專利名稱：一枝蒿酮酸糖酯類衍生物及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及從維藥一枝蒿中分離得到的單體化合物一枝蒿酮酸及以它為母體化 合物所合成的一系列一枝蒿酮酸糖酯類衍生物，該類衍生物經活性檢測具有抗甲、乙型流 感病毒感染的藥物用途。菊科植物新疆一枝蒿(Artemisia rupestris L.)在新疆民間用藥歷史悠久，具 有抗炎、抗過敏、抗菌、抗癌、增強免疫力、解蛇毒、保肝、抗氧化等活性。目前對新疆一枝蒿 的研究主要側重于其化學成分的鑒定，而且有幾種以一枝蒿為主要成分的復方藥品已經上 市。下面是已上市的代表性復方藥品藥品名稱復方一枝蒿顆粒生產企業新疆西域藥業有限公司批準文號國藥準字Z20026711成份一枝蒿，大青葉，板藍根用途解毒利咽，用于感冒，發燒，咽喉腫痛一枝蒿酮酸(Rupestonic acid)是從新疆一枝蒿中分離出的一種含多官能團的倍 半萜類化合物，本課題組對此單體化合物進行了初步的抗甲、乙型流感病毒和單純I、II型 皰疹病毒活性研究，結果表明此母體化合物對乙型流感病毒具有一定的抑制活性。糖類化合物是基本的生命物質之一，它以各種形式參與生命過程，具有信息傳遞， 能量轉移及物質輸送的功能；而某些糖酯類化合物具有抗腫瘤、殺菌等生理活性，且作為前 體藥物具有很好的藥效。將糖基引入到目標分子中，合成了一枝蒿酮酸糖酯類衍生物，有望 改善目標分子的生物活性。本發明將全乙酰化的各種糖基片斷引入到一枝蒿酮酸分子中，合成了一系列一枝 蒿酮酸糖酯類衍生物，反應條件溫和，實驗步驟簡捷。
發明內容
本發明的目的在于，提供一種一枝蒿酮酸糖酯類衍生物及其制備方法和用途，該 類衍生物以一枝蒿酮酸和全乙酰化的溴代糖為原料，在相轉移催化劑四乙基芐基氯化銨的 作用下合成而得。該方法反應條件溫和，實驗步驟簡捷。本發明所述的一枝蒿酮酸糖酯類 衍生物作為制備治療抗甲型或乙型流感病毒的藥物的用途。本發明所述的一種一枝蒿酮酸糖酯類衍生物，其結構如通式
背景技術：
其中Gly為糖基。
Gly糖基為2，3，4，6_四_0_乙酰基-3 _D_葡萄糖基，2，3，4，6-四_0_乙酰 基-a-D-甘露糖基，2，3，4，6_四-0-乙酰基-0-D-半乳糖基，2，3，4-三-0-乙酰 基-0 -D-木糖基，2，3，4-三-0-乙酰基-a -L-阿拉伯糖基，2，3，4_三_0_乙酰基-0 -D-核 糖基，2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七-0-乙酰基乳糖基，2，3，6，2‘ ,3' ,4' ,6'-七-0-乙
酰基麥芽糖基。所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物的制備方法，按下列步驟進行a、將一枝蒿酮酸溶于1，2_ 二氯乙烷中，室溫攪拌下加入氫氧化鈉溶液及三乙基
芐基氯化銨；b、當固體物完全溶解后，再加入溶有全乙酰化溴代糖的1，2-二氯乙烷溶液，在溫 度50-60°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機相；c、將分出的有機相用氫氧化鈉溶液洗滌，然后用水洗至中性，再用無水Na2S04干 燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，即可得到純品。步驟a和步驟c中所述氫氧化鈉濃度為5 %。步驟c中所述柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比石油醚乙酸乙酯= 5:1-2:1。所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物作為制備治療抗甲型或乙型流感病毒的藥物的 用途。本發明所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物的制備方法及其抗甲、乙型流感病毒活性 篩選，是將全乙酰化的各種糖基片斷引入到一枝蒿酮酸分子中，合成一系列一枝蒿酮酸糖 酯類衍生物，反應式如下 Gly糖基:2a=2,3,4,6-四-0-乙酰基-D-葡萄糖基，
2b ；:2，3，4，6-四-0-乙酰基-a -D-甘露賴■，
2c ；:2，3，4，6-四-0-乙酰基-3-D-半乳賴■，
2d ；:2，3，4—二-O-乙酰基-0-D-木糖基，
2e ；:2，3，4—二-0-乙酰基-a -L-阿拉伯賴■，
2f ；:2，3，4—二-O-乙酰基-3-D-核糖基，
2g:2，3,6，2'，3'，4'，6'-七-0-乙酰基乳糖基，
2h ；2,3,6,2',3' ,4' ,6'-七-0-乙酰基麥芽糖基。
本發明所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物的制備方法及抗甲、
研究，反應條件溫和，實驗步驟簡捷。對所合成的衍生物進行了初步的體外抗甲型(H3N2， H1N1)、乙型流感病毒活性測試，實驗結果表明，化合物2d和2g對甲型(H3N2)流感病毒有 較好的抑制作用，化合物3對甲型(H3N2，H1N1)和乙型流感病毒都有較好的抑制作用。
具體實施例方式依據實施例對本發明進一步說明，但本發明不僅限于這些實施例。儀器與試劑Varian 600核磁共振儀(CDC13，TMS為內標)，HP 1100LC/MS液質聯用儀， Shimadzu FTIR-8400S, Yanaco MP-S3熔點測定儀(溫度未經校正)。一枝蒿酮酸按常規方法分離，純度98%，HPLC檢測，其余的試劑均為市售的分析純。實施例1 :2，3，4，6-四-0-乙酰基-0 _D_葡萄糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2_ 二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨(130mg)；當固體完全溶解后再加入10mL溶有2，3，4，6_四_0_乙酰基- a -D-溴代葡萄糖 (0. 4mmol,164mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度50°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4，6-四-0-乙酰基-0-0-葡萄糖基一枝
