專利名稱：：一種來自中藥提取物的血根堿的離子對化合物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種來自中藥提取物的血根堿的離子對藥物和制備方法，以及該藥物在抗菌方面具體是在人用藥、獸用藥以及日化產(chǎn)品中的制藥用途，特別是涉及含有血根堿與有機酸生成的離子對化合物用于獸藥或日化用品的制備，特別指在動物抗菌方向的獸藥及藥物飼料添加劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：近年來，由于人類對于抗生素的濫用，細菌對各類抗生素的耐藥性一直呈現(xiàn)快速上升趨勢。中國是世界上濫用抗生素最為嚴重的國家之一，由此造成的細菌耐藥性問題尤為突出。臨床分離的一些細菌對某些藥物的耐藥性已居世界首位。例如，上海感染的金黃色葡萄球菌中，80X已經(jīng)產(chǎn)生了對青霉素G的耐藥性。凱福隆、頭孢三嗪等第三代的頭孢類菌抗生素的應(yīng)用已日趨普遍，抗生素品種的選用明顯超前。喹諾酮類抗生素進入我國僅僅20多年，耐藥率已經(jīng)達60%70%。許多常用抗生素抗菌效能日漸減低，抗生素耐藥已成為全球公共衛(wèi)生面臨的難題。世界衛(wèi)生組織(WorldHealthOrganization)稱，面對近半個世紀以來迅速增長的抗生素耐藥問題，醫(yī)學(xué)界束手無策。在畜牧產(chǎn)業(yè)中，細菌的耐藥性問題同樣也非常嚴重?，F(xiàn)代化的規(guī)模養(yǎng)殖使得仔豬哺乳期從5-6周縮短到3-4周，雖然最大程度發(fā)揮了母豬的繁殖性能，但不可避免地產(chǎn)生一些不利影響斷奶后仔豬腹瀉發(fā)生頻率明顯增大、仔豬生長受阻、死亡率增加和額外的治療費用加大，而增加了養(yǎng)殖成本。為了預(yù)防腹瀉和提高生產(chǎn)性能，經(jīng)常在斷奶仔豬和生長育肥豬的日糧中添加抗菌性飼料添加劑，如抗生素或抗生素樣生長促進因子。然而，最近幾年公眾對動物產(chǎn)品病原體的耐受性和抗生素殘留的關(guān)注日益增加，迫使人們?nèi)ラ_發(fā)對消費者沒有危害，同時又能起到抗菌作用、預(yù)防腹瀉發(fā)生的替代產(chǎn)品。在現(xiàn)代中獸藥誕生之前，幾千年來中獸藥為我國的畜牧業(yè)發(fā)展做出了重大貢獻，例如中草藥在針對動物的殺菌、消炎方面中藥體現(xiàn)出特有的作用?；谥嗅t(yī)藥理論，大多數(shù)清熱燥濕類中藥均具有程度不等的殺(抑)菌活性，并已廣泛應(yīng)用于獸醫(yī)領(lǐng)域，且在治療細菌感染方面取得了一些成績。由于中藥的特殊性，細菌較少對中藥產(chǎn)生耐藥性，研究具有高效、廣譜、低耐藥性的中藥藥物，對于治療細菌性炎癥具有強烈的現(xiàn)實意義。其中，作為某些由來自中草藥天然成分組成的生物堿與有機酸生成的離子對化合物具有生物堿和有機酸的抗菌活性，并且生物堿和有機酸可能產(chǎn)生協(xié)同作用，從而增強離子對化合物的抗菌活性和擴大抗菌譜，在體內(nèi)發(fā)揮類似于抗生素添加劑的預(yù)防動物疾病和促進生長作用。血根堿為苯并菲啶類生物堿，主要分布在罌粟科、蕓香科、小檗科等植物中。血根堿主要從罌粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及蕓香科植物如雙面針、飛龍掌血中提取分離得到或通過合成制備。其藥理作用主要為抗菌、抗炎、殺蟲、殺蛆、改善肝臟功能、抗肝纖維化、增強免疫力、抗腫瘤等，因其在藥理方面的獨特作用已受到高度重視。最新發(fā)現(xiàn)血根堿能降低四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠模型肝臟組織TGF-P1和a-SMA，從而保護肝臟。血根堿也能夠抑制高糖誘導(dǎo)的乳鼠心肌細胞形態(tài)和功能的改變，并能抑制PKC-a、PKC-132、NF-kB和C-fos的表達和活性，對高糖環(huán)境中的心肌細胞具有保護作用。血根堿分子式C2。H1404N+;分子量332.32，結(jié)構(gòu)式如下在使用來自中草藥(罌粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及蕓香科植物如雙面針、飛龍掌血)中提取分離得到或通過合成制備的血根堿的研究中，除了使用單一血根堿成分用于臨床或畜牧生產(chǎn)中，目前也出現(xiàn)了將血根堿與其他成分進行聯(lián)合使用的趨勢。