靶定補體蛋白c3b的抗體的組合物和方法

專利名稱：靶定補體蛋白c3b的抗體的組合物和方法
靶定補體蛋白C3B的抗體的組合物和方法
背景技術：
年齡相關性黃斑變性(AMD)是進行性疾病，并且是美國年齡65歲及以上老年人視覺喪失和失明的主要原因。AMD主要影響黃斑；其為負責閱讀或開車所需的高視敏度的視網膜的一部分。大多數AMD患者遭受該疾病的早期階段，所述疾病的特征在于存在稱為玻璃疣的細胞外視網膜沉積物。玻璃疣是細胞碎片的細胞外視網膜沉積物、炎癥介質、和細胞外基質組分。AMD的晚期階段表現為干澀或濕潤形式，兩者均與視覺喪失相關。干澀AMD， 也稱為地圖樣萎縮，在檢眼鏡檢查中呈現為界線清楚的區域，其對應于視網膜色素上皮細胞(RPE)喪失的局部區域。濕潤AMD與脈絡膜的新血管形成相關，引起Bruch’ s膜完整性受損和視網膜中脈管生長，其中它們經常出血。這種滲漏引起對視網膜細胞的永久性損傷， 它們相繼死亡的，并在中央視覺區產生盲點。人先天性系統由補體途徑組成。補體途徑作用于防御化膿性細菌感染，橋接先天性和適應性免疫；并去除免疫復合體的產物和炎性損傷。補體是在血漿和細胞表面參與級聯反應的多于30種蛋白質的系統。補體系統及其補體組分參與多種免疫過程。例如，補體 C5b-9復合體，也稱為末端復合體或膜攻擊復合體(MAC)，通過誘導膜通透性損傷而在細胞死亡中起重要作用。近期工作已經證明，補體組分C3和C5是AMD患者中玻璃疣的主要成分。Mulling， R.F. m (2000) FASEB J 14，835_46。已經推測它們以及膜攻擊復合體(MAC) C5b_9和其它急性期反應蛋白在玻璃疣上RPF細胞中的存在參與了可激發補體激活和MAC形成的過程。 Johnson，L等Q001)Exp Eye Res 73，887-896。因此，越來越多的證據表明，補體組分不僅僅是先天性免疫的介體。已經建議營養干預用于抑制干澀AMD發展成濕潤AMD。目前，僅FDA批準的濕潤AMD的治療包括光動力學療法(PDT)、抗VEGF適體，如pegaptanib，和抗VEGF抗體 ranibizumab。這些藥物或治療通常向已患有重大視覺喪失的患者施用。仍然需要開發AMD的有效治療，來替換或補充目前的治療。尤其是，需要可以提供早期檢測、預防或恢復視覺喪失的治療。發明概述本發明涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人或獼猴補體C3b蛋白，其中所述抗體以低于或等于IOOpM的KD結合人C3b，并以低于或等于200pM的KD結合獼猴C3b。例如，此處描述的抗體或抗原結合片段可以低于或等于90pM、低于或等于80pM、 低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于40pM、低于或等于30pM， 并優選高達低于或等于20、19、18、17、16、15、14、13、12或IlpM的KD結合人C3b。優選的是，抗體或其抗原結合片段以低于或等于IOpM的Kd結合人C3b。例如，抗體或其抗原結合片段可以低于或等于9pM、低于或等于8pM、低于或等于7pM、低于或等于6pM、低于或等于 5pM、低于或等于4pM、低于或等于3pM、低于或等于2pM，或高達低于或等于IpM的KD結合 C3b。此處描述的抗體或抗原結合片段可以低于或等于250pM、低于或等于MOpM、低于或等于230pM、低于或等于220pM、低于或等于210pM、低于或等于200pM、低于或等于190pM、低于
5或等于180pM、低于或等于170pM、低于或等于160pM、低于或等于150pM、低于或等于140pM、 低于或等于130pM、低于或等于120pM、低于或等于ΙΙΟρΜ、低于或等于ΙΟΟρΜ、低于或等于 90pM、低于或等于80pM、低于或等于70pM、低于或等于60pM、低于或等于50pM、低于或等于 40、39、38、37、36、35、34、33、32或3讓] 、低于或等于3(^]\1、低于或等于20、19、18、17、16、15、 14、13、12或IlpM并優選高達低于或等于10、9、8、7、6、5、4、3、2或IpM的KD結合獼猴C3b。優選通過溶液平衡滴定(SET)測定此處描述的抗體的結合親和力。SET的方法為本領域所知并在下文中進行了進一步的詳細描述。本發明的抗體可用于抑制補體旁路。例如，此處描述的抗體或其片段如體外溶血測定所測定以低于或等于70nM、優選低于或等于65nM、優選低于或等于50nM、優選低于或等于40nM、30nM或20nM，并更優選低于或等于IOnM的IC50抑制補體旁路。此處描述的抗體或其片段如體外溶血測定所測定以低于或等于ΙΟΟηΜ、優選低于或等于90nM、優選低于或等于80nM、優選低于或等于75nM，并更優選低于或等于70nM的IC50抑制獼猴中的補體旁路。此處描述的抗體或其片段如體外Ob沉積所測定以低于或等于30nM、低于或等于25nM、 低于或等于20nM，并優選低于或等于IOnM的IC50抑制補體旁路。此處描述的抗體或其片段可如體外Ob沉積所測定以低于或等于70nM、低于或等于50nM、低于或等于40nM，并優選低于或等于30nM的IC50抑制獼猴中的補體旁路。此處描述的抗體或其片段如補體膜攻擊復合體的沉積所測定以低于或等于5nM， 優選低于或等于4nM、3nM、2nM，并更優選低于或等于InM的IC50抑制補體旁路。此處描述的抗體或其片段如補體膜攻擊復合體的沉積所測定以低于或等于20nM，優選低于或等于 19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM或13nM，并更優選低于或等于IOnM的IC50抑制獼猴中的補體旁路。此處描述的抗體或其片段如通過產生C3a和Cfe測定以低于或等于ΙΟΟηΜ，優選低于或等于90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM或20nM，并更優選低于或等于IOnM抑制
補體旁路。本發明描述的抗體或其抗原結合片段優選具有如表12中所示的Fab的結合特征。本發明還包括分離的抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人或獼猴的補體C3b 蛋白，并與表1中描述的抗體交叉競爭。此處描述的抗體或其抗原結合片段可以是單克隆抗體、人或人源化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段、Fv片段、F(ab’ ) 2片段、或kFv片段、和/或IgG同種型。本發明的抗體可包括這樣的構架，其中氨基酸已經替換成來自各人VH或VL種系序列的抗體構架。一方面，本發明的抗體以比所述抗體結合C3的親和力高至少1000倍的親和力結合 C3b0本發明包括具有表1中抗體9556的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9611的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9612的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表 1中抗體9609的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體 9610的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9674的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明又進一步包括具有表1中抗體9675的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體91M的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9397的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9398的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9136的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9141的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明又進一步包括具有表1中抗體9373的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9423的重鏈和輕鏈序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9556的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9611的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9612的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。 