專利名稱：羥基黃烷類化合物及其用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種新的化合物及其用途。
背景技術：
腫瘤是一組可影響身體任何部位的100多種疾病的通稱，是人體器官組織的細胞 在外來和內在有害因素的長期作用下所產生的一種以細胞過度增殖為主要特點的疾病。腫 瘤的一個典型特征是快速產生異常細胞，這些細胞超越其通常邊界生長并可侵襲身體的毗 鄰部位和擴散到其它器官。目前，腫瘤是人類的一個主要死亡原因。根據世界衛生組織的 統計數據，2005年全世界死于腫瘤的人數為760萬，占人類死亡總數的13%。2005年所有 腫瘤死亡的70%以上發生在低收入和中等收入國家。預計全世界腫瘤死亡將繼續增加。據 估計，2015年將有900萬人死于腫瘤，并且2030年將有1140萬人死于腫瘤。如何預防和治 療腫瘤是擺在全人類面前的一項艱巨且重要的任務。腫瘤對人類健康威脅巨大，利用各種手段尋找切實有效的抗癌藥物，已經成為世 界范圍內生命科學研究的熱點課題。目前臨床上用于腫瘤治療的化學合成藥物，雖然對于 腫瘤治療起十分重要的作用，但是其毒性大、易產生耐藥性等副作用限制了他們的廣泛使 用。醫藥科研工作者一直在不懈的努力尋找毒副作用相對較小、作用原理獨特、效果明顯的 藥物，如何發明新的具有腫瘤作用的化合物，一直是他們重點研究方向之一。
發明內容
基于上述原因，本公司的科研人員通過長期的研究，得到了 3個新的化合物，該類 化合物除了具有很好的抗衰老的作用外，還具有很好的抗腫瘤的作用，該類化合物具有高 效、低毒的優點，將成為市場上新的抗腫瘤藥物。本發明通過下述技術方案實現的。1、化合物 其中
化合物1 為 R1 = OH R2 = OH R3 = OH R4 = H R5 = OH,名稱為 3，5，6，7，8，3，，
5’ _七羥基黃烷；化合物2 SR1 = OH R2 = OH R3 = H R4 = OH R5 = H，名稱為 3，5，6，7，8，4'-六
羥基黃烷；化合物3 SR1 = H R2 = H R3 = OH R4 = H R5 = OH，名稱為(2S，3S)-3，5，7，
3’，5’ -五羥基黃烷。其中化合物在制備治療衰老藥物中的應用。 其中化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。其中化合物為原料制備的藥物制劑。其中所述的腫瘤為癌。其中所述的腫瘤為肝癌。其中所述的腫瘤為白血病。其中所述的腫瘤為鼻咽癌。本發明所述的化合物，可以由包括但不限于下述方法得到蒲葵籽用乙醇提取，回收溶劑后得到提取物，提取物再依此用石油醚、氯仿、乙酸 乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物(LCE)經硅膠柱層析，氯仿-甲醇梯度洗脫，得到23 個組分(LCE1-LCE23)。組分LCE21經反相中低壓Rp_18柱分離，甲醇-水梯度洗脫，得到7個 組分(LCE^-LCE^)。組分LCE21^通過s印hadex LH-20柱層析，洗脫劑(甲醇-水)梯度 洗脫得到6個組分(LCE21^-LCEm)。組分LCE21I1經過Rp-18高效液相色譜分離，流動 相為甲醇水(25 75)pH為3，紫外檢測，波長為205nm，流速為Sml/min分別在保留時間 為16min左右、30min左右和53min左右分別得到化合物1、化合物2、化合物3。本發明所述的新化合物可以通過化學合成的方法得到。一、化合物的結構鑒定1、化合物1的結構鑒定紅色無定形粉末，ESI-MS (positive and negative)給出準分子離子峰m/z 323 [M+H]+、321[M-H]_，提示其分子量為322。結合1H-NMR和13C-NMR確定其分子式為C15H14O8, 不飽和度為9。