專利名稱：從山楂中精提熊果酸的方法
技術領域：
本發明屬于熊果酸的提取，具體涉及一種從山楂中精提熊果酸的方法。
背景技術：
熊果酸(Ursolic acid)又名烏蘇酸、烏索酸，為五環三萜酸，體外試驗表明，本 品對人結腸癌細胞(HCT-8)、人宮頸癌細胞(Hela)、人黑色素瘤細胞(MV3)、人胃癌細胞 (BGC-823)、人巨細胞性肺癌細胞(801-D)、人卵巢癌細胞(A2780)、人口腔上皮癌細胞(KB) 等有明顯的抑制作用；荷瘤小鼠試驗結果表明本品對人移植性肝癌(Bel-7402)、人肝癌 (SMMC-7721)、小鼠Lewis肺癌(3LL)、S180、H22均有明顯抑制作用。熊果酸能直接殺傷腫 瘤細胞，其作用是通過激活癌細胞中的RARP及內切酶攻擊核及核小體DNA，最終導致細胞 溶解；本品能促進人肝癌細胞(HepG12)凋亡，降低H印G12的細胞活力，細胞主要被阻滯在 GO期和Gl期，并體S期細胞數的下降。體外試驗證明本品顯著抑制SV40DNA復制在啟始， 并大大減少拓樸異構酶I的DNA斷裂，顯著降低復制蛋白A的單鏈DNA的結合活性。現有從山楂中提取熊果酸的方法，采用堿性乙醇回流提取后，在PH9 11條件下 溶解過濾后，濾液調PH3 4，得沉淀，水洗沉淀，用干燥后再乙醇去雜質，過濾結晶等到熊 果酸。這種方法采用堿性溶解，再利用酸性沉淀，并且要求PH3 4，工藝要求高，經本發明 人反復試驗，上述方法只能適用于實驗室的小試，在進行大規模工業化生產時，由于工藝控 制難度大，產品質量、純度，收率均不穩定，不適合藥用原料藥的生產。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能使與大規模工業化生產，質量穩定的從山楂中精提 熊果酸的方法，以解決上述問題。本發明的技術方案為(1)將山楂在70 100°C的溫度下水煮0.5 3小時，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干；(2)將烘干后的產物用乙醇回流提取1 3次，每次1 4h，合并提取液，減壓回 收至干浸膏且無醇味，干浸膏的比重控制在0. 85 1. 30(單位g/ml)之間；(3)用70°C的熱水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，調節干浸膏液的PH值至 11. 5 13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗第一沉淀物至第一沉淀物的濾液PH等于 7，得到第二沉淀物，抽濾第二沉淀物后，將第二沉淀物在70°C下烘干；(4)取步驟(3)中烘干物，用石油醚30-90或乙酸乙脂脫色過濾，保留濾渣，揮干溶 劑，過濾得沉淀；(5)取步驟(4)中沉淀，再用適量乙醇溶解，硅膠、氧化鋁、活性炭、硅藻土、離子交 換樹脂中的一種脫色，過濾，得到白色沉淀；(6)熊果酸重結晶取步驟(4)白色沉淀，用無水乙醇重結晶，即可獲得最后的結 晶產物；重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶12小時。所述步驟(3)中，利用堿調節所述干浸膏的PH值至12。
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所述步驟⑵中所述乙醇回流提取的要求是；第一次2 4小時；第二次1. 5 3 小時；第三次1 2小時。所述步驟(1)中，水煮時，水的重量為山楂重量的5 30倍。所述步驟(2)中，用乙醇回流提取時，第一次乙醇的重量是山楂重量的1 6倍； 第二次乙醇的重量是山楂重量的1 5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1 4倍。步驟(2)中，所述用乙醇回流提取時，乙醇體積濃度為50 100%。本發明的工藝中，先采用水煮將山楂中的水溶性雜質驅除，為后續工藝步驟提供 “單純”的非水溶性物質，有利于后續規模生產工藝步驟中的質量控制，避免山楂中水溶性 物質對后續工藝步驟的影響。本發明在利用乙醇回流提取濃縮后，進行調節干浸膏液的PH 值至11. 5 13，放置得第一沉淀物，將第一沉淀物用蒸餾水洗至PH等于7，這樣先將乙醇 回流提取濃縮后，利用調節堿性，得到堿性沉淀物，該步驟避易于控制，再用水洗堿性沉淀 物至中性，更容易實現；它避免現有工藝中在PH9 11條件下溶解過濾后，濾再調PH3 4， 得沉淀物的質量不穩定性，由于在規模化生產過程中，采用堿性溶解，再利用酸性得沉淀物 時，濾液調PH3 4的中和過程中的濾液均勻度受攪拌裝置、溫度和時間的影響，所以得到 得沉淀物的質量難以控制，這也是現有技術中不適合規模化工業生產的原因之一。本方法 提取的熊果酸的含量98%以上，本發明適合藥用原料藥的大規模化的工業生產。
具體實施例方式實施例1(1)采用水煮對樣本除掉大部分水溶性；取10公斤山楂加5倍山楂重量的水；水 煮沸后保持在70°C下0. 5小時，抽濾后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產物用該產物6倍重量份的體積濃度為95%乙醇回流提取 1次，時間4h，減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml之間。(3)用5倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調節PH值至11. 5，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉 淀物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用1倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚30倍 脫色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結晶用無水乙醇重結晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結晶產物。重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶2小時。得到最終結 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為42 %純度為 彡 98%。實施例2(1)取50公斤山楂加10倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80°C下1. 5小時，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產物用該產物3倍重量份的體積濃度為95%乙醇回流提取2次，第一次回流提取乙醇的重量是產物用重量的6倍；時間3小時；第二次回流提取乙醇 的重量是產物用重量的5倍；時間lh，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比 重控制在0. 85 1. 30g/ml之間。