專利名稱：一種黃獨素b的提取方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥有效成分的提取方法，具體涉及一種黃藥子有效成分——黃 獨素B的提取方法，屬于中藥提取技術領域。
背景技術：
黃藥子為薯蕷科薯蕷屬植物黃獨歷Mcorea Bulbifera L.的干燥塊莖，又名黃 藥、黃獨、木藥子、黃藥根、黃藥脂、山慈菇等，在世界范圍分布廣泛，我國主產于湖北、湖南、 江蘇等地，而河南、山東、浙江、安徽、福建等省亦有生產。其性涼味苦，具有散結消癭、清熱 解毒、涼血降火之功效。黃藥子中含有黃獨萜酯A(dioSbulbine Α)、皂甙、鞣質和淀粉、黃獨 素B、C、薯蕷皂甙元等成分，其藥用歷史悠久，歷代本草對其治療癭疾、血證、外科諸證的 良效均有詳盡記載。現代臨床上常用于治療甲狀腺疾病及各種癌癥，糖尿病等，均取得一定 的療效，但由于肝、腎毒性，限制了其廣泛應用。研究表明，黃獨的化學成分具有多種藥理作 用，如抗炎、抑菌、止血、抗癌、抗病毒等，其氯仿部位的黃獨素B是其抗炎活性成分之一，對 大鼠角叉菜膠性足跖腫及大鼠棉球肉芽腫有顯著的抑制作用，同時也是抗腫瘤活性成分， 尤其對于甲狀腺腺瘤有獨特的療效。現今，黃藥子有效成分的提取方法較少，能夠單獨提取 黃獨素B的方法更是少見，因此，尋找一種能夠簡單、有效地提取黃獨素B的方法對更加深 入的研究其藥理作用具有重大意義。
發明內容
本發明針對上述不足，提供了 一種黃藥子有效成分——黃獨素B的提取方法，本方 法操作簡單，所得提取物中黃獨素B的純度高。本發明是通過以下措施實現的
一種黃獨素B的提取方法，其特征是包括以下步驟
(1)將黃藥子加入丙酮中，回流提取2次，合并提取液待用；
(2)將上述提取液濃縮至無丙酮味，得浸膏，然后浸膏加入硅膠拌樣，干燥；
(3)將干燥后的硅膠加入石油醚，回流提取3次，過濾將濾渣減壓蒸干，然后加入氯仿 回流提取3次，過濾、合并濾液，將濾液蒸干得氯仿部位；
(4)將氯仿部位用乙醇溶解，與硅膠拌樣，上硅膠柱，用氯仿-甲醇體積比為98 2的混 合液洗脫，分段收集洗脫液；
(5)將分段收集的洗脫液分別回收溶劑至干，然后用丙酮溶解、靜置析晶，將有結晶析 出的洗脫液進行抽濾，濾餅洗滌得結晶，濾液合并進入下一步；
(6)將上述步驟(5)的濾液與硅膠拌樣，上柱，用氯仿-甲醇體積比為99:1的混合液 洗脫，分段收集洗脫液，洗脫液分別回收溶劑至干，然后用丙酮溶解、靜置析晶，將有結晶析 出的洗脫液抽濾、濾餅洗滌得結晶，與步驟(5)的結晶合并，得黃獨素B。
上述步驟(3)中，石油醚提取的目的是脫脂，目標成分還在濾渣中；步驟(4)和(6) 中，洗脫過程中不同成分會依次被洗脫下來，應小體積分段收集以確保分離效果，然后依照 薄層層析色譜確定目標物在那一段；步驟(5)和(6)中，黃獨素B在丙酮中容易析出結晶， 因此洗脫液蒸干后用丙酮溶解靜置，隨丙酮慢慢揮發便會有黃毒素B結晶析出。上述步驟(1)中，丙酮的加入量為黃藥子質量的4-7倍，回流提取時，每次提取 2-3h0進一步的，上述步驟(1)中，丙酮的加入量優選為黃藥子質量的5倍。上述步驟(2)中，浸膏和硅膠的質量比為1:1，將拌樣后的硅膠在50°C下減壓干燥。上述步驟(3)中，石油醚的用量為硅膠質量的2-5倍，回流提取時每次提取1-ai ； 氯仿的加入量為濾渣質量的5-8倍，每次回流提取的時間為2-池。進一步的，上述步驟(3)中，石油醚的用量優選為硅膠質量的3倍；氯仿的加入量 優選為濾渣質量的6倍
