專利名稱：恩諾沙星半抗原、人工抗原和抗體及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于食品安全技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及恩諾沙星半抗原、人工抗原和抗體的制 備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
恩諾沙星(Enrof loxacin，EF)，其分子式為C19H22FN3O3，分子量為359. 40，微黃色或
淡橙黃色結(jié)晶性粉末，無(wú)臭，味微苦；遇光色漸變?yōu)槌燃t色，其結(jié)構(gòu)式為式(1)所示
權(quán)利要求
一種恩諾沙星人工半抗原，其特征在于是以恩諾沙星與氨基丁酸或氨基己酸在NHS、DDC和DMF存在條件下反應(yīng)制備得到，所述半抗原含4個(gè)或6個(gè)碳原子手臂，具有式(II)所示分子結(jié)構(gòu)其中，n為 CH2基團(tuán)數(shù)目，n＝4或6。FSA00000234685800011.tif
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述恩諾沙星人工半抗原，其特征在于η= 4。
3.—種權(quán)利要求1或2所述恩諾沙星人工半抗原的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)按投料摩爾比為1 1 1將恩諾沙星、N-羥基琥珀酰亞胺和脂溶性碳二亞胺置 于反應(yīng)容器中，并將上述混合物用少量的DMF溶解，室溫下避光攪拌過(guò)夜；(2)將經(jīng)步驟(1)得到的反應(yīng)物離心取上清得A液；取與恩諾沙星等摩爾量的氨基丁酸或氨基己酸溶于少量蒸餾水中，得B液；(3)將B液緩慢加到A液中，室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，離心取上清液，調(diào)上清液為堿性，將析出的 沉淀過(guò)濾，收集上清液；(4)將步驟(3)制得的上清液調(diào)至酸性，收集沉淀，得到恩諾沙星半抗原。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于步驟(3)所述調(diào)上清液為堿性是將上 清液PH值調(diào)節(jié)為8. 0 8. 5 ；步驟(4)所述調(diào)上清液為酸性是將上清液ρΗ值調(diào)節(jié)為5. 0 6. 0 ；
5.一種恩諾沙星人工抗原，其特征在于是將權(quán)利要求1或2所述恩諾沙星半抗原與蛋 白質(zhì)偶聯(lián)制備得到；具有式(III)所示分子結(jié)構(gòu)
6.一種權(quán)利要求4所述恩諾沙星人工抗原的制備方法，其特征在于是采用活潑脂法將 所述恩諾沙星半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于包括以下步驟(1)將等摩爾所述的恩諾沙星半抗原、DDC、NHS溶解于DMF中，室溫避光反應(yīng)過(guò)夜；(2)將步驟(1)所得反應(yīng)物離心取上清液，將上清液加入到含有載體蛋白的硼酸緩沖 液中，混合物反應(yīng)過(guò)夜；(3)待步驟(2)反應(yīng)完成后，將反應(yīng)后混合液裝入透析袋，透析得到所述人工抗原。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于步驟(2)所述載體蛋白為BSA或0VA， 載體蛋白的濃度在20 30mg/mL ；所述反應(yīng)溫度為4°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于步驟(3)所述透析采用0.9%的生理 鹽水透析3天，每天更換透析液3 5次。
10.一種權(quán)利要求5所述抗原的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于制備恩諾沙星抗體或環(huán)丙沙 星免疫檢測(cè)方面。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種恩諾沙星半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明以恩諾沙星為原料，與氨基丁酸或氨基己酸反應(yīng)生成含4個(gè)或6個(gè)碳原子手臂的半抗原；通過(guò)活潑脂法將半抗原與蛋白質(zhì)偶聯(lián)制備得到人工抗原；將人工抗原免疫小鼠，采用細(xì)胞融合技術(shù)制得對(duì)恩諾沙星高特異性的單克隆抗體。采用本發(fā)明單克隆抗體建立免疫檢測(cè)可用于恩諾沙星現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)，對(duì)實(shí)現(xiàn)畜禽水產(chǎn)品中恩諾沙星殘留的快速檢測(cè)具有重要現(xiàn)實(shí)意義。
文檔編號(hào)C07D215/56GK101962359SQ20101025695
公開(kāi)日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2010年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月17日
發(fā)明者孫遠(yuǎn)明, 張挺, 楊金易, 沈玉棟, 王弘, 雷紅濤 申請(qǐng)人:華南農(nóng)業(yè)大學(xué)