專利名稱：一種蟲草素的提取方法
技術領域：
本發明屬于傳統中藥藥理活性成分提取領域，具體涉及一種從人工冬蟲夏草子實 體中提取蟲草素的方法。
背景技術：
蟲草素又名蟲草堿，其分子式是=CiciN13H5O3,是冬蟲夏草Cordyc印s sinensis中 的一類核苷類化合物，具有很好的抗真菌、細菌、病毒的活性，對鏈球菌、鼻疽桿菌、炭疽桿 菌、豬出血性敗血癥桿菌及葡萄球菌等病原菌的生長有抑制作用。同時蟲草素還表現出抗 HIV-I型病毒和選擇性抑制梭菌屬細菌活性。在治療腫瘤時也發揮著很重要的作用。蟲草 素在冬蟲夏草中的含量低，野生冬蟲夏草的蟲草素含量僅為5. 4 μ g/g，人工冬蟲夏草蟲草 素含量比野生冬蟲夏草含量高，其中人工蛹蟲草最高含量為4. 71%。現在國際市場上蟲草 素價格昂貴，且在我國很少將蟲草素作為有效地活性物質單獨提取，而更多的是作為保健 酒有效成分溶解的酒中，沒有發揮出最大價值。我國人工栽培冬蟲夏草數量巨大，提高蟲草 素的提取率具有巨大的市場前景。
發明內容
本發明的目的在于提供一種操作簡便、蟲草素提取率高、純度高的蟲草素的提取 方法。本發明通過行星球磨法將冬蟲夏草子實體研磨成粉末狀，可使冬蟲夏草粉末粒度 達到0. 1 μ m左右，從而增大顆粒的比表面積，有利于蟲草素的溶出，利用超聲溶解法，在適 宜的條件下，促進蟲草素的溶解，提高提取率，再用活性炭和有機溶劑去除蟲草素中色素， 黃酮類化合物，多糖和蛋白質等雜質，使蟲草素的純度得到了提高，從而實現了本發明的目 的。本發明的蟲草素的提取方法，其特征在于，包括以下步驟(1)粉碎將干燥好的冬蟲夏草Cordyc印s sinensis子實體加入到行星球磨機中 粉碎成粉末狀；(2)提取將上一步驟制備的冬蟲夏草子實體粉末加入到pH值為2 3的水中， 粉末與水的質量體積比為1 (10 20)g/mL，然后用超聲波處理，處理溫度為40 60°C， 頻率為30 50kHZ，處理時間為0. 5 lh，處理完后，溶液經離心，收集上清液；(3)純化在上清液中加入活性炭吸附色素直至上清液無顏色，然后將此上清液 先用乙酸乙酯萃取，去除乙酸乙酯層，在剩余溶液中加入氯仿萃取，去除氯仿層，剩余液體 經大孔樹脂吸附層析，先用水洗脫至流出液無色，再用體積分數為30% 50%的乙醇水溶 液洗脫，收集洗脫液，經干燥即得蟲草素產品。所述的步驟(1)中將干燥好的冬蟲夏草子實體加入到行星球磨機中粉碎優選行 星球磨機的研磨轉速為300 500r/min，粉碎時間為0. 5 lh，大小球個數比為1 1，運 行模式為交替模式。
所述的步驟(3)中在上清液中加入活性炭吸附色素，優選，活性炭與上清液的質 量體積比為(10 30) lg/L。使用時，宜少量多次。所述的步驟(3)中體積分數為30% 50%的乙醇水溶液，其PH值優選為5. 0 6. 0，這是因為蟲草素含有堿性氮原子略微顯堿性，用此溶液洗脫效率高。本發明利用行星球磨法代替傳統的中藥粉碎機將冬蟲夏草子實體研磨，可使冬蟲 夏草粉末粒度達到0. 1 μ m左右，從而增大顆粒的比表面積，有利于蟲草素的溶出，再在合 適的條件下，利用超聲溶解法促進蟲草素的溶解，保護了蟲草素的結構不被破壞，并提高了 提取效率，再利用活性炭、乙酸乙酯和氯仿去除蟲草素中色素，黃酮類化合物，多糖和蛋白 質等雜質，使蟲草素的純度得到了提高，符合工業化生產要求。相比現有提取蟲草素的技術，利用本發明的蟲草素提取方法其提取率可高達 0jl%。以上，蟲草素的純度達到98%以上，并且本發明操作簡便。因此本發明具有操作簡便、蟲草素提取效率高，純度高的優點，為蟲草素的有效利 用創造了條件。