本發明還包括具有表1中抗體9609的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明包括具有表1中抗體9610的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中抗體9674的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明又進一步包括具有表1中9675抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。 本發明包括具有表1中91M抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中9397抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中9398抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中9136抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中9141抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明又進一步包括具有表1中9373抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還包括具有表1中9423抗體的重鏈和輕鏈可變域序列的抗體或其抗原結合片段。本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括選自SEQ IDNOs :1、15、29、 43、57、71、85、99、113、127、141、155、169和 183 的重鏈CDRl ；選自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、
58、72、86、100、114、128、142、156、170和184 的重鏈CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、
59、73、87、101、115、129、143、157、171和185的重鏈CDR3，其中所述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。在其它方面，分離的抗體或其抗原結合片段還包括選自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和 187 的輕鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的輕鏈 CDR3。本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括選自SEQ IDNOs :4、18、32、
46、60、74、88、102、116、130、144、158、172和 186 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs 5、19、33、
47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和187 的輕鏈CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs 6、20、34、
48、62、76、90、104、118、132、146、160、174和188的輕鏈CDR3，其中所述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括選自SEQ IDNOs :7、21、35、
49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和 189 的重鏈可變域序列，還包括選自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的輕鏈可變域序列，其中所
述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。
7
本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括選自SEQ IDNOs :8、22、36、 50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和190的輕鏈可變域序列，其中所述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括與選自SEQ IDNOs :7、21、35、
49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和189的序列具有至少95%序列同一性的重鏈可變域，其中所述抗體結合C3b。一方面，分離的抗體或其抗原結合片段還包括與選自SEQ ID NOs 8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少 95%序列同
一性的輕鏈可變域。本發明還涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括與選自SEQ IDNOs 8、22、36、
50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和190的序列具有至少95%序列同一性的輕鏈可變域，其中所述抗體結合Ob。本發明還進一步涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括與選自SEQ ID NOs 9、23、37、51、65、79、93、107、121、135、149、163、177和 191 的序列具有至少 95%序列同一性的重鏈，其中所述抗體結合C3b。一方面，分離的抗體或其抗原結合片段還包括與選自SEQ ID N0sl0、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的輕鏈。本發明進一步涉及分離的抗體或其抗原結合片段，其包括與選自SEQID NOs 10、 24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的輕鏈，其中所述抗體結合C3b。本發明還包括藥物組合物，其包含此處描述的抗體組合物以及藥學上可接受的載體。尤其是，本發明包括藥物組合物，其包含表1的抗體或其抗原結合片段，例如抗體9556、 9611、9612、9609、9610、9674、9675、9124、9397、9398、9136、9141、9373 或 9423。本發明還包括藥物組合物，其包含表1的兩種或多種抗體或其抗原結合片段的組合。本發明還包括分離的核酸，其包含編碼這樣的多肽的序列，所述多肽包括與選自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的序列具有至少 95 %序列同一性的重鏈可變域。本發明還涉及分離的核酸，其包含編碼這樣的多肽的序列，所述多肽包括與選自 SEQ ID NOs 8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少 95 %序列同一性的輕鏈可變域。一方面，本發明還包括這樣的載體，其包括一種或多種此處描述的核酸分子。本發明還包括分離的宿主細胞，其包括編碼上文描述的抗體重鏈的重組DNA序列，和編碼所述抗體輕鏈的第二個重組DNA序列，其中所述DNA序列有效連接啟動子，并能夠在宿主細胞中表達。期望抗體可以是人單克隆抗體。還期望宿主細胞是非人哺乳動物細胞。本發明還涉及治療年齡相關性黃斑變性的方法，其中所述方法包括向需要治療的受試者施用有效量的包含此處描述的抗體或其片段的組合物的步驟。期望受試者是人。本發明還提供在受試者中抑制補體旁路的方法，其中所述方法包括向需要抑制的受試者施用有效量的包含此處描述的抗體或其抗原結合片段的組合物的步驟。一方面，受試者是人。
