專利名稱：低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積雪草苷的工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積雪草苷的 工藝。積雪草Centella asiatica (L. ) UrBan為傘形科植物，植物學(xué)家林奈 (Linnaeus, Carolus)于1764年將積雪草歸入天胡荽屬(Hydrocotyle)，并定名為 Hydrocotyleasiatica L.。在1879年，德國(guó)人UrBan根據(jù)花瓣的排列以及果實(shí)的棱數(shù)將其 從天胡荽屬中的獨(dú)立出來(lái)并建立積雪草屬(Centella)，積雪草歸入該屬并更名為Centella asiatica (L)Urb.。積雪草主要分布于南北半球熱帶和亞熱帶地區(qū)，主產(chǎn)地為南非、印度、 斯里蘭卡、馬來(lái)西亞、印度尼西亞、澳大利亞、日本等，我國(guó)亦產(chǎn)積雪草。積雪草在中國(guó)的藥 用歷史已達(dá)二千多年之久，民間常用于治療感冒、扁桃腺炎、傳染性肝炎、痢疾、跌打損傷、 疔瘡腫毒、外傷出血等。積雪草現(xiàn)代藥理學(xué)研究和應(yīng)用有了很大發(fā)展，表明積雪草可用于治 療抑郁癥、皮膚創(chuàng)傷、胃潰瘍、傳染性肝炎、皮膚病和流行性腦脊髓膜炎等。積雪草的化學(xué)成分復(fù)雜，主要有三萜類、黃酮類、揮發(fā)油類、多炔烯類等。積 雪草總苷是積雪草提物中主要的藥效成分，主要由積雪草苷(Aisaticoside，CAS No. 16830-15-2)、羥基積雪草苷(Asaiticoside A ；Madecassoside, CAS No. :34540-22_2)和 積雪草苷B (Asaiticoside B，CAS No. : 125265-68-1)等物質(zhì)組成。其中積雪草苷在醫(yī)藥、 化妝品等領(lǐng)域已有廣泛應(yīng)用，研究表明積雪草苷具有促進(jìn)傷口愈合，治療疤痕的藥理作用。積雪草苷(a)、羥基積雪草苷(b)與積雪草苷B(C)的結(jié)構(gòu)式如下(R = Glu-Glu-Rha)在工業(yè)上，從積雪草中提取的積雪草總苷產(chǎn)品常因積雪草產(chǎn)地或工藝的不同而導(dǎo) 致其中積雪草苷、羥基積雪草苷與積雪草苷B的含量有明顯的變化。有些積雪草總苷中積 雪草苷含量大于20%且羥基積雪草苷/積雪草苷(w/w)小于2，有些則積雪草苷含量低于 20%且羥基積雪草苷/積雪草苷(w/w)大于2。對(duì)于上述兩種積雪草總苷中的前者，浙江大學(xué)化工系制藥工程研究所綠色制藥工 程研究室的呂秀陽(yáng)研究員課題組成功開(kāi)發(fā)的采用結(jié)晶法從積雪草總苷出發(fā)制備積雪草苷
背景技術(shù)：
純品的工藝(專利CN2008-10162211)，可以高效地制備得到高純度的積雪草苷產(chǎn)品，具有 高效節(jié)能、產(chǎn)品純度高、回收率高等特點(diǎn)。但此工藝應(yīng)用于后者時(shí)，卻存在積雪草苷回收率 偏低、產(chǎn)品純度不高的問(wèn)題。同時(shí)，為了從該工藝過(guò)程的結(jié)晶余液中進(jìn)一步回收殘留的積雪 草苷與羥基積雪草苷，非常有必要尋找一種從低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷 和羥基積雪草苷的工藝。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝。工藝的步驟如下1)低積雪草苷含量總苷在50 65°C下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物I 與結(jié)晶母液I ；2)固形物I繼續(xù)在50 65°C下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物II與結(jié)晶 母液II ；3)固形物II再次在50 65°C下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié) 晶母液III ；4)固形物III經(jīng)真空干燥后得到高純度羥基積雪草苷；5)結(jié)晶母液I經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，富含總苷的收集液濃縮后真空干燥，得到高 積雪草苷含量總苷；6)高積雪草苷含量總苷用溶劑I溶解、再加入溶劑II結(jié)晶得到固形物IV與結(jié)晶 母液IV ；7)固形物IV經(jīng)真空干燥后得到高純度積雪草苷；8)合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，富含總苷的收集液濃縮后真空 干燥作為起始原料回至步驟1)。其中步驟6)中溶劑I為甲醇或二甲基甲酰胺，加入量為2. 5 10mL/g積雪草總 苷。步驟6)中溶劑II為丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水，加入量為溶劑I加入量的0.5 10 倍。步驟 5)、8)中的大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為 HPD100、HPD200、HPD300、HPD400、HPD500、 HPD600、HPD700、X_5、AB-8 或 D4020。本發(fā)明中的低積雪草苷含量總苷是指積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B總含 量大于70%，積雪草苷含量低于20%且羥基積雪草苷/積雪草苷(w/w)大于2的積雪草總 苷。高積雪草苷含量總苷是指積雪草苷、羥基積雪草苷、積雪草苷B總含量大于70%，積雪 草苷含量高于20%且羥基積雪草苷/積雪草苷(w/w)小于2的積雪草總苷。高純度積雪草 苷是指純度大于90%的積雪草苷產(chǎn)品，高純度羥基積雪草苷是指純度大于90%的羥基積 雪草苷產(chǎn)品。冷卻結(jié)晶過(guò)程在室溫下進(jìn)行，結(jié)晶時(shí)間通常在4小時(shí)以上。本發(fā)明具有過(guò)程簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、污染少、產(chǎn)品積雪草苷收率和純度高等優(yōu)點(diǎn)， 適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
附圖是低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積雪草苷的工藝流程簡(jiǎn)圖。
具體實(shí)施例方式以下用實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的工藝方法作進(jìn)一步的說(shuō)明。本發(fā)明的保護(hù)范圍不受實(shí)施 例的限制，本發(fā)明的保護(hù)范圍由權(quán)利要求書(shū)決定。積雪草總苷原料由廣西昌洲天然藥業(yè)有限公司提供，經(jīng)檢測(cè)其中積雪草苷質(zhì)量含 量為15. 0 %，羥基積雪草苷含量為33 %，積雪草苷B質(zhì)量含量占28 %。實(shí)施例中所用的分析條件如下高效液相色譜(HPLC)分析條件AgilentllOO液相色譜分析系統(tǒng)，色譜柱為 Synergi 4 μ Hydro-RP 80Α reversed—phase column(4. 6mmX 250mm,4 μ m, Phenomenex), 流動(dòng)相甲醇-水(60 40)，流速0.5mL/min，柱溫25°C，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)205nm，積雪草苷標(biāo) 準(zhǔn)對(duì)照品購(gòu)自Sigma公司，羥基積雪草苷標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。本發(fā)明中大孔吸附樹(shù)脂純化的具體步驟如下1)結(jié)晶母液經(jīng)濃縮后真空干燥，再用水溶解至1. 5g/L濃度；2)在層析柱中裝入預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂，高徑比為3 5 ；3)物料溶液以0. 5 1. 5BV/h的流速流過(guò)樹(shù)脂柱，至流出液中總皂苷穿透；4)4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水混合流動(dòng)相(乙醇的體積百分比 為30% )以0. 5 2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并得到富含總 苷的收集液。實(shí)施例1取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為37. 2g，加入93mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為28. lg，加入140. 4mL甲醇(5mL 溶劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形 物III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為17. 5g，收率80. 6%，純度91. 2%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為40. 5g，用27L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD100，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分 比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為16. 7g，加入41. SmL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入41. SmL 水(溶劑I加入量的1倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為6. 8g，收率69. 6%，純度91. 4%。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為12g后用水溶解制成總苷水 溶液，用8L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD100，樹(shù)脂 柱高為9cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為63. 6mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層 析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液2. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇_水混合流動(dòng)相 中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后 合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為8. 3g，作為起始原料回用。實(shí)施例2取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為 27. 6g，加入138mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為16. 3g，加入40. 7mL甲醇(2. 5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為12. 6g，收率58. 7%，純度92. 5%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為44. 4g，用29. 6L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD200，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比 為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草 總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混 合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為 30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)7次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干燥， 重量為20. 6g，加入103. 2mL 二甲基甲酰胺(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入51. 6mL 水(溶劑I加入量的0.5倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV;固形物 IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 2g，收率53. 3 %，純度90. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為18. 5g后用水溶解制成總苷 水溶液，用12. 3L水溶解，在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD200， 樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為12. Sg,作為起始原料回 用。實(shí)施例3取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入450mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為18g，加入135mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固 形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為7. 7g，加入57. 4mL甲醇(7. 5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為3. 6g，收率17. 2%，純度93. 9%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為54. 4g，用36. 2L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD300，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑 比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液 中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙 醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮 后真空干燥，重量為30. 6g，加入229. 3mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 917. ImL水(溶劑I加入量的4倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 1 g，收率52. 3 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為27. 5g后用水溶解制成總苷 水溶液，用18. 3L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD300， 樹(shù)脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為19. lg，作為起始原料 回用。實(shí)施例4取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入600mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為8. 4g，加入21mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為6. 3g，加入31. 7mL甲醇(5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為4g，收率18. 7%，純度93. 9%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為54g，用36L水溶解制成總苷水溶液。在內(nèi)徑 為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD400，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑比為5)， 樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草總 苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水混 合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為 30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干燥， 重量為30. 2g，加入302. 5mL 二甲基甲酰胺(IOmL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入605mL 水(溶劑I加入量的2倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 5g，收率45. 5%，純度89. 8%。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為27. 8g后用水溶解制成總苷 水溶液，用18. 5L水溶解，在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD400， 樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流 速過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗 滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為19. 3g，作為起始原料 回用。實(shí)施例5取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為37. 2g，加入93mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為28. lg，加入280. 9mL甲醇(IOmL 溶劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形 物III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為9. 2g，收率43. 1%，純度93. 1%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為49. 8g，用33. 2L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD500，樹(shù)脂柱高為16cm(高徑比 為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水 混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分 比為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為26g，加入65. ImL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入651. ImL水 (溶劑I加入量的10倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為7. 5g，收率76. 7 %，純度91. 4 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為19. 6g后用水溶解制成總苷 水溶液，用13. IL水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD500， 樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為13. 6g，作為起始原料 回用。實(shí)施例6取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為 27. 6g，加入138mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為16. 3g，加入81. 4mL甲醇(5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為10. lg，收率47. 6 %，純度93 %。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為46. 9g，用31. 2L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD600，樹(shù)脂柱高為15cm(高徑比 為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比 為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)6次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為23. lg，加入115. 