具體實施例方式以下是對本發明的進一步說明，而不是對本發明的限制。實施例1 稱取150g的干燥人工培養的冬蟲夏草子實體，用力壓碎后，加入到行星球磨機的 250ml球磨灌中，調整轉速為300r/min，氧化鋁球個數為20(10大球和10小球)，采用正反 交替研磨，交替時間5min，處理總時間為30min，得到冬蟲夏草子實體粉末。將該粉末150g 加入到1500ml的蒸餾水中，用0. lmol/LHCl調整pH為2，溫度為50°C，用頻率為30KHZ超 聲波處理lh，處理完后離心(3000r/min，IOmin)，收集上清液，在上清液中加入15g活性炭 吸附色素，過濾，在濾液中再加入15g活性炭吸附色素，重復操作，直到上清液沒有顏色為 止，將此上清液先用300ml的乙酸乙酯在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去乙酸乙酯層，剩余 液體再用300ml的氯仿在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去氯仿層，剩余液體上DlOl層析柱， 先用蒸餾水洗脫至流出液無色，再用pH為5. 0的體積分數為30%的乙醇水溶液以3ml/min 速度洗脫，收集洗脫液，真空干燥即得蟲草素晶體，用高壓液相色譜法鑒定蟲草素純度為 98. 5%，提取率為 0. 34%0。實施例2:稱取150g的干燥人工培養的冬蟲夏草子實體，用力壓碎后，加入到行星球磨機的 250ml球磨灌中，調整轉速為500r/min，氧化鋁球個數為20(10大球和10小球)，采用正反 交替研磨，交替時間5min，處理總時間為30min，得到冬蟲夏草子實體粉末。將該150g粉末 加入到1500ml的蒸餾水中，用0. lmol/LHCl調整pH為2. 5，溫度為40°C，用頻率為50KHZ超 聲波處理45min，處理完后離心(3000r/min，IOmin)，收集上清液，在上清液中加入15g活性 炭吸附色素，再過濾，在濾液中再加入15g活性炭吸附色素，重復操作，直到上清液沒有顏 色為止，將此上清液先用300ml的乙酸乙酯在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去乙酸乙酯層， 剩余液體再用300ml的氯仿在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去氯仿層，剩余液體上DlOl層 析柱，先用蒸餾水洗脫至流出液無色，再用pH為6. 0體積分數為50%的乙醇水溶液以:3ml/ min速度洗脫，收集洗脫液，真空干燥即得蟲草素晶體，用高壓液相色譜法鑒定蟲草素純度為98. 7%，提取率為0. 32%0。實施例3 稱取150g的干燥人工培養的冬蟲夏草子實體，用力壓碎后，加入到行星球磨機的 250ml球磨灌中，調整轉速為300r/min，氧化鋁球個數為30(15大球和15小球)，采用正反 交替研磨，交替時間5min，處理總時間為60min，得到冬蟲夏草子實體粉末。將150g粉末加 入到3000ml的蒸餾水中，用0. lmol/LHCl調整pH為3溫度為50°C，用頻率為50KHZ超聲 波處理45min，處理完后離心(3000r/min，IOmin)，收集上清液，在上清液中加入60g活性炭 吸附色素，再過濾，在濾液中再加入60g活性炭吸附色素，重復操作，直到上清液沒有顏色 為止，將此上清液先用600ml的乙酸乙酯在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去乙酸乙酯層，剩 余液體再用600ml的氯仿在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去氯仿層，剩余液體上DlOl層析 柱，先用蒸餾水洗脫至流出液無色，再用pH為6. 0的體積分數為40%的乙醇水溶液以:3ml/ min速度洗脫，收集洗脫液，真空干燥即得蟲草素晶體，用高壓液相色譜法鑒定蟲草素純度 為98. 4%，提取率為0.31%。。實施例4 稱取150g的干燥人工培養的冬蟲夏草子實體，用力壓碎后，加入到行星球磨機的 250ml球磨灌中，調整轉速為300r/min，氧化鋁球個數為20(10大球和10小球)，采用正反 交替研磨，交替時間5min，處理總時間為30min，得到冬蟲夏草子實體粉末。將150g粉末加 入到2250ml的蒸餾水中，0. lmol/LHCl調整pH為3，溫度為60°C，用頻率為50KHZ超聲波 處理30min，處理完后離心(3000r/min，IOmin)，收集上清液，在上清液中加入30g活性炭吸 附色素，再過濾，在濾液中再加入30g活性炭吸附色素，重復操作，直到上清液沒有顏色為 止，將此上清液先用400ml的乙酸乙酯在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去乙酸乙酯層，剩余 液體再用400ml的氯仿在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去氯仿層，剩余液體上DlOl層析柱， 先用蒸餾水洗脫至流出液無色，再用pH為5. 