專利名稱：一種提取禾葉山麥冬皂苷a的方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，特別是涉及一種提取禾葉山麥冬皂苷A的方法。
背景技術：
禾葉山麥冬皂苷A屬甾體皂苷類，mp. 255-256°C，分子式為C49H78O21，分子量1002， 溶于正丁醇、吡啶等，微溶于甲醇、乙醇和氯仿，不溶于丙酮、乙酸乙酯、乙醚等。禾葉山麥冬皂苷A有強心抗腫瘤作用，尤其是抑制宮頸癌細胞和肝癌細胞作用較強。禾葉山麥冬百合科，也叫禾葉土麥冬，主產于河北、山西、陜西、甘肅等地。其塊根也作土麥冬藥用，主要治療陰虛肺燥、咳嗽痰粘、口燥咽干、腸燥便秘等。現有提取禾葉山麥冬阜苷A方法較少，藥理研究較少。如專利(申請號 201010212790)“從禾葉山麥冬中分離制備禾葉山麥冬皂苷A的方法”，該專利采用的方法是將禾葉山麥冬塊狀根粉碎后作為原料，采用乙醇回流浸提，正丁醇萃取，然后正丁醇相萃取物采用DlOl型大孔樹脂分離，分別用水以及不同質量濃度的乙醇溶液洗脫不同極性的組分，所得的皂苷洗脫液真空濃縮、冷凍干燥，逆流色譜方法分離純化皂苷粗提物，皂苷組分進行真空濃縮，再冷凍干燥，得禾葉山麥冬皂苷A。該專利實驗證明禾葉山麥冬皂苷A對人宮頸癌細胞及人肝癌細胞均具有較好的體外增殖抑制作用。該方法采用了逆流色譜分離， 設備投資較大，制備量較小。現有留體皂苷提取分離方法較多，有萃取法、酶解法、酸水解法、柱層析法，以及多種方法聯用。如文獻“麥冬總皂苷不同提取方法的研究”，該文獻實驗結果表明酶解法比常規提取方法效率高。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，為禾葉山麥冬皂苷A制備提供一種簡便易行的方法。為了解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案來實現的一種提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步驟I)取禾葉山麥冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，得酶解原料；2)把上述酶解原料，加5-10倍量30-50%甲醇常溫浸泡提取2_3次，提取液調酸濾過加氯仿溶液沉淀，收集氯仿層；3)把上述氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗滌，再用無水甲醇溶解加氧化鋁拌樣烘干，裝柱，正丁醇-磷酸水溶劑洗脫，薄層監測，收集高濃度流分，調節中性，濃縮成浸膏，無水乙醇溶解結晶2-3次，真空干燥即得禾葉山麥冬皂苷A產品。所述步驟I)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶或淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的 O. 1~1 %。所述步驟2)和步驟3)所用的水為純水。
所述步驟3)中的氧化鋁為中性氧化鋁，粒度120-300目。所述步驟3)中正丁醇-磷酸水溶劑比例為65 : 35 (磷酸調節pH3_4)。本工藝采用生物酶解分解物質組織結構，提高了提取率，縮短了提取時間其次采用常溫提取提取雜質少，能耗低；再次采用甲醇中氯仿萃取，是利用液液分配色譜，其操作比高速逆流色譜操作簡單；還有采用氧化鋁柱分離，正丁醇-磷酸水溶劑洗脫，操作簡單易于放大生產。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式實施例I取禾葉山麥冬原料粉碎,稱量3kg,加3g的果膠酶混合均勻，酶解7天,酶解原料加24L50%甲醇常溫浸泡提取2次，每次8小時，合并提取液鹽酸調至pH3，濾過，濾液加液體量的5L氯仿溶液充分混合攪拌，放置沉淀，收集氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗滌后，粗提物再用無水甲醇溶解，加300g中性氧化鋁(120-300目)拌樣烘干， 粉碎裝柱(徑高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸調節pH3)洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，氫氧化鈉溶液調節中性，減壓濃縮成浸膏，加無水乙醇回流溶解飽和溶解，放置結晶，結晶2次，真空干燥結晶物，得白色禾葉山麥冬皂苷A產品，含量93.3%，收率 62. 5%。實施例2取禾葉山麥冬原料粉碎,稱量3kg,加30g的淀粉酶混合均勻,酶解2天,酶解原料加30L40%甲醇常溫浸泡提取6小時，濾過提取液再加15L40%甲醇浸泡12小時，合并提取液硫酸調至PH2，濾過，濾液加液體量的7L氯仿溶液充分混合攪拌，放置沉淀，收集氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗滌后，粗提物再用無水甲醇溶解，加400g中性氧化鋁(120-300目)拌樣烘干，粉碎裝柱(徑高比I : 5)，正丁醇-磷酸水(比例65 35， 磷酸調節PH3)洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，氫氧化鈉溶液調節中性，減壓濃縮成浸膏，加無水乙醇回流溶解飽和溶解，放置結晶，結晶3次，真空干燥結晶物，得白色禾葉山麥冬皂苷A產品，含量95.6%，收率55.2%。