在1H-NmrgoomHz,中可以觀察到7個氫信號。低場區有3個芳香氫信號 δ 6. 75 (m，H-2，，6，)和 6. 98 (d，J = O. 8Hz, H_4，)，提示結構中存在一個 3，5-二取代的 苯環。結合HMQC譜可知，在偏低場區有2個連氧次甲基的氫信號4.80 (1H，brs, H-2)和 4. 23(lH，br s，H-3)。此外，高場區還有2個亞甲基的氫信號δ H2. 74 (1H，dd，J = 16. 8，2. 7， H-4a)和 2. 84(lH，dd，J = 16. 8，2. 4，H_4e)。在1H-1HCOSY 譜中，δ H4. 80 氫信號與 4. 23 相
關，δ η4. 23氫信號還與2. 74和2. 84有相關，說明結果中存在一個
結 構片段。在13C-NMR (100MHz，⑶30D)中共有15個碳信號，結合HMQC譜，低場區共有12個芳 香碳信號(δ 100-157)；此外有2個次甲基的碳信號(δ 79. 8，67. 5)和一個亞甲基的碳信 號(δ 29. 3)。以上信息說明，化合物3的結構中存在兩個苯環和一個環狀的結構片段。結 合相關文獻可以推導出該化合物為黃烷類化合物，綜合考慮，確定C-3、C-5、C-6、C-7、C-8、C-3’和C-5’都連有羥基。從而確定該化合物的結構為3，5，6，7，8，3’，5’_七羥基黃烷。化 合物為一新的黃烷類化合物。表1化合物1的1H-WR和13C-NMR數據 2、化合物2的結構鑒定紅色無定性粉末，ESI-MS (positive and negative)給出準分子離子峰m/z 330. l[M+Na+H]+、304. 9[M-H]-，提示分子量為306。結合IH-NMR和13C-NMR確定分子式為 C15H1407，計算不飽和度為9。在IH-NMR(400MHz，⑶30D)中可以觀察到8個氫信號。低場區有4個芳香氫信 號[δ 6. 68 (d, J = 8. 5Hz, H_3，，H_5，)，7. 21 (d，J = 8. 5Hz，H_2，，H_6，)]，提示 B 環的 4’為有取代。結合HMQC譜可知，在偏低場區有2個連氧次甲基的氫信號4. 75(1H，brs， H-2) ^P 4. 07(lH,brs,H-3)o此外，高場區還有2個亞甲基的氫信號δ H 2. 77 (1Η，dd，J = 16. 8,4. 4Hz, H-4a)和 2· 64 (1Η, dd, J = 16. 8,2. 4Hz, H_4e)。在 1Η-1Η COSYi普中，δ 4. 75 氫信號與4. 07相關，δ 4. 07處的氫信號還與δ 2. 77、2. 64有相關，說明結果中存在一個
結構片段。13C-NMR(1 OOMHz，CD30D)共有15個碳信號，結合HMQC譜發現，低場區共有12個 芳香碳信號(δ 100-158)，其中δ 115. 8和129. 2均分別為兩個碳的重疊碳信號；此外有2 個次甲基的碳信號(δ 79. 9,67. 4)和一個亞甲基的碳信號(δ 29. 4)。以上信息說明，化合 物4的結構中存在兩個苯環和一個環狀的結構片段。結合相關文獻可以推導出該化合物為 黃烷類化合物，綜合考慮，確定03、(-5、(-6、(-7、(-8和(-4’都連有羥基。從而確定該化 合物的結構為3，5，6，7，8，4’ _六羥基黃烷。化合物2為一新的黃烷類化合物。表2化合物2的1H-NMR和13C-NMR數據 3、化合物3的結構鑒定紅色無定性粉末，ESI-MS (positive and negative)給出準分子離子峰[M+Na]+m/ ζ 313 提示分子量為 290。HR-ESI-MS m/z :313. 0677[M+Na]+，理論值為(C15H14Na06) 313. 0683。結合IH-NMR和13C-NMR確定分子式為C15H1406，不飽和度為9。