專利名稱：一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法。
背景技術：
婆羅子為七葉樹科植物七葉樹Aesculus chinensis Bge.、浙江七葉樹Aesculus chinensisBge.var.ch ekiangensis(Hu et Fang)Fang 或天師栗 Aesculus wilsonii Rehd.的干燥成熟種子。具有理氣寬中，和胃止痛的功效，用于治療胸悶脹痛，胃脘疼痛。七葉皂苷為婆羅子的有效成分，屬于三萜皂苷化合物，具有消炎、抗滲出、恢復毛 細血管通透性，提高靜脈張力，改善血循環，兼有擴張動脈，增加耐缺氧能力，促進腦功能恢 復等作用。相對于七葉皂苷鈉而言，七葉皂甙或七葉皂苷對人體的副作用較弱，而對人體的 治療作用并無影響。可以代替七葉皂苷鈉在化妝品，片劑和搽劑中使用。吳子俠等“七葉皂 苷體外抗SGC-7901細胞的作用及機制研究”，藥理研究表明，七葉皂苷明顯抑制SGC-7901 腫瘤細胞的增殖，并抑制細胞周期和誘導細胞發生凋亡，可下調凋亡相關蛋白Bcl-2的表 達。目前國內七葉皂苷的現有提純方法主要有(1)王緒英等“婆羅子中七葉皂苷的提取分離與純化”，該文獻所公開的的方法是 用60%酒精提取，依次用乙酸乙酯和正丁醇萃取，正丁醇萃取液真空干燥濃縮后上NKA-9 樹脂和反相層析柱，該方法提取率較低，有機溶劑使用量大，比較適用于實驗室小劑量制備需求。(2)高小寧等“婆羅子中七葉皂苷提取工藝研究”，該文獻所公開的方法是95%乙 醇浸漬提取，活性炭脫色后氯仿萃取，水洗烘干，該方法提取物中脂肪油含量較高，純度低。
發明內容
本發明的目的是提供一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法，該方法通過脫 脂、超聲波萃取、膜分離、大孔樹脂吸附、重結晶、干燥等步驟獲得七葉皂苷。為了實現上述目的，本發明的技術方案采用了 一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷 的方法，由以下步驟實現的一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法，其特征在于包括以下步驟1)乙醇提取將牛蒡子粉碎，加6-10倍量乙醚回流脫脂，將脫脂藥渣加入8-15倍 量95 %乙醇，進行超聲提取2-3次，提取完成后，離心分離，得七葉皂苷提取液；2)活性炭脫色上述提取液加入適量活性炭，回流脫色，得脫色液；3)膜分離上述脫色液經微濾膜濾過，再通過超濾膜超濾，收集透過液；4)大孔吸附樹脂吸附上述超濾液濃縮至醇濃度為15% _20%，加入大孔吸附樹 脂柱吸附，依次用水、60%乙醇洗脫，收集七葉皂苷流分；5)結晶上述七葉皂苷流分濃縮至體積1/5-1/8，放置結晶，過濾，得粗結晶物；6)重結晶上述粗結晶物加乙醚洗滌，丙酮溶解，滴加少量乙醚，放置結晶，重復2-3次，結晶真空干燥即得七葉皂苷產品。所述步驟1)中超聲頻率為40-60KHZ，溫度為40-75°C。所述步驟2)中活性炭用量為提取液的0. 3-0. 8%。所述步驟3)中微濾膜為0. 2 μ m的陶瓷膜，超濾膜為截留分子量10000-6000的中 空復合膜，壓力0. 5-lMpa。所述步驟4)中大孔樹脂可選NKA-9、NKA-2、X-5、D-4006中的一種，洗脫劑用量為
3-5倍柱體積，流速為lBV/h-4BV/h。所述步驟4)中真空干燥溫度為60_85°C。本發明本發明采用醇提易過濾，雜質少；膜分離，條件溫和，無變相，不會破壞苷的 結構；采用大孔樹脂，低醇上柱，水和醇洗脫，除雜效果好；再通過丙酮乙醚重結晶，很容易 獲得了高含量產品，而且樹脂可再生，降低了生產成本，本工藝具有工業化意義。
