專利名稱：抗-bcma抗體的制作方法
抗-BCMA抗體本申請含有已經通過EFS-Web提交的序列表，其通過引用的方式全部并入。創建于2010年3月10日的ASCII副本命名為08201010. txt,并且大小為70，657個字節。本發明涉及結合B細胞表面抗原BCMA的抗體。本發明還涉及使用這種抗體來檢測、減少和操控各種B細胞亞型。B細胞是淋巴細胞，其在自適應體液免疫和特異性識別抗原的抗體的產生中發揮重要的作用。B細胞的三種亞類是幼稚B細胞、記憶B細胞和漿細胞。VDJ重組的過程，其中 DNA的兩種或三種片段選自基因組文庫，并且重組以產生抗體可變結構域的組合陣列，高突變(通過其由不同譜系的B細胞編碼的可變結構域進一步改變)導致至多IO9種獨特B細胞譜系，其產生和獨特靶具有特異性的抗體。B細胞據說對于抗原是特異性的，該抗原結合由該B細胞產生的抗體。B細胞通常通過暴露于它們的特異性抗原(Ag)而進行刺激。幼稚 B細胞仍未暴露于它們的特異性抗原。這種暴露(例如，在感染過程中)導致B細胞的增殖和姊妹克隆的產生。姊妹克隆可發育到漿細包中，其產生大量的抗體。漿細胞可以是短壽命的，或者可轉移到骨髓中，在此處它們可存活延長的時間。Ag-暴露的B細胞的姊妹克隆還可發育到記憶B細胞中，該細胞是靜止的直到重新暴露于特異性抗原。記憶B細胞通過分裂快速響應于重新暴露于抗原，以產生漿細胞和另外的記憶B細胞。記憶B細胞包括轉換的記憶B細胞(CD19+CD27SCD38低IgDO、未轉換的記憶B細胞(CD19+CD27SCD38低IgD+) 和雙陰性記憶B細胞(CD19+CD27TD38ffi IgDO。一些顯著疾病涉及B細胞。B細胞的惡性轉化導致癌癥，包括一些淋巴瘤如例如多發性骨髓瘤和霍奇金氏淋巴瘤。一些自家免疫性疾病包括系統性紅斑狼瘡(SLE)，也涉及B 細胞。都涉及B細胞的癌癥和自家免疫性疾病可被認為功能狀態的增益，因為B細胞生長過度和/或不合適地攻擊身體的部分。控制這種疾病的可能的策略是使用靶向病理B細胞的抗體。B細胞成熟抗原(BCMA，也稱為TNFRSF17和⑶沈鍆是這樣的蛋白，其已經顯示在漿母細胞(即，漿細胞前體)和漿細胞的表面上表達，并且據信刺激存活。因此，其表示B 細胞-相關疾病的潛在的靶。BCMA是TNF受體家族的成員，并且結合TNF家族配體BAFF和 APRIL(綜述于 Kalled et al. (2005), Curr Dir Autoimmun 8:206-242)。BCMA 是 III 型膜蛋白，因為其缺少和在大部分TNF受體家族的成員中發現的I型膜蛋白相關的信號肽。BCMA RNA已經在脾臟、淋巴結、胸腺、腎上腺和肝臟中檢測到，并且多種B細胞系的分析表明在成熟后BCMA mRNA的水平增加。人BCMA蛋白已經在CD38+B細胞的各種亞型、特別是菜細胞上檢測到 Ghang et al. (2005), Int Immunol 17 :779-788 ；Darce et al. (2007), J Immunol179 :7276-7286 ；Sims et al. (2005)，Blood 105 :4390-4398 ；Avery et al. (2003)，J Clin Invest 112:286-297)。獨立實驗室已經檢查血液和/或扁桃腺B 細胞亞群，并且發現BCMA表達不可能在幼稚或記憶B細胞上檢測(Zhang et al. (2005)， Int Immunol 17 :779-788 ；Darce et al. (2007), J Immunol179 :7276-7286 ;Chiu et al. (2007),Blood 109 :7四_739)。試圖在胚中心B細胞的表面上檢測BCMA蛋白具有不一致的結果(Zhang et al. (2005), Int Immunol 17 :779-788 ；Chiu et al. (2007) ,Blood 109