實施例3 取禾葉山麥冬原料粉碎，稱量3kg，加IOg的纖維素酶混合均勻，酶解5天，酶解原料加30L30%甲醇常溫浸泡提取12小時，濾過提取液再加15L30%甲醇浸泡5小時，合并提取液硫酸調至PH1，濾過，濾液加液體量的6L氯仿溶液充分混合攪拌，放置沉淀，收集氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗滌后，粗提物再用無水甲醇溶解，加300g 中性氧化鋁(120-300目)拌樣烘干，粉碎裝柱(徑高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例 65 35，磷酸調節pH3)洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，氫氧化鈉溶液調節中性，減壓濃縮成浸膏，加無水乙醇回流溶解飽和溶解，放置結晶，結晶3次，真空干燥結晶物，得白色禾葉山麥冬皂苷A產品，含量96. 1%，收率58.2%。實施例4 取禾葉山麥冬原料粉碎,稱量IOkg,加30g的果膠酶混合均勻,酶解6天,酶解原料加60L50%甲醇常溫浸泡提取2次，每次8小時，合并提取液鹽酸調至pH3，濾過，濾液加液體量的12L氯仿溶液充分混合攪拌，放置沉淀，收集氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗滌后，粗提物再用無水甲醇溶解，加I. 5kg中性氧化鋁(120-300目)拌樣烘干， 粉碎裝柱(徑高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸調節pH3)洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，氫氧化鈉溶液調節中性，減壓濃縮成浸膏，加無水乙醇回流溶解飽和溶解，放置結晶，結晶3次，真空干燥結晶物，得白色禾葉山麥冬皂苷A產品，含量95.4%，收率 52. 5%。實施例5 取禾葉山麥冬原料粉碎,稱量20kg,加70g的果膠酶混合均勻,酶解5天,酶解原料加140L40%甲醇常溫浸泡提取2次,每次8小時,合并提取液硫酸調至pH2,濾過,濾液加液體量的25L氯仿溶液充分混合攪拌，放置沉淀，收集氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、 乙酸乙酯洗滌后，粗提物再用無水甲醇溶解，加3kg中性氧化鋁(120-300目)拌樣烘干，粉碎裝柱(徑高比I : 6)，正丁醇-磷酸水(比例65 35，磷酸調節pH3)洗脫，薄層檢測， 收集高濃度流分，氫氧化鈉溶液調節中性，減壓濃縮成浸膏，加無水乙醇回流溶解飽和溶解，放置結晶，結晶3次，真空干燥結晶物，得白色禾葉山麥冬皂苷A產品，含量95.8%，收率 53. 4%。
權利要求
1.一種提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于包括以下步驟1)取禾葉山麥冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，得酶解原料；2)把上述酶解原料，加5-10倍量30-50%甲醇常溫浸泡提取2-3次，提取液調酸濾過加氯仿溶液沉淀，收集氯仿層；3)把上述氯仿層回收氯仿，得粗提物，依次丙酮、乙酸乙酯洗滌，再用無水甲醇溶解加氧化鋁拌樣烘干，裝柱，正丁醇-磷酸水溶劑洗脫，薄層監測，收集高濃度流分，調節中性， 濃縮成浸膏，無水乙醇溶解結晶2-3次，真空干燥即得禾葉山麥冬皂苷A產品。
2.根據權利要求I所述提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于所述步驟I)中生物酶可選果膠酶、纖維素酶和淀粉酶中的任一種，用量為原料重量的O. 1-1%。
3.根據權利要求I所述提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于所述步驟2)和步驟3)所用的水為純水。
4.根據權利要求I所述提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于所述步驟3)中的氧化鋁為中性氧化鋁，粒度120-300目。
5.根據權利要求I所述提取禾葉山麥冬皂苷A的方法，其特征在于所述步驟3)中正丁醇-磷酸水溶劑比例為65 35 (磷酸調節pH3-4)。
全文摘要
本發明涉及一種提取禾葉山麥冬皂苷A方法。方法是取禾葉山麥冬原料粉碎，加生物酶酶解2-7天，酶解原料加5-10倍量30-50％甲醇常溫浸泡提取2-3次，提取液調酸濾過加氯仿溶液沉淀，收集氯仿層回收氯仿，濃縮物依次丙酮、乙酸乙酯洗滌，再用無水甲醇溶解加氧化鋁拌樣烘干，裝柱，正丁醇-磷酸水溶劑洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，調節中性，濃縮成浸膏，無水乙醇溶解結晶2-3次，真空干燥即得禾葉山麥冬皂苷A產品。采用該方法制備禾葉山皂苷A，工藝方法簡單，所得產品純度高，易于放大生產。
文檔編號C07J71/00GK102603859SQ20111002619
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月25日 優先權日2011年1月25日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司