專利名稱：一種初步純化丹酚酸b轉化原料的方法
技術領域：
本發明涉及一種初步純化丹酚酸B轉化原料的方法。
背景技術：
丹參是我國心腦血管病的基本治療藥物，因療效確切，丹參已成為我國用量最大 (1. 5萬噸/年)、銷售額最高、制劑生產廠最多的中藥(制劑生產廠960家，劑型主要有丹參滴丸、丹參注射液、丹參片、丹參顆粒、丹參沖劑和丹參膠囊)，此外丹參還與其它藥材組方，還用于治療肺心病、高脂血癥、高血粘度綜合征、哮喘、支氣管肺炎、肝炎、肝硬化、腎病綜合征、關節炎、糖尿病循環障礙、各種細菌性和病毒性感染、抗內毒素、腫瘤、硬皮病、皮膚炎、銀屑病、過敏性紫癜、紅斑狼瘡、血栓閉塞性脈管炎、痤瘡、難治性癲癇、視網膜病變等多種疾病。丹參的主要有效成分是丹酚酸。現代藥理研究表明，丹酚酸是以抗氧化、抗炎(通過NF-κ β途徑抑制多種炎性細胞因子表達)為特點、同時具有保護脈管內皮細胞、降脂、 升高高密度脂蛋白、保護心肌缺血缺氧、擴張冠脈血管、改善微循環、抑制血小板聚集、抑制纖維蛋白原合成、激活纖溶、抑制血栓形成、螯合鈣鐵離子等多種藥理作用。在所有已知酚類化合物中(包括黃酮類化合物)丹酚酸類化合物的抗氧化活性最強，其中又以丹酚酸 A(salvianolic acid A，SA)的活性最佳〔《中草藥現代研究》II，1996，498-533. Yi Yang Hu et al. ， World JGastroentero,2000 ；6 (3) :402-404. Cheng Hai Liu et al. ， World J Gastroentero,2000 ；6 (3) :361-364. Yun-Lian Lin et al. J. Nat. Prod. 2002,65,745-747. Lin YL et al. . J. Ethnopharmaco1. 2005.Chen YF et al. . J. Chromatogr A.2005 ； 1088(1-2) :140-5. Hsu YC et al. . J Biomed Sci. 2005 ；12(1) :185-95. Lay IS et al.. J Surg Res. 2003 ；115 (2) :279-85. Lay IS et al. . Planta Med. 2003 ；69(1) :26-32. Chen YL et al. . J CellBiochem. 2001 ；83 (3) :484-93. Chen YH et al. . J Cell Biochem. 2001 ； 82(3) :512-21. Hung HH et al. . Histol Histopathol. 2001 ；16(1) :175-83. Wu YJ et al.. ArteriosclerThromb Vasc Biol. 1998 ；18(3) :481-6.〕，但是，丹參中丹酚酸 A 的天然含量及其純化技術一直制約著丹酚酸A的研發。丹參水提物中酚酸類化合物以丹酚酸B為主，還有少量的丹A、紫草酸、迷迭香酸、 丹酚酸C、D和E。紫草酸可轉化為丹A，其它酚酸在轉化過程可通過自身的降解對丹A起保護作用。丹參水提物中存在丹A鄰近雜質，由丹酚酸B轉化丹A也會生成新的丹A鄰近雜質。并且由于轉化反應的關鍵因素是反應體系的pH和反應溫度。pH過高，對酚酸類化合物破壞嚴重，PH過低，轉化反應基本不發生。在轉化反應可發生的pH范圍內，轉化收率與反應溫度密切相關，是產物生成與破壞的平衡結果。在轉化反應可發生的PH范圍內，反應體系由室溫升至轉化溫度的過程中，大量的丹酚酸B巳被破壞。因此，將丹參水提物進行初步純化后再轉化將有利于丹酚酸A的整個制備過程。 初步純化丹參水提物的工藝目的是除去水溶雜質(包括鐵、銅、鋁、鈣等金屬離子)、前沿
