專利名稱：一種石斛堿的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，尤其是涉及一種石斛堿的制備方法。
背景技術：
石斛堿，是一種四氫吡咯類生物堿，為疏水性弱堿。
分子式C16H25NO2。分子量J63. 27。
《中國藥典》中記載中藥石斛原植物為蘭科石斛屬(Dendrobium)植物的莖；性味甘、淡、微咸、寒；入胃、肺、腎經；功效益胃生津，滋陰清熱。用于陰傷津虧，口干煩渴，食少干嘔，病后虛熱，目暗不明。歷代本草對它的功效也都有詳細記載，《本經》曰“主傷中，除痹，下氣，補五臟虛勞羸瘦，強陰，久服療腸胃。，，現代藥效研究證明，石斛具有增強人體免疫力，消除腫瘤，抑制癌癥，恢復嗓音，抗聲帶疲勞等作用。傳統認為質重、嚼之粘牙、味甘、無渣者為優質石斛，也有將石斛堿的含量作為衡量石斛藥材質量的標準。
生物堿是石斛藥材中最重要的活性成分之一，也是最早分離并進行結構確認的化合物，1932年鈴木秀干等從金釵石斛中首次獲得生物堿，命名為石斛堿。石斛堿具有止痛、 解熱、抗腫瘤等作用，可降低心率、血壓、減慢呼吸，并可解巴比妥中毒，具有較高的研究開發價值。
石斛屬不同的植物生物堿含量差別較大，其中金釵石斛的生物堿含量最高。現有工藝也多是從金釵石斛中提取，如華茉莉等發表的“自動電位滴定法測定金釵石斛藥材中總生物堿的含量”，該文獻公開的方法是高醇回流提取，濃縮至浸膏，鹽酸溶解后上強酸性陽離子樹脂，5%氨水-50%乙醇液洗脫，洗脫液蒸干得產品，該方法僅制得石斛總生物堿， 且制備過程中采用回流，濃縮等過程，能耗較大，氨水洗脫產生的廢液難于處理；再如錢桂敏等發表的“金釵石斛鮮品閃式提取方法的工藝研究”，該文獻采用的工藝是75%乙醇破碎提取，超濾，濾液濃縮至干，氯仿超聲萃取，萃取液濃縮至干，該方法僅得到粗提物。
現有專利“從金釵石斛中提取純化石斛堿的方法”(專利號201010300497. 0)采用的工藝是酸性醇溶液回流提取，過陽離子樹脂吸附、洗脫，洗脫液用氯仿、乙醚萃取得石斛堿粗品，再經制備HPLC制得純度較高的石斛堿。該工藝設備投資大，處理量小。現有工藝存在著，提取成本高，產品含量低、品質差等諸多缺點。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種質量好、設備投入小的石斛堿的制備方法
技術領域：
本發明的目的是采用以下技術方案實現的
一種石斛堿的制備方法，其特征在于包含以下步驟
1)提取將石斛藥材粉碎，用少量氨水浸潤，再加入藥材3 10倍量的高濃度乙醇超聲提取2-3次，每次30 50分鐘，合并得提取液；
2)膜濃縮將上述提取液用超濾膜加壓過濾，再經納濾膜濃縮，得濃縮液；
3)萃取上述濾液加入等量的酸性水溶液萃取2 3次，取酸水層堿化，過濾得石3斛堿粗品；
4)分配柱色譜分離石斛粗品用乙醚溶解，與少量硅膠拌勻后，揮干溶劑，固體上樣，采用分配柱色譜分離，氯仿洗脫，薄層監測，收集洗脫液，蒸干即得產品。
所述步驟1)中的氨水用量是物料的1. 5 3倍，浸潤時間3 5h，高濃度乙醇是 70 95%乙醇，提取溫度為40 70°C。
所述步驟幻中的超濾膜是截留分子量6000 10000的中空纖維膜，加壓控制在 0. 2 0. 7Mpa，納濾膜為截留分子量100-200的納濾膜。
所述步驟3)中的酸性水溶液是pH2 3鹽酸或者硫酸，堿化時采用10 % NaOH或 8% Κ0Η，調節至 pH910。