3mL 二甲基甲酰胺(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 922. 2mL水(溶劑I加入量的8倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 9g，收率60. 9 %，純度90. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為20. Ig后用水溶解制成總苷 水溶液，用13. 4L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD600，樹(shù)脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為14g，作為起始原料回用。實(shí)施例7取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入450mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為18g，加入90mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為10. 6g，加入26. 6mL甲醇(2. 5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為8. 2g，收率38. 6%，純度93. 3%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為49. Sg,用33. 2L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD700，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分 比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)4次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為26g，加入195. ImL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入390. ImL 水(溶劑I加入量的2倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 9g，收率50. 2 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為23. Ig后用水溶解制成總苷 水溶液，用15. 4L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD700， 樹(shù)脂柱高為9cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為63. 6mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液2. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)4次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為16g，作為起始原料回 用。實(shí)施例8取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入600mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為8. 4g，加入21mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為6. 3g，加入31. 7mL甲醇(5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為4g，收率18. 7%，純度93. 9%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為54g，用36L水溶解制成總苷水溶液。在內(nèi) 徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂X-5，樹(shù)脂柱高為16cm(高徑比為4)，樹(shù) 脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng) 相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。 上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干燥，重量 為30. 2g，加入75. 6mL 二甲基甲酰胺(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入37. SmL水 (溶劑I加入量的0. 5倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為6. 6g，收率68. 1 %，純度91. 4 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為25. 6g后用水溶解制成總苷 水溶液，用17. IL水溶解，在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂X-5，樹(shù)脂 柱高為16cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層 析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂 柱，接著用乙醇-水混合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中 乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合 并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為17. 8g，作為起始原料回用。實(shí)施例9取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為37. 2g，加入372mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為9. 7g，加入24. 2mL甲醇(2. 5mL 溶劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形 物III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為7. 5g，收率35. 2%，純度93. 4%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為50. 5g，用33. 7L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂AB-8，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑比 為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液 中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙 醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積 百分比為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真 空干燥，重量為26. 7g，加入133. 7mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入133. 7mL 水(溶劑I加入量的1倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 3g，收率54. 7 %，純度90. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為23. 4g后用水溶解制成總苷 水溶液，用15. 6L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂ABU^i 脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相 中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后 合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為16. 3g，作為起始原料回用。實(shí)施例10取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為27. 6g，加入138mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為16. 3g，加入81.4mL甲醇(5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為10. lg，收率47. 6 %，純度93 %。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為47. 9g，用31. 9L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂D4020，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草 總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混 合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比 為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)4次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干 燥，重量為24. Ig,加入180. 4mL 二甲基甲酰胺(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 1082. 5mL水(溶劑I加入量的6倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 2g，收率53. 6 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為20. 8g后用水溶解制成總苷 水溶液，用13. 9L水溶解，在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂D4020，樹(shù) 脂柱高為16cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為14. 