3雜質和擬“膠體”類雜質。擬“膠體”類雜質是從色譜行為上對植物中目前尚未給出明確化學表征的一類物質。該類物質在正相和反相TLC上均主要集中于原點，卻又少量全程分布于正相和反相TLC 上；在TLC上沒有明確的斑點，在HPLC又無明確的UV吸收峰；在任何極性的洗脫液洗脫時， 都有少量被洗脫。這一獨特的行為使擬“膠體”類雜質去除成為天然產物分離純化關鍵問題之一，特別是對那些不能結晶的化合物。它的去除與否在很大程度上決定了目標化合物的純度是否滿足藥用要求。作為口服制劑，只有在腸道游離的目標化合物才能被吸收，膠體與目標化合物相互作用強，影響生物利用度；作為注射劑，刺激、過敏、凝聚試驗和異常毒性均可能與這類物質密切相關。因此，綜上所述，盡管熱處理丹參提取物制備丹酚酸A的技術盡管基本解決了丹酚酸A的來源問題，但仍然存在轉化率低，對后分離純化不利和分離純化收率低的問題。
發明內容
本發明的目的在于提供一種初步純化丹酚酸B原料的方法，從而有利于丹酚酸A 后續的分離，更有利于提高丹酚酸B轉化制備丹酚酸A的產率。經過系統的篩選和優化，本發明提供了一種初步純化丹酚酸B轉化原料的方法， 其中初步純化丹酚酸B采用聯合色譜法，所述聯合色譜法為大孔樹脂前沿色譜與大孔樹脂置換色譜聯用，所述前沿色譜填料為對丹酚酸B吸附率小、洗脫率高的大孔吸附樹脂 ADS-5、D101或DM130，所述置換色譜填料為吸附率和洗脫率均高的大孔吸附樹脂HPD100或 ADS-8，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為(1 2) 4。優選的，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為1 4。優選的，丹參酚酸B與置換色譜填料的重量比為1 (10 30)。更優選的，丹參酚酸B與置換色譜填料的重量比為1 20優選的，前沿色譜填料為ADS-5，置換色譜填料為HPD100。其中，純化丹酚酸B的色譜聯用方法是前沿色譜柱與置換色譜柱串聯，將PH為 3.0的丹參提取物水溶液按先前沿色譜柱后置換色譜柱的順序上樣后，用去離子水洗脫 3 5個柱體積，斷開兩柱，置換色譜柱用水溶液洗脫2 3個柱體積收集丹酚酸B。優選的，洗脫置換色譜柱用的水溶液為濃度> 70%的甲醇或乙醇或丙醇的水溶液。其中，經聯合色譜法初步純化的轉化原料，其中丹酚酸B > 50%，且原料丹酚酸B 濃度為0. 5% 2%。本發明通過提供一種初步純化丹酚酸B原料的方法，從而有利于丹酚酸A后續的分離，更有利于提高丹酚酸B轉化制備丹酚酸A的產率。采用本發明的初步純化的丹參提取物為轉化原料，既除去了不利于轉化的金屬離子成分，又除去了大部分不利于丹酚酸后續分離的“擬膠體”雜質和前沿雜質。使用本方法制備的丹酚酸B定向轉化丹酚酸A的轉化率> 10%,甚至達60%，顯著提高了丹酚酸A的產率。
圖1聯合色譜操作的流程圖
具體實施例方式發明提供了一種初步純化丹酚酸B轉化原料的方法，其中初步純化丹酚酸B采用聯合色譜法，所述聯合色譜法為大孔樹脂前沿色譜與大孔樹脂置換色譜聯用，所述前沿色譜填料為對丹酚酸B吸附率小、洗脫率高的大孔吸附樹脂ADS-5、DlOl或DM130，所述置換色譜填料為吸附率和洗脫率均高的大孔吸附樹脂HPD100或ADS-8，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為(1 幻4。具體的，前沿色譜的填料與置換色譜的填料重量比可以采用如下表1所示，但并不局限于表1所示的具體實施方式
。表1:
