專利名稱：一種固相合成制備脂肪酰環酯肽化合物的方法
技術領域：
本發明涉及一種固相合成制備脂肪酰環酯肽化合物的方法，特別是涉及到起始 氨基酸的選擇、酯化反應和環合反應的方法。
背景技術：
近年來抗生素的抗性問題越來越嚴重，人們對于新型抗生素的需要越來越迫 切。抗菌肽類抗生素是一大類具有顯著抗感染活性的非特異性免疫類化合物。其中 又以環酯肽類抗菌肽最為引人注目，如2003年9月，美國FDA批準的注射用達托霉素 Daptomyhdn就是一種環酯肽類的抗生素，它的環酯肽部分是由十個氨基酸組成，側鏈 有一個正癸酸。它可以用來治療皮膚和軟組織感染，對待耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 (MRSA)有良好的效果。
脂肪酰環酯肽AM556是從夏威夷鏈球菌NRRL15010中分離得到的一組六個結 構相似的環酯肽類的化合物。對于革蘭氏陽性菌具有廣泛的抗菌活性，并且對于多抗藥 性的臨床菌的最小抑制濃度(MIC)可以達到0.01-0.05ug/ml。其抗菌機制與其他抗生素 的不同，它作用的靶點是細菌中蛋白水解酶復合物的核心催化部分。蛋白水解酶通常結 構嚴密，受到與水解酶有關的腺苷合成酶家族及一些輔助蛋白的調控，當脂肪酰環酯肽 A54556與蛋白水解酶的核心催化部分結合后就消除了這些調控機制。然后細菌內蛋白的 降解將陷入無序狀態，這些沒有受到調控的降解將會阻止細菌細胞的分離，最終使得細 胞凋亡。因此，脂肪酰環酯肽AM556是一類新型的脂肪酰環酯肽類抗菌肽，極有可能成 為一種用于治療革蘭氏陽性菌感染的抗生素。目前，脂肪酰環酯肽AM556是由夏威夷鏈 球菌NRRL15010發酵制得，產量有限，它們及其有更好活性的結構類似物化學合成意義 重大。發明內容
要解決的技術問題
為了避免現有技術的不足之處，本發明提出一種固相合成制備脂肪酰環酯肽化 合物的方法，通過選擇合適的起始氨基酸、酯化及環合方法，解決了脂肪酰環酯肽酯化 不完全及環合困難的問題。
技術方案
—種脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于步驟如下
步驟1:將氨基樹脂加入反應器中，再加入脫除芴甲氧羰基試劑反應，再洗滌 樹脂，稱取相當于樹脂摩爾比2-5倍上載量的氨基酸加入反應器中，加入活化劑1-羥基 苯并三唑和縮水劑二異丙基碳二亞胺，其中氨基酸、活化劑、縮水劑三者的摩爾比例為 1:1:1;
所述脫除芴甲氧羰基試劑為用吡啶的10-30%的N，N 二甲基甲酰胺溶液，摩爾 比例過量1-3倍，反應時間為15-30分鐘；
步驟2:按照步驟1的方法依次連接上其它氨基酸和脂肪酸，獲得保護的直鏈多
肽，結構式為
權利要求
1. 一種脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于步驟如下步驟1:將氨基樹脂加入反應器中，再加入脫除芴甲氧羰基試劑反應，再洗滌樹 脂，稱取相當于樹脂摩爾比2-5倍上載量的氨基酸加入反應器中，加入活化劑1-羥基 苯并三唑和縮水劑二異丙基碳二亞胺，其中氨基酸、活化劑、縮水劑三者的摩爾比例為 1:1:1;所述脫除芴甲氧羰基試劑為用吡啶的10-30%的N，N 二甲基甲酰胺溶液，摩爾比例 過量1-3倍，反應時間為15-30分鐘；步驟2:按照步驟1的方法依次連接上其它氨基酸和脂肪酸，獲得保護的直鏈多肽， 結構式為.OI>nabo=cfX—C—C—CHII- ^ IO NH麵旨Pro ProSa—OTrt NHR^o其中Aa6為任意氨基酸，X = NH;步驟3:在反應器中加入脫三苯甲基試劑浸沒反應物反應1-5分鐘，重復3次，洗滌 干凈，采用活性酯法連接側鏈氨基酸，得到保護的環合前體化合物，結構式為ODmabo=cIXc—C—CHII h2 IO NH 樹脂ProProSer-0-Aa5-NH"Fmoc；NHR&O其中Aa5、Aa6為任意氨基酸，X = NH ；所述的脫三苯甲基試劑是指體積比為1 5 94的三氟乙酸、三異丙基硅烷、二氯 甲烷；所述的活化酯法是將樹脂、4-二甲氨基吡啶、N-芴甲氧羰基-氨基酸、二環己基碳 二亞胺、1-羥基苯并三唑，五者的摩爾比例為1 0.4 4 4 2，后三者用二甲基甲 