蒿酮酸酯。實施例2 =2,3,4,6-四_0_乙酰基-a _D_甘露糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨(130mg)；當固體完全溶解后再加入10mL溶有2，3，4，6_四_0_乙酰基- a -D-溴代甘露糖 (0. 4mmol,164mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度52°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4，6-四-0-乙酰基-a-D-甘露糖基一枝
蒿酮酸酯。實施例3 :2，3，4，6-四-0-乙酰基-0 _D_半乳糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% NaOH溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨(130mg)；當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，4，6_四_0_乙酰基-a _D_溴代半乳糖 (0. 4mmol,164mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度55°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4，6-四-0-乙酰基-0-0-半乳糖基一枝
蒿酮酸酯。實施例4 :2，3，4-三-0-乙酰基-0 _D_木糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2_ 二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨(130mg)；
當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，4_三-0-乙酰基-a_D_溴代木糖 (0. 4mmol,135mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度57°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4-三-0-乙酰基-0-0-木糖基一枝蒿酮酸酯。實施例5 :2，3，4-三-0-乙酰基-a -L-阿拉伯糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨130mg)；當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，4_三_0_乙酰基-0 _L_溴代阿拉伯糖 (0. 4mmol,135mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度60°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4-三-0-乙酰基-a-L-阿拉伯糖基一枝
蒿酮酸酯。實施例6 :2，3，4-三-0-乙酰基-3 _D_核糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨130mg)；當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，4_三-0-乙酰基-a_D_溴代核糖 (0. 4mmol,135mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度58°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機 相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，4-三-0-乙酰基-0-0-核糖基一枝蒿酮酸酯。實施例7 :2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基乳糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5% 氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨130mg)；當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基溴 代乳糖(0.4mmol，279mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度56°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分 出有機相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基乳糖
基一枝蒿酮酸酯。實施例8 :2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基麥芽糖基一枝蒿酮酸酯的制備將一枝蒿酮酸(0. 4mmol，100mg)溶于10mL 1，2-二氯乙烷中，室溫攪拌下加入5%