本發明還提供抑制Ob結合因子B、P或H的方法，其包括使Ob與此處描述的抗 C3b抗體或其片段接觸。本發明還提供抑制C3轉變酶、C4轉變酶和Ob-Ob 二聚體形成的方法，其包括使 C3b與抗Ob抗體或其片段接觸。本發明還包括分離的抗體或其抗原結合片段，其包含與選自SEQ IDNOs :1、2、3、4、 5、6、15、16、17、18、19、20、29、30、31、32、33、34、43、44、45、46、47、48、57、58、59、60、61、62、 71、72、73、74、75、76、85、86、87、88、89 和 90 的序列具有至少 80%,85%,90%,以及高達至少95%的序列同一性的至少一個互補性決定區(CDR)序列，其中所述抗體結合補體蛋白 C3b。本發明還包括分離的抗體或其抗原結合片段，其包含選自SEQ IDNOs :1、2、3、15、 16、17、29、30、31、43、44、45、57、58、59、71、72、73、85、86 和 87 的至少一個重鏈 CDR序列，其中所述抗體結合C3b。本發明還包括分離的抗體或其抗原結合片段，其包含選自SEQ IDNOs :4、5、6、18、
19、20、32、33、34、46、47、48、60、61、62、74、75、76、88、89和 90 的至少一個輕鏈 CDR 序列，其中所述抗體結合C3b。本發明還包括分離的抗原結合多肽，其包含選自SEQ ID NOs :1、15、29、43、57、71 和 85 的重鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、58、72 和 86 的重鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、59、73和87的重鏈CDR3，其中所述抗原結合多肽結合補體蛋白C3b。本發明還包括抗原結合多肽，其包含選自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74和88的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs 5、19、33、47、61、75 和 89 的輕鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs 6、
20、34、48、62、76和90的輕鏈CDR3，其中所述抗原結合多肽結合補體蛋白C3b。除了包括上文指出的重鏈CDR序列的抗原結合多肽外，抗原結合多肽還包括選自 SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74 和 88 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs 5、19、33、47、61、75 和 89 的輕鏈 CDR2 ；和選自 SEQID NOs 6、20、34、48、62、76 和 90 的輕鏈 CDR3。此處描述的抗體結合多肽以低于或等于ΙΟΟρΜ，優選低于或等于ΙΟρΜ，優選低于或等于2pM的KD結合C3b。此外，優選地，抗原結合多肽結合人和獼猴C3b。本發明還包括調節C3b的方法，其包括向需要調節的受試者施用有效量的抗體、 其抗原結合片段或此處描述的抗原結合多肽。任何上述抗體或其抗原結合片段可以是單克隆抗體或其抗原結合片段。定義除非另有定義，此處所用的所有技術和科技術語具有本發明所屬領域中普通技術人員通常理解的相同意思。如此處所用的術語“抗體”包括完整抗體及其任何抗原結合片段(即“抗原結合部分”)或單鏈。天然存在的“抗體”是包含通過二硫鍵相互連接的至少兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈的糖蛋白。每一重鏈包含重鏈可變區(此處縮寫為VH)和重鏈恒定區。所述重鏈恒定區包含三個結構域，CH1、CH2和CH3。每一輕鏈包含輕鏈可變區(縮寫為VL)和輕鏈恒定區。所述輕鏈恒定區包含一個結構域CL。VH和VL區可進一步細分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，它們散布著稱為構架區(FR)的更保守的區域。每一 VH和VL由以下面順序從氨基末端到羧基末端排列的三個CDR和四個FR組成FR1、CDRl、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈和輕鏈的可變區含有與抗原相互作用的結合域。抗體的恒定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或因子，包括免疫系統的多種細胞(例如效應細胞)和經典補體系統的第一個組分(Clq)的結合。如此處所用，術語抗體的“抗原結合部分”指完整抗體的一個或更多片段，其保留與給定抗原(例如C3b)特異性結合的能力。可通過完整抗體的片段進行抗體的抗原結合功能。術語抗體的“抗原結合部分”中包括的結合片段的實例包括Fab片段，其為VL、VH、 CL和CHl結構域組成的單價片段；F (ab) 2片段，其為包含在鉸鏈區通過二硫鍵連接的兩個 Fab片段的二價片段；由VH和CHl結構域組成的Fd片段；由抗體單條臂的VL和VH結構域組成的Fv片段；單結構域抗體(dAb)片段(Ward等，1989Nature 341 :544-546)，其由VH結構域或VL結構域組成；和分離的互補決定區(CDR)。此外，盡管Fv片段的兩個結構域VL和VH由單獨的基因編碼，但可使用重組方法， 通過人工肽接頭將它們連接，所述人工肽接頭使得它們能夠制備成單條蛋白質鏈，其中VL 和VH區域配對形成單價分子(稱為單鏈Fv(scFv)；參閱例如Bird等，1988 Science 242 423-426 ；和 Huston 等，1988Proc. Natl. Acad. Sci. 85 :5879-5883)。此類單鏈抗體包括抗體的一個或更多“抗原結合部分”。使用本領域技術人員已知的常規技術獲得這些抗體片段， 并篩選所述片段，以與完整抗體相同的方式使用所述片段。抗原結合部分也可摻入到單結構域抗體、巨型抗體(maxibodies)、微型抗體 (minibodies)、胞內抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、v-NAR和bis-scFv (參閱例如Hollinger 和 Hudson，2005，Nature Biotechnology，23，9，1126-1136)。抗體的抗原結合部分可移植到基于多肽如III型纖連蛋白0^3)的支架中(參閱美國專利號6，703，199，其描述了纖連蛋白多肽單抗體體)。抗原結合部分可摻入到包含一對串聯Fv區段(VH-CH1-VH-CH1)的單鏈分子中， 所述串聯Fv區段與互補輕鏈多肽一起形成一對抗原結合區(Zapata等，1995 Protein Eng. 8(10) :1057-1062 ；和美國專利號 5，641，870)。