專利名稱：分離治療用肽的方法
分離治療用肽的方法本發明涉及分離用于治療各種病癥的肽的方法，所述病癥包括胃腸道病癥、肥胖、 充血性心力衰竭和良性前列腺增生。腸道易激綜合征(IBQ是常見的腸慢性病癥，其單獨在美國影響2千萬至6千萬人。IBS是胃腸病學家診斷的最常見的病癥(檢查的患者的觀％)并占初級保健醫生出診的 12% (Camilleri 2001, Gastroenterology 120:652-668)。在美國，通過衛生保健用途的直接成本和曠工的間接成本，IBS的經濟影響估計每年在$250億(Talley 1995， Gastroenterology 109 :1736-1741)。IBS患者具有三次以上的曠工并有報道生活質量降低。患病者可能不能或不愿意參加社會活動、維持工作或旅行甚至短距離(Drossman 1993， Dig Dis Sci 38:1569-1580)。由于很少有處方方案來治療IBS，因此在該人群中存在巨大的未滿足的醫療需求。利那洛肽(Linaclotide)是一種新型的Hmer肽和鳥苷酸環化酶C型受體(GCC) 激動劑，其刺激環鳥苷酸(cGMP)的產生。體外研究顯示，利那洛肽以不同的濃度增加人腸細胞中的cGMP，以及在小鼠和大鼠的體內研究顯示，口服利那洛肽對增加小腸運動性、液體分泌和減少內臟痛具有希望的效果。利那洛肽是具有三個二硫鍵的14-氨基酸環肽，序列由環化的(SEQ ID NO. 1) Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr 組成，在 1 位和 6 位、2 位和 10
位以及5位和13位的半胱氨酸殘基之間具有二硫鍵，如下所示
權利要求
1.沉淀肽的方法，包括以下步驟a)提供環化肽的異丙醇或乙醇水溶液，所述環化肽包括氨基酸序列(SEQID NO. 1) Cys_Cys-Glu_Tyr_Cys_Cys—Asn-Pro—Ala-Cys_Thr_Gly-Cys_Tyrο
2.權利要求1所述的方法，其中所述醇溶液是異丙醇溶液，并且所述方法進一步包括以下步驟b)用異丙醇進液反萃取步驟a)得到的水溶液以減小所述溶液中水的百分比。
3.權利要求1所述的方法，其中所述醇溶液是乙醇溶液，并且所述方法進一步包括以下步驟b)用乙醇進液反萃取步驟a)得到的所述溶液以減小所述溶液中水的百分比。
4.權利要求1或2所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%至大約70%異丙醇水溶液。
5.權利要求4所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%異丙醇至大約65%異丙醇水溶液。
6.權利要求5所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%異丙醇至大約60%異丙醇水溶液。
7.權利要求6所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約50%至大約60%異丙醇水溶液。
8.權利要求7所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約55%異丙醇水溶液。
9.權利要求1或3所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約55%至大約75%乙醇水溶液。
10.權利要求9所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約60%至大約75%乙醇水溶液。
11.權利要求10所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約65%至大約75%乙醇水溶液。
12.權利要求1-11中任一項所述的方法，其中步驟b)中用異丙醇或乙醇進液反萃取降低所述溶液中水的百分比直到異丙醇或乙醇的百分比大于95%，優選96%，更優選97%， 最優選98%。
13.權利要求1-12中任一項所述的方法，進一步包括以下步驟c)用庚烷進液反萃取步驟b)得到的溶液以減小所述溶液中異丙醇或乙醇的百分比。
14.權利要求13所述的方法，其中步驟c)中用庚烷進液反萃取降低異丙醇或乙醇的百分比直到庚烷的百分比大于98 %，優選98. 5 %，更優選99 %，甚至更優選99. 5 %，最優選 99. 9%。
15.權利要求1所述的方法，進一步包括以下步驟 b)用水稀釋步驟a)得到的所述溶液。
16.權利要求15所述的方法，其中所述溶液被稀釋到約3/1ν/ν水/異丙醇或約3/1 ν/ν水/乙醇以沉淀SEQ ID No. 1。
17.分離肽的方法，包括以下步驟a)提供環化肽的異丙醇或乙醇水溶液，所述環化肽包括氨基酸序列(SEQID NO. 1) Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyrb)噴霧干燥步驟a)得到的所述溶液。
18.權利要求17所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%至大約70%異丙醇水溶液。
19.權利要求18所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%異丙醇至大約65%異丙醇水溶液。
20.權利要求19所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約45%異丙醇至大約60%異丙醇水溶液。
21.權利要求20所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約50%至大約60%異丙醇水溶液。
22.權利要求21所述的方法，其中所述異丙醇水溶液是大約55%異丙醇水溶液。
23.權利要求22所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約55%至大約75%乙醇水溶液。
24.權利要求23所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約60%至大約75%乙醇水溶液。
25.權利要求M所述的方法，其中所述乙醇水溶液是大約65%至大約75%乙醇水溶液。
26.本文所描述的方法，具體參考上述實施例。
全文摘要
公開了分離利那洛肽的方法，所述利那洛肽為具有三個二硫鍵的環化的14-氨基酸肽。該序列由Cys-Cys-Glu-Tyr-Cys-Cys-Asn-Pro-Ala-Cys-Thr-Gly-Cys-Tyr(SEQ ID NO 1)組成，二硫鍵位于1位和6位、2位和10位以及5位和13位的半胱氨酸殘基之間。該藥物充當GCC超激動劑，提高細胞內cGMP成分，用于治療各種病癥，包括胃腸道病癥、肥胖、充血性心力衰竭和良性前列腺增生。
文檔編號C07K7/08GK102482326SQ201080025605
公開日2012年5月30日 申請日期2010年4月7日 優先權日2009年4月10日
發明者M·P·弗萊明, R·D·皮特森 申請人:科登制藥科羅拉多公司