用于調節靶細胞上補體調節蛋白的活性的組合物和方法

專利名稱：用于調節靶細胞上補體調節蛋白的活性的組合物和方法
用于調節靶細胞上補體調節蛋白的活性的組合物和方法交叉參考相關申請本申請要求2009年3月31提交的美國臨時申請61/165，434和2009年10月27 日提交的美國臨時申請61/255，450的利益，將所述臨時申請通過引用整體并入本文。政府許可權的聲明本發明是在由國立衛生研究院授予的基金號HL078836下由美國政府資助進行的。美國政府在本發明中具有一定的權利。背景補體系統是免疫系統的體液方面的主要效應器。補體激活的經典途徑包括可溶性成分例如某些種類和亞類的抗體與體內的抗原靶的結合。此類結合的抗體的Fc區域中構象的變化將結合位點暴露給Cl (以其不活動狀態存在的補體系統的可溶性成分)。在穩定結合后，Cl經歷構象變化，從而導致Cl亞成分之一的活躍蛋白酶活性。該蛋白酶活性啟動補體成分之間受到高度調節的相互作用的級聯。級聯的結果是靶細胞上膜攻擊復合物 (membrane attack complex, MAC)的裝配。補體激活的相互作用的級聯中的重要步驟是將成分C3轉變成活性C3b的步驟， 因為在該步驟中存在激活信號的大量擴增。具體地，單個C3轉化酶能夠將數百個C3分子轉化成C3b。每一個C!3b成分轉而形成C5轉化酶的部分，產生C5b。每一個激活的rab分子啟動MAC的形成。MAC是貫穿細胞膜以產生跨膜小孔的大分子結構。小孔破壞膜的完整性，從而允許離子和小分子自由地擴散穿過，從而導致補體依賴性細胞溶解(complement dependent cytolysis, CDC)0單克隆抗體(mAb)已成為許多疾病的新型治療劑的潛在強有力種類。例如，在腫瘤學領域，存在數種用于治療癌癥的市售治療性mAb，并且目前有數百種mAb處于臨床開發中(參見 J. Castillo，等人，Experimental Hematology 36 :755-768 (2008)) 許多此類治療性mAb通過激活補體級聯(從而導致MAC在轉化的腫瘤細胞上裝配，從而引發CDC)來起作用。該治療方法可以是有利的，因為抗體可被特異性靶向特異于轉化的腫瘤細胞的抗原， 從而避免許多因既有治療而引起的副作用。然而，由于患病細胞通過膜補體調節蛋白(CRP)例如⑶35、⑶46、⑶55和⑶59 的表達阻止通過⑶C導致的殺傷的能力，治療性mAb的治療潛能可能是有限的(D. Gancz 和 Z. Fishelson，Molecular Immunology 46:2794-2800(2009) ;J. Golay,等人，Blood 98 :3383-3389(2001) ；K. A. Gelderman 等人，Laboratory Investigation :A Journal of Technical Methods and Pathology 82:483—493(2002)；禾口 N. Donin 等人，Clinical and Experimental Immunology 131 :254-263 (2003))。CD46 和 CD55 在 C3 活化階段阻斷補體級聯并且CD59阻止補體的MAC的裝配(Z. Fishelson等人，Molecular Immunology 40 109-123(2003))ο因此，需要有減少⑶35、⑶46、⑶55和⑶59在靶細胞表面上的存在以減弱CRP介導的對補體MAC的抑制的組合物和方法。概要
本概要被提供用以以簡化形式介紹將在下文詳細描述中進一步說明的概念的選擇。本概要無意鑒定所述主題的主要特征，也無意用作幫助確定所述主題的范圍。本文中描述的本發明提供了能夠減少靶細胞上補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度的組合物和試劑。本發明還提供了鑒定此類組合物和試劑的方法、其制備方法和其用途。此外，本發明還提供了增加靶細胞或組織對治療劑介導的補體依賴性細胞溶解(CDC) 和治療劑介導的靶細胞或組織上膜攻擊復合物(MAC)的裝配的易感性的方法。在一個方面，本文中描述的本發明提供了包含能夠減少靶細胞表面上補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度的經修飾多肽的組合物，其中所述多肽包含非天然存在的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述多肽引起CRP的內化或隔離(sequestration)。在另一個實施方案中，所述多肽結合CRP。在某些實施方案中，所述多肽以InM或更小的解離常數 (Kd)結合CRP或所述多肽以.65nM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。在一個具體的實施方案中，所述多肽是分離的病毒蛋白質。在這樣的實施方案中，所述多肽來源于腺病毒纖維鈕蛋白(fiber knob protein)—例如，Ad35纖維鈕蛋白。在一個相關實施方案中，所述多肽來源于在選自Asp207、Ilir245、Ile256的殘基和其組合上包含至少一個氨基酸置換的Ad35 纖維鈕蛋白。在具體的實施方案中，所述氨基酸置換為Asp207Gly、Thr245Ala、Ile256Leu 或其組合。在另一個實施方案中，所述多肽小于25，000道爾頓。在另一個實施方案中，所述組合物包含所述多肽的二聚體形式、所述多肽的三聚體形式或所述多肽的同源三聚體形式。在這些實施方案中，CRP為跨膜蛋白和/或為GPI連接蛋白(GPI-linked protein) 0 在具體的實施方案中，CRP為⑶46、⑶55、⑶59或⑶35。在一個非常具體的實施方案中， CRP為⑶46。在另一個具體的實施方案中，所述多肽結合⑶46。這些實施方案中提供的組合物還能使靶細胞對抗體介導的補體依賴性細胞溶解和/或膜攻擊復合物的裝配敏感。在本文中描述的實施方案中，靶細胞可以是腫瘤細胞。所述腫瘤細胞可選自獲自癌的細胞、獲自肉瘤的細胞、獲自母細胞瘤(blastoma)的細胞、獲自胚細胞癌的細胞和獲自血液腫瘤的細胞。所述腫瘤細胞還可選自原發性淋巴瘤細胞、Raji-Burkitt' s淋巴瘤細胞、BJAB細胞、Farage細胞、BT474細胞、HT18M細胞、LoVo細胞、Η ^9細胞、Mino細胞、Jurkat細胞、 Κ562細胞、HeLa細胞、Α549細胞、SK0V3細胞、ΗΤ29細胞和MDA235MB細胞。在一個具體的實施方案中，靶細胞包含實體瘤的細胞表面標志。所述實體瘤可以是乳腺、肺、結腸直腸系統、胃、前列腺、卵巢、子宮、宮頸、腎、胰腺、肝、腦、頭和頸、鼻咽系統或食管的腫瘤。在另一個具體的實施方案中，靶細胞包含肉瘤的細胞表面標志。肉瘤可以是平滑肌肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤或尤因肉瘤(Ewing' s sarcoma)。在另一個具體的實施方案中，靶細胞包含血液腫瘤的細胞表面標志。血液腫瘤可以是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一個更具體的實施方案中，靶細胞是B細胞，可以是正常B細胞或惡性B細胞。靶細胞可表達選自CD3、 CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD35、CD37、CD38、CD40、CD44、CD52、CD70、 CD80、CD133、CD200、表皮生長因子受體1 (EGFR)、表皮生長因子受體2 (Her2/neu)、人乳脂肪球(HMFGl)、白細胞介素2受體(IL2R)、粘蛋白1和血管內皮生長因子中的一個或多個細胞標志。在一個具體的實施方案中，靶細胞表達CD20。在相關實施方案中，所述多肽還能夠增加靶細胞表面上的補體激活和/或所述多肽能夠增加靶細胞表面上膜攻擊復合物(MAC) 的裝配。在其他相關實施方案中，當與基線或未修飾的多肽相比較時，所述多肽能夠減少補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度至少25% ；所述多肽能夠減少補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度至少M小時；和/或所述多肽在約25ng/ml或更低的濃度下具有活性。在其他相關實施方案中，所述多肽不是抗體或抗體片段；所述多肽不是生長因子或細胞因子； 所述多肽不結合基因的轉錄調控區；所述多肽不結合基因的啟動子區域、增強子區域、沉默子區域(silencer region)或絕緣子區域(insulator region)；和/或所述多肽不結合轉錄因子。在其他相關實施方案中，所述多肽在長度上為至少120個氨基酸；所述多肽包含天然存在的蛋白質或蛋白質結構域的至少一個突變；所述多肽包含與天然存在的蛋白質或蛋白質結構域至少90%的氨基酸序列同源性；和/或所述多肽不是天然存在的蛋白質或蛋白質片段。在其他相關實施方案中，所述多肽被進一步修飾以減少免疫原性。所述多肽的免疫原性可通過將所述多肽偶聯至烷基-PEG，通過表位去免疫化作用，通過共施用免疫抑制劑， 通過加入耐受方案(tolerizing regimen)，通過糖基化所述多肽或通過共施用增強補體激活的試劑來進行減弱。在另一個實施方案中，該方面中提供的組合物包括經修飾的病毒或經修飾CRP-相互作用的微生物-例如奈瑟球菌屬(Neisseria)或鏈球菌(Mr印tococcal) 菌株。在一個這樣的實施方案中，病毒能夠與CRP相互作用并且選自腺病毒、腺伴隨病毒、 逆轉錄病毒、皰疹病毒、麻疹病毒(Edmonston株)、人皰疹病毒6、牛病毒性腹瀉病毒和人柯薩奇病毒。在一個具體的相關實施方案中，該方面中提供的組合物不包括腺病毒。在另一個具體的相關實施方案中，該方面中提供的組合物包括腺病毒-例如，選自Adll、Adl6、 Ad21、Ad34、Ad35和Ad50腺病毒血清型。在一個非常具體的實施方案中，腺病毒為Ad35，并且Ad35腺病毒任選地包括突變的纖維鈕蛋白。 在另一個方面，本文中描述的本發明提供了具有第一結構域和第二結構域的分離的多肽，其中所述第一和第二結構域結合CRP，其中所述第一結構域包含SEQ ID NO 15,SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、 SEQ ID NO 22,SEQ ID NO 23,SEQ ID NO 24,SEQ ID NO 25,SEQ ID NO26,SEQ ID N0: 27、SEQ ID NO :28, SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :30 或 SEQ ID NO :31 所示的氨基酸序列，并且其中X1不是天冬氨酸，X2不是蘇氨酸或1。不是異亮氨酸。在一個具體的實施方案中，X1 為甘氨酸或&為谷氨酸。在另一個具體的實施方案中， 為丙氨酸，或&為任意非極性氨基酸。在另一個具體的實施方案中， 為亮氨酸或任意非極性氨基酸。在一個相關實施方案中，第一結構域包含SEQ ID NO :19中所示的氨基酸序列，其中&不是天冬氨酸；SEQ ID N0:26，其中)(2不為蘇氨酸；或SEQ ID NO :31，其中&不為異亮氨酸。在另一個相關的實施方案中，第二結構域包含SEQ ID NO :19中所示的氨基酸序列，其中&不是天冬氨酸；SEQ ID N0:26，其中)(2不是蘇氨酸；或SEQ ID NO :31，其中&不是異亮氨酸。在另一個相關實施方案中，第一和第二結構域結合相同的CRP，或可選地，第一和第二結構域結合不同的CRP。在本發明的該方面中提供的實施方案中，CRP為⑶35、⑶46、⑶55或⑶59。在一個具體的實施方案中，CRP為CD46。在相關實施方案中，所述多肽引起CRP至細胞內的內化或隔離；和 /或所述多肽以約InM或更小或甚至約0. 65nM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。在一些實施方案中，所述多肽不是抗體或抗體片段。所述多肽可以是分離的、經修飾的病毒蛋白-例如，來源于腺病毒纖維鈕蛋白的多肽。此類來源于腺病毒的纖維鈕結構域的多肽可以例如選自Adll、Adl6、Ad21、Ad34、Ad35*Ad50。在一個非常具體的實施方案中，所述多肽來源于在選自Asp207、Thrf45、Ile256和其組合的殘基上包含至少一個氨基酸置換的Ad35纖維鈕結構域；或，更具體地，所述氨基酸置換為Asp207Gly、Thr245Ala, Ile256Leu或其組合。在另一個實施方案中，所述多肽低于25，000道爾頓。在其他相關實施方案中，所述提供的多肽二聚化、三聚化或甚至同源三聚化。在一個相關實施方案中，所述多肽自發地同源三聚化。三聚化的這樣的多肽還可具有三聚化結構域-例如，來源于病毒蛋白質的三聚化結構域。在一個具體的實施方案中，所述三聚化結構域是噬菌體T4彈力素(fibritin)結構域或逆轉錄病毒纖維蛋白σ 1結構域。在一個非常具體的實施方案中，三聚化結構域包含SEQ ID NO :32中所示的氨基酸序列。在本文中提供的一些實施方案中，所述三聚體具有三維結構，并且同源三聚體(homotrimer)的每一個多肽包含2個環，其中每一個環結合CRP。具體地，環之間的氨基酸序列是可置換的并且基本上不改變對CRP的結合。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了包含本文中描述的多肽中任一種的多肽復合物。在一個實施方案中，所述多肽結合2個或更多個CRP分子。在一個相關實施方案中，CRP為⑶35、⑶46、⑶55或⑶59。在一個具體的實施方案中，CRP為⑶46。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了包含治療有效量的任何本文中描述的多肽的藥物組合物。在一個具體的實施方案中，藥物組合物還包含第二治療劑。在這樣的實施方案中，第二治療劑可選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體 (hybrid antibody)、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體；或第二治療劑可選自細胞毒性劑、細胞抑制劑(cytostatic agent)、化療劑(chemotherapy agent)、 補體激活劑(complement activating agent)、CRP 表達調節劑、放射物(radiation)、 免疫調節劑、促細胞凋亡試劑、熱激蛋白質的抑制劑、蛋白酶抑制劑、脫唾液酸化試劑 (desialyating agent)、MMP抑制劑和PKC抑制劑。在一個具體的實施方案中，第二治療劑為抗體-例如，抗體選自表1中所列的那些抗體，或甚至更具體地，選自利妥昔單抗、Arzerra、愛必妥(Eribitux)、米羅他(吉妥單抗，Mylotarg)、Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁的抗體。在一個進一步的實施方案中，修飾抗體或抗體片段以例如通過Fc修飾的方式進一步增強補體激活。在另一個實施方案中，第二治療劑為選自Lllb，IL4和 TGFbl的CRP表達調節劑。在另一個實施方案中，第二治療劑為選自脫氧精胍菌素和 geldanamyctanespimycin 17-AAG的熱激蛋白抑制劑。在另一個相關的實施方案中，第二治療劑為蛋白酶抑制劑、脫唾液酸化試劑或MMP抑制劑。在另一個相關實施方案中，第二治療劑為選自他莫昔芬、enzastaurin和UBN-01的PKC抑制劑。在一個具體的實施方案中， 第二治療劑為化療劑。在另一個具體的實施方案中，第二治療劑為免疫調節劑-例如選自干擾素-α，干擾素-Y，GM-CSF, TLR 激動劑、NOD 受體激動劑，IL2、IL7、IL17、IL21、IL23、 TNF、IMiDs, RIG-I受體激動劑、天然殺傷細胞配體、天然殺傷細胞活化劑、NKG2P配體和天然抗體的免疫調節劑。在一個非常具體的實施方案中，天然殺傷細胞活化劑為抗-CD137抗體。在另一個非常具體的實施方案中，NKG2P配體選自MICa、MICb、RAEl和ULBPl。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了包括將在其表面上表達CRP的靶細胞與本文中描述的任一種多肽接觸的方法。在一個實施方案中，將所述多肽與靶細胞直接接觸。在另一個實施方案中，所述多肽不是病毒載體的部分。在一個相關實施方案中，靶細胞與多肽的接觸增加了靶細胞對利用抗體的治療的易感性和/或增加了抗體介導的補體依賴性細胞溶解。在一個具體的實施方案中，所述抗體為單克隆抗體-例如，所述抗體選自表1中所列的抗體，或更具體地，所述抗體選自利妥昔單抗、Arzerra、愛必妥、米羅他、 Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁。本發明的該方面描述的實施方案中，靶細胞與本發明的多肽的接觸可以體外、體內和/或離體的。在這些實施方案中，CRP可以為⑶46、⑶55、⑶59或 ⑶35，在一個具體的實施方案中，CRP為⑶46。靶細胞可以為腫瘤細胞-例如，選自獲自癌的細胞、獲自肉瘤的細胞、獲自母細胞瘤的細胞、獲自胚細胞癌的細胞和獲自血液腫瘤的細胞之中的腫瘤細胞。在本發明的該方面中描述的方法中，所述方法還可包括將靶細胞與第二治療劑接觸。與第二治療劑的接觸可在與本文中提供的任一種多肽接觸的同時、之前或之后發生。在示例性實施方案中，第二治療劑可選自細胞毒性劑、細胞抑制劑、化療劑、補體激活劑、放射物、免疫調節劑、促細胞凋亡試劑、蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。在一個具體的實施方案中，第二治療劑為抗體-例如，選自表1中所列的抗體，或更具體地，選自利妥昔單抗、 Arzerra、愛必妥、米羅他、Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁的抗體。在一個相關的具體實施方案中，修飾抗體或抗體片段以進一步增強補體激活-例如Fc修飾。在可選擇的實施方案中， 第二治療劑是化療劑或免疫調節劑。這樣的實施方案中的免疫調節劑可選自干擾素-α、 干擾素-Y、GM-CSF、TLR 激動劑、NOD 受體激動劑、IL2、IL7、IL17、IL21、IL23、TNF、IMiD, RIG-I受體激動劑、天然殺傷細胞配體、天然殺傷細胞活化劑和天然抗體。在該方面中提供的接觸方法中，細胞表面上CRP的活性、量或密度在一些實施方案中減少至少25%。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了治療需要針對涉及免疫系統的病癥進行治療的受試者的方法，所述方法包括給受試者施用本文中描述的任一種藥物組合物。在一些具體的實施方案中，所述病癥與天然殺傷細胞、τ細胞或B細胞的失調相關，所述病癥為癌癥、自身免疫病癥、傳染病或移植后病癥。在一些具體的實施方案中，所述病癥選自癌、 肉瘤、淋巴瘤、白血病、母細胞瘤或胚細胞癌。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了包含有效地連接至調控序列的編碼多肽的核酸的載體，其中所述編碼的多肽能夠減少靶細胞表面上的CRP的活性、量或密度，其中所述編碼的多肽包含非天然存在的氨基酸序列。在一些具體的實施方案中，所述編碼的多肽包含天然存在的蛋白質或蛋白質結構域的至少一個突變；所述編碼的多肽包含與天然存在的蛋白質或蛋白質結構域至少90%的氨基酸序列同源性；所述編碼的多肽是非天然存在的蛋白質或蛋白質片段；所述編碼的多肽不是抗體、抗體片段、生長因子、細胞因子或轉錄調控區；和/或所述編碼的多肽在長度上為至少120個氨基酸。在一個相關實施方案中，CRP為⑶46、⑶55、⑶59或⑶35，或更具體地，CRP為⑶46。在相關方面中，本文中描述的本發明還提供了遞送包含編碼能夠降低靶細胞表面上CRP活性之多肽的核酸的載體的方法，包括將靶細胞與本文中描述的任何載體接觸。在另一個方面，本文中描述的本發明提供了用于篩選能夠改變CRP活性的分子的方法，所述方法包括產生候選分子的文庫；選擇能夠結合CRP的候選分子；和確定所述分子是否改變CRP的活性。在一個實施方案中，CRP為⑶46，⑶55，⑶59或⑶35。在一個具體的實施方案中，CRP為CD46。在一個相關實施方案中，所述分子以InM或更小的結合親和力結合CRP。在相關實施方案中，所述分子選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、 雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。在一個具體的實施方案中，所述分子為小分子。在另一個具體的實施方案中，所述分子為多肽。在另一個實施方案中，所述分子通過CRP至細胞內的內化或隔離來修飾CRP的活性。在一個相關實施方案中，所述分子通過減少細胞表面上CRP的量或密度來修飾CRP的活性。