如此處所用，術語“親和力”指抗體與抗原在單個抗原位點上相互作用的強度。在每一抗原位點中，抗體“臂”的可變區與抗原在許多位點上通過弱的非共價力相互作用；相互作用越多，親和力越強。如此處所用，術語“親合力”指抗體-抗原復合物的總穩定性或強度的信息化量度。其受三個主要因素控制抗體表位親和力；抗原與抗體兩者的效價；和相互作用部分的結構排列。最終這些因素決定了抗體的特異性，即特定抗原結合精確抗原表位的可能性。術語“氨基酸”指天然發生的和合成的氨基酸，以及與天然發生的氨基酸以相似方式起作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然發生的氨基酸是由遺傳密碼編碼的那些氨基酸，以及稍后被例如羥脯氨酸、Y-羧基谷氨酸和0-磷酸絲氨酸修飾的那些氨基酸。氨基酸類似物指這樣的化合物，其與天然發生的氨基酸具有相同的基本化學結構，即與氫結合的α碳、羧基、氨基和R基團，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲锍。此類類似物具有修飾的R基團(例如，正亮氨酸)或修飾的肽骨架，但保留了與天然發生的氨基酸相同的基本化學結構。氨基酸模擬物指具有與氨基酸的一般化學結構不同結構的化合物，但它以與天然發生的氨基酸類似的方式起作用。如此處所用，術語“結合特異性”指各抗體結合位點與僅一個抗原決定簇相互作用的能力。抗體的結合部位位于分子的Fab部分，并從重鏈和輕鏈的高變區構建。抗體的結合親和力是單個抗原決定簇與抗體上單個結合部位之間反應的強度。其為抗原決定簇與抗體結合部位之間起作用的吸引力和排斥力的總和。兩個實體之間的特異性結合表示平衡常數(KA)為至少1χ107Μ-1、108M-1、 109M-1、1010M-1、1011M-1、1012M-1、1013M-1 的結合。短語與抗體(例如，C3b 結合抗體) 的“特異性(或選擇性)結合”指決定近親抗原(例如人Ob或獼猴C3b)在蛋白質和其它生物產品的異質群體中的存在的結合反應。除了上文指出的平衡常數(KA)，本發明的C3b 結合抗體通常還具有約Ixl0-k-l、lxl0-3s-l、lxl04s-l、IxlOIs-I或更低的解離速率常數(Kd)，并且以比其結合非特異性抗原(例如C3)的親和力至少10倍，優選100倍，或高達1000倍或更高的親和力結合C3b。。短語“識別抗原的抗體”和“對抗原特異的抗體”此處可與“特異性結合抗原的抗體”互換使用。如此處所用，“neo-表位”或“neo-抗原”可互換使用，并且是蛋白水解切割C3后 C3b上存在的蛋白質的抗原部分。這些neo-表位在未切割的C3上不容易接近。術語“與黃斑變性相關的狀況或病癥”指任何多種這樣的狀況，其中例如因黃斑細胞生長降低引起視網膜黃斑變性或無功能，增加了黃斑細胞(例如RPE細胞)的死亡或重排、正常生物學功能的喪失，或這些事件的組合。黃斑變性導致細胞組織結構的完整性和/ 或正常黃斑的胞外基質的缺失和/或黃斑細胞的功能缺失。黃斑變性相關病癥的實例包括 AMD、北卡羅來納黃斑營養不良、Sorsby' s眼底營養不良、隱性黃斑營養不良、模式營養不良、卵黃狀黃斑變性、顯性玻璃疣，和malattia leventinese (輻射玻璃疣)。該術語還包括黃斑異常和/或變性之前或之后發生的黃斑外改變。因此，術語“黃斑變性相關病癥”還廣泛地包括改變或損壞黃斑完整性或功能的任何狀況(例如，RPE或Bruch' s膜的損傷)。 例如，該術語包括視網膜脫落、脈絡膜視網膜變性、視網膜變性、光感受器退化、RPE變性、粘多糖病、視桿-視椎營養不良、視椎-視桿營養不良和視椎變性。術語“補體組分”、“補體蛋白”或“補體組分蛋白”指參與激活補體系統的分子。經典途徑組分包括，例如Clq、Clr、Cls、C4、C2、C3、C5、C6、C7、C8、C9和C5b_9復合體(膜攻擊復合體MAC)。旁路途徑組分包括，例如因子B、因子D、備解素、H和I。術語“調節”或“調節”在此處互換使用，指活性或生物學過程(例如，補體過程) 的上調(即，激活或刺激(例如，通過激動或加強))和下調(即，抑制或阻遏(例如，通過拮抗、降低或抑制))。“調節”旨在描述過程的上調或下調。可通過刺激物的拮抗劑抑制通過該刺激物上調的過程。相反地，可通過修飾劑的激動劑抑制通過該修飾劑下調的過程。術語“補體途徑相關分子”、“補體途徑分子”和“補體途徑相關蛋白，，可互換使用， 并指在補體激活和響應激活的補體系統介導的或激活的補體系統觸發的下游細胞活性中起作用的多種分子。它們包括補體途徑的起始物(即，直接或間接觸發補體系統激活的分子)、在補體激活過程中產生的或起作用的分子(例如，補體蛋白/酶，如C3、C5、C5b-9、因子B、因子D、MASP-1和MASP-2)、補體受體或抑制劑(例如，簇蛋白、玻連蛋白、CRl或CD59)， 和激活的補體系統調節或觸發的分子(例如，膜攻擊復合體抑制因子、MACIF ；參閱例如， ugita等，J Biochem, 106 =589-92,1989) 因此，除了此處指出的補體蛋白，補體途徑相關分子還包括，例如C3/C5轉變酶調節子(RCA)，如補體受體類型1 (也稱為CRl或⑶35)、補體受體類型2 (也稱為CR2或⑶21)、膜輔因子蛋白(MCP或⑶46)，和C4bBP ；MAC調節子，如玻連蛋白、簇蛋白(也稱為“3 40，40”)、0^丄059，和同源限制因子(HRF)；免疫球蛋白鏈， 如 Ig κ、IgX 或 Ig γ ；Cl 抑制劑；和其它蛋白質，如 CR3、CR4 (CDl lb/18)和 DAF (CD 55)。術語“補體途徑調節的細胞活性”包括因以下引起的細胞損傷(恥-9攻擊復合體、血管通透性改變、平滑肌細胞的收縮和遷移、T細胞增殖、免疫粘著、樹突狀細胞、單核細胞、粒細胞和血小板的聚集、嗜中性粒細胞(PMN)和巨噬細胞的吞噬、遷移和激活。此外，補體途徑的激活導致補體途徑中副產物產生的促炎癥反應的增加。與補體途徑激活相關的病癥包括腎炎、哮喘、再灌注損傷、血液透析、類風濕性關節炎、全身性紅斑狼瘡、牛皮癬、多發性硬化癥、移植、阿爾茨海默氏病、aHUS、MPGN II或任何其它補體介導的疾病。與黃斑變性相關的病癥包括AMD、北卡羅來納黃斑營養不良、Sorsby' s眼底營養不良、隱性黃斑營養不良、模式營養不良、卵黃狀黃斑變性、顯性玻璃疣，和malattia Ieventinese (輻射玻璃疣)、黃斑異常和/或變性之前或之后發生的黃斑外改變、視網膜脫落、脈絡膜視網膜變性、視網膜變性、光感受器退化、RPE變性、粘多糖病、視桿-視椎營養不良、視椎-視桿營養不良和視椎變性粘多糖病。如此處所用，術語“受試者”包括任何人或非人動物。術語“非人動物”包括所有的非人脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，如非人靈長類、嚙齒類、兔、綿羊、狗、貓、馬、奶牛、鳥、兩棲動物、爬行動物等。術語“嵌合抗體”是這樣的抗體分子，其中(a)恒定區或其部分被改變、替換或交換，使得抗原結合位點(可變區)連接不同種類或改變種類的恒定區、效應功能和/或物種，或賦予嵌合抗體新性質的完全不同的分子，例如酶、毒素、激素、生長因子、藥物等；或 (b)可變區或其部分被具有不同或改變抗原特異性的可變區改變、替換或交換。例如，可通過來自人免疫球蛋白的恒定區替換小鼠恒定區來修飾小鼠抗體。由于用人恒定區進行替換，嵌合抗體在識別抗原中可保留其特異性，同時與最初的小鼠抗體相比，在人中具有降低的抗原性。術語“補體Ob蛋白”或“Ob”互換使用，并指不同物種中的Ob蛋白。例如，人 C3b 具有 SEQ ID NO :197(A鏈)和 198(B鏈)中闡明的序列。可從 Complement Technology Inc. (Tyler, TX)獲得人C3b。如下文實施例部分闡明產生獼猴C3b。術語“保守修飾的變體”應用到氨基酸和核酸序列。對于特定核酸序列，保守修飾的變體指編碼相同或基本相同氨基酸序列的那些核酸，或者其中所述核酸不編碼氨基酸序列，則指基本相同的序列。因為遺傳密碼的簡并性，大量功能相同的核酸編碼任何給定的蛋白質。例如，密碼子GCA、GCC、GCG和G⑶均編碼氨基酸丙氨酸。