并未完全理解BCMA的作用機理。基因改變以缺少BCMA的功能基因的小鼠具有通常的淋巴器官和細胞群體以及接近正常的官能化免疫系統(Xu and Lam(2001), Mol Cell Biol 21 :4067-4074 ；Schiemann et al. (2001), Science 293:2111-2114)。定義記錄在這些小鼠中的僅有缺陷是長壽的骨髓(BM)漿細胞的存活降低(0' Connor et al. (2004), J Exp Med 199:91-98)。因此，可以是這樣的至少在鼠系統中的BCMA提供存活信號至 BM-駐留漿細胞(其是BAFF或APRIL-介導的，或這兩種情況)。實際上，通過BCMA的信號傳導激活 NF-kB 途徑(Hatzoglou et al. (2000), J Immunol 165 :1322-1330)，其涉及 B 細胞存活、±曾殖和成熟(Litinskiy et al. (2002)Nat Immunol 3 :822-829 ；Pomerantz and Baltimore (2002)Mol Cell 10 :693-695 ；Huang et al. (2004) Proc Natl Acad Sci USA 101 :17789-17794 ；He et al. (2004) J Immunol 172 :3268-3279) 使用惡性人細胞的結果通常與BCMA和細胞存活之間的連接關系一致。原發性多發性骨髓瘤(MM)細胞、匪細胞系(Novak et al. (2004)Blood 103 :689-694)，和來自霍奇金淋巴瘤的霍奇金和李-斯 (HRS)細胞(Chiu et al. (2007)，Blood 109 :729-739 ；Novak et al. (2004)，Blood 104 2247-2253)已經顯示表達BCMA。加入BAFF和/或APRIL進一步顯示為這些惡性細胞提供存活信號，盡管并不清楚BCMA主要負責該效果。因為不同B細胞亞群在不同B細胞相關病癥中暗示，所以存在需要這樣的藥劑，該藥劑特異性靶向一種或多種B細胞亞群。BCMA在一些B細胞的表面上的表達提供標記，通過該標記這些細胞可被特異性靶向。為了利用BCMA作為一種或多種B細胞亞群的標記，需要這樣的藥劑，該藥劑特異性結合BCMA，并且需要測定B細胞亞群通過這些BCMA-特異性藥劑而結合。本發明提供特異性結合BCMA的抗體。本發明的抗體可用于靶向下列B細胞亞群中的一種或多種漿細胞、記憶B細胞和幼稚B細胞。附圖簡要說明
圖1示出抗-人BCMA mAbs在BCMA-轉染的CHO細胞上的結合。生物素-綴合的抗-人BCMAmAbs的結合(使用抗生蛋白鏈菌素-PE可視化)通過流式細胞計量術在 BCMA-CHO穩定細胞系(A)和對照非-轉染的CHO細胞(B)上測量。陰影區域表示細胞用同種型對照mAb染色。圖2示出抗-BCMA結合B細胞亞群。人外周血液中的B細胞亞群通過流式細胞計量術評價與抗-BCMA mAbs的反應性。可視化如圖1。陰影區域表示用同種型對照Ab 染色。B細胞亞群是漿細胞(CD19+CD27髙CD38髙IgD_) (A)，轉換的記憶B細胞(CD19+CD27 髙CD38 ffiIgDO (B)，未轉換的記憶B細胞(CD19+CD27高CD38ffi IgD+) (C)，雙陰性記憶B細胞 (CD19+CD27TD38 低 IgD) (D)和幼稚 B 細胞(CD19+CD27_IgD+) (E)。圖3示出抗-BCMA結合分離自健康和患SLE-個體的B細胞亞群。來自健康志愿者和SLE患者的人外周血液中的B細胞亞群通過流式細胞計量術評價與抗-BCMAmAbs C12A3. 2和A7D12. 2的反應性。B細胞亞群如圖2中那樣。可視化如圖1。圖4示出分離自HSC/NSG小鼠的人CD45+脾細胞隔室內的人漿細胞的流式細胞染色。脾臟漿細胞分別用抗-BCMA抗體A7D12.2(左組；粗線)和C12A3.2(右組；粗線)或同種型對照小鼠IgG2b或IgGl Ab (兩組中的細線)染色。