在另一個方面，本發明提供了包含SEQ ID NO :3所示的氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的多肽，其中所述多肽包含選自Asp207Gly，Thrf45Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合⑶46的同源三聚體。在另一個方面，本發明提供了包含編碼SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少 40個連續氨基酸的多肽的核苷酸序列的核酸分子，其中所述多肽包括選自Asp207Gly， Thrf45Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合⑶46的同源三聚體。在另一個方面，本發明提供了用于降低CD46的細胞表面水平的組合物。根據本發明的該方面的組合物包含(a)有效地降低CD46的細胞表面水平的藥劑的量，所述藥劑包含多種經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成與從多個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言具有增強的對于 CD46結合的親和力的同源三聚體；和(b)藥學上可接受的載體。在另一個方面，本發明提供了用于減少靶細胞表面上CD46的量的方法。根據本發明的該方面的方法包括將在其表面上表達CD46的靶細胞與一定量的包含多個經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽的組合物接觸，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成與從由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言具有增強的對于⑶46結合的親和力的同源三聚體。在另一個方面，本發明提供了用于誘導表達CD46的靶細胞的細胞溶解的方法。本據本發明的該方面的方法包含(a)將在其表面上表達⑶46的靶細胞與一定量的包含多種有效地減少存在于靶細胞表面上的CD46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的試劑接觸；和(b)將按照步驟(a)處理的靶細胞與結合靶細胞表面上的抗原并且誘導細胞溶解的抗體或其片段接觸。在另一個方面，本發明提供了在有此需要的哺乳動物受試者中增強抗癌單克隆抗體的抗腫瘤作用的方法。按照本發明的該方面的方法包括(a)給所述哺乳動物受試者施用一定量的包含多種有效地減少存在于靶腫瘤細胞表面上的CD46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的組合物至少一次；和(b)給該受試者施用治療有效量的抗癌抗體至少一次，其中所述抗癌抗體結合在靶腫瘤細胞上表達的非CD46細胞表面抗原。在另一個方面，本發明提供了試劑盒，所述試劑盒包括(a)包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的經修飾的纖維鈕結構域多肽，其中所述多肽包含至少一個選自Asp207Gly、Thrf45Ala和Ile256Leu的氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合CD46的同源三聚體；和(b)結合哺乳動物細胞表面上的抗原并且誘導細胞溶解的抗體或其片段。在另一個方面，本發明提供了增強抗體治療劑在治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病中的效應的方法。根據本發明的該方面的方法包括(a)給所述哺乳動物受試者施用一定量的包含多種有效地減少存在于靶細胞表面上的⑶46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的藥劑至少一次；和(b)給該受試者施用治療有效量的抗體治療劑至少一次，其中所述抗體治療劑結合在靶細胞上表達的非CD46細胞表面抗原。本發明的多肽、核酸和組合物對于實施本發明的方法是有用的。附圖概述
本發明的上述方面和許多伴隨的有利方面將變得更容易領會，因為當與附圖結合時，通過參考下列詳細描述，本發明的上述方面和許多伴隨的有利方面變得更好理解，其中圖IA是標示N末端尾部結構域(aa 1-45)、柄結構域(shaft domain) (aa 46-133) 和C末端纖維鈕(K)結構域(aa 134-323)的相對位置的全長野生型腺病毒血清型35 (Ad 35)纖維多肽(SEQ ID NO 2)的示意圖；圖IB舉例說明野生型Ad35纖維多肽的鈕結構域⑷(SEQ ID NO 3)的氨基酸序列，其中稱為〃 DE" (SEQ ID NO :6)、“ FG" (SEQ ID NO :7)、“ HI" (SEQ ID NO :8) 和"IJ" (SEQ ID NO 9)的環區域加以下劃線。其中已顯示置換能消除⑶46結合的氨基酸位置以圓圈標示，并且其中已顯示置換能增強⑶46結合的氨基酸位置由正方形標示；圖 IC 為野生型 Ad35、突變型 Ad3^(++(Asp207Gly 和 Thr245Ala)和其他結合 CD46 的腺病毒的腺病毒鈕結構域即Adll、Adl6、Ad21、Ad34、Ad35和Ad50的氨基酸比對；圖2A圖解說明在與Ad3^(-279 (消除CD46的結合),Ad35K (野生型),Ad45K++ (包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)或與抗_CD46mAb —起溫育后不同時間點上HeLa 細胞表面上CD46的相對水平，其中通過流式細胞術分析CD46的水平，該水平表示為未處理細胞(N > 6)的CD46平均熒光強度的百分比，如實施例2中所描述的；圖2B圖解說明在用重組Ad3^((野生型)或Ad3^(++(包Asp207Gly和Thr245Ala 的雙突變體)溫育后第6或48小時，HeLa細胞表面上重組Ad35纖維鈕蛋白的相對水平，其中利用抗_His6標簽抗體，然后利用抗小鼠抗體-Alexa Fluor 488通過流式細胞術分析所述水平，其表示為未處理細胞(N > 6)的平均熒光強度的百分比，如實施例2中所描述的；圖2C圖解說明Ad35_GFP感染后HeLa細胞的轉導水平，如通過在暴露于不斷增加MOI的Ad35-GFP感染性病毒顆粒后M小時HeLa細胞的GFP平均熒光測量的，其中在用Ad35-GFP病毒顆粒感染前72小時用重組纖維鈕蛋白Ad3^(-279 (消除⑶46的結合)、 Ad4^((野生型)或Ad4^(++(包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)預溫育HeLa細胞，如實施例2中所描述的；圖3圖解說明在用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、抗⑶46mAb或重組纖維鈕蛋白 Ad35K (野生型)或Ad35K++(包含Asp207Gly和Hir245Ala的雙突變體)預溫育，然后用利妥昔單抗(抗⑶20mAb)或達珠單抗(抗_25mAb)溫育，隨后利用提供補體的正常人血清 (NHS)預溫育后，活拉吉細胞(Raji cell) (CD20陽性，CD25陰性)的相對水平，作為補體依賴性細胞溶解(CDC)的量度，其中拉吉細胞活力水平表示為未處理細胞(N >6)的平均活力的百分比，如實施例2中所描述的；圖4A圖解說明由重組纖維鈕蛋白Ad35K(野生型)或Ad35K++(包含Asp207Gly 和Thr245Ala的雙突變體)預溫育后產生的⑶20陽性細胞系BJAB、Farage和Mino中增強的利妥昔單抗介導的CDC，其中細胞活力水平表示為未處理細胞(N>6)的平均活力的百分比，如實施例2中所描述的；圖4B圖解說明在重組纖維鈕蛋白Ad35K(野生型)或Ad35K++(包含Asp207Gly 和Thr245Ala的雙突變體)預溫育后，患有B細胞慢性淋巴細胞白血病(CLL)的患者的原代淋巴瘤細胞中增強的利妥昔單抗介導的CDC，其中細胞活力水平表示為未處理細胞(N > 6)的平均活力的百分比，如實施例2中所描述的；
圖4C圖解說明最抗Ad35K++/利妥昔單抗殺傷的細胞樣品(CCL-3)具有最低百分比的⑶20+細胞和最低⑶20水平；圖4D圖解說明在低至25ng/ml的劑量上看到Ad3^(++對拉吉細胞的致敏效應；圖5A圖解說明利用Ad3^-279 (消除CD46的結合)或Ad3^++ (具有增強的CD46 結合的包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)的第一注射，然后PBS或利妥昔單抗(抗 CD20mAb)的第二注射處理的異種移植淋巴瘤小鼠的骨髓中人CD20陽性細胞的相對水平， 其中在第二注射后6小時測量CD20陽性細胞水平，其表示為骨髓中對于CD20呈陽性的細胞的百分比，如實施例3中所描述的；圖5B圖解說明利用Ad3^(-279 (消除CD46的結合)或Ad3^(++ (具有增強的CD46 結合的包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)的第一注射，然后PBS或利妥昔單抗(抗 ⑶20mAb)的第二注射處理的異種移植淋巴瘤小鼠(接受Raji細胞)的Kaplan-Meier存活研究的結果，其中一組小鼠在利妥昔單抗的第一注射后48小時接受Ad35K++/利妥昔單抗的第二處理，如實施例3中所描述的；圖5C和5D圖解說明通過Ad3^(-279 (消除CD46的結合)或Ad35K++(CD46結合增加的、包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)的第一注射，然后通過PBS或利妥昔單抗(抗-CD20mAb)的第二注射處理的異種移植淋巴瘤小鼠(接受Farage細胞)的存活研究的結果，如實施例3中所描述的；圖5E圖解說明的利用Farage細胞注射的，利用Ad3^(-279或Ad3^(++預處理的人異種移植小鼠模型的骨髓、淋巴結或脾中人CD20陽性細胞的百分比(如利用流式細胞測量的)，然后在施用PBS或利妥昔單抗后12小時殺死如實施例3中所描述的；圖6圖解說明在Ad3^(++反應性抗體存在(Ad3^(++接種的小鼠血清)或不存在 (對照小鼠血清)的情況下，在用重組纖維鈕蛋白Ad35K(野生型)或Ad35K++(⑶46結合增強的、包含Asp207Gly和Thr245Ala的雙突變體)預溫育、然后進行利妥昔單抗處理后觀察到的增強的CDC所介導之細胞殺傷效應，證明了抗Ad35K++抗體對CDC不存在抑制作用； 其中細胞存活水平表示為未處理細胞(N > 6)的平均存活的百分比，如實施例4中所描述的；圖7A圖解說明了在用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、單獨的利妥昔單抗、正常人血清 (NHS) >Ad35K++預處理加NHS、利妥昔單抗加NHS或Ad3^++預處理加利妥昔單抗加NHS溫育后，來自人外周血單個核細胞(PBMC)(來自健康供體)的培養的活CD20陽性細胞百分比，如實施例8中所描述的；圖7B圖解說明在用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)、單獨的利妥昔單抗、正常人血清 (NHS) >Ad35K++預處理加NHS、利妥昔單抗加NHS或Ad3^++預處理加利妥昔單抗加NHS培養的活人PBMC百分比，如實施例8中所描述的；圖7C圖解說明利用單獨的Ad35K++、利妥昔單抗或NHS培養的原代人血管內皮細胞、角膜上皮細胞、卵巢上皮細胞或包皮成纖維細胞與PBS處理的對照細胞(N = O相比較的細胞存活百分比，如實施例8中所描述的；圖8A圖解說明，利用人拉吉細胞注射用Ad3^(-279或Ad35K++預處理的、然后在施用PBS或利妥昔單抗后12小時殺死的異種移植小鼠模型中骨髓或腸系膜淋巴結中人 CD20陽性細胞的百分比(如利用流式細胞術測量的(N = 5))，如實施例9中所描述；
圖8B為按照實驗處理方案#1處理的異種移植模型小鼠的Kaplan-Meier存活曲線圖(N = 10)，所述方案包括將拉吉細胞注射至小鼠，用Ad3^(-279或Ad35K++預處理小鼠，然后施用PBS或利妥昔單抗，該曲線顯示當用Ad35K++/利妥昔單抗處理小鼠時，與單獨利妥昔單抗或Ad35K-279對照相比較而言，存活顯著增加，如實施例9中所描述；圖8C是按照實驗處理方案#2 (所述實驗方案包括兩個循環的雙Ad3^(++注射及隨后利妥昔單抗注射)處理的異種移植小鼠的Kaplan-Meier存活曲線，其顯示與PBS處理的對照小鼠相比較而言，接受2X (利妥昔單抗加Ad3^(++處理)的小鼠的長期存活，如實施例9中所描述的；圖8D圖解說明與野生型Ad35K蛋白相比較而言，Ad3^(++對利妥昔單抗療法產生顯著更強的增強作用；圖9A圖解說明利用Ad3^++的預溫育增強了 Campath (抗CD52mAb)對Raji (CD52 陽性)細胞的CDC介導的殺傷，如實施例10中所描述的；圖9B圖解說明利用Ad3^(++的預溫育在Campath (抗⑶52mAb)存在的情況下對 Jurkat細胞(CD52陰性)的存活沒有影響，如實施例10中所描述的；圖IOA圖解說明利用Ad3^(++的預溫育增強了赫賽汀(抗Her2/neumAb)對BT-474 乳腺癌(Herf/neu陽性)細胞的CDC介導的殺傷，如實施例10中所描述的；圖IOB圖解說明利用Ad3^(++的預溫育在赫賽汀(抗Herf/neu mAb)存在的情況下對MDA-231細胞乳腺癌(Herf/neu陰性)的存活沒有影響，如實施例10中所描述的；圖IlA圖解說明利用Ad3^(++的預溫育增強了通過愛必妥(抗EGFRmAb)產生的 CDC介導的LOVO結腸癌(EGFR陽性)的殺傷，如實施例10中所描述的；圖IlB圖解說明Ad3^(++在愛必妥(抗EGFR mAb)存在的情況下對HeLa細胞 (EGFR陰性)的存活沒有影響，如實施例10所描述的；

圖12圖解說明利用Ac^K++的預溫育增強了米羅他(吉妥單抗)對AML HL60(⑶33-陽性細胞)的殺傷；圖13圖解說明利用Ad3^++的預溫育增強Arzerra對Farage (CD20-陽性)細胞的殺傷；圖14圖解說明mAb增強Ad3^(++和來自不同供體(A血型和B血型)的正常人血清(NHS)增強mAb的殺傷作用圖14A圖解說明利用BT474細胞進行的實驗的時間軸；圖14B圖解說明與PBS處理的細胞相比較而言活細胞的百分比；圖14C圖解說明利用Farage細胞和Arzerra進行的實驗的時間軸。圖14D，圖解說明在不同NHS來源存在的情況下利用Arzerra進行的Farage細胞的殺傷；圖15A舉例說明在使用DNA2. 0軟件進行最優化之前和之后Ad3^++的DNA序列；圖15B圖解說明在使用DNA2. 0軟件進行最優化之前和之后Ad3^(++的氨基酸序列；圖15C舉例說明檢查Ad35K++DNA序列中不想要的基序；圖IOT舉例說明在IPTG誘導后包含pEI^9-Ad3^(++的HMS174中Ad3^(++的檢測；圖16圖解說明來自非人靈長類動物模型的數據；
圖16A舉例說明Ad3^(++增強利妥昔單抗的體外B細胞去除效應；圖16B舉例說明利用獼猴屬(食蟹猴和豚尾猴)、狒狒屬(橄欖狒狒(P. Anubis)) 和人的紅細胞進行的Ad3^(++血凝集測定；和圖17圖解說明利用Ad3^(++和利妥昔單抗在針對人⑶46和⑶20為雙轉基因的轉基因C57B1/6小鼠中進行的功效研究。詳述除非在本文中專門定義，否則本文中使用的所有術語具有本發明所屬領域內技術人員所理解的意義相同的意義。關于本領域的定義和術語，實施者具體地參考Sambrook 等人，Molecular Cloning :A Laboratory Manual,第 3 版，Cold Spring Harbor Press, Plainsview, New York(2001)；禾口 Ausubel 等人’ Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley&Sons，New York(2002)。提供下列定義用以闡明這些術語在本說明書和權利要求B中用于描述本發明時的含義。如本文中所使用的，術語“序列同一性”或“同一性百分比”，當用于核酸分子時， 指在對齊各序列以獲得最大同一性百分比并且不將任何核酸殘基置換視為序列同一性的一部分后，候選核酸分子序列中與受試核酸分子序列(例如SEQ ID NO :4中所示的核酸分子序列)相同的核酸殘基的百分比。為了獲得最佳比對，不將缺口引入候選核酸序列。 核酸序列同一性可以以下列方式測定。使用程序BLASTN 2.1版(基于Altschul等人， Nucleic Acids Research 25 :3389-3402 (1997))將受試多核苷酸分子用于搜索核酸序列數據庫，例如Genbank數據庫。以無缺口模式(imga pped mode)使用該程序。使用缺省過濾(Default filtering)以除去因如 J. C. Wootton 禾口 S. Federhen，Methods in Enzymology 266 :554-571(1996)中定義的低復雜度區域而產生的序列同源性。利用BLASTN的缺省參數。如本文中所使用的，術語“同一性百分比”或“同一性百分比的”，當與用于實施本發明的多肽結合使用時，被定義為在對齊各序列以獲得最大同一性百分比后，多肽序列中與指定的多肽的氨基酸序列(例如SEQ ID NO :3的氨基酸序列)相同的氨基酸殘基的百分比。當進行比較時，為了獲得最佳比對，不將缺口引入生物標志序列。可以例如以下列方式測定氨基酸序列同一性。使用BLASTP程序，將多肽的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO :3中所示的氨基酸序列)用于搜索蛋白質序列數據庫，例如GenBank數據庫。以無缺口模式使用該程序。使用缺省過濾以除去因低復雜度的區域而產生的序列同源性。利用BLASTP的缺省參數。如本文中所使用的，如下縮寫氨基酸殘基丙氨酸(Ala ；Α)、天冬酰胺(Asn ；N)、天冬氨酸(Asp ；D)、精氨酸(Arg ；R)、半胱氨酸(Cys ；C)、谷氨酸(Glu ；E)、谷氨酰胺(Gln ；Q)、 甘氨酸(Gly ；G)、組氨酸(His ；H)、異亮氨酸(lie ；I)、亮氨酸(Leu ；L)、賴氨酸(Lys ；K)、甲硫氨酸(Met ；Μ)、苯丙氨酸(Phe ；F)、脯氨酸(Pro ；P)、絲氨酸(Ser ； S)、蘇氨酸(Thr ；T)、色氨酸(Trp ；W)、酪氨酸(Tyr ；Y)和纈氨酸(Val ；V)。如本文中所使用的，術語"親和力"在蛋白質結合的背景中是指結合蛋白質之間的相互作用的強度。結合的強度通常由兩個蛋白質之間更大的分子間力而產生并且導致它們之間更強的結合。
如本文中所使用的，縮寫"Ad"是指腺病毒并且通常后跟表示腺病毒的血清型的數字。例如，“Ad35"是指腺病毒血清型35。如本文中所使用的，術語"纖維多肽"是指由腺病毒表達的全長纖維多肽(例如，SEQ ID NO :2)，其包含N末端尾結構域、柄結構域和C末端鈕結構域。纖維多肽自發地裝配成稱為“纖維”的同源三聚體，其在衣殼的12個頂角中每一個的基部上位于腺病毒病毒體的外部。如本文中所使用的，術語"纖維"是指由3個單個的纖維多肽組成的同源三聚體蛋白質結構。腺病毒纖維介導與靶宿主細胞的接觸和進入其中的內化。如本文中所使用的，術語“纖維鈕結構域多肽”是指能夠形成結合CD46的同源三聚體的纖維多肽的C末端結構域。實例是SEQ ID NO :3所示的野生型腺病毒血清型35鈕結構域，其也按縮寫被稱為"Ad3^(多肽"。如圖IB中舉例說明的，纖維蛋白的C末端部分可三聚化并且形成結合CD46的纖維結構。如本文中所使用的，術語"經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽"是指包含野生型腺病毒鈕結構域的變體的多肽，其中所述經修飾的多肽包含至少一個氨基酸的添加、缺失或置換或其組合，其中所述經修飾的多肽可形成能夠結合CD46的同源三聚體。優選任何置換突變是保守的，因為其最低限度地破壞生物化學性質。因此，當引入突變以置換氨基酸殘基時，優選用帶正電荷的殘基置換帶正電荷的殘基(H、K和R)；優選用帶負電荷的殘基置換帶負電荷的殘基(D和E)；優選用中性極性殘基置換中性極性殘基(C、G、N、Q、S、T和Y)； 和優選用中性非極性殘基置換中性非極性殘基(A、F、I、L、M、P、V和W)。在最廣泛的意義上，可基于各氨基酸的側鏈的化學特征將天然存在的氨基酸分組。“疏水性〃氨基酸意指 lie、Leu、Met、Phe, Trp, Tyr, Val、Ala、Cys 或 ftx)。“親水性“氨基酸意指Gly、Asn、Gin、Ser, Thr, Asp、Glu、Lys、Arg或His。還可如下再細分氨基酸的該分組。“不帶電荷的親水性"氨基酸意指kr，Thr，ASn或Gin。“酸性"氨基酸意指Glu或Asp。“堿性〃氨基酸意指Lys，Arg或His。經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽的實例示于SEQ ID NO :5，其為具有置換 Asp207Gly和Thr245Ala的野生型腺病毒；35鈕結構域序列(SEQ ID NO :3)。SEQ ID NO 5 中所示的具體的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽也以縮寫"Ad3^(++多肽"表示。在本文中，通過參考全長野生型腺病毒35纖維多肽序列(SEQ ID NO 2)來描述特定氨基酸置換或替換突變的位置，首先是指出在野生型序列中發現的氨基酸殘基，然后是在野生型序列中指定的氨基酸位置，然后指出突變型多肽中發現的氨基酸殘基。例如，術語"Asp207Gly" 描述了野生型序列(SEQ ID NO 2)中氨基酸位置207上的置換，其中Asp被Gly替換。如本文中所使用的，術語“連續的”，在多肽的氨基酸序列的背景中，是指氨基酸殘基的連續排序，如它們在參照序列中顯示的那樣。氨基酸的連續序列在參照序列中通常不包含添加、缺失或置換。然而，當在本文中具體指定時，氨基酸的連續序列可包含置換而不破壞序列的連續性。例如，短語"SEQ ID NO :3的連續氨基酸"是指無插入、缺失或大部分置換的氨基酸殘基的連續排序，如它們在SEQ ID NO :3中顯示的。然而，該短語允許包含其他描述的氨基酸置換(即，Asp207Gly、Thrf45Ala和Ile256Leu)而不破壞序列的連續性。如本文中所使用的，術語"補體來源"是指包含在誘導后引起細胞溶解和細胞死亡所必需的補體系統的一些或全部單個成分的混合物，例如人血清。