因此，在每一位置上(其中密碼子確定丙氨酸)，可將所述密碼子改變成任何所述相應的密碼子，而不改變所編碼的多肽。此類核酸變異是“沉默變異”，其為保守修飾變異的一種。此處編碼多肽的每一核酸序列也描述了所述核酸的每一種可能的沉默變異。本領域技術人員將認識到可修飾核酸中的每一密碼子(除了 AUG，其通常是甲硫氨酸的唯一密碼子，和TGG，其通常是色氨酸的唯一密碼子)，以產生功能上相同的分子。因此，在每一所述序列中暗含了編碼多肽的核酸的每一沉默變異。對于多肽序列，“保守修飾的變體”包括對多肽序列的各替換、缺失或添加，其導致對氨基酸用化學上類似的氨基酸進行替換。提供功能上類似的氨基酸的保守替換表為本領域所熟知。此類保守修飾變體除了并且不排斥本發明的多態性變體、種間同源物和等位基因。以下8組含有彼此為保守替換的氨基酸1)丙氨酸㈧、甘氨酸(G) ；2)天冬氨酸(D)，谷氨酸(E) ；3)天冬酰胺(N)，谷氨酰胺(Q) ；4)精氨酸(R)，賴氨酸(K) ；5)異亮氨酸(I)，亮氨酸(L)，甲硫氨酸(M)，纈氨酸(V) ；6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W) ；7)絲氨酸(S)， 蘇氨酸(T)；和8)半胱氨酸(C)、甲硫氨酸(M)(參閱例如，Creighton, Proteins (1984)) 0 在一些實施方案中，術語“保守序列修飾”用于指不顯著影響或改變含有氨基酸序列的抗體的結合特征的氨基酸修飾。術語“交叉-阻斷”、“交叉-阻斷的”在此處可互換使用，表示抗體或其它結合劑在標準的競爭性結合測定中干擾其它抗體或結合劑與C3結合的能力。可使用標準競爭結合測定法來測定抗體或其它結合劑能夠干擾另一抗體或結合分子與C3結合的能力或程度，并因此是否可以被稱為本發明的交叉阻斷。一種合適的測定法包括使用Biacore技術(例如通過使用BIAcore3000儀器(Biacore，Uppsala，Sweden))， 其可以使用表面等離振子共振技術測量相互作用的程度。用于測量交叉阻斷的另一測定法使用基于ELISA的方法。術語“表位”表示能夠特異性結合抗體的蛋白質決定簇。表位一般由分子的化學活性表面基團，如氨基酸或糖側鏈組成，并一般具有特定的三維結構特征，以及比電荷特征。 構象和非構象表位可以區分開，因為在變性溶劑的存在下失去與前者的結合，而不失去與后者的結合。如此處所用，術語IgG抗體或其片段(例如，Fab片段)的“高親和力”指對靶抗原具有10-8M或更低、10-9M或更低、10-10M、或10-11M或更低、或10-12M或更低、或10-13M 或更低的KD的抗體。然而，“高親和力”結合對于其它抗體同種型可以發生變化。例如，對于IgM同種型的“高親和力”結合指具有10-7M或更低，或10-8M或更低的KD的抗體。一方面，此處描述的抗Ob抗體或其抗原結合片段具有低于或等于InM，優選低于或等于200pM， 更優選低于或等于ΙΟΟρΜ，并甚至更優選低于或等于IOpM的KD。如此處所用，術語“人抗體”旨在包括具有可變區的抗體，在所述可變區中構架和 CDR區均來自人來源的序列。此外，如果抗體含有恒定區，所述恒定區也來自此類人序列，例如人種系序列，或突變形式的人種系序列。本發明的人抗體可包括不由人序列編碼的氨基酸殘基(例如，通過體外隨機或位點特異性誘變或通過體內體細胞突變引入的突變)。術語“人單克隆抗體”指具有可變區的顯示單一結合特異性的抗體，在所述可變區中構架和CDR區均來自人序列。在一個實施方案中，所述人單克隆抗體由雜交瘤產生，所述雜交瘤包括從轉基因非人動物，例如轉基因小鼠中獲得的B細胞，所述轉基因非人動物具有融合到無限增殖細胞中的包含人重鏈轉基因和輕鏈轉基因的基因組。“人源化”抗體是保留非人抗體的反應性，而在人中具有更低免疫原性的抗體。 例如這可通過保留非人⑶R區并用它們的人類對應物替換抗體剩余部分(即，恒定區以及可變區的構架部分)來實現。參閱例如，Morrison等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA,81 6851-6855，1984 ；Morrison 禾口 Oi，Adv. Immunol. ,44 :65-92,1988 ；Verhoeyen 等，Science, 239 :1534-1536,1988 ；Padlan, Molec. Immun. ,28 :489-498,1991 ；禾口 Padlan，Molec. Immun. ,31 169-217，1994。人工程化技術的其它實例包括，但不限于在US5，766，886中公開的Xoma技術。在兩條或更多核酸或多肽序列的上下文中，術語“相同的”或百分比“同一性”指相同的兩條或更多序列或子序列。當使用以下的序列比較算法或通過手工比對和視覺檢查測定，比較并比對在比較窗內或指定區域內用于最大對應時，如果兩條序列具有特定百分比(即，在特定區域上或當不指定時，在全長序列上60%同一性，任選地65 %、70%、75 %、 80 %、85 %、90 %、95 %或99 %同一性)的相同氨基酸殘基或核苷酸，那么兩條序列“基本相同”。任選地，同一性存在于長度至少約50個核苷酸(或10個氨基酸)的區域，或更優選地在長度至少100到500或1000或更多核苷酸(或20、50、200或更多氨基酸)的區域。對于序列比較，通常一條序列作為參考序列，測試序列與其進行比較。當使用序列比較算法時，將測試和參考序列輸入計算機，如果需要，指定子序列坐標，并指定序列算法程序參數。可使用默認程序參數，或可指定可選參數。所述序列比較算法然后基于程序參數計算測試序列相對于參考序列的百分比序列同一性。如此處所用，“比較窗口”包括參考選自20到600、一般約50到約200，更一般約100到約150的任何一定數量相鄰位置的區段，其中可在兩條序列進行最佳比對后將序列與相同數量相鄰位置的參考序列進行比較。用于比較的序列比對方法為本領域所熟知。例如通過Smith和Waterman(1970)Adv. Appl. Math. 2 :482c的局部同源性算法，通過 Needleman 和 Wunsch，J. Mol. Biol. 48 :443,1970 的同源性比對算法，通過搜索 Pearson 禾口 Lipman, Proc. Nat，1. Acad. Sci. USA 85 :2444,1988的相似性方法，通過這些算法的計算機化實現(Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr.，Madison, WI中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)，或通過手工比對和視覺檢查(參閱，例如 Brent 等，Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley&Sons, Inc. (Ringbou編輯，2003))進行序列最佳比對用于比較。適合于測定百分比序列同一性和序列相似性的算法的兩個實例是BLAST和BLAST 2. 0 算法，其分別描述于 Altschul 等，Nuc. Acids Res. 25 :3389-3402,1977 ；和 Altschul 等，J. Mol. Biol. 215 :403_410，1990 中。用于進行 BLAST 分析的軟件通過 National Center for Biotechnologyhformation公開獲得。該算法包括首先通過鑒定查詢序列中長度為W 的短字來鑒定高得分序列對(HSPs)，當在數據庫序列中用相同長度的字比對時，所述短字匹配或滿足某一正值閾值得分Τ。T稱為鄰近字得分閾值(Altschul等，上文)。這些初始鄰近字命中作為起始搜索的種子，以發現含有它們的更長HSI^s。只要可增加累積比對得分， 則沿每一序列的兩個方向延伸字命中。對于核苷酸序列，使用參數M(對一對匹配殘基的獎賞得分；總>0)和N(對錯配殘基的罰分；總<0)計算累積得分。對于氨基酸序列，使用得分矩陣來計算累積得分。當所述累積比對得分從其最高達到值跌落X量；因一個或更多負得分殘基比對累積，所述累積比對得分到達零或以下；或到達任何一條序列的末端時， 停止字命中在每一方向上的延伸。