4g，作為起始原料回 用。實(shí)施例11取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入600mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為8. 4g，加入21mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為6. 3g，加入31. 7mL甲醇(5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為4g，收率18. 7%，純度93. 9%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為55g，用36. 7L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD100，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分 比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)4次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為31. 2g，加入156. 2mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入156. 2mL 水(溶劑I加入量的1倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 3g，收率54. 7%，純度90. 8%。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為26. 9g后用水溶解制成總苷 水溶液，用17. 9L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD100，樹(shù)脂柱高為9cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為63. 6mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液2. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)5次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為18. 7g，作為起始原料 回用。實(shí)施例12取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入450mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為18g，加入90mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為10. 6g，加入26. 6mL甲醇(2. 5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為8. 2g，收率38. 6%，純度93. 3%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為48. 8g，用32. 5L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD200，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比 為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草 總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混 合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為 30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)8次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干燥， 重量為25g，加入250. ImL 二甲基甲酰胺(IOmL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入125mL 水(溶劑I加入量的0.5倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV;固形物 IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 1 g，收率42. 3 %，純度89. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為23. 9g后用水溶解制成總苷 水溶液，用15. 9L水溶解，在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD200， 樹(shù)脂柱高為16cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為16. 6g，作為起始原料回 用。實(shí)施例13取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為 27. 6g，加入207mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固 形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為11. 7g，加入88mL甲醇(7. 5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 6g，收率26. 3%，純度93. 7%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為51. 4g，用34. 3L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD300，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液 中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙 醇-水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體 積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮 后真空干燥，重量為27. 6g，加入207. 3mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 829mL水(溶劑I加入量的4倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV;固 形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. lg，收率52. 3%，純度90. 3%。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為25. 5g后用水溶解制成總苷 水溶液，用17L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD300，樹(shù) 脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為17. 7g，作為起始原料回 用。實(shí)施例14取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為37. 2g，加入93mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得至Ij 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為28. lg，加入140. 4mL甲醇(5mL 溶劑I/g積雪草總苷)加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形 物III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為17. 5g，收率80. 6%，純度91. 2%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為40. 5g，用27L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD400，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑比 為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液 中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙 醇_水混合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積 百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后 真空干燥，重量為16. 7g，加入167mL 二甲基甲酰胺(IOmL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加 入334mL水(溶劑I加入量的2倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 5g，收率45. 5 %，純度89. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為14. 2g后用水溶解制成總苷 水溶液，用9. 5L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD400，樹(shù) 脂柱高為9cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為63. 6mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液2. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相 中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后 合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為9. 9g，作為起始原料回用。實(shí)施例15