如本文中所 使用的，"膜攻擊復合物"(“MAC")是指插入并且破壞細胞膜的終端5個補體成分(C5-C9)的復合物。如本文中所使用的，術語"抗體"包括來源于任何產生抗體的哺乳動物(例如， 小鼠、大鼠、兔、駱駝和靈長類動物，包括人)或者合成或重組地產生的抗體和其抗體片段， 所述抗體和其片段特異性結合目的靶或其部分。示例性抗體包括多克隆、單克隆和重組抗體；多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)；人源化抗體；鼠抗體；嵌合抗體、小鼠-人、小鼠_靈長類動物、靈長類動物_人單克隆抗體；和抗獨特型抗體；并且可以是任何完整分子或其片段。如本文中所使用的，術語"抗原結合片段"是指來自全長抗體或與其相關的抗原結合區或可變區。抗體片段的舉例說明性實例包括Fab、Fab'、F(ab)2、F(ab‘片段、scFv片段、雙價抗體、納米抗體、線性抗體(linear antibody)、單鏈抗體分子，和從抗體片段形成的多特異性抗體。如本文中所使用的，"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的Vh*八結構域，其中此類結構域存在于單個多肽鏈中。通常，Fv多肽還包含Vh與\結構域之間的多肽連接子，其使得scFv能夠形成用于抗原結合的所需結構。如本文中所使用的，“嵌合抗體"是一種重組蛋白，其中包含來源于非人種類 (例如，嚙齒類動物)抗體的可變結構域和互補決定區，然而所述抗體分子的其余部分來源于人抗體。如本文中所使用的，“人源化抗體"是一種嵌合抗體，其包含符合移植入人抗體構架區的來源于非人免疫球蛋白的特定互補決定區的最小限度序列。人源化抗體通常是重組蛋白質，其中只有抗體互補決定區是非人來源的。如本文中所使用的，術語〃全身性遞送〃和〃全身性施用〃意欲包括但不限于口服途徑和胃腸外途徑(包括肌內(IM)，皮下、靜脈內(IV)、動脈內、吸入、舌下、含服、局部、 經皮、經鼻、經直腸、經陰道和有效地導致遞送的試劑分散至期望治療作用的一個或多個位置的其他施用途徑。補體調節蛋白⑶46 (也稱為膜輔因子蛋白MCP)、⑶55 (也稱為衰變加速因子DAF)和⑶59 (也稱為保護素)可互換地稱為補體調節蛋白(CRPs)、膜結合補體抑制蛋白、補體調節劑等。大多數細胞通過一個或多個此類CRP而免受補體的破壞。⑶46和⑶55靶向C3/C5轉化酶階段上的起始途徑。⑶59阻斷終末補體途徑并且通過在MAC裝配期間結合C8和C9阻止MAC 形成(Meri等人，1990)。已例如在許多原發性腫瘤和腫瘤細胞系(Fishelson等人，Mol Immunol 40(2-4) 109-23 (2003) ；GeIderman 等人，Lab Invest 82(4) 483-93 (2002) ；Yan 等人，(2008))；自身免疫性疾病和感染性疾病中注意到CRP的過表達。CD46 ⑶46(MCP)為在有核細胞的膜上表達的1型跨膜糖蛋白。人⑶46蛋白序列在本文中提供為SEQ ID N0:14，其對應于Genbank登錄號ABK81636。從其細胞外氨基酸末端開始， 人CD46蛋白具有4個串聯的補體調控蛋白(CCP)模塊CCPl (aa 35-88)、CCP2 (aa99_158)、 CCP3 (aal62-224)和CCP4 (aa 228-283)，隨后為1或2個富含高度0-糖基化絲氨酸/蘇氨酸/脯氨酸(STP)的結構域、跨膜結構域和胞質尾區。4個CCP模塊形成CD46的細胞外結構域的主要部分。CCP包含3個 N聯糖基化位點。STP結構域和細胞質尾結構域可各自經歷選擇性剪接，從而導致分子量在55至65kDa的范圍內變化的CD46的4個主要人同種型 (BC1、BC2、C1 和 C2) (A. Gaggar 等人，Journal of Virology79 :7503_7513 (2005))。⑶46首先是由于其補體結合和調節性質而為人所知的(綜述于M. K. Liszewski 等人，Advances in Immunology 61 :201_283 (1996)中)。在這一點上，CD46 保護細胞免受膜攻擊復合物(MAC)在細胞膜上的形成。具體地，CD46結合與細胞膜相結合的補體因子 C4b和C3b，并且用作輔因子通過血漿絲氨酸蛋白酶因子I使它們的蛋白水解活性失活。該相互作用由⑶46CCP2、CCP3和CCP4結構域介導。蛋白質水解失活因阻止結合的補體因子的C3 (C3a、C3b)和C5 (C5a、C5b)轉化酶活性而阻止了細胞上MAC的形成(A. Gaggar等人， Journal of Virology 79:7503-7513(2005))。此外，兩種人同種型存在CD46細胞質結構域，其在調節T細胞誘導的炎癥反應中具有相反作用(J.C.Marie等人，Nature Immunology 3 :659-666(2002))。除了其在免疫應答的調控中作用外，CD46還用作多種病原體包括麻疹病毒、人類皰疹病毒6型和兩種類型的細菌一產膿鏈球菌(Str印tococcus pygogenes)和病原性淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)的受體。麻疹病毒血凝素蛋白與CD46 CCPl和CCP2 相互作用。CCP2和CCP3充當人類皰疹病毒6型和鏈球菌的結合靶，而CCP3和STP結構域是奈瑟球菌附著所必需的(A. Gaggar 等人，Journal of Virology 79:7503-7513(2005))。 此外，已證明⑶46是一系列人腺病毒血清型的高親和力受體(S. Tuve等人，Journal of Virology 80 12109-12120 (2006) ；A. Gaggar 等人，Nature Medicine9 :1408_1412 (2003)； 和 D. Sirena 等人，Journal of Virology78 4454-4462 (2004)) 此外，已顯示⑶46是一系列人腺病毒血清型的高和力受體(S. Tuve等人， Journal of Virology 80 12109-12120 (2006) ；A. Gaggar 等 K, Nature Medicine 9 1408-1412(2003)；和 D. Sirena 等人，Journal of Virology 78:4454-4462(2004))。已顯示⑶46CCP2結構域介導對腺病毒的兩個血清型-Adll和Ad35的結合。具體地，CCP2結構域的天然構象對于Ad35附著是至關重要的，并且該結構域上氨基酸位置 130至135或152至156上的置換完全消除Ad35結合。已有人提出利用⑶46進行細胞附著的多種病原體就是這樣做的，因為其為病原體提供了調節免疫應答的機會(R. Cattaneo, Journal of Virology 78:4385-4388(2004))。例如，已報導利用多價抗體或利用麻疹病毒在細胞表面上進行⑶46的交聯可誘導以與巨胞飲(macropinocytosis)相似的過程吞噬配體，從而導致細胞表面C 46降解的偽足，這反過來保護細胞免受補體裂解 (B. Crimeen-Irwin ^A, Journal of Biological Chemistry 278 46927-46937 (2003)； J. Schneider-Schaulies 等人，Journal of Virology 70:255-263(1996))。腺病毒是非包膜雙鏈DNA病毒。人腺病毒已被分類成6個亞組(A至F)，包括多至 51個血清型。B組腺病毒構成兩個遺傳簇(genetic clusters)-Bl (包括血清型Ad3，Ad7， Adl6，Ad21 和 Ad50)和 B2 (包括血清型 Adll，Adl4，Ad34 和 Ad35) (G. Wadell 等人，Annals of the New York Academy of Sciences 354 :16-42 (1980))。大多數Bl 腺病毒主要與急性呼吸道疾病相關，并且與C組腺病毒(例如，Ad5)不同，其不建立持久性(G. ffadell, Current Topics in Microbiology and Immunology 110 :191_220 (1984))。B2血清型Adllp，Ad34禾口 Ad35主要與腎和尿道的感染相關。B組血清型在腺病毒中是獨特的，因為它們不使用柯薩奇病毒和腺病毒受體(CAR)作為它們的主要附著受體。特別地，B2組I血清型，包括Adl6， Ad21，Ad35和Ad50，幾乎只使用CD46作為受體；B2組II血清型，包括Ad3，Ad7p和Adl4， 使用仍未被鑒定的受體并且不使用⑶46 ；最后，B2組III，血清型Adllp，使用⑶46和該仍未被鑒定的受體二者(S. Tuve 等人，Journal of Virology 80 12109-12120 (2006)) 腺病毒病毒體是二十面體，其特征在于位于衣殼的12個頂角每一個的基部的纖維。病毒體上的纖維是由3個單個纖維多肽組成的同源三聚體結構。每一個腺病毒纖維多肽是不對稱結構，其由以下所組成N末端尾(其與衣殼的五鄰體基質蛋白(penton base protein)相互作用并且包含將蛋白質轉運至細胞核所必需的信號)、柄(其包含多個15 個殘基的重復單位)和包含用于受體結合的決定簇 的C末端鈕結構域組成(J. S. Hong and J. A. Engler, Journal of Virology 70:7071-7078(1996))。來自所有組(無論是 CAR 相互作用還是B組腺病毒)的腺病毒通過纖維末端上的鈕結構附著至它們的受體(A. Gaggar 等人，“CD46 Is a Cellular Receptor for Group B Adenoviruses, " Journal of Natatrual Medicines 9 :1408_1412 (2003))。纖維多肽的三聚化是腺病毒與其受體結合所必需的(J. S. Hong 和 J.A.Engler，Journal of Virology 70:7071-7078(1996) ；H. Wang 等人，Journal of Virology 81 :12785_12792 (2007))。突變型Ad2纖維的研究顯示所述纖維多肽的三聚化只需要C末端鈕結構域的部分和柄區域的C末端的較短的部分。似乎纖維的至少N端半部分可缺失而不影響三聚化(J. S. Hong and J. A. Engler, Journal of Virology 70 :7071-7078(1996))。已測定了 C組血清型Ad5 (結合CAR受體)(D. Xia等人，Structure 2 1259-1270(1994))、B 組血清型 Adll (結合 CD46 受體)(B. D. Persson 等人，Nature Structural&Molecular Biology 14 164-166 (2007))和 B 組血清型 Ad35 (結合 CD46 受體) (H. Wang 等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007))的腺病毒鈕結構域的具體結構。同源三聚體鈕結構域似乎形成如三葉螺旋槳一樣的結構，由此每一個葉片(即單個鈕結構域)包含多個緊密堆疊的β折疊片(標記為A至J)。與⑶46結構域CCPl和CCP2 結合的重組Adll纖維鈕的結晶揭示纖維鈕結構域的F-G、H-I和I-J環內3個至關重要的接觸區(B. D. Persson等人，Nature Structural&Molecular Biology 14:164-166(2007))。 該模型得到了證明Adll病毒與⑶46的結合可通過在Adll H-I環內引入單個氨基酸置換(Arg279Gln)而被消除的研究支持(D. J. Gustafsson 等人，Journal of Virology 80: 1897-1905(2006)[作者的修正，80 5101.])。結晶和突變研究已闡明Ad35纖維鈕結合⑶46的關鍵區域，建立了 Ad35纖維鈕結構域⑶46相互作用的模型，其中一個⑶46單位在鈕同源三聚體結構內的每一對纖維鈕結構域之間結合(H. Wang等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)，通過引用整體并入本文)。因此，單個纖維鈕同源三聚體能夠交聯3個⑶46受體。已使用特異于鈕蛋白的三聚體形式的抗體(abll87-100，批號134173 ；Abeam)確定了三聚化是Ad35纖維鈕與可溶性 CD46 的結合所必需的，H. Wang 等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)。 如H. Wang等人中所描述的，使用誘變PCR產生Ad35纖維鈕突變型多肽文庫以便每個纖維鈕結構域多肽產生平均1或2個氨基酸突變。對文庫進行三聚化和與可溶性CD46結合的雙重選擇。破壞三聚化的突變都不能結合⑶46。鑒定了其中突變消除Ad35纖維鈕結合⑶46 但不影響三聚化的4個殘基氨基酸位置242上的Phe、氨基酸位置279上的Arg、位置282上的Ser和位置302上的Glu。此類殘基位于相應于針對Adll纖維鈕結構域報導的3個接觸區的區域內。其他輪的篩選不覆蓋其他區域，表明已找出了所有可檢測的CD46關鍵相互作用區域。結晶學圖像的迭加(Superimposition)顯示Ad35與Adll之間的核心結構高度相似。此外，全部Ad35突變存在于球狀Ad35纖維鈕結構內的暴露的環區域內，這強調了它們在受體結合中的作用。具體地，存在于F-G和H-I環中的 接觸殘基位于Ad35單體的相對于I-J環中接觸區域的對側，表明一個⑶46單位結合在兩個Ad35纖維鈕單體之間。這獲得了表示CD46分子與Ad35纖維鈕單體之間以1 1相互作用的化學計量學數據的支持 (H. Wang 等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)) 因此，Ad35 纖維鈕結構域 ⑶46相互作用不僅導致緊密結合，而且還交聯數個⑶46分子。CD55 CD55(DAF)是一種70kDa蛋白質，在人中由CD55基因編碼的(Medof ME，等人 (April 1987) “ Cloning and characterization of cDNAs encoding the complete sequence of decay-accelerating factor of human complement" . Proc. Natl. Acad. Sci.U. S. A. 84(7) :2007_11)。人 CD55 蛋白質序列相應于 Genbank 登錄號 AAC60633。CD55 是調節細胞表面上的補體系統的70kDa膜蛋白。其阻止C3bBb復合物(旁路途徑的C3轉化酶)的裝配或加速先形成的轉化酶的解裝配，從而阻止膜攻擊復合物的形成。CD55糖蛋白廣泛地分布在造血和非造血細胞中。所述蛋白與一些補體蛋白共有一些氨基酸重復基序和功能相似性。Osuka 等人，“Molecular Cloning and Characterization of Novel Splicing Variants of Human Decay-Accelerating Factor, " Genomics 88(3) 316-322，September 2006 ；已報導了許多種在幾乎所有測試的組織中表達但在它們的表達模式上有變化的剪接變體。一些變體是在糖基化后分泌的⑶55的可溶性形式(M. A. Davitz 等人，“Release of Decay-Accelerating Factor(DAF)From the Cell Membrane by Phosphatidylinositol-Specific Phospholipase C (PIPLC)," Journal of Experimental Medicine 163(5) :1150_1161，May 1986)。CD55是在自身細胞的膜中固有地起作用以防止自體C3b在它們的表面上沉積的補體調節齊Ll (V. Nussenzweig 等人，“Inhibition of Complement Activation on the Surface of Cells After Incorporation of Decay-Accelerating Factor(DAF) Into Their Membranes, " Journal of Experimental Medicine 160(5) : 1558-1578, November 1984)。其用于加速生物分子C3轉化酶(級聯的中心擴增酶)的衰變-分角軍(decay-dissociation) ο (A. Nicholson-WeIler 等人’ “Isolation of a Human Erythrocyte Membrane Glycoprotein With Decay-Accelerating Activity for C3 Convertases of the Complement System, " The Journal of Immunology 129(1) : 184-189，July 1982 ;M. K. Pangburn 等人， “Breakdown of C3 After Complement Activation !Identification of a New Fragment C3g, Using Monoclonal Antibodies, " Journal of Experimental Medicine 156(1) :205_216, July 1982 ； Τ· Fujita等人，〃 The Mechansism of Action of Decay-Accelerating Factor (DAF) :DAF Inhibits the Assembly of C3 Convertases by Dissociating C2a and Bb, " Journal of Experimental Medicine 166(5) 1221-1228, November 1987)。CD55 為 CD97 的細胞配體(J. Hamann 等人，“The Seven-Span TransmembraneReceptor CD97 Has a Cellular Ligan d(CD55, DAF), " Journal of Experimental Medicine 184(3) 1185-1189, September 1996)。陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria)患者的紅細胞缺乏CD55。此類患者的細胞不能附著至表達反受體(counterrec印tor)的細胞。⑶55的缺乏似乎不具有任何相關血液學異常或其他異常(D. M. Lublin 等人，“Molecular Basis of Reduced or Absent Expression of Decay-Accelerating Factor in Cromer Blood Group Phenotypes, " Blood 84(4) 1276-1282，August 1994)。陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥中CD55的不存在導致患病細胞上增力口的C3b攝取(Μ· E. Medof 等人，"Amelioration of Lytic Abnormalities of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria With Decay-Accelerating Factor, " Proceeings of the National Academy of Sciences USA(PNAS)82(9) =2980-2984, May 1985)。CD55被一些柯薩奇病毒和其他腸道病毒例如艾可病毒和柯薩奇病毒B病毒用作受體(Karnauchow TM, Tolson DL, Harrison ΒΑ, Altman Ε, Lublin DM, Dimock K(August 1996). " The HeLa cell receptor for enterovirus 70 is decay-accelerating factor (CD55) “ . J. Virol. 70(8) 5143-52 ；Goodfellow 等人，J Gen Virol 81(5) 1393-401 (2000))。已在小鼠中測試了將重組可溶性⑶55_Fc作為心臟損傷的抗腸道病毒療法(Yanagawa B, Spiller OB, Choy J, Luo H, Cheung P, Zhang HM, Goodfellow IG, Evans DJ, Suarez A, Yang D, McManus BM(January 2003). " Coxsackievirus B3_associated myocardial pathology and viral load reduced by recombinant soluble human decay-accelerating factor in mice" . Lab. Invest. 83(1) :75_85)。CD59 ⑶59為糖基化磷脂酰肌醇錨定的18_20kDa糖蛋白(GPi-錨定的)。人⑶59蛋白質序列相應于Genbank登錄號CAG46523。⑶59在人外周血白細胞、紅細胞和幾種人細胞系上表達。所述蛋白也在內皮細胞上、周圍神經纖維的施萬細胞鞘、神經元、小神經膠質細胞、少突神經膠質細胞、星形細胞、室管膜細胞和某些上皮細胞例如唾液腺的腺泡細胞、支氣管上皮、腎小管和鱗狀上皮細胞上表達(Nose等人，〃 Tissue distribution of HRF20， a novel factor preventing the membrane attack of homologous complement, and its predominant expression on endothelial cells in vivo, " Immunology 70(2) 145-9, June 1990 ;Vedeler 等人，"The expression of CD59 in normal human nervous tissue, " Immunology 82(4) :542-7, August 1994 ;Hideshima 等人， "Expression of HRF20, a regulatory molecule of complement activation, on peripheral blood mononuclear cells, " Immunology 69(3) :396-401, March 1990)。