所述步驟4)中的分配柱分離的具體方法是以60 100目的硅膠為支持劑，用量是上樣量的30 50倍，以氯仿飽和的pH4. 5緩沖液為固定相，用pH4. 5緩沖液飽和的氯仿洗脫，洗脫液流速控制1 1. 5BV/h，洗脫劑用量5 12BV。
所述步驟4)中pH4. 5的緩沖液為醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。
綜上所述，本發明存在以下優點氨水浸潤，使生物堿游離，利于提取；高濃度醇超聲提取，節約能耗，提取率高；膜濃縮，超濾膜濾去大分子物質，納濾膜截留目標產物，操作簡便且節約能耗，膜可重復利用；酸水萃取除去脂溶性雜質，堿液沉淀制得總生物堿；分配柱色譜分離純化得到較純凈的石斛堿，工藝筒單易操作，能耗較低，設備投入小。
下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式
下述實施實例中石斛堿的監測均采用薄層監測法(參照“中藥活性成分分析手冊”)，具體方法如下
薄層色譜條件
薄層板硅膠G薄層板；
展開劑氯仿-甲醇(10 0.8)；
顯色劑改良碘化鉍鉀試液；
氨蒸氣飽和下展開，展距10cm，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，供試品在與對照品色譜相應的位置上，有一相同顏色的單一斑點。
實施例1
將金釵石斛藥材粉碎，取100g，加入200ml氨水浸潤3個小時，再加入0. 8L80%乙醇超聲提取50分鐘，提取溫度為60°C，過濾，濾渣再加入0. 5L80%乙醇超聲提取30分鐘， 提取溫度為50°C，過濾，合并濾液后，加壓通過截留分子量10000的中空超濾膜，壓力控制 0. 2Mpa左右，濾液再經納濾膜濃縮至0. 5L，取0. 5LpH2的鹽酸水溶液萃取兩次，合并萃取液，用10% NaOH調節至pH9. 5，濾出沉淀物干燥，得石斛堿粗品3. 2g ；取120980目硅膠加入IOOg的pH4. 5醋酸-醋酸鈉緩沖液(預先用氯仿飽和)，再加入緩沖液飽和的氯仿浸泡， 調成稀糊，濕法裝柱，將石斛堿粗品用20ml乙醚溶解，與15g硅膠拌勻，揮干乙醚，上柱，用緩沖液飽和的氯仿洗脫，薄層監測，收集高濃度洗脫液，蒸干即得產品0. 53g。
實施例2
將金釵石斛藥材粉碎，取500g，加入900ml氨水浸潤4個小時，再加入4L85%乙醇超聲提取70分鐘，提取溫度為60°C，過濾，濾渣再加入3L80%乙醇超聲提取40分鐘，提取溫度為^°C，過濾，合并濾液后，加壓通過截留分子量8000的中空超濾膜，壓力控制0. 3Mpa 左右，濾液再經納濾膜濃縮至2L，取2LpH2的鹽酸水溶液萃取兩次，合并萃取液，用8% KOH 調節至pHIO，濾出沉淀物干燥，得石斛堿粗品11. 8g ；取400g60目硅膠加入300g的pH4. 5 醋酸-醋酸鈉緩沖液(預先用氯仿飽和)，再加入緩沖液飽和的氯仿浸泡，調成稀糊，濕法裝柱，將石斛堿粗品用90ml乙醚溶解，與40g硅膠拌勻，揮干乙醚，上柱，用緩沖液飽和的氯仿洗脫，薄層監測，收集高濃度洗脫液，蒸干即得產品2. 7g。
實施例3
將金釵石斛藥材粉碎，取1kg，加入1. 5L氨水浸潤5個小時，再加入9L75%乙醇超聲提取80分鐘，提取溫度為70°C，過濾，濾渣再加入7L75%乙醇超聲提取50分鐘，提取溫度為50°C，過濾，合并濾液后，加壓通過截留分子量7000的中空超濾膜，壓力控制0. 4Mpa左右，濾液再經納濾膜濃縮至4L，取4LpH2的硫酸水溶液萃取兩次，合并萃取液，用10% NaOH 調節至PH9，濾出沉淀物干燥，得石斛堿粗品24. 7g ；取800g60目硅膠加入550g的pH4. 5醋酸-醋酸鈉緩沖液(預先用氯仿飽和)，再加入緩沖液飽和的氯仿浸泡，調成稀糊，濕法裝柱，將石斛堿粗品用200ml乙醚溶解，與70g硅膠拌勻，揮干乙醚，上柱，用緩沖液飽和的氯仿洗脫，薄層監測，收集高濃度洗脫液，蒸干即得產品3. 9g。