BLAST算法參數W、T和X決定了比對的靈敏度和速度。 BLASTN程序(對于核苷酸序列)使用默認字長(W) 11、期望值(E) 10、M = 5、N = -4和兩條鏈的比較。對于氨基酸序列，BLASTP程序使用默認字長3，和期望值(E) 10和BL0SUM62 得分矩陣(參閱 Henikoff 和 Henikoff，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89 :10915,1989)比對 (B) 50、期望值(E) 10、M= 5、N = -4和兩條鏈的比較。BLAST算法也進行兩條序列之間相似性的統計學分析(參閱例如，Karlin和 Altschul, Proc. Natl. Acad. Sci. U SA 90:5873-5787,1993)。BLAST 算法提供的一種相似性測量是最小總和概率(P(N))，其提供兩條核苷酸或氨基酸序列之間偶然發生匹配的概率的指示。例如，如果測試核酸與參考核酸的比較中最小總和概率低于約0. 2，更優選低于約 0. 01，并最優選低于約0. 001，那么認為核酸與參考序列相似。也可使用已經整合到ALIGN算法(版本2. 0)的E. Meyers和W. Miller (Comput. Appl.Biosci.，4 :11-17,1988)的算法，使用PAMl20加權殘基表，空位長度罰分12和空位罰分4測定兩條氨基酸序列之間的百分比同一性。此外，可使用已經整合到GCG軟件包(可在 www. gcg. com 上獲得)中的 GAP 程序的 Needleman 和 1Wunsch (J. Mol，Biol. 48 :444-453, 1970)算法，使用Blossom 62矩陣或PAM250矩陣，以及空位加權16、14、12、10、8、6或4和長度加權1、2、3、4、5或6來測定兩條氨基酸序列之間的百分比同一性。除了上文指出的序列同一性的百分比，兩條核酸序列或多肽基本相同的另一指示是第一條核酸編碼的多肽與針對第二條核酸編碼的多肽產生的抗體免疫交叉反應，如下文描述。因此，多肽通常與第二條多肽基本相同，例如，其中兩條肽僅因保守替換而不同。兩條核酸序列基本相同的另一指示是兩個分子或其互補序列在嚴格條件下彼此雜交，如下文描述。兩條核酸序列基本相同的又一指示是可使用相同的引物來擴增所述序列。術語“分離的抗體”指抗體，其基本不含具有不同抗原特異性的其它抗體(例如， 特異性結合Ob的分離的抗體基本不含特異性結合除Ob外的抗原的抗體)。然而，特異性結合C3b的分離的抗體可對其它抗原具有交叉反應性。此外，分離的抗體可基本不含其它細胞物質和/或化學品。術語“同種型”指重鏈恒定區基因提供的抗體種類(例如，IgM、IgE、IgG如IgGl 或IgG4)。同種型也包括這些種類中一種的修飾形式，其中已經進行修飾以改變Fc功能，例如來增強或減弱效應功能或與Fc受體的結合。如此處所用，術語“Kassoc”或“Ka”旨在指特定抗體-抗原相互作用的結合速率， 而如此處所用，術語“Kdis”或“Kd”旨在指特定抗體-抗原相互作用的解離速率。如此處所用，術語“KD”旨在指解離常數，其獲得于Kd與Ka的比值(即Kd/Ka)并表達為摩爾濃度 (M)。可使用本領域熟知的方法測定抗體的KD值。用于測定抗體KD的方法是通過使用表面等離振子共振，或使用生物傳感器系統如Biacore 系統。如此處所用，術語“單克隆抗體”或“單克隆抗體組合物”指單個分子組合物的抗體分子的制劑。單克隆抗體組合物對特定表位顯示單一結合特異性和親和力。術語“核酸”此處與術語“多核苷酸”可互換使用，并指單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。所述術語包括含有已知核苷酸類似物或修飾的骨架殘基或鍵的核酸，其為合成的、天然發生的和非天然發生的，其與參考核酸具有相似的結合性質，并且其以與參考核苷酸相似的方式進行代謝。此類類似物的實例包括，但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性-甲基膦酸酯、2-0-甲基核糖核苷酸、肽核酸(PNA)。除非另有指出，特定核酸序列也暗中包括其保守修飾的變體(例如簡并密碼子替換)和互補序列，以及明確指出的序列。尤其是，如下文詳細描述，可通過產生這樣的序列完成簡并密碼子替換，其中用混和堿基和/或脫氧肌苷殘基替換一個或更多所選(或全部) 密碼子的第三個位置(Batzer 等，Nucleic Acid Res. 19 :5081,1991 ；Ohtsuka 等，J. Biol. Chem. 260 :2605-2608,1985 ；禾口 Rossolini 等，Mol. Cell. Probes 8 :91-98,1994)。術語“有效連接”指兩個和更多多核苷酸(例如DNA)區段的功能關系。通常，其指轉錄調節序列與轉錄序列之間的功能關系。例如，如果啟動子或增強子序列刺激或調節
15編碼序列在適當宿主細胞或其它表達系統中的轉錄，那么該啟動子或增強子序列有效連接編碼序列。一般地，有效連接轉錄序列的啟動子轉錄調節序列與轉錄序列在物理空間上鄰近，即它們是順式作用。然而，一些轉錄調節序列，如增強子不需要與編碼序列(增強子增強其轉錄)在物理空間上鄰近或位于其附近。如此處所用，術語“優化的”表示已經使用生產細胞或生物，一般是真核細胞，例如畢赤酵母細胞、中國倉鼠卵巢細胞(CHO)或人細胞中優選的密碼子改變核苷酸序列，以編碼氨基酸序列。將優化的核苷酸序列改造以完全或最大可能地保留起始核苷酸序列(其也稱為“親本”序列)最初編碼的氨基酸序列。已經改造了此處的優化序列以具有哺乳動物細胞中優選的密碼子。然而，此處也考慮其它真核細胞或原核細胞中這些序列的優化表達。 優化的核苷酸序列編碼的氨基酸序列也稱為優化的。術語“多肽”和“蛋白質”此處互換使用來指氨基酸殘基的聚合物。所述術語應用到氨基酸聚合物，其中一個或更多氨基酸殘基是相應天然發生氨基酸的人工化學模擬物， 還應用到天然發生的氨基酸聚合物和非天然發生的氨基酸聚合物。除非另有指出，特定的多肽序列也暗中包括其保守修飾的變體。如此處所用，術語“重組人抗體”包括通過重組方法制備、表達、產生或分離的所有人抗體，如從對人免疫球蛋白基因轉基因或轉染色體的動物(例如小鼠)或從中制備的雜交瘤中分離的抗體、從經轉化以表達人抗體的宿主細胞，例如從轉染瘤中分離的抗體、從重組、組合人抗體庫文中分離的抗體，和通過任何其它手段制備、表達、產生或分離的抗體，所述手段包括將全部或部分人免疫球蛋白基因、序列剪切成其它DNA序列。此類重組人抗體具有可變區，其中構架和CDR區均來自人種系免疫球蛋白序列。然而在某些實施方案中，此類重組人抗體可進行體外誘變(或者，當使用人Ig序列轉基因的動物時，進行體內體細胞誘變)，因此重組抗體的VH和VL區的氨基酸序列是當來自并與人種系VH和VL序列相關時可能在體內人抗體種系所有組成成分中不天然存在的序列。術語“重組宿主細胞”(或簡單地“宿主細胞”)指已經向其中引入重組表達載體的細胞。應理解此類術語不僅旨在指特定受試者細胞，還指此細胞的后代。因為某些修飾可能因突變或環境影響而在后代中出現，所以該后代實際上可能與親本細胞不相同，但仍然包括在此處所用術語“宿主細胞”的范圍內。術語“受試者”包括人和非人動物。非人動物包括所有的脊椎動物，例如哺乳動物和非哺乳動物，如非人靈長類、羊、狗、奶牛、雞、兩棲動物和爬行動物。除了指出時，術語“患者”或“受試者”此處可互換使用。術語“治療”包括施用組合物或抗體，以防止或延遲癥狀、并發癥或疾病(例如 AMD)的生物化學指征的開始，緩解癥狀或阻止或抑制疾病、狀況或病癥的進一步發展。治療可以是預防性的(以防止或延遲疾病開始，或防止其臨床或亞臨床癥狀的表現)或在疾病表現后治療性抑制或緩解癥狀。術語“載體”旨在指能夠轉運已經連接另一多核苷酸的多核苷酸分子。一種類型的載體是“質粒”，其指已經連接額外DNA片段的環形雙鏈DNA環。另一類型的載體是病毒載體，如腺伴隨病毒載體(AAV或AAV2)，其中額外的DNA區段可連接到病毒基因組內。