CD59也被稱為保護素或人白細胞表面抗原MICl 1，MINI，MIN2，MIN3，MSK21。該蛋白已被鑒定為HRF20 [同源限制因子(homologous restriction factor) _20kDa]和MACIF[膜攻擊復合物抑制因子](MAC-IP，MAC-抑制蛋白)。其與小鼠Ly6抗原密切相關(Petranka等人，“Structure of the CD59_encoding gene further evidence of a relationship to murine lymphocyte antigen Ly-6 protein，" Proc Natl Acad Sci USA. 89 (17) :7876_9， September 1992)。人基因產生超過4種不同的mRNA分子(通過可選擇的多聚腺苷酸化產生的)(Tone 等人，"Gene structure of human CD59 and demonstration that discrete mRNAs are generated by alternative polyadenylation,“ J Mol Biol 227(3) :971_6，October 1992)。其他名稱為H19、MIRL[反應性裂解的膜抑制劑]，P18，1F5，16. 3A5，BRIC 229，YTH 53. 1。⑶59的功能是阻止膜攻擊復合物(由激活的終末補體蛋白C5b至C9形成的)在細胞表面上的形成和保護細胞免受補體介導的細胞裂解(關于具有相似活性的因子也參見 CD55) ο Acosta 等人(“Molecular basis for a link between complement and the vascular complications of diabetes，" Proc Natl Acad Sci USA. 97 (10) 5450-5,May 2000)已報導人CD59在體內是糖基化的，并且糖基化的人CD59喪失其對膜攻擊復合物的形成的抑制功能。CD59的失活增加膜攻擊復合物誘導的生長因子從內皮細胞的釋放。CD59在細胞膜上的表達限制了同源補體對細胞的裂解。所述蛋白可能不阻穿孔素對細胞的殺傷(Meri 等人，“Human protectin(CD59)，an 18-20-kD homologous complement restriction factor, does not restrict perforin-mediated lysis, " J Exp Med. 172(1) =367-70, July 1990)。細胞保持對由IL2活化的淋巴細胞(LAK細胞) 產生的細胞毒性攻擊的敏感性，所述活化的淋巴細胞釋放穿孔素(Okada等人，“HRF20， a membrane inhibit or of complement attack， does not protect cells from the cytotoxic reaction by lymphokine activated killer cells，“ Biochem Biophys Res Commun. 171(2) 717-21 September 1990)。Hahn等人(〃 Overlapping but nonidentical binding sites on CD2 for CD58 and a second ligand CD59，〃 Science 256(5065) 1805-7, June 1992)已將 CD59 鑒定為 ⑶2的生理配體。⑶2上用于⑶59和另一種⑶2配體即⑶58的結合位點有重疊但不相同。 CD58是人CD2的主要配體，從而在T細胞的細胞活化中起著共剌激作用。該效應牽涉共剌激抗原 CD58 (Menu 等人，“CD59 costimulation of T cell activation. CD58 dependence and requirement for glycosylation，〃 J. Immunol. 153(6) :2444_56，September 1994)。 人角質細胞中CD2介導的CD59剌激導致ILl- α、IL6和GM-CSF的分泌，它們可能參與角質細胞與表皮內T淋巴細胞的相互作用(Naderi等人，〃 CD2_mediated CD59 stimulation in keratinocytes results in secretion of IL—lalpha， IL—6， and GM-CSF amplications for the interaction of keratinocytes with intraepidermal T lymphocytes, “ Int J Mol Med. 3 (6) :609_14，June 1999)。已顯示⑶59在許多惡性黑色素瘤細胞系中過表達(Simon等人， 〃 Identification of differentially expressed messenger RNAs in human melanocytes and melanoma cells， “ Cancer Res. 1996 Jul 1 ；56 (13) :3112_7 1996)。此類細胞還組成型地釋放CD59的可溶性生物活性形式，該形式逆轉其對補體介導的裂角軍的作用(Brasoveanu 等人，“Melanoma cells constitutively release an anchor-positive soluble form of protectin(sCD59)that retains functional activities in homologous complement-mediated cytotoxicity, “ J Clin Invest. 100(5) 1248-55, September 1997)。這下調了人黑色素瘤細胞對同源補體的易感性(Coral 等人， 〃 Overexpression of protectin(CD59)down-modulates the susceptibility of human melanoma cells to homologous complement， “ J Cell Physiol. 185(3) :317_23，December 2000)。許多艾可病毒使用CD59作為細胞感染的細胞受體或附著蛋白(Goodfellow等人，“Echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells is inhibited by antiserum to the complement control protein CD59, “ J Gen Virol.81 (Pt 5) 1393-401, May 2000)。CD35 ⑶35可互換地稱為紅細胞補體受體1 (CRl)、C3b/C4b受體和免疫粘附受體，其為人基因。人CD35蛋白序列相應于Genbank登錄號NM_000651. 4 ；GI :86793108。由該基因編碼的蛋白質是補體激活調節劑(RCA)家族的成員并且位于染色體1的'簇RCA'區域內。所述基因編碼在紅細胞、白細胞、腎小球上皮足突細胞(glomerular podocytes)和脾濾泡樹突細胞上發現的單體單跨I型(single-pass type I)膜糖蛋白。Knops血型系統是位于該蛋白上的抗原的系統。所述蛋白介導與已活化補體成分的顆粒和免疫復合物的細胞結合。該蛋白表達的減少和/或其基因的突變與膽囊癌、膜毛細血管型腎小球腎炎 (mesangiocapillary glomerulonephritis)、系統性紅斑狼瘡和結節病相關。該基因的突變也與惡性瘧原蟲叢簇(rosetting)、賦予抗嚴重瘧疾的保護作用的減少相關。已表征了編碼不同同種型的選擇性等位基因特異性剪接變體。其他等位基因特異性同種型包括分泌的形式已被描述，但未完全表征。在靈長類動物中，CD35用作加工和清除接受補體調理的免疫復合物的主要系統。 已顯示CD35可用作補體級聯的負調節劑，介導免疫粘附和吞噬作用，以及抑制經典和旁路途徑。CRl分子的數量在正常個體中隨紅細胞的老化而減少，并且在病理狀態例如全身性紅斑狼瘡(SLE)、HIV感染、某些溶血性貧血和其他涉及免疫復合物的病癥中也減少。本發明的組合物、多肽和方法本文中提供了用于減少靶細胞上CRP活性的組合物和方法。這樣的減少可通過下列方式來實現減少靶細胞上活性CD46、CD55、CD59或CD35受體的數目；減少靶細胞上活性⑶46、⑶55、⑶59或⑶35受體的密度；引起靶細胞上⑶46、⑶55、⑶59或⑶35受體的隔離；引起靶細胞上⑶46、⑶55、⑶59或⑶35受體的內化；結合靶細胞上的⑶46、⑶55、⑶59 或⑶35受體；封閉靶細胞上的⑶46、⑶55、⑶59或⑶35受體；和/或減少通過靶細胞上 ⑶46、⑶55、⑶59或⑶35受體進行的信號轉導和信號。靶細胞上CRP的活性的此種調節和減少在用于治療包括但不限于癌癥、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植相關病癥的多種療法中是有用的。本文中提供了經修飾的多肽或包含能夠減少靶細胞表面上補體調節蛋白 (CRP)的活性、量、密度、隔離或內化的經修飾的多肽的組合物，其中所述經修飾的多肽包含非天然存在的序列。在一個實施方案中，本公開內容的多肽在長度上為至少5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、125、130、140、150、160、170、175、 180、200、250、300、350、400、450個或甚至至少500個氨基酸。在一個具體的實施方案中，所
述多肽在長度上為至少1 25個氨基酸。在一個相關實施方案中，本公開內容的多肽不是肽。 在另一個相關的實施方案中，本公開內容的多肽可采取三維結構。在一個實施方案中，本公開內容的多肽，在重量上為至少1000、2500、5000、7500、 10，000,15, 000,20, 000,25, 000,30,000,35,000,40,000,45,000,50,000,55,000,60,000、 65，000,70, 000,75, 000,80, 000,85, 000,90, 000,95, 000 或甚至 100，000 道爾頓。在一個實施方案中，本公開內容的多肽不是生長因子或細胞因子。
在一個實施方案中，本公開內容的多肽不結合轉錄調控區。在一個具體的實施方案中，所述多肽不結合基因的啟動子區域、增強子區域、沉默子區域或絕緣子區域。在另一個具體的實施方案中，所述多肽不結合轉錄因子。在一個實施方案中，本公開內容的多肽包含天然存在的蛋白質或蛋白質結構域的至少一個突變。在另一個實施方案中，所述多肽包含與天然存在的蛋白質或蛋白質結構域至少 30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、99%或 100% 的氨基酸序列同一性。在另一個實施方案，所述多肽不是天然存在的蛋白質或蛋白 質片段。在另一個實施方案中，本公開內容的多肽具有第一結構域和第二結構域，其中所述第一結構域和第二結構結合crp，其中所述第一結構域包含seq id n0:15、seq id no: 16、seq id no :17、seq id no :18、seq id no :19、seq id no :20、seq id no :21、seq id no :22、seq id no :23、seq id no :24、seq id no :25、seq id no :26、seq id no :27、seq id no 28,seq id no :29、seq id no :30或seq id no 31中所示的氨基酸序列，并且其中 x1不是天冬氨酸，x2不是蘇氨酸或x3不是異亮氨酸。在一個具體的實施方案中，x1為除了天冬氨酸外的任意氨基酸，x1為甘氨酸，或x1為谷氨酸。在另一個具體的實施方案中，x2為除了蘇氨酸外的任意氨基酸，x2為丙氨酸或x2為任意非極性氨基酸。在另一個具體的實施方案中，x3為除了異亮氨酸外的任意氨基酸，x3為亮氨酸或x3為任意非極性氨基酸。在一個相關實施方案中，所述第一結構域包含seq id no :19所示的氨基酸序列，其中x1不是天冬氨酸；seq id no :26，其中x2不是蘇氨酸；或seq id no :31，其中x3不是異亮氨酸。在另一個相關的實施方案中，所述第二結構域包含seq id n0:19所示的氨基酸序列，其中&不是天冬氨酸；seq id no :26，其中x2不是蘇氨酸；或seq id no :31，其中x3不是異亮氨酸。seq id no 15 至 seq id no 31 的描述seq id no 1.(ad35纖維鈕結構域的de環的氨基酸序列)Dssgnlltx1EsDlkipl其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)seq id n0:16.(ad35纖維鈕結構域的de環的部分氨基酸序列)Gnlltx1Esdlk其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)seq id n0:17.(ad35纖維鈕結構域的de環的部分氨基酸序列)Nlltx1Esdl其中X1為任意氨基酸；
其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO: 18.(AD35纖維鈕結構域的DE環的部分氨基酸序列)LLTX1ESD其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO: 19.(AD35纖維鈕結構域的DE環的部分氨基酸序列)LTX1ES其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO 20.(AD35纖維鈕結構域的DE環的部分氨基酸序列)TX1E其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO:21.(AD 35纖維鈕結構域的DE環的部 分氨基酸序列)GNLLTX1ES其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO:22.(AD 35纖維鈕結構域的DE環的部分氨基酸序列)GNLLTX1其中X1為任意氨基酸；其中&為0(野生型)；其中X1SG(突變型)；或其中X1 SE(保守置換)SEQ ID NO:23.
(AD35纖維鈕結構域的TO環的氨基酸序列)TSETVASSKAFMPSTTAYPFNTX2TRDSENYIHGX3其中X2為任意氨 基酸；其中野生型)；其中突變型)；其中&為(，G，N，Q，S或 Y;或其中父2為卩，I，L，M，P，V或W其中X3為任意氨基酸；其中X3為1(野生型)其中X3為L (突變型)其中X3 為 A，F，M，P，V 或 WSEQ ID NO 24.(AD35纖維鈕結構域的TO環的部分氨基酸序列)FNTX2TRDSENYIHGX3其中X2為任意氨基酸；其中野生型)；其中突變型)；其中&為(，G，N，Q，S或 Y;或其中父2為卩，I，L，M，P，V或W其中X3為任意氨基酸；其中X3為1(野生型)其中X3為L(突變型)其中父3為八，F，M，P，V或WSEQ ID NO:25.(AD35纖維鈕結構域的TO環的部分氨基酸序列)FNTX2TRD其中X2為任意氨基酸；其中野生型)；其中父2為八(突變型)；其中X2 為 C，G，N，Q，S或 Y;或其中父2為卩，I，L，M，P，V或WSEQ ID NO 26.(AD35纖維鈕結構域的TO環的部分氨基酸序列)NTX2TR其中X2為任意氨基酸；其中野生型)；其中突變型)；其中&為(，G，N，Q，S或 Y;或其中父2為卩，I，L，M，P，V或W
seq id no :27.(ad35纖維鈕結構域的to環的部分氨基酸序列)tx2t其中x2為任意氨基酸；其中野生型)；其中x2sa (突變型)；其中x2 為 c，g，n，q，s或 y;或其中父2為卩，i，l，m，p，v或wseq id no 28.(ad35纖維鈕結構域的to環的部分氨基酸序列)x2trdsenyihgx3其中x2為任意氨基酸；其中野生型)；其中x2sa (突變型)；其中x2 為 c，g，n，q，s或 y;或其中x2*f，i，l，m，p，v 或 w其中x3為任意氨基酸；其中x3為1(野生型)；其中x3為l(突變型)；或其中x3 為 a，f，m，p，v 或 wseq id no 29.(ad35纖維鈕結構域的to環的部分氨基酸序列)Trdsenyihgx3其中x3為任意氨基酸；其中x3為1(野生型)；其中x3為l(突變型)；或其中x3 為 a，f，m，p，v 或 wseq id no 30.(ad35纖維鈕結構域的to環的部分氨基酸序列)yihgx3其中x3為任意氨基酸；其中x3為1(野生型)；其中x3為l(突變型)；或其中x3 為 a，f，m，p，v 或 wseq id no 31.(ad35纖維鈕結構域的to環的部分氨基酸序列)hgx3其中x3為任意氨基酸；其中x3為1(野生型)；
其中X3為L(突變型)；或其中X3SA, F，M，P，V 或 W
在另一個相關實施方案中，所述第一和第二結合域結合相同的CRP，或可選擇地所述第一和第二結構域結合不同CRP。在本發明的該方面中提供的實施方案中，CRP為CD 35、 ⑶46、⑶55或⑶59。在一個具體的實施方案中，CRP為⑶46。在相關實施方案中，所述多肽弓丨起CRP至細胞中的內化或隔離；和/或所述多肽以約InM或更小的或甚至約.65nM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。在一些實施方案中，所述多肽不是抗體或抗體片段。所述多肽可以是分離的經修飾的病毒蛋白質，例如來源于腺病毒纖維鈕蛋白的多肽。來源于腺病毒的纖維鈕結構域的此類多肽可以例如選自Adll、Adl6、Ad21、Ad34、Ad35和Ad50。在一個非常具體的實施方案中，所述多肽來源于Ad35纖維鈕結構域，并且包含在選自Asp207、 Thr245、Ile256中的殘基上的至少一個氨基酸置換或其組合；或更具體地所述氨基酸置換為Asp207Gly、Thr245Ala、Ile256Leu或其組合。在另一個實施方案中，所述多肽少于 25, 000道爾頓。本文中提供的多肽可以二聚化、三聚化、同源二聚化或同源三聚化。在一個實施方案中，所述多肽自發地二聚化、同源二聚化、三聚化或同源三聚化。二聚體、三聚體、同源二聚體或同源三聚體可具有三維結構，其中各單體包含具有結合CRP的親和力的兩個環。環之間的序列可以是可置換的并且不降低對CRP的結合。在一個相關實施方案中，本文中提供了包含非天然存在的序列的單體多肽，所述單體多肽在二聚化或三聚化之后能夠結合補體調節蛋白(CRP)。可按照本領域技術人員已知的方法確定二聚體，三聚體，同源二聚體和同源三聚體形成。例如，多肽的三聚化可通過一些標準包括在蔗糖梯度中的沉降、對胰蛋白酶蛋白水解的抗性和聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率來評估(Hong 和 Engler，Journal of Virology 70:7071-7078(1996))。本發明的多肽還可包含三聚化結構域。在一個實施方案中，所述三聚化結構域來源于病毒蛋白質。例如，所述三聚化結構域為細菌噬菌體T4彈力素(fibritin)結構域或逆轉錄病毒纖維蛋白ο 1結構域。在一個實施方案中，所述三聚化結構域包含氨基酸序列 GYIPEAPRDGQAYVRKDGEffVLLSTFL(SEQ ID NO :32)。同樣地，本文中還提供了包含至少1個、2個、3個或更多個本文中描述的任何多肽的多肽復合物。在一個實施方案中，所述多肽復合物可結合兩個或更多個CRP分子。CRP可以是⑶35、⑶46、⑶55或⑶59。在一個具體的實施方案中，CRP為⑶46。在一個實施方案中，本公開內容的多肽復合物在重量上為至少1000、2500、5000、 7500,10,000,15,000,20, 000,25, 000,30, 000,35, 000,40, 000,45, 000,50, 000,55, 000、 60，000,65, 000,70, 000,75, 000,80, 000,85, 000,90, 000,95, 000 或甚至 100，000 道爾頓。在一個具體的實施方案中，如實施例1中所描述的，與野生型Ad35纖維鈕結構域多肽相比較，Ad35纖維鈕結構域內的特定氨基酸置換(即，突變的或經修飾的Ad35纖維鈕結構域多肽)增強同源三聚體纖維鈕結構域多肽對CD46的結合親和力。如實施例2中所顯示的，將細胞與突變型Ad35纖維鈕結構域多肽接觸誘導了 CD46-Ad35纖維鈕復合物的內化，從而減少細胞表面上⑶46的大量存在。此外，與對于野生型Ad35纖維鈕結構域多肽所觀察到的相比較，具有增強的對CD46的結合親和力的突變型Ad35纖維鈕結構域多肽 (Asp207Gly和Thr245Ala)引起細胞表面CD46的更多減少，并且這種減少持續更長時間。如實施例2和3中所顯示的，表面CD46水平的短暫降低導致腫瘤細胞對由抗癌mAb產生的 CDC敏感性。這種致敏效應對于具有增強的對CD46結合的突變型Ad35纖維鈕結構域多肽是最大的 ，然后是野生型Ad35纖維鈕結構域多肽，其兩者都具有比抗CD46mAb的致敏效應更大的效應。如實施例3中所顯示的，在體內觀察到該致敏作用的療效，其中接受淋巴瘤異體移植物的小鼠在mAb治療之前接受突變型Ad35纖維鈕結構域多肽的致敏處理后，在它們的骨髓中具有更低水平的淋巴瘤細胞和延長的存活期。如實施例2中進一步所顯示的，由突變型Ad35纖維鈕結構域多肽誘導的CD46的表面水平的降低減少了 Ad35-GFP載體的細胞感染性。因此，突變型Ad35纖維鈕結構域多肽(例如，Ad35K++)的高親和力和它們交聯幾個CD46分子的能力一起導致短暫的CD46內化，這繼而使淋巴瘤細胞在體外和在淋巴瘤的體內動物模型中對利妥昔單抗介導的CDC敏感。