具體實施例方式通過以下實施例進一步詳細說明本發明，但應注意本發明的范圍并不受這些實施 例的任何限制。實施例1將婆羅子粉碎，取1kg，加10倍量乙醚回流脫脂lh，過濾，取脫脂藥渣加入15倍 量95%乙醇，進行超聲提取30min，頻率為40KHz，溫度為45°C，重復3次，提取完成后，離心 分離，得七葉皂苷提取液，將提取液加入3g活性炭，回流脫色lh，抽濾，得脫色液，脫色液經 0. 2 μ m的陶瓷膜濾過，再經截留分子量10000-6000的中空復合膜超濾，壓力0. 5Mpa,收集 透過液，濃縮至醇濃度為15%，加入IL NKA-9大孔吸附樹脂柱吸附，先用5L水洗脫雜質， 流速為40ml/min，再用3L60%乙醇洗脫，控制流速為50ml/min，收集七葉皂苷流分，七葉皂 苷流分濃縮至體積1/5，放置結晶，過濾，得粗結晶物19. 8g，粗結晶物加200ml乙醚洗滌2 次，過濾，再用150ml丙酮溶解，滴加少量乙醚至開始渾濁，放置結晶，重復2-3次，濾出結晶 70°C真空干燥即得七葉皂苷產品14. 5g，含量為96. 2%。實施例2將婆羅子粉碎，取1kg，加8倍量乙醚回流脫脂lh，過濾，取脫脂藥渣加入10倍量 95%乙醇，進行超聲提取50min，頻率為60KHz，溫度為75°C，重復2次，提取完成后，離心分 離，得七葉皂苷提取液，將提取液加入5g活性炭，回流脫色1. 5h，抽濾，得脫色液，脫色液經 0. 2μπι的陶瓷膜濾過，再經截留分子量10000-6000的中空復合膜超濾，壓力IMpa，收集透 過液，濃縮至醇濃度為20%，加入1LNKA-2大孔吸附樹脂柱吸附，先用4L水洗脫雜質，流速 為40ml/min，再用5L60%乙醇洗脫，控制流速為40ml/min，收集七葉皂苷流分，七葉皂苷流 分濃縮至體積1/7，放置結晶，過濾，得粗結晶物26. lg，粗結晶物加300ml乙醚洗滌3次，過 濾，再用180ml丙酮溶解，滴加少量乙醚至開始渾濁，放置結晶，重復2次，濾出結晶60°C真 空干燥即得七葉皂苷產品16. 4g，含量為97.4%。實施例3 將婆羅子粉碎，取2kg，加10倍量乙醚回流脫脂lh，過濾，取脫脂藥渣加入12倍 量95 %乙醇，進行超聲提取Ih，頻率為60KHz，溫度為40°C，重復3次，提取完成后，離心分 離，得七葉皂苷提取液，將提取液加入8g活性炭，回流脫色lh，抽濾，得脫色液，脫色液經
40. 2 μ m的陶瓷膜濾過，再經截留分子量10000-6000的中空復合膜超濾，壓力0. 6Mpa,收集 透過液，濃縮至醇濃度為18%，加入IL X-5大孔吸附樹脂柱吸附，先用7L水洗脫雜質，流速 為50ml/min，再用3L60%乙醇洗脫，控制流速為60ml/min，收集七葉皂苷流分，七葉皂苷流 分濃縮至體積1/8，放置結晶，過濾，得粗結晶物36. Sg,粗結晶物加500ml乙醚洗滌2次，過 濾，再用250ml丙酮溶解，滴加少量乙醚至開始渾濁，放置結晶，重復3次，濾出結晶75°C真 空干燥即得七葉皂苷產品30. lg，含量為98. 9%。實施例4 將婆羅子粉碎，取5kg，加9倍量乙醚回流脫脂lh，過濾，取脫脂藥渣加入15倍量 95%乙醇，進行超聲提取40min，頻率為55KHz，溫度為60°C，重復2次，提取完成后，離心分 離，得七葉皂苷提取液，將提取液加入IOg活性炭，回流脫色1. 5h，抽濾，得脫色液，脫色液 經0. 2μπι的陶瓷膜濾過，再經截留分子量10000-6000的中空復合膜超濾，壓力0. 5Mpa，收 集透過液，濃縮至醇濃度為15%，加入5L D-4006大孔吸附樹脂柱吸附，先用15L水洗脫雜 質，流速為300ml/min，再用15L60%乙醇洗脫，控制流速為350ml/min，收集七葉皂苷流分， 七葉皂苷流分濃縮至體積1/8，放置結晶，過濾，得粗結晶物89. 