某些載體能夠在其中引入載體的宿主細胞中進行自主復制(例如，具有細菌復制起點的細菌載體和游離型哺乳動物載體)。其它載體(例如非游離型哺乳動物載體)可在引入宿主細胞后整合到宿主細胞的基因組中，并由此與所述宿主基因組一起復制。此外，某些載體能夠指導它們有效連接的基因的表達。此類載體此處稱為“重組表達載體”(或簡單地，“表達載體”)。一般而言，在重組DNA技術中有用的表達載體經常是質粒的形式。在本說明書中， “質粒”和“載體”可互換使用，因為質粒是載體的最常用形式。然而，本發明旨在包括此類其它形式的表達載體，如病毒載體(例如，復制缺陷型逆轉錄病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)， 其起等同的功能。如此處所用，術語“C!3b活性”表示Ob產生下游的補體旁路的活性，包括但不限于例如C3轉變酶的活性，C5轉變酶的活性。可使用此處描述的測定，如但不限于溶血測定， 測定C3a和Cfe產生的測定、Ob沉積測定，和膜攻擊復合體(MAC)沉積測定來測定Ob活性。如此處所用，“Ob活性的改變”或“C!3b活性的調節”指通過一種或多種此處描述的測定法測定Ob活性，其中Ob活性相對于相關對照增加或降低至少10%。例如，當存在抗體或片段的情況下Ob活性相對于缺少抗體或片段情況下C3b的活性降低或增加至少10% 時，可以說本發明的抗體或抗原結合片段調節Ob活性。如此處所用，術語“cyno”或“獼猴”指獼猴(Macaca fascicularis)。附圖簡述

圖1顯示，C3b抗體以相對于C3高至少1000倍的選擇性結合C3b。圖2顯示了在10%人或獼猴血清中抗C!3b抗體抑制溶血的能力的實例。圖3顯示了 C!3b抗體抑制C!3b產生為C3分解產物的能力的實例。圖4顯示了證明C!3b抗體抑制MAC沉積的能力的示例性數據。圖5顯示，C3b抗體通過抑制產生C3a和C5a阻斷旁路途徑驅動的補體激活。圖6A顯示了 SDS-PAGE凝膠，其顯示了 tick-over轉變酶活性的抑制。圖6B顯示了 6A凝膠中對Ob產生的抑制的定量。圖6C顯示了抗Ob抗體抑制預形成的C3轉變酶活性。圖7顯示抗體c;3b抗體體外抑制C5轉化酶活性。圖8A顯示了通過C!3b抗體抑制因子B結合C3b。圖8B顯示了通過C!3b抗體抑制因子P結合C3b。圖8C顯示了通過C!3b抗體抑制因子H結合C3b。圖8D顯示了通過C3b 抗體抑制C!3b-C;3b 二聚體形成。圖9顯示了針對C3d的抗體交叉反應性測定的結果。圖10顯示了針對C5的抗體交叉反應性測定的結果。圖11顯示了測定Ob抗體是否結合i Ob或C3c的結合測定的結果。圖12顯示了物種交叉反應性研究的結果。圖12A顯示了大鼠交叉反應性。圖12B 顯示了兔交叉反應性。圖12C顯示了豬交叉反應性。圖12D顯示了小鼠交叉反應性。圖 12E顯示了豚鼠交叉反應性。圖12F顯示了狗交叉反應性。發明詳述本發明部分基于這樣抗體分子的發現，所述抗體分子特異性結合人和獼猴C3b。本發明涉及全長IgG形式的抗體(參閱例如，抗體9556、9611、9612、9609、9610、9674和9675) 以及其抗原結合片段，如Fab片段(例如，參閱抗體9124、9397、9398、9136、9141、9373和 9423)。因此，本發明提供特異性結合補體Ob蛋白(例如，人C3b，獼猴C3b)的抗體、藥物組合物、生產方法和使用此類抗體和組合物的方法。C!3b 抗體本發明提供特異性結合C3b (例如，人C3b，獼猴C3b)的抗體。在一些實施方案中， 本發明提供特異性結合人和獼猴C3b的抗體。本發明的抗體包括，但不限于如實施例中所述分離的人單克隆抗體。本發明提供特異性結合Ob蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含具有 SEQ ID NO :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的氨基酸序列的VH結構域。本發明還提供特異性結合Ob蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含具有下文表1中列出的任何一個VH CDRs的氨基酸序列的VH CDR0具體而言， 本發明提供特異性結合Ob蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含(或者，組成為)具有下文表1中列出的任何一個VH CDRs的氨基酸序列的一個、兩個、三個、四個、五個或更多VH⑶Rs。本發明提供特異性結合C!3b蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含具有 SEQ ID NO :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和 190 的氨基酸序列的VL結構域。本發明還提供特異性結合Ob蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含具有下文表1中列出的任何一個VL CDRs的氨基酸序列的VL CDR0具體而言， 本發明提供特異性結合Ob蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體，所述抗體包含(或者，組成為)具有下文表1中列出的任何一個VL CDRs的氨基酸序列的一個、兩個、三個或更多 VL CDRs。本發明的其它抗體包括已經突變的氨基酸，其在CDR區中仍然與表1所述序列中描述的⑶R區具有至少百分之60、70、80、85、90或95的同一性。在一些實施方案中，其包括突變氨基酸序列，其中當與表1所述序列中描述的CDR區比較時CDR區中不超過1、2、3、 4或5個氨基酸已經發生突變。本發明還提供編碼特異性結合C3b蛋白質(例如，人和/或獼猴C3b)的抗體的 VH、VL、全長重鏈和全長輕鏈的核酸序列。可優化此類核酸序列用于在哺乳動物細胞中表達(例如，表 1 顯示了抗體 9556、9611、9612、9609、9610、9674 和 9675，以及 Fab 片段 9124、 9397、9398、9136、9141、9373和9423的重鏈和輕鏈的優化核酸序列)。表1.本發明C!3b抗體、Fabs與C3b蛋白質的實例表權利要求
1.分離的抗體或其抗原結合片段，其特異性結合人或獼猴補體C!3b蛋白，其中所述抗體以低于或等于IOOpM的KD結合人C3b。
2.權利要求1的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段也以低于或等于250pM的KD結合獼猴C3b。
3.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段以低于或等于IOpM的KD結合人C3b。
4.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段以低于或等于2pM的KD結合人C3b。
5.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體如通過體外溶血測定法所測定以低于或等于65nM的IC50抑制人補體旁路。
6.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體如通過體外Ob沉積所測定以低于或等于50nM的IC50抑制人補體旁路。
7.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體如通過補體膜攻擊復合體的沉積所測定以低于或等于5nM的IC50抑制人補體旁路。
8.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體如通過產生C3a和Cfe所測定以低于或等于IOOnM的IC50抑制補體旁路。
9.權利要求1的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段特異性結合人或獼猴的補體C3b蛋白，并與表1中描述的抗體交叉競爭。
