專利名稱：一種長春花高含量抗癌生物堿制備方法
一種長春花高含量抗癌生物堿制備方法
技術領域：
本發明涉及一種長春花高含量抗癌生物堿制備方法，長春花為夾竹桃科藥用植物，天然植物體中含有100余種生物堿，其中抗癌有效成份長春堿和長春新堿的含量甚微， 僅在十萬分之幾至百萬分之幾，由于長春堿、長春新堿是治療白血病、淋巴肉瘤、絨毛膜上皮癌等腫瘤的有效藥物，所以價值十分昂貴。應用毛狀根轉化技術誘導出長春花毛狀根，篩選并建立生長迅速、抗癌生物堿含量高而穩定的毛狀根克隆繁殖系統，將為長春花抗癌生物堿的工業化生產和產業化開發開辟一條有效的途徑。
背景技術：
植物次生代謝產物具有復雜的化學結構，至今仍沒有找到有效的或經濟的合成方法。因此人們對如何產生出更多的次生代謝產物，往往采用愈傷組織培養和細胞懸浮培養。 但是，在未分化的細胞中，生長通常與次生代謝通路是不相容的，因為在整體植株上，次生代謝產物一般只積累在特殊的組織或器官中，所以未分化的細胞和愈傷組織不能產生或很少產生次生代謝產物是很自然的。
發明內容發根農桿菌(Agrobaterium rhizogenes)可以感染高等植物，從而使被感染的植物產生毛狀根。毛狀根的產生，涉及到發根農桿菌基因組中Ri質粒進入到植物基因組中所形成的一個穩定的特征，在生理上，根系統所具有的代謝通路能夠較完整地表達，其次生代謝產物和含量不低于或大大高于根系統所產生的次生代謝產物，并且某些無性系在離體培養的條件下還表現出快速生長的特征，通過對所獲得的大量轉化毛狀根無性系的選擇，可以獲得快速生長和次生代謝產物含量高的無性系。目前，這種優良無性系可以用發酵器進行大規模的工業化培養，從而獲得那些從天然植物中難以大量獲得的次生代謝產物，使人類擺脫對天然植物的依賴。與現有技術相比，本發明的有益效果是應用毛狀根轉化技術誘導出長春花毛狀根，篩選并建立生長迅速、抗癌生物堿含量高而穩定的毛狀根克隆繁殖系統，獲得毛狀根克隆繁殖的工藝指標和工藝流程，為長春花抗癌生物堿的產業化生產開辟一條有效的途徑。
具體實施方式
將發根農桿菌活化I用活化的發根農桿菌感染長春花無菌外植體I將感染部位長出的毛狀根逐一分離I將各毛狀根無性系離體培養
I測定生長速率、生物堿含量與成分分析并與原植物比較I獲得高含量抗癌生物堿的毛狀根優良無性系I建立優良無性系培養系統(發酵器)I提取、分離、純化生物堿
權利要求
1.一種長春花高含量抗癌生物堿制備方法；
2.長春花轉化毛狀根離體培養的遺傳穩定方法；
3.長春花毛狀根大量培養的工藝指標和工藝流程；
4.長春花高含量抗癌生物堿毛狀根克隆繁殖系統的建立；
5.長春花毛狀根高含量抗癌生物堿的提取、分離、純化方法。
全文摘要
本發明涉及一種長春花高含量抗癌生物堿制備方法。用發根農桿菌介導獲得的毛狀根，通過多次繼代培養，根據生長速率、生物堿含量，篩選出生長速度快、生物堿含量高而穩定的優良無性系；用小型發酵器(10-30升)將毛狀根優良無性系培養，通過調整培養基的成分、通氣狀況、光照、溫度、外源激素、培養方式等條件，獲得毛狀根培養的工藝指標和工藝流程；建立毛狀根克隆繁殖系統，并從毛狀根中提取、分離、純化生物堿。
文檔編號C07D519/04GK102464670SQ201010531638
公開日2012年5月23日 申請日期2010年11月4日 優先權日2010年11月4日
發明者廖龍 申請人:廖龍