在IH-NMR (400MHz，DMS0_d6)中可以觀察到9個氫信號。低場區有5個芳香氫信號 δ 6. 65 (m, Η-2，，6，)、6· 89 (d, J = O. 8Hz, H_4，)、δ 5. 72 (d, J = 2. OHz, H_7)和 5. 89 (d, J =2. 0Hz，H-5)，提示結構中存在一個3’，5’- 二取代的苯環和一個5，7- 二取代的苯環。在 偏低場區有2個連氧次甲基的氫信號4. 72 (br s, H-2)和4. 00 (br s, H-3)。此外，高場區 還有 2 個亞甲基的氫信號 δ 2. 48(dd, J = 16. 5,3. 2Hz，H_2)和 2. 68(dd, J = 16. 5,4. OHz, H-2)。13C-NMR (1 OOMHz, DMS0_d6)共有15個碳信號，低場區共有12個芳香碳信號 (δ 94-156)，此外有2個次甲基的碳信號(δ 78. 0,64. 9)和一個亞甲基的碳信號(δ 28. 2)。 以上信息說明，化合物5的結構中存在兩個苯環和一個環狀的結構片段。結合相關文獻可 以推導出該化合物為黃烷類化合物，綜合考慮，確定C-3、C-5、C-7、C-3’和C-5’都連有羥 基。從而確定該化合物的結構為3，5，7，3’，5’ -五羥基黃烷。根據Η-2和Η-3與Η-3和 Η-4之間小的耦合常數表明2，3位上氫的相對構型為順式構型；再根據其旋光值[α ]D20 =+38.0(c0. 2,Me0H)結合文獻確定該化合物的絕對構型為(2S，3S)-3，5，7，3 ‘，5’-五羥 基黃烷。化合物3為一新的黃烷類化合物。 表3化合物3的1H-WR和13C-NMR數據
二、清除02_能力試驗(1)各儲備液的配制NADH儲備液稱 20. 7mg NADH，溶解于 40ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。
PMS 儲備液稱 1. 84mg PMS，溶解于 40ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。NBT 儲備液稱 12. 3mg NBT，溶解于 30ml pH 8. 150mmol/L Tris-HCl 緩沖液中。樣品用DMSO溶解成不同濃度(2)實驗過程445 μ 1 pH 8. 150mmol/L Tris-HCl — 250 μ 1 NADH 儲備液一250 μ 1 NBT儲備液 —5 μ 1樣品一50 μ 1 PMS儲備液，混勻，室溫放5min，570nm測OD值。注意調零組以DMSO+Tris-HCl緩沖液代替樣品+PMS空白組以Tris-HCl緩沖液代替PMS對照組以DMSO代替樣品超氧陰離子清除率=[1- (0D測定組-OD空白組)/ (0D對照組-OD調零 組)]X100%(3)實驗結果見表4。表4本發明化合物清除02_結果 樣品用DMSO溶解成不同濃度(2)實驗過程995 μ 1 DPPH儲備液一5 μ 1藥物混勻，室溫避光20min后546nm測OD值。調零組以甲醇+DMSO代替DPPH+藥物空白組以甲醇代替DPPH對照組以DMSO代替藥物清除百分比=[1-(0D測定-OD空白)/(0D對照-OD調零)]X100%(3)實驗結果見表5。
表5本發明化合物對烷自由基DPPH試驗結果 四、本發明化合物抑瘤試驗