7g，粗結晶物加IOOOml乙醚 洗滌2次，過濾，再用500ml丙酮溶解，滴加少量乙醚至開始渾濁，放置結晶，重復2次，濾出 結晶65°C真空干燥即得七葉皂苷產品75. 0g，含量為97. 6%。實施例5:將婆羅子粉碎，取10kg，加8倍量乙醚回流脫脂lh，過濾，取脫脂藥渣加入12倍 量95 %乙醇，進行超聲提取1. 5h，頻率為60KHz，溫度為75°C，重復3次，提取完成后，離心 分離，得七葉皂苷提取液，將提取液加入45g活性炭，回流脫色lh，抽濾，得脫色液，脫色液 經0. 2μπι的陶瓷膜濾過，再經截留分子量10000-6000的中空復合膜超濾，壓力0. SMpa，收 集透過液，濃縮至醇濃度為15%，加入5L Χ-5大孔吸附樹脂柱吸附，先用30L水洗脫雜質， 流速為300ml/min，再用30L60 %乙醇洗脫，控制流速為350ml/min，收集七葉皂苷流分，七 葉皂苷流分濃縮至體積1/15，放置結晶，過濾，得粗結晶物169. 3g，粗結晶物加2L乙醚洗滌 2次，過濾，再用1. 5L丙酮溶解，滴加少量乙醚至開始渾濁，放置結晶，重復3次，濾出結晶 85°C真空干燥即得七葉皂苷產品154g，含量為95. 8%。
權利要求
一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法，其特征在于包括以下步驟1)乙醇提取將牛蒡子粉碎，加6 10倍量乙醚回流脫脂，將脫脂藥渣加入8 15倍量95％乙醇，進行超聲提取2 3次，提取完成后，離心分離，得七葉皂苷提取液；2)活性炭脫色上述提取液加入適量活性炭，回流脫色，得脫色液；3)膜分離上述脫色液經微濾膜濾過，再通過超濾膜超濾，收集透過液；4)大孔吸附樹脂吸附上述超濾液濃縮至醇濃度為15％ 20％，加入大孔吸附樹脂柱吸附，依次用水、60％乙醇洗脫，收集七葉皂苷流分；5)結晶上述七葉皂苷流分濃縮至體積1/5 1/15，放置結晶，過濾，得粗結晶物；6)重結晶上述粗結晶物加乙醚洗滌，丙酮溶解，滴加少量乙醚，放置結晶，重復2 3次，結晶真空干燥即得七葉皂苷產品。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中所述超聲頻率為40-60KHZ， 溫度為40-75°C。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟2)中活性炭用量為提取液的 0. 3-0. 8%。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟3)中微濾膜為0.2μπι的陶瓷膜， 超濾膜為截留分子量10000-6000的中空復合膜，壓力0. 5-lMpa。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中大孔樹脂可選NKA-9、 NKA-2、X-5、D-4006中的一種，洗脫劑用量為3_5倍柱體積，流速為lBV/h_4BV/h。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟4)中真空干燥溫度為60-85°C。
全文摘要
本發明公開了一種從婆羅子中提取純化七葉皂苷的方法，該方法是將原料用乙醚回流脫脂，藥渣放入提取器中，加乙醇進行超聲提取，提取完成后，離心分離，得到七葉皂苷提取液，活性炭脫色，微濾、超濾后濃縮至低濃度乙醇，大孔吸附樹脂吸附，經水及乙醇洗脫，收集七葉皂苷流分，回收試劑，放置結晶，丙酮乙醚重結晶。該工藝易放大生產。
文檔編號C07H1/08GK101974061SQ201010510839
公開日2011年2月16日 申請日期2010年10月19日 優先權日2010年10月19日
發明者萬冬梅, 劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司