專利名稱：四種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及四種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用。大環化合物是一類重要的治療用抗生素。臺勾霉素(Tiacumicins)是一系列18 元環大環內酯抗生素的總稱。臺勾霉素BCTiacumicin B)在生產臺勾霉素(Tiacumicins) 的菌株中是一個主要產物，其擁有一個18元環大環內酯，兩個脫氧糖基和一個芳香環 支鏈，其生產菌株主要包括，放線菌指孢囊菌Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085，游動放線菌 Actinoplanes deccanensis ATCC 21983 和小孢鏈 菌 Catellatospora sp. Bp3323_81 等。指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085 為 小單孢菌科(Micromonosporaceae)放線菌，能夠產生多種臺勾霉素類化合物。本發明的目的是提供四種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中 的應用。本發明通過對指抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085進行一系列針對Tiacumicin B的基因敲除突變，得到3個突變株，從這3個 突變株的培養物中分離到了四種新的臺勾霉素類化合物，并且發現它們對金黃色葡萄球菌 Staphylococcusaureus ATCC 29213,蘇云金芽抱桿菌 Bacillus thuringensis,獎腸球菌 Enterococcus faecalisATCC 29212具有中等抑菌活性，可以用于制備抗菌藥物，從而實現 了本發明的目的。本發明的四種臺勾霉素類化合物，其結構如式(1)所示
權利要求
1.如式(1)所示的四種臺勾霉素類化合物
2.—種權利要求1所述的化合物1的制備方法，其特征在于，所述的化合物1是從對指 抱囊菌 Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis NRRL 18085 的 tiaM-1 "化 酶基因進行敲除后的tiaM-鹵化酶基因敲除突變株TCM50的發酵培養物中分離得到的。
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述的化合物1的制備方法包括以下 步驟將大孔樹脂加入tiaM-鹵化酶基因敲除突變株TCM50的培養基中，經發酵培養后，分 離出發酵液中的大孔樹脂，經乙醇洗脫，乙醇提取物經濃縮回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯層經濃縮后得代謝產物粗提物，將該粗提物經硅膠柱層析，以體積比從100 O 5 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為20 1梯度下洗脫下 來的餾分，再經凝膠柱層析，以體積比1 1的氯仿-甲醇作為洗脫劑洗脫，進而用ODS反 相中壓液相色譜，YMOGEL ODS-A球型填料，120A孔徑，50um粒徑，30 X 2. 5cm I. D.，流速為 15ml/min,以體積分數從15% -70%的甲醇/水梯度洗脫120min，再以體積分數70% -85% 的甲醇/水梯度洗脫40min，收集體積分數80% -84%梯度下餾分，濃縮，再用硅膠柱層析， 以體積比為10 1的氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，收集餾分，得到化合物1。
4.一種權利要求1所述的化合物2和3的制備方法，其特征在于，所述的化合物2和3 是從對指孢囊菌NRRL 18085的tiaGl-糖基轉移酶基因進行敲除后的tiaGl-糖基轉移酶 基因敲除突變株TCM57的發酵培養物中分離得到的。
5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的化合物2和3的制備方法包 括以下步驟將大孔樹脂加入tiaGl-糖基轉移酶基因敲除突變株TCM57的培養基中，經發 酵培養后，分離出發酵液中的大孔樹脂，經乙醇洗脫，乙醇提取物經濃縮回收乙醇后，用乙 酸乙酯萃取，乙酸乙酯層經濃縮后得代謝產物粗提物，該粗提物經硅膠柱層析，以體積比從 100 O O 100的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為100 1梯度下洗脫 下來的餾分Fr. 1和體積比為20 1梯度下洗脫下來的餾分Fr. 2，餾分Fr. 1經凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，收集餾分，然后經硅膠柱層析，以體積比 從4 1 2 1的石油醚-乙酸乙酯為洗脫劑梯度洗脫，收集石油醚-乙酸乙酯體積比 為3 1梯度下洗脫下來的餾分，再經凝膠柱層析，以甲醇為流動相，收集洗脫下來的餾分， 得到化合物3 ；溜分Fr. 2經凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，收 集洗脫下來的餾分，再經薄層制備色譜，以體積比為10 1的氯仿-甲醇為展開劑，收集Rf 值為0. 6的部位的餾分，得到化合物2。
6.一種權利要求1所述的化合物4的制備方法，其特征在于，所述的化合物4是從對 指孢囊菌NRRL 18085的tiaPl_P450基因進行敲除后的tiaPl_P450基因敲除突變株TCM69 的發酵培養物中分離得到的。
7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述的化合物4的制備方法包括以 下步驟將大孔樹脂加入tiaPl-P450基因敲除突變株TCM69的培養基中，經發酵培養后，分 離出發酵液中的大孔樹脂，經乙醇洗脫，乙醇提取物經濃縮回收乙醇后，用乙酸乙酯萃取， 乙酸乙酯層經濃縮后得代謝產物粗提物，該粗提物經硅膠柱層析，以體積比從100 0 0 100的氯仿-甲醇梯度洗脫，收集氯仿-甲醇體積比為20 1梯度下洗脫下來的餾分， 經凝膠柱層析，以體積比為1 1的氯仿-甲醇為洗脫劑洗脫，收集洗脫下來的餾分，再經 硅膠柱層析，以體積比為1 2的氯仿-乙酸乙酯為洗脫劑洗脫，收集洗脫下來的餾分，最 后經 ODS 反相中壓液相色譜，YMOGEL ODS-A, 12nm S-50ym,30X2. 5cml. D.，流速為 15ml/ min，以體積分數從20% 84%的乙腈/水為流動相梯度洗脫120min，收集乙腈/水體積分 數為84%梯度下洗脫下來的餾分，得到化合物4。
8.權利要求1所述的四種臺勾霉素類化合物在制備抗菌藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了四種臺勾霉素類化合物及其制備方法和在制備抗菌藥物中的應用。本發明以指孢囊菌NRRL 18085作為原始菌，分別對該菌的tiaM-鹵化酶基因、tiaG1-糖基轉移酶基因和tiaP1-P450基因實行敲除，獲得tiaM-鹵化酶基因敲除突變株(TCM50)、tiaG1-糖基轉移酶基因敲除突變株(TCM57)、tiaP1-P450基因敲除突變株(TCM69)。對突變株發酵產物粗提物采用正相硅膠、反相硅膠、凝膠等柱層析色譜技術和制備薄層層析色譜技術等，從突變株TCM50得到化合物1，突變株TCM57得到化合物2和化合物3，突變株TCM69得到化合物4。這四種化合物對金黃色葡萄球菌，蘇云金芽孢桿菌，糞腸球菌具有抑制活性，有望用于研發成為新的抗菌新藥。
文檔編號C07H17/08GK102030791SQ20101052641
公開日2011年4月27日 申請日期2010年10月28日 優先權日2010年10月28日
發明者張長生, 李蘇梅, 牛四文, 肖毅, 鞠建華 申請人:中國科學院南海海洋研究所