取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入600mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為8. 4g，加入21mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為6. 3g，加入63. 4mL甲醇(IOmL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為2. lg，收率9. 8%，純度94. 1%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為56. 9g，用38L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD500，樹(shù)脂柱高為16cm(高徑比為 4)，樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草 總苷穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混 合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比 為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干 燥，重量為33. Ig,加入82. 8mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入828. 3mL水 (溶劑I加入量的10倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為7. 5g，收率76. 7%，純度91. 4%。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為26. 7g后用水溶解制成總苷 水溶液，用17. 8L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD500， 樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以0. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)4次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為18. 5g，作為起始原料 回用。實(shí)施例16取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入450mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為18g，加入90mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為10. 6g，加入53. ImL甲醇(5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為6. 6g，收率31. 2%，純度93. 5%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為52. 4g，用34. 9L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD600，樹(shù)脂柱高為15cm(高徑比 為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比 為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)6次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干 燥，重量為28. 6g，加入71. 5mL 二甲基甲酰胺(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 571. 7mL水(溶劑I加入量的8倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為7. 4g，收率75. 8 %，純度91. 4 %。
合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為22. 2g后用水溶解制成總苷 水溶液，用14. 8L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD600， 樹(shù)脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為15. 4g，作為起始原料回 用。實(shí)施例17取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為 27. 6g，加入138mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形 物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為16. 3g，加入40. 7mL甲醇(2. 5mL溶劑 I/g積雪草總苷)加熱至60°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物III 經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為12. 6g，收率58. 7%，純度92. 5%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為44. 4g，用29. 6L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD700，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪 草總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇-水 混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分 比為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空 干燥，重量為20. 6g，加入154. 8mL甲醇(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入309. 6mL 水(溶劑I加入量的2倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 9g，收率50. 2 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為18. 7g后用水溶解制成總苷 水溶液，用12. 5L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂HPD700， 樹(shù)脂柱高為9cm(高徑比為3)，樹(shù)脂柱的床層體積為63. 6mL ；總苷水溶液以0. 5BV/h的流速 過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液2. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌 樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流 動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分 析后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為13g，作為起始原料回 用。實(shí)施例18取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為37. 2g，加入93mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得至Ij 固形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為28. lg，加入140. 4mL甲醇(5mL 溶劑I/g積雪草總苷)加熱至65°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形 物III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為17. 5g，收率80. 6%，純度91. 2%。
結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為40. 5g，用27L水溶解制成總苷水溶液。在 內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂X-5，樹(shù)脂柱高為16cm(高徑比為4)， 樹(shù)脂柱的床層體積為201. ImL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草總苷 穿透，共加入總苷水溶液8. 9L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混合流 動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比為30 %。 上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干燥，重量為 16. 7g，加入125. 3mL 二甲基甲酰胺(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入62. 6mL水 (溶劑I加入量的0. 5倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為4. 6g，收率47. 1 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為14. Ig后用水溶解制成總苷 水溶液，用9. 4L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂X_5，樹(shù)脂 柱高為12cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層 析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂 柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以2BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中 乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)1次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合 并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為9. 8g，作為起始原料回用。實(shí)施例19取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入300mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)， 加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量為 27. 