靶細胞表面上CRP活性的減少所述多肽、二聚體或三聚體與CRP的結合可根據本領域技術人員已知的方法來確定。例如，與⑶46，CD55, CD59或CD35的結合可通過簡單的western印跡或Wang，H.，等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)及實施例 1 (對于 CD46)中描述的表面等離子體共振測定來確定。例如，可按照本領域技術人員公知的方法例如實施例1中描述的表面等離子體共振來定量同源三聚體對于CD46的結合親和力。因此，在一個實施方案中，提供了包含非天然存在的氨基酸序列和至少2個能夠結合CRP的結構域的經修飾多肽。所述多肽本身可結合CRP，或可二聚化，三聚化，同源二聚化或同源三聚體化以結合CRP。所述多肽還可以是可結合CRP的蛋白質復合物的部分。本文中提供了包含非天然存在的氨基酸序列的經修飾多肽、包含此類經修飾多肽的二聚體或三聚體，或者包含兩個或更多個此類經修飾多肽的多肽復合物，其中所述經修飾的多肽、二聚體、三聚體或復合物可以以與未修飾的野生型或親本多肽相比較而言更大的親和力(例如為至少 1、1· 5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、23、25、30、35、40、45、50、75、100、 150、200、500或至少約1000倍)結合CRP。因此，CRP對所述經修飾的多肽、二聚體、三聚體或復合物的解離常數(Kd)不超過 10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、l. 5ηΜ、1ηΜ、0. 9ηΜ、0. 8ηΜ、 0. 7ηΜ、0· 65ηΜ、0· 63ηΜ、0· 6ηΜ、0· 5ηΜ、0· 4ηΜ、0· 3ηΜ、0· 25ηΜ、0· 2ηΜ、0· 15ηΜ、0· 1ηΜ、0· 05ηΜ、 0. 01ηΜ、0. 005ηΜ、0. 001ηΜ、0. 0005ηΜ或0. ΟΟΟΙηΜ。在一個具體的實施方案中，如實施例1 中所描述的，經修飾的纖維鈕結構域多肽和⑶46的Kd為.63ηΜ。因此，在一個實施方案中，本文中提供的經修飾多肽能夠形成三聚體或同源三聚體，所述三聚體結合在靶細胞表面上表達的CRP (⑶46、⑶55、⑶59或⑶35)并且誘導CRP至細胞內的內化。在另一個實施方案中，本文中提供的經修飾多肽能夠形成三聚體或同源三聚體，所述三聚體結合在靶細胞表面上表達的CRP (⑶46、⑶55、⑶59或⑶35)并且誘導CRP 的隔離。在另一個實施方案中，本文中提供的經修飾的多肽能夠形成三聚體或同源三聚體， 所述三聚體結合在靶細胞表面上表達的CRP (⑶46、⑶55、⑶59或⑶35)并且減小靶細胞上 CRP受體的密度。在另一個相關的實施方案中，本文中提供的經修飾的多肽能夠形成三聚體或同源三聚體，所述三聚體結合在靶細胞表面上表達的CRP (CD46、⑶55、⑶59或⑶35)并且減少靶細胞上CRP的活性。在一個實施方案中，與經修飾的多肽一起溫育或與其接觸引起至少5%的細胞表面CRP水平的下降，優選至少10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%的細胞表面CRP水平的下降在另一個實施方案中，與經修飾的多肽一起溫育或與其接觸引起至少5%的細胞表面上CRP密度的減小，優選至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %或70 %的細胞表面上 CRP密度的減小。在另一個實施方案中，與經修飾的多肽一起溫育或與其接觸引起至少5%的細胞表面上CRP活性的減少，優選至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %或70 %的細胞表面上 CRP活性的減少。在另一個實施方案中，與經修飾的多肽一起溫育或與其接觸引起至少5%的細胞表面上CRP隔離或內化的增加，優選至少10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%的細胞表面上隔離或內化的增加。在一些實施方案中，在細胞表面CRP水平恢復至溫育前水平之前，通過與經修飾的多肽溫育產生的細胞表面CRP水平的下降，細胞表面上CRP密度的減小，靶細胞表面上 CRP活性的減小，CRP內化的增加，CRP隔離的增加持續至少2小時、4小時、6小時、8小時、 10小時，優選持續至少12小時、24小時、36小時、48小時、72小時或96小時。在一個示例性實施方案中，包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的經修飾纖維鈕結構域多肽包含促進CD46結合的支架基序。經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽在一個示例性實施方案中，經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽被用于減小細胞表面上CD46的活性。圖IA是以SEQ ID NO :2 (其由以SEQ ID NO 1提供的cDNA編碼)提供的全長野生型腺病毒血清型35 (Ad35)纖維多肽的示意圖，其顯示N末端尾結構域(aa 1-45)、柄結構域(aa 46-133)和C末端纖維鈕(K)結構域(aa 134-323)的相對位置。先前已確定除了鈕結構域(aa 134-323)外，柄結構域的C末端最末部分(aa 123-133)是纖維三聚化所必需的。Hong 和 Engler，J. Virology 70:7071-7078(1996)。因此，如圖 IB 中所顯示的，包含柄結構域的11氨基酸部分(aa 123-133)和完整鈕結構域(aa 134-323)的野生型Ad35多肽提供為SEQ ID NO :3。本文中公開了相對于SEQ ID NO :2的第一氨基酸殘基按順序編號的氨基酸置換(圖IA中顯示的)。因此，存在于SEQ ID NO 3中的第一氨基酸殘基相應于全長纖維多肽(SEQ ID NO 2)的氨基酸123。該編號方案也用于只包含SEQ ID NO 2的亞部分或變異的多肽序列中相應的氨基酸位置，以使序列的相對位置與全長序列相通。如本文中所使用，纖維多肽(SEQ ID NO 2)的鈕結構域(SEQ ID NO 3)中的下列氨基酸置換氨基酸殘基207 (其中Asp被Gly替代)、氨基酸殘基245 (其中Thr被Ala替代)以及氨基酸殘基256 (其中Ile被Leu替代)單個地或組合地導致經修飾Ad35纖維鈕結構域多肽對于CD46的結合親和力增強。參見表2和實施例1。因此，在一些實施方案中，本發明提供了包含SEQ ID N0:3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的經修飾纖維鈕結構域多肽，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thr245Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合⑶46的同源三聚體。如本文中所使用的，術語"SEQ ID NO :3的連續氨基酸"是指氨基酸殘基如它們出現在SEQ ID NO :3中一樣的連續排序，而無插入、缺失或大多數的置換。然而，該短語允許摻入描述的氨基酸置換(即，Asp207Gly、Thr245Ala、Ile256Leu)。因此，在一個示例性實施方案中，所述多肽可包含SEQ ID NO :3的至少殘基1-12 (相應于SEQ ID N0:2，氨基酸殘基123-135)和一個或多個如下置換位置85上的Gly置換(相應于SEQ ID NO 2的位置207上的Asp)；位置120上的Thr置換(相應于SEQ ID NO 2的位置245上的Ala)；和 /或位置134上的Ile置換(相應于SEQ ID NO 2的位置134上的Leo)。在一些實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO :3的至少 20、至少30、至少40、至少50、至少100、至少200或至少300個連續氨基酸并且還包含選自 As p207Gly, Thr245Ala和Ile256Leu的氨基酸置換的至少一個置換。在一些實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO 3的至少12 至約20個連續氨基酸，包括選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ile256Leu的氨基酸置換的至少一個置換。在其他實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO 3的至少20 至約50個連續氨基酸，包括至少一個選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ile256Leu的氨基酸置換。在其他實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO 3的至少50 至約100個連續氨基酸，包括選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ile256Leu的氨基酸置換的至少一個置換。在其他實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO :3的約100 個至全部連續氨基酸，包括選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ile256Leu的氨基酸置換的至少
一個置換。在一個實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO 3的至少40 個連續氨基酸，其中所述多肽包含Asp207Gly和Thr245Ala。在一個實施方案中，所述多肽包含具有置換Asp207Gly和Thr245Ala的SEQ ID NO :3 JnSEQ ID NO :5中所示的，其由 SEQ ID NO 4所示的cDNA編碼.在另一個實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO :6,SEQ ID NO :7,SEQ ID NO :8 和 SEQ ID NO :9 的至少一個。SEQ ID NO :6 為 Ad35 纖維鈕結構域中 DE 環區域的連接D β折疊片與E β折疊片的氨基酸序列，并且相應于SEQ ID NO :2的從氨基酸位置199至氨基酸位置215的連續氨基酸序列。在一些實施方案中，所述多肽包含含有氨基酸置換 Asp207Gly 的 SEQ ID NO 6 (DE 環)。SEQ ID NO :7為Ad35纖維鈕結構域中TO環區域的連接F β折疊片與G β折疊片的氨基酸序列，并且相應于SEQ ID NO 2的從氨基酸位置223至氨基酸位置256的連續氨基酸序列。在一些實施方案中，所述多肽包含含有氨基酸置換Thr245Ala和/或Ile256Leu 之一或任一個的SEQ ID NO :7 (TO環)。SEQ ID NO 8為Ad35纖維鈕結構域中HI環區域的連接H β折疊片與I β折疊片的氨基酸序列，相應于SEQ ID NO :2的從氨基酸位置276至氨基酸位置287的連續氨基酸序列。SEQ ID NO :9為Ad35纖維鈕結構域中IJ環區域的連接Ιβ折疊片與JP折疊片的氨基酸序列，相應于SEQ ID NO 2的從氨基酸位置297至氨基酸位置313的連續氨基酸序列。在一些實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽是包含SEQ ID N0S:5、6、7和8以形成結合CD46的結合結構域的支架多肽。
Ad35纖維鈕結構域的晶體學分析已幫助證實了 TO環(SEQ ID NO 9)和HI環(SEQ ID NO 9)與IJ環(SEQ ID NO 9)中的接觸區域相比較而言位于Ad35纖維鈕結構域的對側上(Wang 等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)) 這些環內的氨基酸殘基對于CD46結合是非常重要的事實暗示著一個CD46單位在兩個Ad35纖維鈕結構域之間 (即，一個纖維鈕結構域的re和HI環與另一個纖維鈕結構域的IJ環之間)結合。此外， Wang等人，Journal of Virology 82 :10567_10579 (2008)和實施例1中描述的結果支持由 SEQ ID NOS :6和7包含的突變序列對于增強與⑶46的結合的重要性。晶體學分析表明DE 環(SEQ ID NO 6)中位置207上的Asp被Gly置換允許DE和HI環接近CD46。這是 因為在結合中，離氨基酸位置207最近的⑶46R-基團是疏水性Ile殘基(Ilel3)。疏水性Gly 對極性Asp的置換可允許⑶46HI環移至更接近Ilel3殘基。類似地，針對TO環(SEQ ID NO 7)內氨基酸位置245上的Thr引入疏水性Ala可能允許位置246上的Thr移至更接近 CD46上位置46的Tyr。因此，FG環能夠移至更接近CD46。在一個實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含與SEQ ID NO :3至少 50%、至少60%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%同一或與其完全同一的氨基酸序列。在一個實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含突變型Ad35纖維鈕結構域多肽的氨基酸序列，所述氨基酸序列包含位置207上的氨基酸置換 (其中Asp被Gly替換)和位置245上的置換(其中Thr被Ala替換)，如SEQ ID NO 5所示的。鈕結構域中這2個置換的組合導致突變型Ad35纖維鈕結構域多肽(在本文中也稱為Ad35K++)，所述多肽三聚體化以形成同源三聚體鈕結構，所述結構對于結合CD46的親和力是由野生型Ad35纖維鈕結構域多肽(SEQ ID NO :3)(在本文中也稱為Ad35K)形成的同源三聚體鈕結構的親和力的23. 2倍，如表2和實施例1中所顯示的。根據本發明的該方面，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽能夠形成可結合在細胞表面上表達的⑶46的同源三聚體鈕結構。同源三聚體的形成自發地發生，并且不需要各纖維多肽的完整性。如由 Hong 和 Engler ,Journal of Virology 70 :7071_7078 (1996)(通過引用并入本文)所顯示的，Ad2纖維蛋白的完整N端半部分的缺失不影響同源三聚化。因此， 至多纖維蛋白的C端半部分對于三聚化是足夠的。具體地，研究人員發現C端上的小缺失 (SEQ ID NO 2 aa 123-134)破壞三聚化，然而保留殘基電荷的選擇的添加或置換導致相對穩定的同源三聚體。因此，纖維三聚化可利用完整的纖維鈕結構域和柄的至少正好C端氨基酸(SEQ ID NO 2 aa 123-134)來實現。可根據本領域技術人員公知的方法確定同源三聚體形成。例如，纖維鈕蛋白的三聚化可通過一些標準包括在蔗糖梯度中的沉降、對胰蛋白酶蛋白水解的抗性和聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率來評估(Hong和Engler，Journal of Virology 70: 7071-7078(1996))。關于電泳遷移率，纖維鈕結構域同源三聚體是非常穩定的復合物，并且當在SDS-PAGE之前未煮沸樣品時，其跑在與三聚體的分子量一致的分子量上。然而，在煮沸后，三聚體結構被破壞，蛋白質隨后跑在與蛋白質單體一致的大小上。纖維鈕蛋白的三聚化也可使用兔多克隆抗His6-HRP抗體來進行確定，如Wang，H.，等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)和實施例1中所描述的。可根據本領域技術人員熟知的方法確定同源三聚體與⑶46的結合。例如，可通過簡單的 western 印變或如 Wang，H.，等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)和實施例1中描述的表面等離子體共振測定確定與CD46的結合。此外，可按照本領域技術人員公知的方法例如實施例1中描述的表面等離子體共振測定定量同源三聚體對于CD46的結合親和力。通常可按照本領域技術人員公知的方法確定同源三聚體的形成。例如，可根據一些標準包括在蔗糖梯度中的沉降、對胰蛋白酶蛋白水解的抗性和聚丙烯酰胺凝膠中的電泳遷移率(H ong 和 Engler，Journal of Virology 70 7071-7078 (1996))來評估多肽的三聚化(Hong 和 Engler ,Journal of Virology 70:7071-7078(1996))。關于電脈遷移率，纖維鈕蛋白同源三聚體是非常穩定的復合物，并且當在SDS-PAGE之前未煮沸樣品時，其跑在與三聚體的分子量一致的分子量上。然而，在煮沸后，三聚體結構被破壞，蛋白質隨后跑在與蛋白質單體一致的大小上。纖維鈕蛋白的三聚化也可使用兔多克隆抗His6-HRP抗體來進行確定，如 Wang，H.，等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)和實施例 1 中所描述的。在一個具體的實施方案中，如實施例2中所描述的，經修飾的Ad35纖維鈕結構域多肽(例如，Ad35K++)與細胞膜上表達的⑶46的結合誘導纖維鈕結構域多肽/⑶46復合物至細胞內部的內化，如實施例2中所描述的。圖2A舉例說明了在加入20yg/ml PBS(對照)、野生型Ad35K(野生型)、Ad35K++(SEQ ID NO 5)或抗CD46mAb后在不同時間點上HeLa 細胞上⑶46的細胞表面水平。在15分鐘后，與Ad35K++接觸的細胞與用PBS處理的細胞相比較而言在其表面上具有約70%的⑶46水平降低。Ad35K++引起⑶46水平的最大下降以及最慢恢復至溫育前水平。相反地，用抗⑶46mAb處理的細胞只顯示約30%的細胞表面 ⑶46水平下降，并且更快地回復至溫育前水平。圖2B舉例說明流式細胞術研究結果，顯示細胞結合的Ad35K和Ad35K++的減少， 其表明纖維鈕結構域多肽隨CD46—起被內化。免疫熒光研究表明在將細胞與Ad35K和 Ad35K++接觸后30分鐘，在次級內體/溶酶體中檢測到纖維鈕結構域多肽和CD46。此外，在將細胞與纖維鈕結構域多肽接觸后第12小時，用Ad35K++處理的細胞主要顯示細胞質CD46 染色，其強度表明CD46在溶酶體中降解。與實施例2的結果相似，對于下列淋巴瘤/白血病細胞拉吉、Jurkat, K562、Mo7e、Mino和Farage以及對于下列實體瘤細胞A549 (肺)， SK0V3 (卵巢)，HT29 (結腸)和MDA235MB細胞(乳腺)觀察到Ad35K++介導的表面CD46水平的降低。與這些結果相一致，如圖2C中顯示的，在將細胞與Ad35纖維鈕或Ad35K++接觸后72小時嘗試用Ad35-GFP (為了進行感染需要表面CD46)感染細胞導致相對抗性的細胞， 這表明表面CD46的不存在。對其他腫瘤細胞系例如紅白血病Mo7e細胞和B淋巴瘤拉吉細胞進行的相似⑶46流式細胞術和Ad35-GFP測定產生相似的結果。鑒定能夠減少靶細胞表面上CRP的活性、量或密度的分子在一個實施方案中，提供了用于篩選能夠改變CRP活性的分子或化合物的方法。 所述方法包括產生候選分子文庫，選擇能夠結合CRP的候選分子，并且確定所述分子是否改變CRP的活性。CRP可以為⑶46、⑶55、⑶59或⑶35。在一個具體的實施方案中，CRP 為CD46。在一個實施方案中，所述分子例如以InM或更小的結合親和力結合CRP。待篩選的分子可選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體_藥物綴合物、 siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。在一個示例性實施方案中，所述分子是小分子。在另一個示例性實施方案中，所述分子是多肽。在相關實施方案中，所述分子通過CRP至細胞內的內化或隔離，或通過減少細胞表面上CRP的量或密度來改變CRP的活性。可通過針對測試分子篩選表達CRP的細胞群或分級分離的細胞來鑒定能夠改變 CRP的活性或結合CRP的分子。可使用結合至基質例如陣列或多個顆粒的已知組成的不同測試化合物分離或鑒定新型分子，所述基質可允許只使用一小部分空間充分獲取大量的化學/結構空間樣本。由于基質表面上每一種測試化合物的組成是已知的，因此這構成了對親和成分(affinity element)的篩選。例如，測試化合物陣列在基質可定址位置上在指定的位置上包含測試化合物，并且可用于鑒定CRP的一種或多種結合劑。所述測試化合物基于核心序列或結構的較小變化可以是無關的或相關的。不同測試化合物可包括給定的測試化合物的變體(例如多肽同種型)、結構或組成上無關的測試化合物或其組合。