10.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。
11.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是人或人源化抗體。
12.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是嵌合抗體。
13.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是單鏈抗體。
14.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是Fab片段或kFv片段。
15.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體是IgG同種型。
16.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體包含這樣的構架，其中氨基酸已經替換到來自各人VH或VL種系序列的抗體構架。
17.任一前述權利要求的分離的抗體，其中所述抗體以比所述抗體結合C3的親和力高至少1000倍的親和力結合C3b。
18.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含選自 SEQ ID NOs :1、15、29、43、57、71、85、99、113、127、141、155、169 和 183 的重鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :2、16、30、44、58、72、86、100、114、128、142、156、170 和 184 的重鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :3、17、31、45、59、73、87、101、115、129、143、157、171 和 185 的重鏈CDR3，其中所述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。
19.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含選自 SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173 和 187 的輕鏈 CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的輕鏈CDR3，其中所述分離的單克隆抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。
20.權利要求18的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述單克隆抗體還包含選自SEQ ID NOs :4、18、32、46、60、74、88、102、116、130、144、158、172 和 186 的輕鏈 CDRl ；選自 SEQ ID NOs :5、19、33、47、61、75、89、103、117、131、145、159、173和 187 的輕鏈CDR2 ；和選自 SEQ ID NOs :6、20、34、48、62、76、90、104、118、132、146、160、174 和 188 的輕鏈 CDR3。
21.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含選自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的重鏈可變域序列，還包括選自 SEQID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和190的輕鏈可變域序列，其中所述分離的抗體或其抗原結合片段結合補體蛋白C3b。
22.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含與選自 SEQ ID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175 和 189 的序列具有至少95%序列同一性的重鏈可變域，其中所述抗體結合C3b。
23.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含與選自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少95%序列同一性的輕鏈可變域，其中所述抗體結合C3b。
24.權利要求20-23的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或抗原結合片段還包含與選自 SEQ ID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176 和 190 的序列具有至少95%序列同一性的輕鏈可變域。
25.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含與選自 SEQ ID NOs :9、23、37、51、65、79、93、107、121、135、149、163、177 和 191 的序列具有至少95%序列同一性的重鏈，其中所述抗體結合C3b。
26.任一前述權利要求的分離的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含與選自 SEQ ID NOs :10、24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178和 192 的序列具有至少95%序列同一性的輕鏈，其中所述抗體結合C3b。
27.權利要求25的分離的抗體或其抗原結合片段，其還包含與選自SEQID NOs=IO, 24、38、52、66、80、94、108、122、136、150、164、178 和 192 的序列具有至少 95%序列同一性的輕鏈。
28.藥物組合物，其包含任一前述權利要求的抗體或其抗原結合片段和藥學上可接受的載體。
29.分離的核酸，其包含編碼這樣的多肽的序列，所述多肽包含與選自SEQID NOs :7、21、35、49、63、77、91、105、119、133、147、161、175和189 的序列具有至少 95%序列同一性的重鏈可變域。
30.分離的核酸，其包含編碼這樣的多肽的序列，所述多肽包含與選自SEQID NOs :8、22、36、50、64、78、92、106、120、134、148、162、176和 190 的序列具有至少 95%序列同一性的輕鏈可變域。
31.載體，其包含權利要求27或觀的核酸。
32.分離的宿主細胞，其包含編碼任一前述權利要求的抗體或其抗原結合片段的重鏈的重組DNA序列，和編碼任一前述權利要求的抗體或其抗原結合片段的輕鏈的第二條重組 DNA序列，其中所述DNA序列有效連接啟動子，并能夠在宿主細胞中表達。
33.權利要求30的分離的宿主細胞，其中所述抗體是人單克隆抗體。
34.權利要求30的分離的宿主細胞，其中所述宿主細胞是非人哺乳動物細胞。
35.治療年齡相關性黃斑變性的方法，其包括向需要治療的受試者施用有效量的包含權利要求1-27的抗體或其抗原結合片段的組合物。
36.權利要求33的方法，其中所述受試者是人。
37.在受試者中抑制補體旁路的方法，其包括向需要抑制的受試者施用有效量的包含權利要求1-27的抗體或其抗原結合片段的組合物。
38.權利要求35的方法，其中所述受試者是人。
全文摘要
本發明涉及結合人和獼猴補體蛋白C3b的抗體及其抗原結合片段，以及使用其的組合物和方法。
文檔編號C07K16/18GK102459334SQ201080026538
公開日2012年5月16日 申請日期2010年5月5日 優先權日2009年5月6日
發明者A·克勞澤, B·C·吉爾德, B·埃特馬德-吉爾博特遜, I·克拉格, I·斯普勞斯基, K·趙, M·羅古斯卡, Y-I·金 申請人:諾瓦提斯公司