6氫氧化鈉溶液(lmL)及三乙基芐基氯化銨130mg)；當固體完全溶解后，再加入10mL溶有2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基溴 代麥芽糖(0.4mmol，279mg)的1，2-二氯乙烷溶液，溫度57°C下攪拌，TLC檢測反應完全后， 分出有機相；將分出的有機相用15mL 5%氫氧化鈉溶液洗滌兩次，然后用水洗至中性，再用無 水Na2S04干燥，減壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，采用梯度洗脫，洗脫劑為體積比 石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1，即可得到2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基麥芽
糖基一枝蒿酮酸酯。根據反應式表明在制備一枝蒿酮酸糖酯類衍生物的過程中，除了得到一枝蒿酮 酸糖酯類衍生物2a_2h以外，還得到了一枝蒿酮酸與溶劑1，2_ 二氯乙烷反應后生成的副產 物3。本發明將所合成的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物2a_2h和副產物3進行了初步的體外 抗流感病毒活性測試。本發明所述衍生物作為制備治療抗甲、乙型流感病毒的藥物的用途的生物活性測 定測試原理以MDCK(狗腎)細胞為病毒宿主細胞，測定樣品抑制病毒引起細胞病變 程度(CPE)。測試的材料(1)病毒株甲型流感病毒[312-2006 (H3N2)，219-2006 (H1N1)]，乙型流感病毒 (濟防97-13)，2006年9月在雞胚尿囊腔內培養傳代，_80°C保存。(2)樣品處理樣品溶于DMS0，再用培養液配成適宜的初始濃度，用培養液做3倍 稀釋，各8個稀釋度。(3)陽性對照藥病毒唑(RBV)，浙江康裕藥業有限公司生產(批號20050612)。方法(一 )測試樣品溶液的配制將各樣品溶于適量的DMS0，再用培養液配制成1000 yg/mL的初始濃度，然后用 培養液依次做3倍稀釋，各8個稀釋度(濃度依次為250，62. 5，15. 6,3. 9，1. 0,0. 2,0. 06， 0. 02 u g/mL)。( 二 )抗流感病毒活性測試將狗腎(MDCK)細胞接種于96孔培養板，置于5% C02 , 37°C培養24小時，MDCK細 胞分別加入流感甲型病毒10_3(316倍TCID5Q)、流感乙型病毒(濟防97-13)1/210_2(158倍 TCID5(1)，37°C吸附2小時后移出病毒液，分別加入不同稀釋度的藥物。設病毒對照和細胞對 照，37°C培養待病毒對照組病變程度(CPE)達4+時觀察各組細胞病變程度(CPE)(約36小 時)，計算各樣品對流感病毒半數抑制濃度(IC5(I)值。使用上述測定方法，測得本發明的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物2a 2h以及副產物 3的活性結果如表1、表2所示表1 一枝蒿酮酸衍生物2a 2h以及副產物3抗甲型流感病毒(H3N2、Hmi)的活
性數據
7 表2 —枝蒿酮酸糖酯類衍生物2a 2h以及副產物3抗乙型流感病毒的活性數據 TC5Q 半數有毒濃度。- 樣品在最大無毒計量時無抗流感病毒活性。SI 選擇指數。SI = TC50/IC50。1母體化合物(一枝蒿酮酸)。
權利要求
一種一枝蒿酮酸糖酯類衍生物，其結構如通式其中Gly為糖基。FSA00000156471800011.tif
2.根據權利要求1所述的衍生物，其特征在于Gly糖基為2，3，4，6_四-0-乙酰 基-3-D-葡萄糖基，2，3，4，6_四-0-乙酰基-a-D-甘露糖基，2，3，4，6_四-0-乙酰 基-0 -D-半乳糖基，2，3，4-三-0-乙酰基-0 -D-木糖基，2，3，4-三-0-乙酰基-a -L-阿 拉伯糖基，2，3，4-三-0-乙酰基一0-D-核糖基，2，3，6，2' ,3' ,4' ,6'-七_0_乙酰基 乳糖基，2，3，6，2'，3'，4'，6'-七_0_乙酰基麥芽糖基。
3.根據權利要求1所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物的制備方法，其特征在于按下列步 驟進行a、將一枝蒿酮酸溶于1，2_二氯乙烷中，室溫攪拌下加入氫氧化鈉溶液及三乙基芐基 氯化銨；b、當固體物完全溶解后，再加入溶有全乙酰化溴代糖的1，2_二氯乙烷溶液，在溫度 50-60°C下攪拌，TLC檢測反應完全后，分出有機相；c、將分出的有機相用氫氧化鈉溶液洗滌，然后用水洗至中性，再用無水Na2S04干燥，減 壓蒸餾得粗品，所得糖漿用柱層析純化，即可得到純品。
4.根據權利要求3所述方法，其特征在于步驟a和步驟c中所述氫氧化鈉濃度為5%。
5.根據權利要求3所述方法，其特征在于步驟c中所述柱層析純化，采用梯度洗脫，洗 脫劑為體積比石油醚乙酸乙酯=5 1-2 1。
6.根據權利要求1所述的一枝蒿酮酸糖酯類衍生物作為制備治療抗甲型或乙型流感 病毒的藥物的用途。
全文摘要
本發明涉及一枝蒿酮酸糖酯類衍生物及其制備方法和用途，該類衍生物是由一枝蒿酮酸和全乙酰化的溴代糖為原料，在相轉移催化劑四乙基芐基氯化銨的作用下合成而得，并對所合成的衍生物進行了初步的體外抗甲(H3N2，H1N1)、乙型流感病毒活性測試，實驗結果表明，化合物2d和2g對甲型(H3N2)流感病毒有較好的抑制作用，副產物3對甲型(H3N2，H1N1)和乙型流感病毒都有較好的抑制作用。該方法反應條件溫和，實驗步驟簡捷。
文檔編號C07H1/00GK101857613SQ20101019102
公開日2010年10月13日 申請日期2010年6月3日 優先權日2010年6月3日
發明者曹玲華, 趙江瑜, 阿吉艾克拜爾·艾薩 申請人:中國科學院新疆理化技術研究所