實施例4
將金釵石斛藥材粉碎，取1kg，加入2L氨水浸潤5個小時，再加入10L85%乙醇超聲提取50分鐘，提取溫度為60°C，過濾，濾渣再加入8L85%乙醇超聲提取40分鐘，提取溫度為60°C，過濾，合并濾液后，加壓通過截留分子量9000的中空超濾膜，壓力控制0. 5Mpa左右，濾液再經納濾膜濃縮至4L，取4LpH2的鹽酸水溶液萃取兩次，合并萃取液，用8% KOH調節至pHIO，濾出沉淀物干燥，得石斛堿粗品23. Ig ；取850g60目硅膠加入300g的pH4. 5醋酸-醋酸鈉緩沖液(預先用氯仿飽和)，再加入緩沖液飽和的氯仿浸泡，調成稀糊，濕法裝柱，將石斛堿粗品用180ml乙醚溶解，與90g硅膠拌勻，揮干乙醚，上柱，用緩沖液飽和的氯仿洗脫，薄層監測，收集高濃度洗脫液，蒸干即得產品4. 7g。
權利要求
1.一種石斛堿的制備方法，其特征在于包含以下步驟1)提取將石斛藥材粉碎，用少量氨水浸潤，再加入藥材3 10倍量的高濃度乙醇超聲提取2-3次，每次30 50分鐘，合并得提取液；2)膜濃縮將上述提取液用超濾膜加壓過濾，再經納濾膜濃縮，得濃縮液；3)萃取上述濾液加入等量的酸性水溶液萃取2 3次，取酸水層堿化，過濾得石斛堿粗品；4)分配柱色譜分離石斛粗品用乙醚溶解，與少量硅膠拌勻后，揮干溶劑，上樣，采用分配柱色譜分離，氯仿洗脫，薄層監測，收集洗脫液，蒸干即得產品。
2.如權利要求1所述的一種石斛堿的制備方法，其特征在于所述步驟1)中的氨水用量是物料的1. 5 3倍，浸潤時間3 5h，高濃度乙醇為70 95%乙醇，提取溫度為40 70 "C。
3.如權利要求1所述的一種石斛堿的制備方法，其特征在于所述步驟幻中的超濾膜為截留分子量6000 10000的中空纖維膜，過濾加壓控制在0. 2 0. 7Mpa，納濾膜為截留分子量100-200的納濾膜。
4.如權利要求1所述的一種石斛堿的制備方法，其特征在于所述步驟幻中的酸性水溶液是PH2 3鹽酸或者硫酸，堿化時采用10% NaOH或8% Κ0Η，調節至pH9 10。
5.如權利要求1所述的一種石斛堿的制備方法，其特征在于所述步驟4)中的分配柱分離的具體方法是以60 100目的硅膠為支持劑，用量是上樣量的30 50倍，以氯仿飽和的PH4. 5緩沖液為固定相，用pH4. 5緩沖液飽和的氯仿洗脫，洗脫液流速控制1 1. 5BV/h, 洗脫劑用量5 12BV。
6.如權利要求書1所述的一種石斛堿的制備方法，其特征在于所述步驟4)中pH4.5的緩沖液為醋酸-醋酸鈉緩沖溶液。
全文摘要
本發明涉及一種石斛堿的制備方法，其特征在于，將石斛藥材粉碎，用少量氨水浸潤，再加入高濃度乙醇液超聲提取2～3次，提取液用超濾膜加壓過濾，再經納濾膜濃縮，濃縮液用酸水萃取2～3次，取酸水層堿化，過濾，沉淀物用乙醚溶解，與少量硅膠拌勻后，揮干溶劑，上樣，采用分配色譜分離，薄層監測，收集洗脫液，減壓濃縮蒸干即得產品。本工藝操作簡單，制備過程能耗低，設備投入小，產品含量高、質量好。
文檔編號C07D491/18GK102477040SQ20101055784
公開日2012年5月30日 申請日期2010年11月25日 優先權日2010年11月25日
發明者劉東鋒, 李法慶 申請人:蘇州寶澤堂醫藥科技有限公司