上述步驟(4)中，所用的硅膠為柱層析硅膠，氯仿部位與柱層析硅膠的質量比為1:1。上述步驟(5)和(6)中，加入丙酮的量至少應完全溶解洗脫液回收溶劑后所留下 的殘留物，其具體量可根據情況進行調整。黃藥子中的有效成分很多，在提取時一般會將很多藥物有效成分同時提取出來， 如果需要單獨研究某一成分還要進行進一步的分離純化，不但浪費時間還不好分離。本發 明通過對提取工藝及提取液、洗脫液的選擇，對黃藥子的有效成分進行提取，所得的提取物 中，全部為黃獨素B，不含其他物質，所得黃獨素B純度高，不用進一步進行分離純化。本方 法操作較簡單，能夠有效地提取黃獨素B，對進一步研究其藥理及藥效具有重大意義。
具體實施例方式下面通過具體實施例對本發明進行進一步的闡述，應該明白的是，下述說明僅是 為了解釋本發明，并不對其內容進行闡述。本發明實施例中所用的試藥與儀器如下
黃藥子藥材經本院中藥資源室林慧彬研究員鑒定為黃獨々io^orea Bulbifera L.的 干燥塊莖。柱層析硅膠(100-200目)、薄層層析硅膠G均為青島海洋化工有限公司生產，丙 酮、石油醚、氯仿、甲醇等試劑均為分析純。晶玻HH-S4數顯電子恒溫水浴鍋，BP211D賽多利斯電子天平，XT3A顯微熔點測定 儀(北京市科儀電光儀器廠)。實施例1
取黃藥子藥材1. 75kg，加入5倍量的丙酮，水浴加熱回流提取2次，每次2小時，提取 液過濾，濾液合并濃縮至無丙酮味，得浸膏47g，加入等量硅膠拌樣，50°C減壓干燥。將干燥 后的硅膠樣品加入3倍量的石油醚，水浴加熱回流提取3次，每次1小時，提取液過濾。將 濾渣減壓蒸干，加入6倍量氯仿，加熱回流提取3次，每次2小時，提取液過濾，濾液合并蒸 干，得氯仿部位10g，用少量95乙醇加熱溶解，加入等量柱層析硅膠拌樣。將氯仿部位上硅 膠柱(4cmX 13cm)，氯仿-甲醇(98:2體積比)洗脫，因為洗脫過程中不同成分會依次被洗脫 下來，所以采用小體積分段收集洗脫液的方式來進行洗脫，以確保分離效果，然后依照薄層層析色譜確定目標物在那一段。本次試驗以每150ml為一段，分段收集洗脫液，所得洗脫液 共1950ml。各洗脫液分別回收溶劑至干得殘留物，因為黃毒素B易溶于丙酮中，所以殘留物 用丙酮溶解、靜置析晶，隨著丙酮的揮發，有些洗脫液中析出大量的無色結晶，將這些洗脫 液進行抽濾、丙酮洗滌，共得結晶1.5g。將析出結晶的抽濾液合并，用等質量柱層析硅膠拌 樣，上硅膠柱(2. 5cmX 16cm)，氯仿-甲醇(99:1體積比)洗脫，以每IOOml為一段，分段收集 洗脫液，每段洗脫液分別回收溶劑，殘留物加丙酮溶解放置，隨著丙酮的揮發析出無色方柱 狀結晶共50mg。用薄層層析色譜法(氯仿-甲醇(13:1))觀察分離結果，所得結晶均為同一物質， 香草醛-硫酸顯色為單一紫紅色斑點，Rf值為0. 5。測得其熔點為285-288°C，核磁共振波 譜數據與文獻中黃獨素B的一致，確定該化合物為黃獨素B。實施例2
取黃藥子藥材1. 75kg，加入7倍量的丙酮，水浴加熱回流提取2次，每次2小時，提取 液過濾，濾液合并濃縮至無丙酮味，得浸膏，浸膏加入等量硅膠拌樣，50°C減壓干燥。將干 燥后的硅膠樣品加入2倍量的石油醚，水浴加熱回流提取3次，每次2小時，提取液過濾。 將濾渣減壓蒸干，加入8倍量氯仿，加熱回流提取3次，每次3小時，提取液過濾，濾液合并 蒸干，得氯仿部位，用少量乙醇加熱溶解，加入等量柱層析硅膠拌樣。將氯仿部位上硅膠柱 (4cmX 13cm)，氯仿-甲醇(98 2體積比)洗脫，分段收集洗脫液，回收溶劑，殘留物加丙酮溶 解放置，析出大量無色結晶，抽濾，少量丙酮洗，得結晶保存。將析出結晶的抽濾液合并，柱 層析硅膠拌樣，上硅膠柱(2. 5cmX 16cm)，氯仿-甲醇(99:1體積比)洗脫，分段收集洗脫液， 回收溶劑，殘留物加丙酮溶解放置。析出結晶，最終提取結晶質量為1.52g。薄層層析色譜法(氯仿-甲醇(13:1))觀察分離結果，所得結晶均為同一物質，香 草醛-硫酸顯色為單一紫紅色斑點，Rf值為0. 5。其熔點為285-288°C，核磁共振波譜數據 與文獻[7] —致，確定該化合物為黃獨素B。實施例3