測試化合物可以是小分子、藥物、類肽、多糖、有機化合物、無機化合物，聚合物、月旨質、核酸、多肽、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒、適體、蛋白質、多糖或其他化合物。測試化合物可以是天然的或合成的。測試化合物可包含基于任何數目的連接(例如，酰胺、酯、醚、硫醇、自由基加成、金屬配合等)或連接的組合、樹枝狀結構、環狀結構、空腔結構或用作在其上進行特定加成的支架的其他結構(具有多個附近連接位置)的線性或分支異聚體化合物或由其組成。可使用本領域內的標準方法將此類測試化合物點在基質上或原位合成。此外，可將測試化合物組合點樣或原位合成以檢測有用的相互作用例如協同結合。在一個實施方案中，所述測試化合物可以是具有已知氨基酸序列的多肽。例如，可將可溶性CRP用于載玻片上的打點陣列(spotted array)，所述陣列包含數個至1，000, 000 個具有可變氨基酸的長度的測試多肽。可將多肽通過C端連接至表面。多肽的序列可隨機地從19種氨基酸(不包括半胱氨酸)產生。結合反應可包括非特異性競爭劑例如過量的用另一種染料標記的細菌蛋白質以便可測定對于每一種多肽結合靶的特異性比率。可選擇具有最高特異性和結合的多肽。每一個點上多肽的身份是已知的，從而可被容易地鑒定。可通過肽陣列鑒定用作CRP活性的調節劑的抗體或合成抗體。另一個方法是使用通過抗體噬菌體展示的合成抗體產生。將抗體(例如，Fab)的M13噬菌體文庫在噬菌體顆粒上展示為與外殼蛋白的融合物。每一個噬菌體顆粒展示唯一抗體并且也封裝包含所述編碼DNA的載體。可構建高度多樣性的文庫，所述文庫表現為噬菌體庫，其可用于結合固定抗原的抗體選擇。通過固定的抗原保留結合抗原的噬菌體，并且通過洗滌除去非結合噬菌體。 可通過感染大腸桿菌(Escherichia coli)宿主擴增保留的噬菌體庫，并且可將所述擴增的噬菌體庫用于額外輪的選擇以最終獲得以結合抗原的克隆為主的群體。在該階段，可分離單相克隆，將其經歷DNA測序以解碼展示的抗體的序列。通過使用噬菌體展示和本領域內已知的其他方法，可產生對于CRP的高親和力設計者抗體。還可使用基于珠粒的測定鑒定能夠結合或以其它方式調節CRP的活性的新型試劑。CRP結合劑或調節劑也可以是新型適體。可使用配體指數富集的系統進化技術 (systematic evolution of ligands by exponential enrichment)(SELEX)(Tuerk&Gold, Science 249 :505_510，1990 ；Ellington&Szostak, Nature 346 =818-822,1990)(例如美國專利No. 5，270，163中描述的)鑒定靶的適體。可將核酸的文庫與靶CRP接觸，將特異性結合至靶的此類核酸從文庫中不特異性結合所述靶的其余核酸分離。擴增分離的核酸以產生配體富集的庫。多輪的結合、分 離和擴增(即，選擇)導致一種或多種具有所需活性的適體的鑒定。也可使用改進的方法，例如美國專利公開案No. 20090264508中描述的激光SELEX 或 deSELEX。用于減少靶細胞表面上CRP的活性、量或密度的經修飾多肽的鑒定蛋白質工程的進展和強大文庫選擇技術的可獲得性使得能夠開發許多設計用于實際上結合任何選擇的蛋白質靶的變通蛋白質支架。支架文庫基于展示不同結合特征的蛋白質構象基序。類型可包括α-Sandwich、α-Barrel、三螺旋束、重復蛋白質、肽結合劑、小支架、呈遞限制性肽的支架(Scaffolds presenting constrained peptide), 具有固有熒光的支架(Scaffolds with intrinsic fluorescence)、具有內在酶促活性的支架、蛋白酶抑制劑和二硫鍵合的支架(Binz，H. K.和Pluckthun，Α.，“ Engineered Proteins as Specific Binding Reagents, " Current Opinion in Biotechnology 16 459-469(2005))。通常，可產生如上文中描述的噬菌體展示選擇以產生已知蛋白質結合基序的許多變體。可選擇結合特定靶的特定變異并且進行測序。在這方面，可將候選多肽的一個或多個結構域例如腺病毒鈕結構域序列整合入所選擇的支架基序，可利用技術例如噬菌體展示選擇產生變體的文庫，可使用本文的實施例中描述的示例性測定法就CRP(CD46、 ⑶655或⑶59)結合和療效評估可選擇的支架的功效。可使用對于本領域技術人員來說是常規的重組表達方法產生經修飾的多肽。例如，可以通過克隆編碼具有或不具有整合入表達載體例如pQE-30Xa表達載體(Qiagen)的 His 標簽的 Ad35K++(SEQ ID NO 4)的 cDNA 序列來產生包含 SEQ ID NO :5 (Ad35K++)的重組Ad35纖維鈕結構域多肽。在轉化入大腸桿菌后，通過加入異丙基_ α -D-硫代-半乳糖苷(IPTG)來誘導蛋白質表達，隨后如由制造商所建議的純化蛋白質，用因子Xa蛋白酶降解。在降解后，使用Xa清除樹脂(Removal Resin)除去因子Xa蛋白酶。隨后使用Ni-NTA 親和層析捕獲和除去已切割的His6標記的肽和未降解的His6標記的蛋白質，如制造商的說明書中所描述的。在一個實施方案中，本文中提供了鑒定可結合CRP的多肽的方法，其包括如下步驟將三維分子建模算法用于CRP的原子坐標以確定CRP的結合結構域的空間坐標；和針對CRP結合結構域的空間坐標電子篩選存儲的一組候選多肽的空間坐標以鑒定可結合CRP 的多肽。在另一個實施方案中，本文中提供了鑒定可結合CRP的多肽的方法，其包括如下步驟提供CRP和候選多肽的晶體結構；將CRP和候選多肽的晶體結構疊加；和確定候選多肽與CRP之間是否存在結構基礎親和力。在另一個實施方案中，本文中提供了用于篩選能夠結合CRP的高親和力多肽的方法，所述方法包括產生候選多肽的文庫；選擇能夠同源三聚化的候選多肽；選擇能夠結合 CRP的可溶形式的候選多肽；和鑒定能夠以.65nM或更小的結合親合力結合CRP的那些多肽。在另一個方面，本發明提供了編碼包含突變的經修飾多肽的分離核酸分子。對于 Ad35纖維鈕蛋白，所述突變選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ild245Leu。按照全長纖維多肽 (SEQ ID NO 2)的第一氨基酸殘基依順序給Ad35纖維鈕結構域(SEQ ID NO 3)中的突變編號。
在一些實施方案中，提供了核酸。在一個示例性實施方案中，所述核酸還包含編碼肽區域 SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO 8 禾口 SEQ ID NO :9 的核苷酸序列。如上文中所描述的，這些肽片段分別相應于Ad35纖維鈕結構域多肽的DE環、FG環、HI環和IJ 環。在一個實施方案中，提供了編碼結合CD46的支架蛋白并且包含由間隔核酸殘基分隔的編碼肽區域SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :7和SEQ ID NO :8的核酸序列的核酸分子。在一個實施方案中，所述分離的核酸編碼突變型Ad35纖維鈕結構域 (Ad35K++Asp207Gly和Thr245Ala)，如SEQ ID NO 5中所示的。本領域技術人員理解由于遺傳密碼的簡并性，多肽序列的 每一個氨基酸可由多個已知的三核苷酸密碼子單位編碼。編碼每一個氨基酸的各種密碼子是公知的。這樣，多肽例如SEQ ID NO :5可預測地由許多核酸編碼，每一個核酸在它們的序列中具有獨特的變異。因此，可預期核酸的多樣性通過遺傳密碼的簡并性，全都編碼SEQ ID NO :5的多肽。在另一個實施方案中，所述核酸包含SEQ ID NO :4。在另一個方面，提供了包含編碼本文中描述的多肽的核酸的表達載體。表達載體是用于將基因引入靶細胞，使得細胞能夠從所述基因產生大量穩定的信使RNA(mRNA)的構建體。商購可得的表達載體的非限定性實例包括PQElOO (Qiagen，Valencia，CA)，如實施例 1中使用的。表達載體包含編碼多肽的核酸，所述多肽包含SEQ ID NO 3的至少12個連續氨基酸并且包括選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ild245Leu的氨基酸置換中的至少一個置換。無論載體的來源如何，本領域技術人員應理解，包含所述核酸的表達載體也具有有效地連接至所述核酸序列的表達控制序列。這樣的表達控制序列可包括使得宿主細胞轉錄機器能夠或促進其產生所述核酸的mRNA拷貝的啟動子或增強子序列。具體地，所述啟動子序列為細胞的RNA聚合酶提供了附著至被靶向以轉錄成mRNA的基因附近的DNA序列的位點。優選實施方案包括允許產生大量mRNA (這轉而使得細胞翻譯機器能夠產生大量由所述核酸編碼的多肽)的此類啟動子或增強子區域。這樣的表達控制序列的非限定性實例是Iac操縱子，其包含啟動子和阻抑子序列。所述阻抑子序列可被乳糖類似物例如異丙基-a-D-硫代-半乳糖苷(IPTG)阻遏，從而允許操縱子的啟動子元件促進基因轉錄。本領域技術人員還應理解，所述表達載體可包含選擇標記，例如賦予包含該載體和表達該抗性標記基因的細胞對抗生素試劑的抗性的基因。借助于該抗性標記基因，可將成功地接受所述載體和表達由其編碼的基因的細胞與未接受所述載體的細胞分離開。此類選擇標記的非限定性實例是賦予對抗生素例如卡那霉素或氨芐青霉素的抗性的基因。在另一個方面，提供了用包含編碼上述多肽的核酸的載體轉染的培養細胞。在這方面，當完整細胞的轉錄機器能接觸核酸模板進行mRNA的產生時，細胞被載體成功轉染。 促進載體轉染進入細胞的方案在本領域內是公知的。在一個其他實施方案中，本發明包括用上述載體穩定轉染的培養細胞的后代。這樣的后代可包含載體的拷貝而無需經歷轉染方案，并且能夠在表達控制序列的控制下轉錄載體中包含的核酸。利用用表達載體轉染的培養細胞產生大量多肽的技術在本領域內是公知的。 Wang，H.，等人，Journal of Virology 81 12785-12792 (2007)(通過引用并入本文)提供了這樣的技術的非限定性實例。簡而言之，使用包括與靶基因克隆位點相鄰的Iac操縱子的表達載體。所述載體序列還在目的基因的N端編碼6個His殘基重復基序。在轉染入大腸桿菌細胞后，可用濃度為ImM的IPTG進行溫育來誘導基因的表達。在足夠長的時間例如 5小時后，收獲細胞，使用緩沖液(50mM NaH2PO4, 300mM NaCl，10mM咪唑)裂解細胞，然后在冰上用lmg/ml溶菌酶溫育30分鐘并且進行超聲處理。通過離心除去細胞碎片，將上清液與Ni-次氮基三乙酸(NTA)瓊脂糖珠在4°C下一起溫育3小時。NTA瓊脂糖結合His標簽， 促進蛋白質純化。收集珠粒，用50mM NaH2PO4, 300mM NaCl，60mM咪唑和20%甘油洗滌。利用50mM NaH2PO4, 300mM NaCl，250mM咪唑和20%甘油從NTA珠粒洗脫重組蛋白。

減少靶細胞表面上⑶46的量的方法在另一個方面，本發明提供了用于減少靶細胞表面上CD46的量的方法。所述方法包括將在其表面上表達⑶46的靶細胞與一定量的包含多種經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的組合物接觸，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成同源三聚體，所述同源三聚體與從由SEQ ID N0:3(野生型Ad35纖維鈕)組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言具有增強的對于CD46結合的親和力。本文中描述了本發明的方法所使用的經修飾腺病毒35纖維鈕結構域多肽。可使用常規誘變和篩選方法，例如實施例1中描述的方法， 從任何腺病毒血清型衍生本發明該方面的方法中所使用的另外的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽，所述腺病毒血清型能夠通過其纖維鈕結構域結合⑶46。例如，B組血清型11、16、 21、34、35和50產生可結合⑶46的纖維鈕結構域多肽。此外，還涉及可充分修飾來自腺病毒纖維多肽的識別CAR受體的鈕結構域以使得三聚體鈕結構能夠結合⑶46。可通過多種公知的方法進行CRP結合。關于CRP結合，示例性方法詳細地描述于實施例1中，其中建立纖維鈕結構域突變體文庫，就強CD46結合篩選文庫。簡而言之，利用編碼野生型腺病毒纖維鈕結構域多肽序列作為模板實施隨機誘變PCR。將擴增產物克隆進入表達載體，然后轉化進入細胞，隨后將所述細胞鋪板于瓊脂平板上。在誘導蛋白質表達后，將細菌菌落轉移至濾膜，通過按順序與可溶性⑶46、抗⑶46mAb和標記的抗Ig抗體進行溫育來在所述濾膜上顯現CD46結合。隨后可容易地測定來自顯示最強結合信號的集落的DNA，從而鑒定有利的突變。用于鑒定增強突變的其他高通量選擇策略在本領域內是已知的。例如，可對大量變體(接近IO8)有效地實施噬菌體展示和肽展示選擇。可將顯示增強的結合能力的多肽變體物理連接至編碼它們的基因，從而使得能夠容易地確定有利突變的序列(論述于 Clackson, Τ. , and Wells, J. Α. , " In Vitro Selection From Protein and Peptide Libraries, “ TIbTech, 12 173-184(1994)中)。產生經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的其他方法包括利用標準技術操縱編碼野生型纖維鈕的DNA，例如限制性消化和基于合理設計的突變。優選多肽的人工合成也被涉及。在其中經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽來源于腺病毒血清型35的實施方案中，本文中描述的經修飾Ad35K多肽在根據本發明該方面的方法的實施中是有用的。在該方法的一些實施方案中，所述經修飾的腺病毒多肽包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸殘基，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、Thr245Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合。為了促進從單個多肽形成的同源三聚體結合CD46的能力，所述同源三聚體優選形成具有緊密堆積的β折疊片的紐結構。在一個優選實施方案中，所述多肽包含相應于β折疊片(I-J)并且保留β折疊片二級結構的序列。在另一個實施方案中，所述多肽包含相應于F-G、H-I和I-J環的序列，所述序列連接β折疊片并且提供與⑶46的接觸點。圖IB 舉例說明纖維鈕結構域序列內的示例性β折疊片環結構域。在一些實施方案中，所述經修飾的纖維鈕結構域多肽包含與SEQ ID NO :6、SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :8禾口 SEQ ID NO :9 具有至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%或甚至至少 80 %的同一性(例如，至少85 %、至少90 %、至少95 %或至少100 %同一)的序列，并且還包含相應于SEQ ID NO 2氨基酸207 (其中Asp被Gly替換)和SEQ ID NO 2氨基酸245 (其中Thr被Ala替換)的氨基酸。整合進入所述經修飾的纖維鈕結構域多肽的這些序列可以以任何順序放置。在優選實施方案中，這些序列被展示β折疊片二級結構的多肽結構域分隔。根據本發明的該方面的方法，從所述經修飾纖維鈕結構域多肽形成的同源三聚體與CD46的結合誘導CD46至細胞內的內化。檢測CD46的內化的示例性方法描述于實施例 2中。根據提供的方法， 將靶細胞與包含經修飾的纖維鈕結構域多肽的組合物接觸，所述經修飾纖維鈕結構域多肽包含的量和所接觸的時間足以引起與將靶細胞與對照(例如PBS) 接觸相比較而言至少40%的細胞表面上CD46水平的下降。在優選實施方案中，細胞表面上的⑶46水平的降低為至少50 %，優選60 %，更優選70 %，更優選80 %。在其他實施方案中，將靶細胞與充足的包含所述經修飾纖維鈕結構域多肽的組合物接觸引起與由野生型纖維鈕結構域多肽或抗CD46mAb在相同條件下引起的減少相比較而言更大的細胞表面CD46 的減少。將細胞與能夠減少CRP活性的多肽接觸可使用在細胞表面上表達⑶46、⑶55、⑶59或⑶35 (CRP)的任何靶細胞(包括存在于哺乳動物受試者的體內或組織培養物中的靶細胞)實施所述方法。在一些實施方案中，如在本文中更詳細描述的，所述靶細胞是癌細胞或腫瘤細胞。在一些實施方案中， 所述靶細胞易受附著至CD46、CD55、CD59或CD35的病原體例如腺病毒、皰疹病毒、麻疹病毒、瘟病毒(pestivirus)、艾可病毒和柯薩奇病毒B病毒、釀膿鏈球菌(Streptococcus pyogenes)和淋病奈瑟球菌感染。本文中提供的方法減少由需要⑶46、⑶55、⑶59或⑶35 結合和附著至所述細胞的病原體產生的感染。由于靶細胞上⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的減少的細胞表面水平，所述病原體具有減少的附著和侵入細胞的機會，因為靶細胞經歷更少的病原體附著和與其的接觸。在一個示例性實施方案中，如實施例2中所描述的，與未處理的對照細胞相比較， 利用重組Ad35K++(SEQ ID NO :5)預處理的細胞中⑶46的下調降低了通過Ad35_GFP病毒體進行的感染的GFP轉導水平。關于在哺乳動物受試者中接觸靶細胞，試劑的施用方法描述于下文中。關于接觸體外培養的細胞，將試劑呈遞至培養細胞的方法是常規的并且對于本領域技術人員來說是已知的。包含修飾多肽的組合物的具體量將根據本領域技術人員理解的許多因素而變化。 此類因素包括靶細胞的來源、⑶46、⑶55、⑶59或⑶35在靶細胞表面上的表達譜、細胞的生長環境和可及性、試劑的效力和穩定性以及同源三聚體多肽對于⑶46、CD55、⑶59或⑶35 的結合親和力。
可將培養的、體內或離體細胞與范圍在至少0. 001,0. 0025,0. 005,0. 0075,0. 01、 0.025,0.05,0.075,0.1,0.25,0. 5,0. 75、1、2，5、5、7，5、10、12，5,15,17. 5、20 和 25 μ g/ml 的培養基內濃度的任何經修飾多肽接觸。 作為一個非限定實例，如實施例2中所描述的，可將培養的細胞與范圍在0.025至 25 μ g/ml培養基之間的濃度的經修飾纖維鈕結構域多肽接觸。在一些實施方案中，⑶46，⑶55，⑶59或⑶35從靶細胞表面的內化在將靶細胞與包含經修飾多肽的試劑接觸約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30、45、60、75或長至120分鐘的時間內是可檢測的。在一些實施方案中，⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的細胞表面水平僅在24小時后，優選36小時后，更優選48小時后，更優選72或甚至96小時后回復至接觸前的細胞表面水平，或溫育前水平。用于檢測細胞表面標志例如⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的方法在本領域內是公知的，例如流式細胞術和熒光染色。用于檢測CD46的細胞表面水平的示例性方法描述于實施例3中。用于在表達CRP的靶細胞中誘導細胞溶解的方法在另一個方面，本發明提供了用于在其表面上表達⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的靶細胞中誘導細胞溶解的方法。根據本發明的該方面的方法包括(a)將在其表面上表達 ⑶46、⑶55、CD59或⑶35的靶細胞與一定量的包含有效地減少存在于所述靶細胞表面上的 ⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的量的多種經修飾多肽的試劑接觸；和(b)將按照步驟(a)處理的靶細胞與結合靶細胞表面上的抗原并且誘導細胞溶解的抗體或其片段接觸。已顯示⑶46、⑶55、⑶59或⑶35的細胞表面表達保護細胞免受補體依賴性細胞溶解的破壞。根據本發明的該方面的方法，靶細胞上細胞表面CD46、CD55、CD59或CD3水平的降低使細胞對通過誘導補體依賴性細胞溶解(CDC)的試劑例如抗體或其片段產生的細胞溶解敏感。在一個示例性實施方案中，如實施例2中描述的和圖2中舉例說明的，與包含所述經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽Ad35K++(SEQ ID NO 5)的組合物接觸的細胞經歷達到 70%的表面⑶46水平的降低，持續至少48小時。作為⑶46，⑶55，⑶59或⑶35的補體抑制劑功能的減少的結果，靶細胞變得對結合靶細胞表面上的抗原或以其它方式誘導細胞溶解的試劑敏感。結合靶細胞或以其它方式誘導細胞裂解的試劑可被認為是第二治療劑(能夠減少CRP的活性的經修飾多肽為第一治療劑)并且可以是本領域內已知的具有這類作用的任何試劑。在一些實施方案中，第二治療劑選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、 雜合抗體、抗體_藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。在其他實施方案中，第二治療劑選自細胞毒性劑、細胞抑制劑、化療劑、補體激活劑、CRP表達的調節劑、放射物、免疫調節劑、促細胞凋亡試劑、熱激蛋白質的抑制劑、蛋白酶抑制劑、去涎酸化試劑、MMP抑制劑和PKC抑制劑。在另一個實施方案中，第二治療劑為選自Lllb，IL4和TGFbl的CRP表達的調節劑；選自脫氧精胍菌素和geldanamyctanespimycinH-AAG的熱激蛋白抑制劑；蛋白酶抑制齊[J、去涎酸化試劑或MMP抑制劑；選自他莫昔芬、enzastaurin和UBN-Ol的PKC抑制劑；化療劑；或免疫調節劑。免疫調節劑的實例包括例如干擾素_ α、干擾素_、、GM-CSF, TLR激動劑、NOD受體激動劑、IL2、IL7、IL17、IL21、IL23、TNF、IMiD, RIG-I受體激動劑天然殺傷細胞配體/激活劑、NKG2P配體(例如MICa、MICb, RAEl和ULBP1)和天然抗體。天然細胞活化劑可以是抗CD137抗體。在一些實施方案中，所述試劑可以是凝集素或補體系統的可溶性成分例如C4b和C3b。如上文中所描述的，在一些實施方案中，誘導CDC的第二治療劑為抗體或其片段。所述抗體可選自表1中所列的抗體，或更具體地可以是利妥昔單抗、Arzerra、米羅他、 Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁。還可修飾(例如利用Fc修飾)抗體或抗體片段以進一步增強補體激活。誘導CDC的抗體或其片段能夠⑴結合細胞表面抗原例如癌癥標志，和(ii)募集補體。因此，本發明的方法所使用的抗體片段通常保留抗原結合結構域和負責與補體相互作用的區域，所述結構域和區域在本領域內是已知的。例如，已顯示對于CDC的誘導比較重要的抗體的區域包括Fc區域的特定部分，尤其是鉸鏈結構域(Dall' AcqUa，W.