前沿色譜的填料置換色譜的填料2 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 9 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 8 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 7 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 6 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 5 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 33 4(1 3)前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 2 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1. 1 4前沿色譜的填料置換色譜的填料1 4優選的，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為1 4。優選的，丹參酚酸B與置換色譜填料的重量比為1 (10 30)，具體的，丹參酚酸B與置換色譜的填料重量比可以采用如下表2所示，但并不局限于表2所示的具體實施方式
。表2
丹參酚酸B 置換色譜的填料1 10丹參酚酸B 置換色譜的填料1 12丹參酚酸B 置換色譜的填料1 15丹參酚酸B 置換色譜的填料1 18
權利要求
1.一種初步純化丹酚酸B轉化原料的方法，其中初步純化丹酚酸B采用聯合色譜法，所述聯合色譜法為大孔樹脂前沿色譜與大孔樹脂置換色譜聯用，所述前沿色譜填料為對丹酚酸B吸附率小、洗脫率高的大孔吸附樹脂ADS-5、DlOl或DM130，所述置換色譜填料為吸附率和洗脫率均高的大孔吸附樹脂HPD100或ADS-8，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為(1 2) 4。
2.按照權利要求1所述的方法，其特征在于前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為 1 4。
3.按照權利要求1所述的方法，其特征在于丹參酚酸B與置換色譜填料的重量比為 1 (10 30)。
4.按照權利要求3所述的方法，其特征在于丹參酚酸B與置換色譜填料的重量比為 1 20
5.按照權利要求1所述的方法，其特征在于前沿色譜填料為ADS-5，置換色譜填料為 HPD100。
6.按照權利要求1所述的方法，其特征在于純化丹酚酸B的色譜聯用方法是前沿色譜柱與置換色譜柱串聯，將PH為3. 0的丹參提取物水溶液按先前沿色譜柱后置換色譜柱的順序上樣后，用去離子水洗脫3 5個柱體積，斷開兩柱，置換色譜柱用水溶液洗脫2 3 個柱體積收集丹酚酸B。
7.按照權利要求6所述的方法，其特征在于，洗脫置換色譜柱用的水溶液為濃度 ^ 70%的甲醇或乙醇或丙醇的水溶液。
8.按照權利要求1所述的方法，其特征在于經聯合色譜法初步純化的轉化原料，其中丹酚酸B彡50 %，且原料丹酚酸B濃度為0. 5 % 2 %。
全文摘要
本發明提供了一種初步純化丹酚酸B轉化原料的方法，其中初步純化丹酚酸B采用聯合色譜法，所述聯合色譜法為大孔樹脂前沿色譜與大孔樹脂置換色譜聯用，所述前沿色譜填料為對丹酚酸B吸附率小、洗脫率高的大孔吸附樹脂ADS-5、D101或DM130，所述置換色譜填料為吸附率和洗脫率均高的大孔吸附樹脂HPD100或ADS-8，前沿色譜填料與置換色譜的填料重量比為(1～2)∶4。本發明以尿素為催化劑的轉化方法，大大縮短了丹酚酸B處于易破壞狀態的時間，顯著提高了丹酚酸A的產率。使用本方法制備的丹酚酸B定向轉化丹酚酸A的轉化率≥10％，甚至達60％，顯著提高了丹酚酸A的產率。
文檔編號C07C69/732GK102212050SQ20101014368
公開日2011年10月12日 申請日期2010年4月6日 優先權日2010年4月6日
發明者何克江, 劉軍鋒, 劉珂, 張祁, 陳棟, 韓飛 申請人:山東靶點藥物研究有限公司, 海南鑫鴻凱實業有限公司