圖5示出分離自用抗-BCMA抗體(chC12A3. 2或chC13F12. 1)或人IgGl對照處理的HSC/NSG小鼠的人CD45+脾細胞隔室內的漿細胞(PC)的流式細胞染色。小鼠每周兩次腹腔注射抗-BCMAAb或HIgGl對照，進行兩周。**p < 0. 0001 ；*ρ = 0. 0066。圖6示出分離自用抗-BCMA抗體(chCllD5. 1或chA7D12. 2)或人IgGl對照處理的HSC/NSG小鼠的人CD45+脾細胞隔室內的漿細胞(PC)的流式細胞染色。小鼠每周兩次腹腔注射抗-BCMAAb或HIgGl對照，進行兩周。表1.序列的簡要描述
權利要求
1.一種分離的抗體，其結合SEQ ID NO :9的多肽，其中所述抗體包含選自蛋白序列的 ⑶R1、⑶R2或⑶R3中的至少一種⑶R，所述蛋白序列選自由SEQ ID NO :1，SEQ ID NO :3， SEQID NO 5 和 SEQ ID NO 7 構成的組。
2.權利要求1所述的抗體，其中所述抗體包含選自蛋白序列的CDR1、CDR2或CDR3中的至少兩種CDR，所述蛋白序列選自由SEQ ID NO :1，SEQ ID NO :3，SEQ ID NO 5和SEQID NO 7構成的組。
3.權利要求1所述的抗體，其中所述抗體包含蛋白序列的⑶R1、⑶R2或⑶R3的⑶R， 所述蛋白序列選自由SEQ ID NO 1, SEQ ID N0:3，SEQ ID NO :5和SEQ ID NO :7構成的組。
4.權利要求1所述的抗體，其中選自⑶R1、⑶R2或⑶R3中的至少一種⑶R來自SEQ ID NO :5，并且所述抗體還包含可變結構域，所述變結構域包含和SEQ ID NO :6的氨基酸 24-38 一致的CDRl區、和SEQ ID NO 6的氨基酸M-60 —致的CDR2區、或和SEQ ID NO 6 的氨基酸93-101 —致的⑶R3區中的至少一種。
5.權利要求1所述的抗體，其中所述重鏈可變結構域包含SEQID NO :5并且所述輕鏈可變結構域包含SEQ ID NO :6。
6.一種分離的抗體，其結合和權利要求5的抗體相同的抗原表位。
7.一種分離的抗體，其結合SEQ ID NO :9的多肽，其中所述抗體包含a.可變結構域，包含和選自SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 5 或 SEQ ID NO 7的序列的CDR1、CDR2和CDR3 —致的CDR1、CDR2和CDR3區；或b.部分(a)的可變結構域的變體，其否則除了在所述CDR區中至多總共10個氨基酸取代以外和所述可變結構域一致。
8.權利要求7所述的抗體，其中所述序列是SEQID NO :5，并且所述抗體還包含c.可變結構域，包含和SEQID NO 6的氨基酸M-38 —致的CDRl區、和SEQ ID NO 6 的氨基酸討-60 —致的⑶R2區、以及和SEQ ID NO 6的氨基酸93-101 —致的⑶R3區；或d.部分(c)的可變結構域的變體，其否則除了在所述CDR區中至多總共10個氨基酸取代以外和所述可變結構域一致。
9.一種分離的抗體，其結合SEQ ID NO :9的多肽，其中所述抗體包含選自蛋白序列的 CDRl、⑶R2或⑶R3中的至少一種⑶R，所述蛋白序列選自由SEQ ID N0:2、SEQ ID NO :12、 SEQ ID NO 6 和 SEQ ID NO 8 構成的組。
10.權利要求9所述的抗體，其中所述抗體包含選自蛋白序列的CDR1、CDR2或CDR3中的至少兩種CDR，所述蛋白序列選自由SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 6和SEQ ID NO 8構成的組。