酰胺和四氫呋喃的混合溶劑溶解，常溫反應0.5小時后加入樹脂中，再加入4-二甲氨基 吡啶，常溫反應5小時以上，分別用N，N-甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇、二氯甲烷洗 滌樹脂；步驟4:在樹脂中加脫除芴甲氧羰基試劑反應，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂； 加入2%的胼反應2分鐘，重復三次；最后分別用N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、乙 醇、二氯甲烷依次洗滌3次樹脂；步驟5:在樹脂上環合時，需要添加環合劑六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷，1-羥基苯并三唑，N，N-二異丙基乙胺。它們的摩爾比例為樹脂六氟磷酸苯并 三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷1-羥基苯并三唑N，N-二異丙基乙胺的摩爾比例為 1:5:5: 0.1，有機溶劑用N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷、三氯甲烷、四氫呋喃中 的一種或幾種的混合溶劑，室溫反應12小時以上，分別用N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲 烷、乙醇、二氯甲烷依次洗滌3次樹脂得到環合化合物，結構式為
2.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于采用“王樹脂” 替代步驟1中的氨基樹脂，且不用脫除芴甲氧羰基試劑反應洗滌樹脂；步驟2獲得保護的 直鏈多肽結構式中X = 0；步驟3得到的環合前體化合物結構式中X = 0；步驟5環合化合物結構式中X = 0 ；步驟6脂肪酰環酯肽結構式中X = 0。
3.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述脫除芴甲氧 羰基試劑的反應為兩次，第一次時間為5 15分鐘，第二次時間為5 15分鐘。
4.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述步驟1中的氨 基酸為 Fmoc-Asp—ODmab 或者 Fmoc-Glu—ODmab。
5.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述步驟2中的氨 基酸為N-芴甲氧羰基_氨基酸，相對于樹脂上載量的2-5倍。
6.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述每連接一個 氨基酸都要經過kaiser test,如反應呈現陽性則重復連接氨基酸。
7.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述脫除芴甲氧 羰基保護后都要進過kaiser test，如反應呈現陰性則重復脫除芴甲氧羰基保護。
8.根據權利要求1所述的脂肪酰環酯肽的合成方法，其特征在于所述步驟6處理干燥是指將剪切液用氮氣或者空氣吹干，加入冰乙醚沉淀析出固體，離心干燥得到脂肪酰 環酯肽并回收乙醚。
全文摘要
本發明涉及一種固相合成制備脂肪酰環酯肽化合物的方法，步驟為將脫除芴甲氧羰基保護后的氨基樹脂、Fmoc-Asp-Odmab、活化劑、縮水劑直鏈多肽；在反應器中加入脫三苯甲基試劑浸沒反應物反應，采用活性酯法連接側鏈氨基酸得到保護的環合前體化合物；在樹脂中加脫除芴甲氧羰基試劑反應，用N，N-二甲基甲酰胺洗滌樹脂；在樹脂中加入環合劑，得到環十肽產品。本發明成功合成了此類化合物及其類似物。此方法簡單，合成產率高，適合于有類似結構的環酯肽的合成。
文檔編號C07K1/04GK102020703SQ20101013204
公開日2011年4月20日 申請日期2010年3月25日 優先權日2010年3月25日
發明者任錦, 尚曉婭, 張瑞潔, 徐春蘭, 李洋, 牛衛寧, 王秋雨, 欽傳光 申請人:西北工業大學