本發明化合物對人體4個瘤株的體外抑瘤活性實驗，這4個瘤株包括白血病HL-60細胞、白血病Mata細胞、鼻咽癌CNE-I細胞和肝癌H印G2細胞。(I)MTT 法在96孔培養板中每孔加入200ul (含有2. 5X IO4個腫瘤細胞)含10 % FBS的RPMI 1640培養基的細胞懸液，置37°C 5% CO2培養箱中培養24h后，實驗組分別加入最終 濃度100、50、25、12. 5和6. 25 μ g/ml權利要求1中所述的化合物，對照組則加入等體積溶 齊U，每組4孔，重復4次。置37°C，5% CO2培養箱培養2天后，棄去上清液，加入200 μ 1/孔 新鮮配制的含50mg/ml MTT的無血清培養液，37°C繼續培養4h。棄去上清液，加入200 μ 1 DMS0，震蕩混勻后，在酶標儀上以波長為550nm，參比波長為450nm測定OD值。計算結果并 利用CalcuSyn軟件計算出IC5tl值。按下式計算藥物對腫瘤細胞生長得抑制率腫瘤細胞生長抑制率％ = (1-實驗組平均OD值/對照組平均OD值)X 100%(2)實驗結果見表6。表6不同化合物抑制腫瘤作用 注“-”表示抑制作用較弱未能測出IC5tl值實驗結果表明上述試驗表明，本發明新化合物具有抗衰老的作用、抗腫瘤的作 用，特別是對癌癥，包括但不限于肝癌、白血病、鼻咽癌具有很好的治療作用，試驗數據表 明，本發明新化合物比現有的化合物具有更好的藥理作用。
實施例實施例1取晾干粉碎的蒲葵籽20kg，用70%乙醇(150L)回流提取3次，每次3小時，合并提取液。在55°C下減壓回收乙醇得濃縮浸膏(LC)3.0kg。將3. 0kg浸膏(LC)用4. 0L水分 散，依次用等體積石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取三次。分別收集各萃取液并濃縮獲 得各萃取物，其中乙酸乙酯萃取物(LCE)55.05g。取乙酸乙酯萃取物(LCE)55. 05g，用氯仿和甲醇溶解，稱80g柱層析硅膠(100-200 目)進行拌樣。稱取硅膠(200-300目)1200g，用氯仿溶解硅膠裝柱，并用氯仿平衡柱子至硅 膠面不再下降，干法上樣，柱子高度為10X80cm。依次用氯仿(48L)、氯仿-甲醇(100 1) (80L)、氯仿-甲醇(50 1) (47L)、氯仿-甲醇(25 1) (53L)、氯仿-甲醇(15 1)(116L)、 氯仿-甲醇(10 1)(41L)、氯仿-甲醇(5 1)(45L)、氯仿-甲醇(2 1)(5. 1L)、甲醇 (3L)梯度洗脫。控制流速在1500ml/h，每接1000ml為一個餾分濃縮。并且利用薄層檢測 合并得到23個組分(LCEfLCEj。取第21個組分LCE21 (6. 00g)(由氯仿-甲醇5 1洗脫得到)，用10ml甲醇溶解， 通過反相中低壓Rp-18(33X330mm)柱層析分離，依次利用甲醇-水(5 95) (1500ml)、甲 醇-水(15 85) (1000ml)、甲醇-水(30 70) (500ml)、甲醇-水(40 60) (500ml)、甲 醇-水(50 50) (500ml)、甲醇-水(60 40) (500ml)、甲醇-水(75 25) (300ml)、甲 醇-水(85 15) (300ml)和甲醇(500ml)梯度洗脫，流速為4ml/min，每接100ml為一個餾 分濃縮，利用薄層檢測指導合并得到7個組分(LCEn-LCE”)。組分LCE^dOlOmg)用甲醇5ml溶解，通過S印hadex LH_20 (20 X 4；30謹)柱層析， 洗脫劑依次為甲醇-水(5 95) (800ml)、甲醇-水(15 85) (300ml)、甲醇-水(35 65) (300ml)、甲醇-水(55 45) (300ml)、甲醇-水(75 25) (300ml)和甲醇(300ml)梯 度洗脫，流速為1滴/秒，每20ml作為一個餾分濃縮，并利用薄層檢測指導合并得到6個 組分(LCEfH-LCU。取組分 LCE21_H(250mg)經過 Rp_18 高效液相 Waters XTerra, 19 X 250mm制備色譜柱分離，流動相為甲醇水(25 75) pH為3，紫外檢測，波長為205nm， 流速為8ml/min，在保留時間為16. 