6g，加入276mL甲醇(IOmL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固 形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為7. 2g，加入17. 9mL甲醇(2. 5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至50°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 5g，收率26. 2%，純度93. 7%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為51. 5g，用34. 3L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂AB-8，樹(shù)脂柱高為20cm(高徑比 為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為251. 3mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液 中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液11. 2L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙 醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積 百分比為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真 空干燥，重量為27. 7g，加入138. 3mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入138. 3mL 水(溶劑I加入量的1倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ；固形物IV 經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 3g，收率54. 7 %，純度90. 8 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為25. 3g后用水溶解制成總苷 水溶液，用16. 9L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂ABU^i 脂柱高為15cm(高徑比為5)，樹(shù)脂柱的床層體積為106mL ；總苷水溶液以1. 5BV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液4. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以lBV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相 中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后 合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為17. 6g，作為起始原料回用。
實(shí)施例20取60g積雪草總苷原料加入燒杯中，加入150mL甲醇(2. 5mL溶劑I/g積雪草總 苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I ；固形物I經(jīng)真空干燥后重量 為37. 2g，加入186mL甲醇(5mL溶劑I/g積雪草總苷)，加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固 形物II與結(jié)晶母液II ；固形物II經(jīng)真空干燥后重量為21. 9g，加入109. 7mL甲醇(5mL溶 劑I/g積雪草總苷)加熱至55°C溶解后冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III ；固形物 III經(jīng)真空干燥后羥基積雪草苷產(chǎn)品，重量為13. 7g，收率63. 7%，純度92. 3%。結(jié)晶母液I經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為43. 3g，用28. 9L水溶解制成總苷水溶液。 在內(nèi)徑為4cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂D4020，樹(shù)脂柱高為12cm(高徑比為 3)，樹(shù)脂柱的床層體積為150. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò)層析柱，至流出液中雪草 總苷穿透，共加入總苷水溶液6. 7L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù)脂柱，接著用乙醇_水混 合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng)相中乙醇的體積百分比 為30 %。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)3次，洗脫液經(jīng)HPLC分析后合并，濃縮后真空干 燥，重量為19. 5g，加入146. 4mL 二甲基甲酰胺(7. 5mL溶劑I/g積雪草總苷)，溶解后加入 878. 7mL水(溶劑I加入量的6倍)進(jìn)行結(jié)晶，然后經(jīng)過(guò)濾得到固形物IV與結(jié)晶母液IV ； 固形物IV經(jīng)真空干燥后即為高純度積雪草苷產(chǎn)品，重量為5. 2g，收率53. 6 %，純度90. 3 %。合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為17. 3g后用水溶解制成總苷 水溶液，用11. 5L水溶解，在內(nèi)徑為3cm的層析柱中裝入經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂D4020，樹(shù) 脂柱高為12cm(高徑比為4)，樹(shù)脂柱的床層體積為84. SmL ；總苷水溶液以lBV/h的流速過(guò) 層析柱，至流出液中雪草總苷穿透，共加入總苷水溶液3. 8L ；先用4個(gè)床層體積的水洗滌樹(shù) 脂柱，接著用乙醇_水混合流動(dòng)相以1. 5BV/h的流速洗脫積雪草總皂苷，乙醇-水混合流動(dòng) 相中乙醇的體積百分比為30%。上述大孔吸附樹(shù)脂純化過(guò)程重復(fù)2次，洗脫液經(jīng)HPLC分析 后合并得到富含總苷的收集液，收集液經(jīng)濃縮后真空干燥，重量為12g，作為起始原料回用。
權(quán)利要求
一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積雪草苷的工藝，其特征在于，工藝的步驟如下1)低積雪草苷含量總苷在50～65℃下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I；2)固形物I繼續(xù)在50～65℃下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物II與結(jié)晶母液II；3)固形物II再次在50～65℃下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物III與結(jié)晶母液III；4)固形物III經(jīng)真空干燥后得到高純度羥基積雪草苷；5)結(jié)晶母液I經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，富含總苷的收集液濃縮后真空干燥，得到高積雪草苷含量總苷；6)高積雪草苷含量總苷用溶劑I溶解、再加入溶劑II結(jié)晶得到固形物IV與結(jié)晶母液IV；7)固形物IV經(jīng)真空干燥后得到高純度積雪草苷；8)合并結(jié)晶母液II、III、IV經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，富含總苷的收集液濃縮后真空干燥作為起始原料回至步驟1)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝，其特征在于所述步驟6)中溶劑I為甲醇或二甲基甲酰胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝，其特征在于所述步驟6)中溶劑I的加入量為2. 5 10mL/g積雪草總苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝，其特征在于所述步驟6)中溶劑II為丙酮、乙腈、乙醚、乙酸乙酯或水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝，其特征在于所述步驟6)中溶劑II的加入量為溶劑I加入量的0. 5 10倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積 雪草苷的工藝，其特征在于所述步驟5)、步驟8)中的大孔吸附樹(shù)脂型號(hào)為HPD100、HPD200、 HPD300、HPD400、HPD500、HPD600、HPD700、X_5、AB-8 或 D4020。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種低積雪草苷含量總苷出發(fā)同時(shí)制備積雪草苷和羥基積雪草苷的工藝，工藝步驟如下1)低積雪草苷含量總苷在50～65℃下用甲醇加熱溶解，冷卻結(jié)晶得到固形物I與結(jié)晶母液I；2)固形物I再在上述條件下重結(jié)晶二次、再經(jīng)真空干燥后得到高純度羥基積雪草苷；3)結(jié)晶母液I經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，濃縮、真空干燥后得到高積雪草苷含量總苷，然后用溶劑I溶解、再加入溶劑II結(jié)晶，最后經(jīng)真空干燥后得到高純度積雪草苷；4)結(jié)晶母液經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂純化，富含總苷的收集液濃縮后真空干燥作為起始原料回用。本發(fā)明過(guò)程簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、污染少、產(chǎn)品收率和純度高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J63/00GK101983966SQ201010556169
公開(kāi)日2011年3月9日 申請(qǐng)日期2010年11月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月19日
發(fā)明者呂秀陽(yáng), 鄭興芳 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)