(3)用10倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調節PH值至12，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚60脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結晶用無水乙醇重結晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結晶產物。重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶2小時。得到最終結 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為50%純度為彡98%。實施例3(1)取100公斤山楂加30倍山楂重量的水；水煮沸后保持在70°C下3小時，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產物用該產物8倍重量份的體積濃度為50 100%乙醇回 流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是產物用重量的6倍；時間1. 5小時；第二次回流 提取乙醇的重量是產物用重量的5倍；時間1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是產物用重 量的4倍；時間lh，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml 之間。(3)用40倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調節PH值至13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結晶用無水乙醇重結晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結晶產物。重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶2小時。得到最終結 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質量為分子式C3tlH48O3分子量456. 36 ；收率為49%純度為彡98%。實施例4(1)取80公斤山楂加20倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80°C下2. 5小時，抽濾 后將濾渣在70°C下烘干備用。(2)取步驟(1)烘干的產物用該產物10倍重量份的體積濃度為50 100%的乙醇 回流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是產物用重量的8倍；時間2小時；第二次回流 提取乙醇的重量是產物用重量的8倍；時間1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是產物用重量的8倍；時間0. 5h，合并提取液；減壓回收至干浸膏且無醇味，干浸膏比重控制在0. 85 1. 30g/ml 之間。(3)用25倍于干浸膏重量份的70°C水分散干浸膏，用氫氧化鈉調節PH值至12，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗沉淀物，至沉淀 物濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾后將第二沉淀物在70°C下烘干備用。(4)取步驟(3)中干燥第二沉淀物，用5倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脫 色三次，每次0. 5h，過濾，保留過濾物，揮干溶劑。(5)熊果酸脫色取步驟(4)中去溶劑得過濾物抽，用乙醇溶解，利用離子交換樹 脂脫色，過濾。得到白色沉淀。(6)熊果酸重結晶用無水乙醇重結晶步驟(5)中的白色沉淀，三次，即可獲得最 后的結晶產物。重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶2小時。得到最終結 晶物熊果酸。檢測熊果酸的質量為分子式C3tlH48O3分子量456.36;收率為51%純度為 彡 98%。
權利要求
一種從山楂中精提熊果酸的方法，其步驟是(1)將山楂在70～100℃的溫度下水煮1～5小時，抽濾后將濾渣在70℃下烘干；(2)將烘干后的用乙醇回流提取1～3次，每次1～4h，合并提取液，減壓回收至干浸膏狀且無醇味，比重控制在0.85～1.30g/ml之間；(3)用70℃的熱水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，調節干浸膏液的PH值至11.5～13，放置得第一沉淀物，抽濾，用蒸餾水洗第一沉淀物至第一沉淀物的濾液PH等于7，得到第二沉淀物，抽濾第二沉淀物后將第二沉淀物在70℃下烘干；(4)取步驟(3)中烘干物，用石油醚30 90或乙酸乙脂脫色過濾，保留濾渣，揮干溶劑，過濾得沉淀；(5)取步驟(4)中沉淀，再用適量乙醇溶解，硅膠、氧化鋁、活性炭、硅藻土、離子交換樹脂中的一種脫色，過濾，得到白色沉淀；(6)熊果酸重結晶取步驟(4)白色沉淀，用無水乙醇重結晶，即可獲得最后的結晶產物；重結晶條件每次用無水乙醇溶解，在室溫下放置結晶12小時。
2.如權利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(3)中，利用堿調節 所述干浸膏液的PH值至12。
3.如權利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中所述乙醇回 流提取的要求是；第一次第一次2 4小時；第二次1. 5 3小時；第三次1 2小時。
4.如權利要求1所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(1)中，水煮時，水 的重量為山楂重量的5 50倍。
5.如權利要求1或3所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中，用乙 醇回流提取時，第一次乙醇的重量是山楂重量的1 6倍；第二次乙醇的重量是山楂重量的 1 5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1 4倍。
6.如權利要求1或3所述從山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步驟(2)中，所述用 乙醇回流提取時，乙醇體積濃度為50 100%。
全文摘要
本發明公開了一種從山楂中精提熊果酸的方法。它是先將山楂水煮驅除水溶性雜質后，利用乙醇回流提取濃縮，調節再濃縮物的pH值至堿性，得到沉淀物，水洗沉淀物至中性，脫色后重結晶得到熊果酸。該方法適于規模化的工業生產。
文檔編號C07J63/00GK101983965SQ20101052015
公開日2011年3月9日 申請日期2010年10月26日 優先權日2010年10月26日
發明者張長弓, 易以木, 白巖 申請人:武漢利元亨藥物技術有限公司