123min得到化合物1 (10mg)。實施例2取晾干粉碎的蒲葵籽10kg，用70%乙醇(75L)回流提取3次，每次3小時，合并提 取液。在55°C下減壓回收乙醇得濃縮浸膏(LC) 1. 6kg。將1. 6kg (LC)用2. 0L水分散，依次 用等體積石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取三次。分別收集各萃取液并濃縮獲得各萃取 物，其中乙酸乙酯萃取物(LCE)27. 65g。取乙酸乙酯萃取物(LCE)27. 65g，用氯仿和甲醇溶解，稱40g柱層析硅膠(100-200 目)進行拌樣。稱取硅膠(200-300目)800g，用氯仿溶解硅膠裝柱，并用氯仿平衡柱子至硅 膠面不再下降，干法上樣，柱子高度為6X75cm。依次用氯仿(23L)、氯仿-甲醇(100 1) (40L)、氯仿-甲醇(50 1) (22L)、氯仿-甲醇(25 1) (25L)、氯仿-甲醇(15 1) (50L)、 氯仿-甲醇(10 1)(20L)、氯仿-甲醇(5 1)(22L)、氯仿-甲醇(2 1) (2. 5L)梯度洗 脫。控制流速在800ml/h，每接500ml為一個餾分濃縮。并且利用薄層檢測合并得到19個 組分(LCEfLCEj。取第17個餾分LCE17(4. 0g)(由氯仿-甲醇5 1洗脫得到)，用6ml甲醇溶解， 通過反相中低壓Rp-18(33X330mm)柱層析分離，依次利用甲醇-水(5 95) (800ml)、甲 醇-水(15 85) (600ml)、甲醇-水(30 70) (300ml)、甲醇-水(40 60) (300ml)、甲 醇-水(50 50) (300ml)、甲醇-水(60 40) (300ml)、甲醇-水(75 25) (200ml)、甲醇-水(85 15) (200ml)和甲醇(300ml)梯度洗脫，流速為4ml/min，每接100ml為一個餾 分濃縮，利用薄層檢測指導合并得到6個組分(LCEm-LCE^)。組分LCEiH (600mg)用甲醇 5ml 溶解，通過 S印hadex LH-20 (20 X 430mm)柱層析， 洗脫劑依次為甲醇-水(5 95) (600ml)、甲醇-水(15 85) (200ml)、甲醇-水(35 65) (200ml)、甲醇-水(55 45) (200ml)、甲醇-水(75 25) (200ml)和甲醇(200ml)梯度洗 脫，每20ml作為一個餾分濃縮，并利用薄層檢測合并得到6個組分(LCEu+i-LCEu+e)。取組分LCE17_h (130mg)經過 Rp_18 高效液相 Waters XTerra，19 X 250mm 制備色譜 柱分離，流動相為甲醇水(25 75)pH為3，紫外檢測，波長為205nm，流速為Sml/min，在 保留時間為30. 657min得到化合物2 (30mg)。實施例3取晾干粉碎的蒲葵籽30kg，用70%乙醇(200L)回流提取3次，每次3小時，合并 提取液。在55°C下減壓回收乙醇得濃縮浸膏(LC)4.3kg。將4.3kg(LC)用6. 0L水分散，依 次用等體積石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取三次。分別收集各萃取液并濃縮獲得各萃 取物，其中乙酸乙酯萃取物(LCE)81.5g。取乙酸乙酯萃取物(LCE)81. 5g，用氯仿和甲醇溶解，稱120g柱層析硅膠(100-200 目)進行拌樣。稱取硅膠(200-300目)1600g，用氯仿溶解硅膠裝柱，并用氯仿平衡柱子至硅 膠面不再下降，干法上樣，柱子高度為lOXlOOcm。依次用氯仿(60L)、氯仿-甲醇(100 1) (120L)、氯仿-甲醇(50 1) (70L)、氯仿-甲醇(25 1) (75L)、氯仿-甲醇(15 1) (150L)、氯仿-甲醇(10 1) (60L)、氯仿-甲醇(5 1) (62L)、氯仿-甲醇(2 1) (10L)、 甲醇(10L)梯度洗脫。