采用與實施例1相同的方法提取黃獨素B，不同的是，所用各種提取溶劑的量不同，具 體為，丙酮的加入量為黃藥子質量的4倍，干燥后的硅膠樣品加入5倍量的石油醚提取，提 取后的濾渣中加入5質量倍的氯仿。所得的結晶質量為1. 51kg，將檢測全部為黃獨素B。實施例4
采用與實施例2相同的方法提取黃獨素B，不同的是，所用各種提取溶劑的量不同，具 體為，丙酮的加入量為黃藥子質量的6倍，干燥后的硅膠樣品加入4倍量的石油醚提取，提 取后的濾渣中加入7質量倍的氯仿。所得的結晶質量為1. Mkg，將檢測全部為黃獨素B。
權利要求
1.一種黃獨素B的提取方法，其特征是包括以下步驟(1)將黃藥子加入丙酮中，回流提取2次，合并提取液待用；(2)將上述提取液濃縮至無丙酮味，得浸膏，然后浸膏加入硅膠拌樣，干燥；(3)將干燥后的硅膠加入石油醚，回流提取3次，過濾將濾渣減壓蒸干，然后加入氯仿 回流提取3次，過濾、合并濾液，將濾液蒸干得氯仿部位；(4)將氯仿部位用乙醇溶解，與硅膠拌樣，上硅膠柱，用氯仿-甲醇體積比為98:2的混 合液洗脫，分段收集洗脫液；(5)將分段收集的洗脫液分別回收溶劑至干，然后用丙酮溶解、靜置析晶，將有結晶析 出的洗脫液進行抽濾，濾餅洗滌得結晶，濾液合并進入下一步；(6)將上述步驟(5)的濾液與硅膠拌樣，上柱，用氯仿-甲醇體積比為99:1的混合液洗 脫，分段收集洗脫液，洗脫液分別回收溶劑至干，然后用丙酮溶解、靜置析晶，將有結晶析出 的洗脫液抽濾、濾餅洗滌得結晶，與步驟(5)的結晶合并，得黃獨素B。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征是步驟(1)中，丙酮的加入量為黃藥子質 量的4-7倍，回流提取時，每次提取2-池。
3.根據權利要求2所述的提取方法，其特征是步驟(1)中，丙酮的加入量為黃藥子質 量的5倍。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征是步驟(2)中，浸膏和硅膠的質量比為 1 1，將拌樣后的硅膠在50°C下減壓干燥。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征是步驟(3)中，石油醚的用量為硅膠質量 的2-5倍，回流提取時每次提取1-池。
6.根據權利要求5所述的提取方法，其特征是步驟(3)中，石油醚的用量為硅膠質量 的3倍。
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特征是步驟(3)中，氯仿的加入量為濾渣質量 的5-8倍，每次回流提取的時間為2-池。
8.根據權利要求7所述的提取方法，其特征是步驟(3)中，氯仿的加入量為濾渣質量 的6倍。
9.根據權利要求1所述的提取方法，其特征是步驟(4)中，所用的硅膠為柱層析硅膠， 氯仿部位與柱層析硅膠的質量比為1:1。
全文摘要
本發明公開了一種黃獨素B的提取方法，包括黃藥子丙酮回流提取，提取液濃縮至無丙酮味，得浸膏；浸膏與硅膠拌樣，加入石油醚提取，濾渣蒸干，加入氯仿提取，提取液蒸干得氯仿部位；氯仿部位與硅膠拌樣，上柱，用氯仿-甲醇體積比為98:2的混合液洗脫，分段收集洗脫液；洗脫液回收溶劑，用丙酮溶解、析晶，得結晶，濾液再上柱，用氯仿-甲醇體積比為99:1的混合液洗脫，洗脫液回收溶劑，用丙酮溶解、析晶，結晶合并，得黃獨素B。本發明通過對提取工藝及洗脫液的選擇，對黃獨素B進行提取，所得的提取物中，不含其他物質，不用進一步進行分離純化。本方法操作較簡單，能夠有效地提取黃獨素B，對進一步研究其藥理及藥效具有重大意義。
文檔編號C07D493/20GK102070646SQ20111000384
公開日2011年5月25日 申請日期2011年1月11日 優先權日2011年1月11日
發明者于蓓蓓, 閆雪生 申請人:山東省中醫藥研究院