，等人，The Journal of Immunology 177 1129-1138 (2006))和 / 或 CH2 結構域(Idusogie, Ε· E.，等人，The Journal of Immunology 166:2571-2575(2001))。作為另外的實例，抗體工程研究已鑒定了 Fc區域的CH2結構域中的增強利妥昔單抗結合Clq和介導CDC的能力的殘基 (Wang, S. Y.，等人，Expert Opin. Biol. Ther. 8 :759_768 (2008))在一個實施方案中，靶細胞可與能結合所述細胞并且誘導補體依賴性細胞溶解的試劑例如抗體連續接觸，包括在將所述細胞與包含經修飾多肽的組合物接觸之前和之后。 在另一個實施方案中，可在一個同時的步驟中實施所述方法。在這一點上，可將包含經修飾多肽的組合物和結合靶細胞并且誘導補體依賴性細胞溶解的試劑(例如，抗體)基本上同時與靶細胞接觸。在另一個實施方案中，將靶細胞與試劑接觸，所述試劑在將靶細胞與包含經修飾多肽的組合物接觸(步驟a)后約10分鐘至72小時內結合靶細胞并且誘導補體依賴性細胞溶解(步驟b)。例如，可在實施步驟a后約15分鐘至48小時，優選在步驟a后約 15分鐘至12小時實施步驟b。在一個優選實施方案中，在步驟a后約8小時實施步驟b。細胞溶解可通過引入上文中描述的抗體依賴性補體途徑發生。在優選實施方案中，所述試劑是單克隆抗體(mAb)，例如表1的示例性抗體，已知其特異性結合靶細胞上的細胞表面標志，例如細胞的表面疾病標志。根據本文中提供的方法，由抗體依賴性補體信號轉導激活的腫瘤細胞溶解還可牽涉效應細胞的參與。除了起始細胞表面上MAC形成外，補體信號轉導級聯的誘導也產生在募集能夠誘導癌細胞的細胞介導細胞溶解的效應細胞中有用的趨化試劑。具體地，補體成分C3a和C5a的釋放導致將細胞例如NK細胞引入腫瘤的梯度。此外，沉積在腫瘤細胞表面上的iC3b分子激活效應細胞表面上的補體受體3 (CR3)， 并且在酵母細胞壁α -葡聚糖存在的情況下誘導CR3依賴性細胞毒性，從而提供激活抗腫瘤細胞的細胞毒性機制的潛在方法，所述細胞毒性機制對于酵母和真菌通常是保守的 (Adams, G. P.禾口 Weiner，L. Μ· ，Nature Biotechnology 23:1147—1157(2005))。根據本發明的該方面的方法，靶細胞的直接環境包含足以在誘導后引起細胞溶解的補體效應子系統的全部必需成分。如本文中所使用的術語"補體源"是指包含在誘導后引起細胞溶解和細胞死亡所必需的補體系統的一些或全部各成分的混合物。補體系統成分在本領域內是已知的，所述成分中的一些描述于本文中。此外，眾所周知，從脊椎動物例如人或其他哺乳動物收獲的血清是所有補體的成分的來源。在一些實施方案中，所述方法包括為靶細胞提供補體源，例如先前收獲的血清。可按照本領域內已知的方法例如通過注射或輸注補體成分來施用補體系統的成分。在其他實施方案中，可任選地將血漿與存在于組織培養基中的靶細胞接觸，如實施例3中所舉例說明的。在其他實施方案中，補體成分由所述細胞存在于其中的生物體提供。在其中由本方法的使用者給靶細胞提供補體源的實施方案中，基于具體情況，提供補體源的時間安排可以是可變的。在一些實施方案中，可在實施步驟b之前將靶細胞與補體源接觸。在其他實施方案中，可在實施步驟b的同時將靶細胞與補體源接觸。在其他實施方案方案中，可在實施步驟b之后將靶細胞與補體 源接觸。在優選實施方案中，可在步驟b實施的30分鐘內為靶細胞提供補體源。在一些實施方案中，所述方法使靶細胞對由特異性結合異常增殖細胞例如癌細胞的細胞表面標志的mAb誘導的CDC敏感。在本說明書中，術語癌細胞的使用是指展示失調或不受控制的細胞分裂并且在本領域內已被詳盡表征的細胞。癌細胞可以是存在于動物受試者的體內的細胞，或可選擇地，是人工培養物中的在適當培養條件下展示無限細胞分裂能力的轉化細胞。潛在的癌細胞類型包括癌(來源于上皮細胞)、肉瘤(來源于結締組織或間充質細胞)、淋巴瘤和白血病(來源于造血細胞)、母細胞瘤(其來源于未成熟細胞或胚胎細胞)或胚細胞癌。在其他實施方案中，所述靶細胞是癌癥的體外模型， 其對于本領域技術人員來說顯然是已知的。非限定性實例包括Raji-Burkitt' s淋巴 ^MMM (Lapalombella, R. A, “ A Novel Raji-Burkitt' s Lymphoma Model for Preclinical and Mechanistic Evaluation of CD52-Targeted Immunotherapeutic Agents, “ Clinical Cancer Research 14 :569_578 (2008))、BJAB 細胞(EBV-陰性 Burkitt' s淋巴瘤)、Farage細胞(非何杰金氏B細胞淋巴瘤)、Mino細胞(套細胞淋巴瘤)、Jurkat 細胞、562、HeLa (宮頸)、A549 (肺)、SK0V3 (卵巢)、HT29 (結腸)、MDA265MB (乳腺)。增強抗癌mAb在哺乳動物受試者中的抗腫瘤效應的方法FDA批準的用于惡性血液病的mAb中包括利妥昔單抗(也稱為美羅華和利妥昔單抗)，其目前用于治療B細胞非何杰金淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、毛細胞白血病和慢性淋巴細胞白血病。利妥昔單抗是抗⑶20的人源化未綴合IgGlmAb。⑶20在正常B淋巴細胞和B細胞淋巴瘤的表面上表達，但不在造血干細胞、祖B細胞和漿細胞上表達。體外和體內研究已顯示利妥昔單抗可有效地在B細胞淋巴瘤細胞上誘導⑶C (Di Gaetano, N.，等人，J. Immunol 171 1581-1587(2003) ；Golay, J.，等人，Haematologica 91 :176_183 (2006) ；Reff, Μ. E.， 等人，Blood 83 435-445(1994) ；Bellosillo, B.，等人，Blood 98 :2771_2777 (2001)；以及，van der Kolk, L. Ε.，等人，British Journal of Haematology 115 :807_811 (2001))。 利妥昔單抗通過CD20與淋巴瘤細胞的結合導致經典補體途徑的激活，從而最終導致 MAC 的形成(Di Gaetano，N.，等人，J. Immunol 171 1581-1587 (2003)) 對于奧法木單 ^L (ofatumumab, iii 禾爾力 HuMax CD20 ；Arzerra) ( CD20mAb) (Castillo, J. ， Winer, Ε.， &Quesenberry，P.，Experimental Hematology 36 :755_768 (2008))、用于治療慢性淋巴細胞白血病的阿倉珠單抗(抗 CD52mAb) (Zent, C. S.，等人，Leukemia Research (2008))、 用于治療急性髓樣白血病(AML)的吉姆單抗(抗CD 33mAb) (Castillo, J.，Winer, Ε.， &Quesenberry，P. ,Experimental Hematology 36:755—768(2008))已報導了 CDC在月中瘤細胞殺傷中的相似作用。還可施用利妥昔單抗以治療自身免疫性疾病，例如包括但不限于自身免疫性溶血性貧血、類風濕關節炎和自身免疫性神經學障礙(德維克病、重癥肌無力、自身免疫性神經病(autoimmune neuropathies)禾口炎性肌病)。在另一個方面，本發明提供了增強抗癌單克隆抗體在有此需要的哺乳動物受試者中的抗腫瘤效應的方法。根據本發明的該方面的方法包括(a)給所述哺乳動物受試者施用一定量的包含多種有效地減少靶腫瘤細胞表面上存在的⑶46，⑶55，⑶59或⑶35的量的經修飾多肽的組合物至少一次；和(b)給所述受試者施用治療有效量的抗癌抗體至少一次， 其中所述抗癌抗體結合靶腫瘤細胞上表達的非⑶46，⑶55，⑶59或⑶35細胞表面抗原。如本文中所描述的，包含多種經修飾多肽的試劑使靶細胞對由特異性結合靶細胞 (例如存在于哺乳動物受試者例如人的體內的癌細胞)的細胞表面標志的HiAb誘導的CDC 敏感。潛在的癌癥類型包括癌(來源于上皮細胞)、肉瘤(來源于結締組織或間充質細胞)、 淋巴瘤和白血病(來源于造血細胞)、母細胞瘤(其來源于未成熟細胞或胚胎細胞)或胚細胞癌。

在一些實施方案中，所述mAb特異性結合惡性血液病例如白血病(包括但不限于急性淋巴母細胞性白血病(ALL)、慢性淋巴細胞白血病(CLL)、急性髓細胞性白血病(AML)、 慢性粒細胞白血病(CML)和毛細胞白血病)的細胞表面標志。CLL亞型包括前體B急性淋巴細胞白血病(precursor B acute lymphoblastic leukemia)、前體T急性淋巴細胞白血病(precursor T acute lymphoblastic leukemia)、Burkitt‘ s 白血病禾口急性雙表型白血病。CLL亞型包括B細胞幼淋巴細胞白血病。AML亞型包括急性早幼粒細胞白血病、急性粒細胞白血病、急性粒-單核細胞白血病和急性巨核母細胞白血病。CML亞型包括慢性單核細胞白血病。其他惡性血液病除了非何杰金淋巴瘤以外還包括多發性骨髓瘤、沃爾登斯特倫巨球蛋白血癥、何杰金氏淋巴瘤，包括套細胞淋巴瘤、大細胞淋巴瘤、濾泡淋巴瘤、T細胞淋巴瘤、NK/T淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、粘膜相關性淋巴樣組織(mucosa-associated lymphoid tissue) (MALT)淋巴瘤和套細胞淋巴瘤。在一些實施方案中，所述mAb特異性結合實體瘤例如乳腺癌，肺癌，結直腸癌，胃癌，前列腺癌，卵巢癌，子宮癌，宮頸癌，腎癌，胰腺癌，肝癌，腦癌，頭頸癌，鼻咽癌和食管癌的細胞表面標志。在一些實施方案中，所述HiAb特異性結合肉瘤例如平滑肌肉瘤，纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤和尤因肉瘤的細胞表面標志。在一些實施方案中，所述mAb特異性結合血液腫瘤例如白血病、淋巴瘤或骨髓瘤的細胞表面標志。癌細胞與它們所源自的細胞相比較而言通常高度異常。通常地，癌細胞展示許多對于所述細胞類型、細胞的環境是不適當的或在生物體發育的其他階段中正常存在的罕見細胞表面抗原。可選擇地，細胞表面蛋白表達的水平在癌細胞中可能發生了改變。因此， 存在可獨特地鑒定來自正常細胞的癌細胞的不同細胞表面標志。按照提供的方法，細胞疾病的標志包括癌細胞的標志。癌細胞標志可包括病毒相關蛋白、以增加的水平在癌細胞上表達的已改變自身腫瘤抗原、只在癌細胞上表達的腫瘤特異性抗原(包括自身分子的突變形式)。在優選實施方案中，所述標志的表達水平在癌細胞中高于在正常細胞中，并且更優選，所述標記幾乎只在癌細胞中表達。癌癥靶細胞的有用的細胞表面標志的非限定性實例包括CD3、CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD35、CD37、CD38、CD40、CD44、 CD52、CD70、CD80、CD133、CD200、表皮生長因子受體1 (EGFR)、表皮生長因子受體2 (Her2/ neu)、人乳脂肪球蛋白l(humanmilk fat globule 1，HMFG1)、白細胞介素2受體(IL2R)、粘蛋白1和血管內皮生長因 子。單克隆抗體已作為有前景的抗癌治療劑的種類出現。歸功于它們特異性結合癌細胞特征性的標志的能力，HiAb使得能夠將患者自己的免疫系統靶向癌細胞的破壞。在本文中提供的方法中有用的單克隆抗體通常被修飾以包含人Fc結構域，從而減少抗體的免疫原性和增強募集人免疫效應子系統的能力。預期當此類方法用于非人受試者時，可修飾抗體的Fc結構域以匹配受試者。可將人抗體的不同同種型用作抗癌治療性mAb的骨架。通常，IgM是用于補體激活的最有效同種型，然而其尚未被廣泛用于臨床腫瘤學中， 因為其不容易從血管結構外滲(Adams，G. P.和Weiner，L. M.，“ Monoclonal Antibody Therapy of Cancer, “ Nature Biotechnology 23:1147-1157(2005))。因此，IgM 同種型的適用范圍可能更加局限于惡性血液病。IgGl和IgG3同種型在導向⑶C上都非常有效。 有用的抗癌mAb抗體的非限定性實例列于表1中，并且進一步描述于Campoli，Μ.，等人， Principles&Practice of Oncology 23(1&2) 1-19 (2009)(通過引用并入本文)中。表1 用于癌癥治療的腫瘤_抗原特異性mAb
權利要求
1.包含能夠減少靶細胞表面上補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度的經修飾多肽的組合物，其中所述多肽包含非天然存在的氨基酸序列。
2.權利要求1的組合物，其中所述多肽引起CRP的內化或隔離。
3.權利要求1的組合物，其中所述多肽結合CRP。
4.權利要求3的組合物，其中所述多肽以InM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。
5.權利要求4的組合物，其中所述多肽以0.65nM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。
6.權利要求1的組合物，其中所述多肽是分離的病毒蛋白質。
7.權利要求6的組合物，其中所述多肽來源于腺病毒纖維鈕蛋白。
8.權利要求7的組合物，其中所述多肽來源于Ad35纖維鈕蛋白。
9.權利要求7的組合物，其中所述多肽來源于在選自Asp207、Thr245,Ile256和其組合中的殘基處包含至少一個氨基酸置換的Ad35纖維鈕蛋白。
10.權利要求9的組合物，其中所述氨基酸置換為Asp207Gly、Thr245Ala,Ile256Leu 或其組合。
11.權利要求1的組合物，其中所述多肽小于25，000道爾頓。
12.權利要求1的組合物，其中所述組合物包含所述多肽的二聚體形式。
13.權利要求1的組合物，其中所述組合物包含所述多肽的三聚體形式。
14.權利要求13的組合物，其中所述組合物包含所述多肽的同源三聚體形式。
15.權利要求1的組合物，其中所述CRP為跨膜蛋白。
16.權利要求1的組合物，其中所述CRP為GPI連接蛋白。
17.權利要求1的組合物，其中CRP為⑶46、⑶55、CD59或⑶35。
18.權利要求17的組合物，其中所述CRP為⑶46。
19.權利要求18的組合物，其中所述多肽結合⑶46。
20.權利要求1的組合物，其中所述組合物還能夠使靶細胞對抗體介導的補體依賴性細胞溶解敏感。
21.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞為腫瘤細胞。
22.權利要求21的組合物，其中所述腫瘤細胞選自獲自癌的細胞、獲自肉瘤的細胞、獲自母細胞瘤的細胞、獲自胚細胞癌的細胞和獲自血液腫瘤的細胞。
23.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞選自原發性淋巴瘤細胞、Raji-Burkitt's 淋巴瘤細胞、BJAB細胞、Farage細胞、BT474細胞、HT18M細胞、LoVo細胞、Η ^9細胞、Mino 細胞、Jurkat細胞、Κ562細胞、HeLa細胞、Α549細胞、SK0V3細胞、Η ^9細胞和MDA235MB細胞。
24.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞包含實體瘤的細胞表面標志。
25.權利要求對的組合物，其中所述實體瘤是乳腺、肺、結腸直腸系統、胃、前列腺、卵巢、子宮、宮頸、腎、胰腺、肝、腦、頭和頸、鼻咽系統或食管的腫瘤。
26.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞包含肉瘤的細胞表面標志。
27.權利要求沈的組合物，其中所述肉瘤是平滑肌肉瘤、纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤或尤因肉瘤。
28.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞包含血液腫瘤的細胞表面標志。
29.權利要求觀的組合物，其中所述血液腫瘤是白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。
30.權利要求1的組合物，其中所述靶細胞為B細胞。
31.權利要求30的組合物，其中所述靶細胞為正常B細胞。
32.權利要求30的組合物，其中所述靶細胞為惡性B細胞。
33.權利要求1的組合物，其中靶細胞表達選自下述的一個或多個細胞標志CD3、 CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD25、CD30、CD33、CD35、CD37、CD38、CD40、CD44、CD52、CD70、 CD80、CD133、CD200、表皮生長因子受體1 (EGFR)、表皮生長因子受體2 (Her2/neu)、人乳脂肪球蛋白(HMFGl)、白細胞介素2受體(IL2R)、粘蛋白1和血管內皮生長因子。
34.權利要求33的組合物，其中所述靶細胞表達⑶20。
35.權利要求1的組合物，其中所述多肽還能夠增強靶細胞表面上的補體激活。
36.權利要求1的組合物，其中所述多肽還能夠增加靶細胞表面上膜攻擊復合物(MAC) 的裝配。
37.權利要求1的組合物，其中當與基線或未修飾的多肽相比較時，所述多肽能夠減少補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度至少25%。
38.權利要求1的組合物，其中所述多肽能夠減少補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度至少24小時。
39.權利要求1的組合物，其中所述多肽在約25ng/ml或更低的濃度具有活性。
40.權利要求1的組合物，其中所述多肽不是抗體或抗體片段。
41.權利要求1的組合物，其中所述多肽不是生長因子或細胞因子。
42.權利要求1的組合物，其中所述多肽不結合基因的轉錄調控區。
43.權利要求42的組合物，其中所述多肽不結合基因的啟動子區域、增強子區域、沉默子區域或絕緣子區域。
44.權利要求1的組合物，其中所述多肽不結合轉錄因子。
45.權利要求1的組合物，其中所述多肽在長度上為至少120個氨基酸。
46.權利要求1的組合物，其中所述多肽包含天然存在的蛋白質或蛋白質結構域的至少一個突變。
47.權利要求46的組合物，其中所述多肽與天然存在的蛋白質或蛋白質結構域有至少 90%的氨基酸序列同源性。
48.權利要求1的組合物，其中所述多肽不是天然存在的蛋白質或蛋白質片段。
49.權利要求1的組合物，其中所述多肽被進一步修飾以減少免疫原性。
50.權利要求49的組合物，其中所述多肽的免疫原性通過將所述多肽偶聯至烷基-PEG，通過表位去免疫化作用，通過共施用免疫抑制劑，通過加入耐受方案，通過糖基化所述多肽或通過共施用增強補體激活的試劑來進行減弱。
51.權利要求1的組合物，其中所述組合物包括經修飾的病毒。
52.權利要求1的組合物，其中所述組合物包括經修飾CRP-相互作用微生物。
53.權利要求52的組合物，其中所述生物為奈瑟球菌屬或鏈球菌菌株。
54.權利要求51的組合物，其中所述病毒能夠與CRP相互作用。
55.權利要求M的組合物，其中所述病毒選自腺病毒、腺伴隨病毒、逆轉錄病毒、皰疹病毒、麻疹病毒(Edmonston株)、人皰疹病毒6、牛病毒性腹瀉病毒和人柯薩奇病毒。
56.權利要求1的組合物，其中所述組合物不包括腺病毒。
57.權利要求55的組合物，其中所述組合物不包括腺病毒。
58.權利要求55的組合物，其中所述病毒為選自Adll、Adl6、Ad21、Ad34、Ad35和Ad50 中的腺病毒血清型。
59.權利要求58的組合物，其中所述腺病毒為Ad35。
60.權利要求59的組合物，其中所述Ad35腺病毒包含突變型纖維鈕蛋白。
61.具有第一結構域和第二結構域的分離的多肽，其中所述第一和第二結構域結合 CRP，其中所述第一結構域包含 SEQ ID NO :15、SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :17、SEQ ID NO 18、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :20、SEQ ID NO :21、SEQ ID NO :22、SEQ ID NO :23、SEQ ID NO :24、SEQ ID NO :25、SEQ ID NO :26、SEQ ID NO :27、SEQ ID NO :28、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO 30或SEQ ID NO 31所示的氨基酸序列，其中\不是天冬氨酸，X2不是蘇氨酸或1、 不是異亮氨酸。
62.權利要求61的多肽，其中&為甘氨酸。
63.權利要求61的多肽，其中&為谷氨酸。
64.權利要求61的多肽，其中&為丙氨酸。
65.權利要求61的多肽，其中)(2為任意非極性氨基酸。
66.權利要求61的多肽，其中&為亮氨酸。
67.權利要求61的多肽，其中)(3為任意非極性氨基酸。
68.權利要求61的多肽，其中所述第一結構域包含SEQID NO 19中所示的氨基酸序列，其中X1F是天冬氨酸；SEQ ID NO :26，其中)(2不為蘇氨酸；或SEQ ID N0:31，其中)(3不為異亮氨酸。
69.權利要求61的多肽，其中所述第二結構域包含SEQID NO 19中所示的氨基酸序列，其中X1F是天冬氨酸；SEQ ID NO :26，其中)(2不是蘇氨酸；或SEQ ID N0:31，其中)(3不是異亮氨酸。
70.權利要求61的多肽，其中所述第一和第二結構域結合相同的CRP。
71.權利要求61的多肽，其中所述第一和第二結構域結合不同的CRP。
72.權利要求61的多肽，其中所述CRP為⑶35、⑶46、CD55或⑶59.
73.權利要求61的多肽，其中所述CRP為⑶46.