控制流速在2000ml/h，每接1000ml為一個餾分濃縮。并且利用薄層 檢測合并得到25個組分(LCEfLCEj。取第22個組分LCE22 (9. 5g)(由氯仿-甲醇5 1洗脫得到)，用10ml甲醇溶解， 通過反相中低壓Rp-18(33X330mm)柱層析分離，依次利用甲醇-水(5 95) (2000ml)、甲 醇-水(15 85) (1500ml)、甲醇-水(30 70) (1000ml)、甲醇-水(40 60) (1000ml)、 甲醇-水(50 50) (1000ml)、甲醇-水(60 40) (1000ml)、甲醇-水(75 25) (500ml)、 甲醇-水(85 15) (500ml)和甲醇(500ml)梯度洗脫，流速為6ml/min，每接200ml為一個 餾分濃縮，利用薄層檢測指導合并得到8個組分(LCE^-LCEi》。組分LCE^d. 54g)用甲醇 8ml 溶解，通過 S印hadex LH-20 (20 X 430mm)柱層析， 洗脫劑依次為甲醇-水(5 95) (1000ml)、甲醇-水(15 85) (500ml)、甲醇-水(35 65) (500ml)、甲醇-水(55 45) (500ml)、甲醇-水(75 25) (500ml)和甲醇(500ml)梯度洗 脫，每50ml作為一個餾分濃縮，并利用薄層檢測指導合并得到6個組分(LC^+i-LCE )。取組分LCE22_h (379mg)經過 Rp_18 高效液相 Waters XTerra, 19 X 250mm 制備色譜 柱分離，流動相為甲醇水(25 75)pH為3，紫外檢測，波長為205nm，流速為Sml/min，在 保留時間為53. 990min得到化合物3 (30mg)。上述實施例包括但不限于上述。
權利要求
化合物其中化合物1為R1＝OH R2＝OH R3＝OH R4＝H R5＝OH，名稱為3，5，6，7，8，3’，5’-七羥基黃烷；化合物2為R1＝OH R2＝OH R3＝H R4＝OH R5＝H，名稱為3，5，6，7，8，4′-六羥基黃烷；化合物3為R1＝H R2＝H R3＝OH R4＝H R5＝OH，名稱為(2S，3S)-3，5，7，3’，5’-五羥基黃烷。FSA00000073406400011.tif
2.根據權利要求1所述的化合物，其中化合物在制備治療衰老藥物中的應用。
3.根據權利要求1所述的化合物，其中化合物在制備治療腫瘤藥物中的應用。
4.根據權利要求1所述的化合物，其中化合物為原料制備的藥物制劑。
5.根據權利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為癌。
6.根據權利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為肝癌。
7.根據權利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為白血病。
8.根據權利要求3所述的化合物，其中所述的腫瘤為鼻咽癌。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，本發明公開了一類新化合物及其用途，利用理化常數和波譜學手段手段鑒定了它們的化學結構，該類化合物除了具有很好的抗衰老的作用外，還具有很好的抗腫瘤的作用，該化合物具有高效、低毒的優點，將成為市場上新的抗腫瘤藥物。
文檔編號C07D311/64GK101857584SQ20101015262
公開日2010年10月13日 申請日期2010年4月22日 優先權日2010年4月22日
發明者何祥久, 景運條, 曾小斌, 滕慧梅, 蔣晨光, 黃有帶 申請人:廣東德鑫制藥有限公司