0的體積分數為30%的乙醇水溶液以5ml/min 速度洗脫，收集洗脫液，真空干燥即得蟲草素晶體，用高壓液相色譜法鑒定蟲草素純度為 98. 6%，提取率為 0. 34%0。實施例5 稱取150g的干燥人工培養的冬蟲夏草子實體，用力壓碎后，加入到行星球磨機的 250ml球磨灌中，調整轉速為500r/min，氧化鋁球個數為20(10大球和10小球)，采用正反 交替研磨，交替時間5min，處理總時間為30min，得到冬蟲夏草子實體粉末。將150g粉末加 入到1500ml的蒸餾水中，用0. lmol/LHCl調整pH為2. 5，溫度為45°C，用頻率為30KHZ超 聲波處理lh，處理完后離心(3000r/min，IOmin)，收集上清液，在上清液中加入45g活性炭 吸附色素，再過濾，在濾液中再加入45g活性炭吸附色素，重復操作，直到上清液沒有顏色 為止，將此上清液先用300ml的乙酸乙酯在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去乙酸乙酯層，剩 余液體再用300ml的氯仿在空化混懸萃取裝置中萃取，棄去氯仿層，剩余液體上DlOl層析 柱，先用蒸餾水洗脫至流出液無色，再用pH為5. 5的體積分數為50%的乙醇水溶液以Iml/ min速度洗脫，收集洗脫液，真空干燥即得蟲草素晶體，用高壓液相色譜法鑒定蟲草素純度 為98. 0%，提取率為0. 35%0。
權利要求
1.一種蟲草素的提取方法，其特征在于，包括以下步驟(1)粉碎將干燥好的冬蟲夏草Cordyc印Ssinensis子實體加入到行星球磨機中粉碎 成粉末狀；(2)提取將上一步驟制備的冬蟲夏草子實體粉末加入到pH值為2 3的水中，粉末 與水的質量體積比為1 (10 20) g/mL，然后用超聲波處理，處理溫度為40 60°C，頻率 為30 50kHZ，處理時間為0. 5 lh，處理完后，溶液經離心，收集上清液；(3)純化在上清液中加入活性炭吸附色素直至上清液無顏色，然后將此上清液先用 乙酸乙酯萃取，去除乙酸乙酯層，在剩余溶液中加入氯仿萃取，去除氯仿層，剩余液體經大 孔樹脂吸附層析，先用水洗脫至流出液無色，再用體積分數為30% 50%的乙醇水溶液洗 脫，收集洗脫液，經干燥即得蟲草素產品。
2.根據權利要求1所述的蟲草素的提取方法，其特征在于，所述的步驟(1)中將干燥 好的冬蟲夏草子實體加入到行星球磨機中粉碎，其行星球磨機的研磨轉速為300 500r/ min，粉碎時間為0. 5 lh，大小球個數比為1 1，運行模式為交替模式。
3.根據權利要求1所述的蟲草素的提取方法，其特征在于，所述的步驟(3)中在上清液 中加入活性炭吸附色素，其活性炭與上清液的質量體積比為(10 30) lg/L。
4.根據權利要求1所述的蟲草素的提取方法，其特征在于，所述的步驟(3)中體積分數 為30% 50%的乙醇水溶液，其pH值為5. 0 6. 0。
全文摘要
本發明公開了一種蟲草素的提取方法。它是通過行星球磨法將冬蟲夏草子實體研磨成粉末狀，可使冬蟲夏草粉末粒度達到0.1μm左右，從而增大顆粒的比表面積，有利于蟲草素的溶出，利用超聲溶解法，在合適的條件下，促進蟲草素的溶解，提高提取率，再用活性炭和有機溶劑去除蟲草素中色素，黃酮類化合物，多糖和蛋白質等雜質，得到了蟲草素產品。相比現有提取蟲草素的技術，利用本發明的蟲草素提取方法其提取率可高達0.31‰以上，蟲草素的純度達到98％以上，并且本發明操作簡便。因此本發明具有操作簡便、蟲草素提取效率高，純度高的優點，為蟲草素的有效利用創造了條件。
文檔編號C07H19/16GK102060898SQ20111000415
公開日2011年5月18日 申請日期2011年1月10日 優先權日2011年1月10日
發明者丁振濤, 葉克難, 鐘建春 申請人:中山大學