11.權利要求10所述的抗體，其中所述抗體包含蛋白序列的⑶Rl、⑶R2或⑶R3的⑶R， 所述蛋白序列選自由SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO 6或SEQ ID NO 8構成的組。
12.權利要求1-11中任一項所述的抗體，其中所述抗體是嵌合、人源化或單鏈抗體。
13.一種雜交瘤，其產生權利要求1-11中任一項所述的抗體。
14.一種藥物組合物，包含權利要求1-11中任一項所述的抗體和藥學上可接受的載體。
15.一種多肽，其結合SEQ ID NO :9并且包含權利要求1-11中任一項所述的抗體的抗原結合部分、Fab片段或F(ab，)2片段。
16.一種雜交瘤，其產生權利要求15所述的抗原結合部分、Fab片段或F(ab’)2片段。
17.一種藥物組合物，包含權利要求15所述的抗原結合部分、Fab片段或F(ab’)2片段、以及藥學上可接受的載體。
18.一種減少漿細胞的方法，包括施用權利要求1-11中任一項所述的抗體。
19.一種治療B細胞相關病患的方法，包括施用權利要求1-11中任一項所述的抗體。
20.權利要求19所述的方法，其中所述B-細胞相關病患是漿細胞瘤，霍奇金氏淋巴瘤， 濾泡性淋巴瘤，小無核裂細胞淋巴瘤，地方性伯基特氏淋巴瘤，擴散性伯基特氏淋巴瘤，邊緣區淋巴瘤，結外粘膜相關淋巴組織淋巴瘤，結單核B細胞淋巴瘤，脾淋巴瘤，外套細胞淋巴瘤，大細胞淋巴瘤，彌漫性混合細胞淋巴瘤，免疫母細胞性淋巴結瘤，原發性縱隔B細胞淋巴瘤，肺B細胞血管中心性淋巴瘤，小淋巴細胞淋巴瘤，不確定惡性腫瘤潛在的B細胞增殖，淋巴瘤樣肉芽腫，移植后淋巴增生癥，免疫調節紊亂，風濕性關節炎，重癥肌無力，特發性血小板減少性紫癜，抗磷脂綜合征，南美洲錐蟲病，Graves病，韋格內氏肉芽腫癥，聚動脈動脈炎，干燥綜合征，慢性天皰瘡，硬皮病，多發性硬化，抗磷脂綜合征，ANCA相關性血管炎， 古德帕斯徹氏病，川崎氏病，自身免疫性溶血性貧血，和急進性腎小球腎炎，重鏈疾病，原發性或免疫細胞相關性淀粉樣變性或顯著性不確定的單克隆丙種球蛋白病。
21.權利要求20所述的方法，其中所述B細胞相關病患是B細胞惡性腫瘤。
22.權利要求20所述的方法，其中所述B細胞相關病患是漿細胞惡性腫瘤。
23.權利要求22所述的方法，其中所述漿細胞惡性腫瘤是多發性骨髓瘤。
24.權利要求20所述的方法，其中所述B細胞相關病患是自家免疫性疾病。
25.權利要求M所述的方法，其中所述自家免疫性疾病是系統性紅斑狼瘡。
26.權利要求20所述的方法，其中所述B細胞相關病患是風濕性關節炎。
27.權利要求20所述的方法，其中所述B細胞相關病患是特發性血小板減少性紫癜、或重癥肌無力、或自身免疫性溶血性貧血。
28.權利要求18所述的方法，還包括施用RITUXAN 。
29.一種降低至少一種自身抗體的水平的方法，包括施用權利要求1-11中任一項所述的抗體。
30.一種分離的抗體，其結合SEQ ID NO :9的多肽，其中所述抗體包含可變結構域，所述可變結構域包含和選自SEQ ID NO :1、SEQ ID NO :3、SEQ ID NO 5或SEQ ID NO 7的序列的CDR1、CDR2和CDR3區總共至少95%—致的CDR1、CDR2和CDR3區。
31.權利要求30所述的抗體，其中所述序列是SEQID NO :5，并且所述抗體還包含可變結構域，所述可變結構域包含和SEQ ID NO 6的⑶R1、⑶R2和⑶R3區總共至少95%—致的 CDR1、CDR2 和 CDR3 區。
全文摘要
本發明提供識別B細胞成熟抗原(BCMA)并且結合幼稚B細胞、漿細胞和/或記憶B細胞的抗體。本發明還提供減少幼稚B細胞、漿細胞和記憶B細胞的方法，和治療B細胞相關病患包括淋巴瘤和自家免疫性疾病的方法。
文檔編號C07K16/28GK102421801SQ201080020559
公開日2012年4月18日 申請日期2010年3月10日 優先權日2009年3月10日
發明者S.L.卡萊德, 許彥明 申請人:比奧根艾迪克Ma公司