74.權利要求61的多肽，其中所述多肽二聚化。
75.權利要求61的多肽，其中所述多肽三聚化。
76.權利要求75的多肽，其中所述多肽同源三聚化。
77.權利要求61的多肽，其中所述多肽還包含三聚化結構域。
78.權利要求77的多肽，其中所述三聚化結構域來源于病毒蛋白質。
79.權利要求78的多肽，其中所述三聚化結構域為細菌噬菌體T4彈力素結構域或呼腸孤病毒纖維蛋白ο 1結構域。
80.權利要求77的多肽，其中所述三聚化結構域包含SEQID NO :32中所示的氨基酸序列。
81.包含權利要求53-80所述多肽中任一種的多肽復合物。
82.權利要求81的多肽復合物，其中所述復合物包含2個或更多個權利要求61-80中所述多肽。
83.權利要求80的多肽復合物，其中所述復合物結合2個或更多個CRP分子。
84.權利要求83的多肽復合物，其中所述CRP為⑶35、⑶46、⑶55或⑶59。
85.權利要求84的多肽復合物，其中所述CRP為⑶46。
86.權利要求76的多肽，其中所述多肽自發地同源三聚化。
87.權利要求86的多肽，其中所述同源三聚體具有三維結構，并且同源三聚體的每一多肽包含2個環，其中每一個環結合CRP。
88.權利要求87的多肽，其中環之間的氨基酸序列是可置換的并且基本上不改變對 CRP的結合。
89.權利要求61的多肽，其中所述多肽引起CRP至細胞內的內化或隔離。
90.權利要求61的多肽，其中所述多肽以約InM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。
91.權利要求61的多肽，其中所述多肽以0.65nM或更小的解離常數(Kd)結合CRP。
92.權利要求61的多肽，其中所述多肽不是抗體或抗體片段。
93.權利要求61的多肽，其中所述多肽是分離的、經修飾的病毒蛋白。
94.權利要求93的多肽，其中所述多肽衍生自腺病毒纖維鈕蛋白。
95.權利要求94的多肽，其中所述多肽衍生自選自Adll、Adl6、Ad21、Ad34、Ad35和 Ad50之中的腺病毒的纖維鈕結構域。
96.權利要求95的多肽，其中所述多肽衍生自在選自Asp207、Thr245,Ile256和其組合之中的殘基處包含至少一個氨基酸置換的Ad35纖維鈕結構域。
97.權利要求96的多肽，其中所述氨基酸置換為Asp207Gly、Thrf45Ala、Ile256Leu或其組合。
98.權利要求61的多肽，其中所述多肽小于25，000道爾頓。
99.包含治療有效量的權利要求1至98中任一項所述多肽的藥物組合物。
100.權利要求99的藥物組合物，其中還包含第二治療劑。
101.權利要求100的藥物組合物，其中所述第二治療劑選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。
102.權利要求100的藥物組合物，其中所述第二治療劑選自細胞毒性劑、細胞抑制劑、 化療劑、補體激活劑、CRP表達的調節劑、放射物、免疫調節劑、促細胞凋亡試劑、熱激蛋白質的抑制劑、蛋白酶抑制劑、去涎酸化試劑、MMP抑制劑和PKC抑制劑。
103.權利要求101的藥物組合物，其中第二治療劑為抗體。
104.權利要求103的藥物組合物，其中所述抗體選自表1中所列的那些抗體。
105.權利要求104的藥物組合物，其中所述抗體選自利妥昔單抗、Arzerra、愛必妥、米羅他、Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁。
106.權利要求101的藥物組合物，其中所述抗體或抗體片段被修飾以進一步增強補體激活。
107.權利要求106的藥物組合物，其中所述修飾為Fc修飾。
108.權利要求102的藥物組合物，其中所述第二治療劑為選自Lllb、IL4和TGFbl之中的CRP表達調節劑。
109.權利要求102的藥物組合物，其中所述第二治療劑為選自脫氧精胍菌素和 geldanamyctanespimycin 17-AAG 的熱激蛋白的抑制劑。
110.權利要求102的藥物組合物，其中所述第二治療劑為蛋白酶抑制劑、脫唾液酸化試劑或MMP抑制劑。
111.權利要求102的藥物組合物，其中所述第二治療劑為選自他莫昔芬、enzastaurin 和UBN-Ol的PKC抑制劑。
112.權利要求102的組合物，其中所述第二治療劑為化學治療劑。
113.權利要求102的藥物組合物，其中第二治療劑為免疫調節劑。
114.權利要求113的藥物組合物，其中所述調節劑選自干擾素-α，干擾素-Υ， GM-CSF、TLR 激動劑、NOD 受體激動劑，IL2、IL7、IL17、IL21、IL23、TNF、IMiD, RIG-I 受體激動劑、天然殺傷細胞配體、天然殺傷細胞活化劑、NKG2P配體和天然抗體。
115.權利要求114的藥物組合物，其中所述天然殺傷細胞活化劑為抗CD137抗體。
116.權利要求114的藥物組合物，其中所述NKG2P配體選自MICa、MICb、RAE1和ULBP1。
117.包括將在其表面上表達CRP的靶細胞與權利要求1至98中任一項所述多肽接觸的方法。
118.權利要求117的方法，其中將所述多肽與靶細胞直接接觸。
119.權利要求117的方法，其中所述多肽不是病毒載體的部分。
120.權利要求117的方法，其中所述接觸增加了靶細胞對利用抗體進行的治療的易感性。
121.權利要求117的方法，其中所述接觸增強抗體介導的補體依賴性細胞溶解。
122.權利要求120的方法，其中所述抗體為單克隆抗體。
123.權利要求120的方法，其中所述抗體選自表1中所列的抗體。
124.權利要求120的方法，其中所述抗體選自利妥昔單抗、Arzerra、愛必妥、米羅他、 Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁。
125.權利要求117的方法，其中所述接觸是體外接觸。
126.權利要求117的方法，其中所述接觸是體內接觸。
127.權利要求117的方法，其中所述接觸是離體接觸。
128.權利要求117的方法，其中所述CRP為⑶46、⑶55、⑶59或⑶35。
129.權利要求117的方法，其中所述CRP為⑶46。
130.權利要求117的方法，其還包括將靶細胞與第二治療劑接觸。
131.權利要求117的方法，其中所述靶細胞為腫瘤細胞。
132.權利要求131的方法，其中所述腫瘤細胞選自獲自癌的細胞、獲自肉瘤的細胞、獲自母細胞瘤的細胞、獲自胚細胞癌的細胞和獲自血液腫瘤的細胞。
133.權利要求130的方法，其中與第二治療劑的接觸在與權利要求1至98中任一項所述多肽接觸的同時、之前或之后發生。
134.權利要求130的方法，其中第二治療劑選自細胞毒性劑、細胞抑制劑、化療劑、補體激活劑、放射物、免疫調節劑、促細胞凋亡試劑、蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。
135.權利要求134的方法，其中所述第二治療劑為抗體。
136.權利要求135的方法，其中所述抗體選自表1中所列的抗體。
137.權利要求136的方法，其中所述抗體選自利妥昔單抗、Arzerra、愛必妥、米羅他、Campath、赫賽汀和阿瓦斯丁。
138.權利要求137的方法，其中所述抗體或抗體片段被修飾以進一步增強補體激活。
139.權利要求138的方法，其中所述修飾為Fc修飾。
140.權利要求130的方法，其中所述第二治療劑是化療劑。
141.權利要求130的方法，其中第二治療劑是免疫調節劑。
142.權利要求141的方法，其中所述免疫調節劑選自干擾素-α、干擾素-Y、GM_CSF、 TLR 激動劑、NOD 受體激動劑、IL2、IL7、IL17、IL21、IL23、TNF、IMiD, RIG-I 受體激動劑、天然殺傷細胞配體、天然殺傷細胞活化劑和天然抗體。
143.權利要求117的方法，其中細胞表面上CRP的活性、量或密度在減少至少25%。
144.治療需要針對牽涉免疫系統的病癥進行治療的受試者的方法，所述方法包括給受試者施用權利要求99-116所述的任一種藥物組合物。
145.權利要求144的方法，其中所述病癥與天然殺傷細胞、T細胞或B細胞的失調相關。
146.權利要求144的方法，其中所述病癥為癌癥、自身免疫病癥、傳染病或移植后病癥。
147.權利要求144的方法，其中所述病癥選自癌、肉瘤、淋巴瘤、白血病、母細胞瘤或胚細胞癌。
148.包含有效地連接至調控序列的編碼多肽的核酸的載體，其中所述編碼的多肽能夠減少靶細胞表面上CRP的活性、量或密度，其中所述編碼的多肽包含非天然存在的氨基酸序列。
149.權利要求148的載體，其中所述編碼的多肽包含天然存在的蛋白質或蛋白質結構域的至少一個突變。
150.權利要求148的載體，其中所述編碼的多肽與天然存在的蛋白質或蛋白質結構域有至少90%的氨基酸序列同源性。
151.權利要求148的載體，其中所述編碼的多肽不是天然存在的蛋白質或蛋白質片段。
152.權利要求148的載體，其中所述編碼的多肽不是抗體、抗體片段、生長因子、細胞因子或轉錄調控區。
153.權利要求148的載體，其中所述編碼的多肽在長度上為至少120個氨基酸。
154.權利要求148的載體，其中所述CRP為⑶46、⑶55、CD59或⑶35。
155.遞送包含編碼能夠減少靶細胞表面上CRP活性之多肽的核酸的載體的方法，包括將靶細胞與權利要求148-154的載體接觸。
156.用于篩選能夠改變CRP活性的分子的方法，所述方法包括(a)產生候選分子的文庫；(b)選擇能夠結合CRP的候選分子；和(c)確定所述分子是否改變CRP的活性。
157.權利要求156的方法，其中所述CRP為⑶46、⑶55、⑶59或⑶35。
158.權利要求156的方法，其中所述CRP為⑶46。
159.權利要求156的方法，其中所述分子以InM或更小的結合親和力結合CRP。
160.權利要求156的方法，其中所述分子選自蛋白質、多肽、小分子、藥物、抗體、抗體片段、雜合抗體、抗體-藥物綴合物、siRNA、反義RNA、miRNA、病毒和適體。
161.權利要求156的方法，其中所述分子為小分子。
162.權利要求156的方法，其中所述分子為多肽。
163.權利要求156的方法，其中所述分子通過CRP至細胞內的內化或隔離來改變CRP 的活性。
164.權利要求156的方法，其中所述分子通過減少細胞表面上CRP的量或密度來改變 CRP的活性。
165.包含SEQID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的經修飾纖維鈕結構域多肽，其中所述多肽包含選自Asp207Gly，Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合⑶46的同源三聚體。
166.權利要求165的多肽，其包含Asp207Gly。
167.權利要求165的多肽，其包含Thr245Ala。
168.權利要求165的多肽，其包含Asp207Gly和Thr245Ala。
169.權利要求165的多肽，其中所述多肽包含SEQID NO :3所示氨基酸序列的至少40個連續氨基酸。
170.權利要求165的多肽，其中所述多肽還包含SEQID NO :6、SEQ ID NO :7、SEQ ID NO 8或SEQ ID NO 9中的至少一個。
171.權利要求165的多肽，其中所述多肽包含與SEQID NO :3所示氨基酸序列有至少 80%同一性的⑶46結合結構域。
172.權利要求168的多肽，其包含SEQID NO :5。
173.權利要求165的多肽，其中3個多肽形成同源三聚體，所述同源三聚體與通過3個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言以至少約1.5倍的親和力結合 CD46。
174.權利要求165的多肽，其中將從所述多肽形成的同源三聚體與包含CD46的細胞表面接觸導致細胞表面上CD46水平的量減少。
175.包含編碼經修飾纖維鈕結構域多肽的核苷酸序列的核酸分子，所述纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少40個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自 Asp207Gly、Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合CD46的同源三聚體。
176.權利要求175的核酸分子，其中所述核苷酸序列編碼SEQID NO :5所示的氨基酸序列。
177.權利要求176的核酸分子，其中所述核苷酸序列包含SEQID NO :4。
178.包含有效地連接至表達控制序列的權利要求175所述核酸的表達載體。
179.用權利要求178的載體轉染的培養細胞或其后代，其中所述細胞能夠表達所述多肽。
180.降低⑶46的細胞表面水平的組合物，其包含(a) 一定量的有效地降低CD46的細胞表面水平的試劑，所述試劑包含多種經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成與從多個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言對于⑶46結合的親和力增強的同源三聚體；和(b)藥學上可接受的載體。
181.權利要求180的組合物，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQ ID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合。
182.權利要求180的組合物，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含 Asp207Gly 和 Thr245Ala。
183.權利要求182的組合物，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQID NO :5。
184.權利要求181的組合物，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含與其連接的至少一個聚乙二醇聚合物。
185.權利要求181的組合物，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含減少所述多肽在哺乳動物受試者中的免疫原性的氨基酸插入、缺失或置換中的至少一個或其組I=I O
186.權利要求181的組合物，其還包含至少一種誘導補體依賴性細胞溶解的試劑。
187.用于減少靶細胞表面上⑶46的量的方法，所述方法包括將在其表面上表達CD46的靶細胞與一定量的包含多個經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的試劑接觸，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成與從多個由SEQ ID NO 3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言對于CD46結合的親和力增強的同源三聚體。
188.權利要求187的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQID NO :3所示的氨基酸序列的至少12個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合。
189.權利要求188的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含 Asp207Gly 和 Thr245Ala。
190.權利要求188的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽與SEQID NO 3具有至少80%的同一性。
191.權利要求189的方法，其中所述經修飾的多肽包含SEQID NO :5。
192.權利要求187的方法，其中所述試劑使接觸的表達CD46的細胞對由抗體誘導的細胞溶解敏感，所述抗體結合在所述接觸的細胞上表達的非CD46細胞表面標志并且誘導補體依賴性細胞溶解。
193.權利要求187的方法，其中所述試劑降低所述接觸的表達CD46的細胞對特異性結合CD46的病原體引起的感染的易感性。
194.權利要求193的方法，其中所述特異性結合CD46的病原體選自腺病毒、皰疹病毒、 麻疹病毒、瘟病毒、釀膿鏈球菌和奈瑟球菌。
195.用于在其表面上表達⑶46的靶細胞中誘導細胞溶解的方法，其包括(a)將在其表面上表達⑶46的靶細胞與一定量的包含多種有效地減少靶細胞表面上存在的CD46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽的試劑接觸；和(b)將按照步驟(a)處理的靶細胞與結合靶細胞表面上的抗原并且誘導細胞溶解的抗體或其片段接觸。
196.權利要求195的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成同源三聚體，所述三聚體與從多個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言對于CD46結合的親和力有所增強。
197.權利要求195的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQID NO 3所示的氨基酸序列的至少12個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thrf45Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合。
198.權利要求197的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含 Asp207Gly 和 Thr245Ala。
199.權利要求197的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽與SEQID NO 3具有至少80%的同一性。
200.權利要求195的方法，其中所述經修飾的多肽包含SEQID NO :5。
201.權利要求195的方法，其中所述靶細胞為B細胞。
202.權利要求195的方法，其中所述靶細胞為腫瘤細胞。
203.權利要求202的方法，其中所述腫瘤細胞選自癌、肉瘤、母細胞瘤、胚細胞癌和血液腫瘤細胞。
204.權利要求203的方法，其中所述抗體或其片段結合腫瘤細胞上的細胞表面抗原， 其選自CD20、CD52、CD33、CD22、CD23、CD3、CD80、CD30、CD33、CD25、白細胞介素 2 受體 (IL2R)、人乳脂肪球蛋白1 (HMFGl)、粘蛋白1、表皮生長因子受體2 (Her2/neu)和HLA-DR。
205.權利要求195的方法，其中在步驟(a)約48小時內實施步驟(b)。
206.權利要求195的方法，其還包括對按照步驟(b)處理的靶細胞提供補體源。
207.增強抗癌單克隆抗體在有此需要的哺乳動物受試者中的抗腫瘤效應的方法，所述方法包括(a)給哺乳動物受試者施用一定量的藥劑至少一次，所述藥劑包含多種有效地減少靶腫瘤細胞表面上存在的CD46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽；和(b)給所述受試者施用治療有效量的抗癌抗體至少一次，其中所述抗癌抗體結合在靶腫瘤細胞上表達的非CD46細胞表面抗原。
208.權利要求207的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成同源三聚體，所述同源三聚體與從多個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比較而言具有增強的對于CD46結合的親和力。
209.權利要求207的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQID NO 3所示的氨基酸序列的至少12個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thrf45Ala和Ile256Leu的至少一個氨基酸置換或其組合。
210.權利要求207的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含 Asp207Gly 和 Thr245Ala。
211.權利要求207的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽與SEQID NO 3具有至少80%的同一性。
212.權利要求207的方法，其中所述經修飾的多肽包含SEQID NO :5。
213.權利要求207的方法，其中所述腫瘤細胞選自獲自癌的細胞、獲自肉瘤的細胞、獲自母細胞瘤的細胞、獲自胚細胞癌的細胞和獲自血液腫瘤的細胞。
214.權利要求207的方法，其中所述抗體或其片段結合腫瘤細胞上的細胞表面抗原， 其選自 CD20、CD52、CD33、CD22、CD23、CD3、CD80、CD30、CD33、CD25、白細胞介素 2 受體 (IL2R)、人乳脂肪球蛋白1 (HMFGl)、粘蛋白1、表皮生長因子受體2 (Her2/neu)和HLA-DR。
215.權利要求207的方法，其中在步驟(a)約48小時內實施步驟(b)。
216.權利要求214的方法，其中所述抗體或其片段結合CD20。
217.權利要求216的方法，其中所述抗體為利妥昔單抗。
218.—種試劑盒，其包含(a)包含SEQID NO :3所示氨基酸序列的至少12個連續氨基酸的經修飾纖維鈕結構域多肽，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合，并且其中所述多肽可形成能夠結合⑶46的同源三聚體；和(b)結合哺乳動物細胞表面上的抗原并且誘導細胞溶解的抗體或其片段。
219.增強抗體治療劑在治療哺乳動物受試者的自身免疫性疾病中的效應的方法，所述方法包括(a)給所述哺乳動物受試者施用一定量的藥劑至少一次，所述藥劑包含多種有效地減少靶細胞表面上CD46的量的經修飾腺病毒纖維鈕結構域多肽；和(b)給所述受試者施用治療有效量的抗體治療劑至少一次，其中所述抗體治療劑結合在靶細胞上表達的非CD46細胞表面抗原。
220.權利要求219的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽能夠形成同源三聚體，所述同源三聚體與從多個由SEQ ID NO :3組成的多肽形成的同源三聚體相比而言具有增強的對于CD46結合的親和力。
221.權利要求219的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含SEQID NO 3所示的氨基酸序列的至少12個連續氨基酸，其中所述多肽包含選自Asp207Gly、 Thrf45Ala和Ile256Leu中的至少一個氨基酸置換或其組合。
222.權利要求219的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽包含 Asp207Gly 和 Thr245Ala。
223.權利要求219的方法，其中所述經修飾的腺病毒纖維鈕結構域多肽與SEQID NO 3具有至少80%的同一性。
224.權利要求219的方法，其中所述經修飾的多肽包含SEQID NO :5。
225.權利要求219的方法，其中所述靶細胞為T細胞。
226.權利要求219的方法，其中所述靶細胞為B細胞。
227.權利要求219的方法，其中所述抗體治療劑結合選自⑶20、⑶25和⑶4的細胞表面抗原。
228.權利要求219的方法，其中所述自身免疫性疾病選自類風濕關節炎、糖尿病、甲狀腺的病癥、多發性硬化、移植器官的抗體介導的排斥、特發性膜性腎病、銀屑病、免疫異常性神經病(即，慢性炎癥性脫髓鞘性多發性神經病，多肌炎，皮肌炎，多病灶運動神經病或單克隆丙種球蛋白病)，重癥肌無力，無菌硬腦脊膜炎、炎性腸病和自體免疫溶血性疾病 (AIHA)。
全文摘要
本發明涉及能夠減少靶細胞上補體調節蛋白(CRP)的活性、量或密度的試劑。本發明還提供了此類試劑的鑒定方法、制備方法和用途。
文檔編號C07K14/725GK102448982SQ201080022959
公開日2012年5月9日 申請日期2010年3月31日 優先權日2009年3月31日
發明者A·利伯, D·卡特, R·J·貝倫森, 汪宏杰 申請人:華盛頓大學, 贊譽公司