例如，中國專利申請200610136957.4、"血根堿或白屈菜紅堿在血吸蟲病防治上的應(yīng)用"中提到將血根堿與白屈菜紅堿分別進行鹽化處理并混合后以用于防治血吸蟲病，獲得了良好的協(xié)同治療效應(yīng)，同時鹽化處理也提高了藥物的生物利用度。然而，上述方法集中于將二者進行混合或是單一處理，通過聯(lián)合使用來產(chǎn)生協(xié)同作用，并且所獲得的聯(lián)合藥物并不是單一藥物，其理化穩(wěn)定性和生物利用度均不如純化合物成分。中國專利CN100572380C公開了一種從中藥黃連中提取的小檗堿和另一種中藥成分魚腥草素鈉鹽通過化合反應(yīng)來生成一種小檗堿離子對化合物。該方法所制備的離子對化合物后，擴大了小檗堿的抗菌譜，增強了抗菌效果，減少耐藥菌株的產(chǎn)生，并且增加了小檗堿的脂溶性，為增加小檗堿的生物利用度提供了可能，從而有望提高小檗堿的臨床療效。然而，該方法必須選擇兩種理化性質(zhì)相似、且藥理作用相同的大分子基團進行化合，進入體內(nèi)后兩種分子分別離解發(fā)揮藥效，對于本發(fā)明而言意味著必須選擇一種與血根堿具有理化性質(zhì)相似、且藥理作用相同的中藥提取物的化合物進行處理，這不但提高了生產(chǎn)成本、加大了反應(yīng)難度，同時還得根據(jù)中草藥的"君、臣、佐、使"藥分關(guān)系來確定兩種藥用成分的主次/比例關(guān)系，以及必須依靠眾多的臨床實驗加以證明這兩種藥用活性成分能否產(chǎn)生協(xié)同效應(yīng)，這無疑增加了研發(fā)血根堿復(fù)合藥物的難度。綜合所述，目前需要提供一種能夠提高血根堿的生物利用度、擴大血根堿的抗菌譜、增強血根堿藥效、同時引入廉價高效的其他藥用成分的方法及其血根堿復(fù)合藥物的產(chǎn)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人基于通過多年對來自中草藥(罌粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及蕓香科植物如雙面針、飛龍掌血)提取物的血根堿研究積累，突破對于血根堿開發(fā)的傳統(tǒng)思路，即不再局限于選擇適于血根堿的合適載體或配伍劑，也不再于對血根堿選擇理化性質(zhì)相似、且藥理作用相同的其他藥用化合物來進行處理，而是創(chuàng)造性的選擇一種既能夠增強血根堿的抑菌協(xié)同效應(yīng)、增強血根堿作為藥用成分的穩(wěn)定性，特別是顯著提高生物利用度的一種中藥單一成分、同時屬于廉價高效且易進行化合反應(yīng)的簡單化合物。本發(fā)明將血根堿與有機酸鹽二者非常規(guī)地通過分子間靜電引力作用結(jié)合成新的配對化合物(即離子對化合物)，從而最終獲得一種來自中藥的新的離子對化合物。簡單而言，即發(fā)明人通過長期的工作積累，意外發(fā)現(xiàn)可以選擇一些與血根堿具有相同殺菌效應(yīng)的有機酸基團，將其與血根堿進行化合反應(yīng)，從而獲得能實現(xiàn)本發(fā)明目的的血根堿復(fù)合有機酸的離子對化合物。另一方面，本發(fā)明通過大量實驗選擇了多種適于本發(fā)明目的的有機酸。因此，本發(fā)明第一個目的是首次提供一種來源于中草藥(罌粟科植物如博落回、血水草、白屈菜等以及蕓香科植物如雙面針、飛龍掌血)或化合生成的血根堿的離子對化合物，其具有通式I所示的結(jié)構(gòu)，通式I其中，有機酸RC00—選自具有抗菌活性的綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、熊果酸、苯甲酸、水楊酸、酒石酸、乳酸、山梨酸、延胡索酸、蘋果酸、檸檬酸、馬來酸、甘草酸、甘草次酸、鼠尾草酸、對羥基桂皮酸、迷迭香酸、琥珀酸、阿魏酸、原兒茶酸、肉桂酸、咖啡酸、菊苣酸或土槿皮乙酸。在一個實施方案中，所述的有機酸RC00—優(yōu)選自綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、鼠尾草酸、迷迭香酸、苯甲酸或水楊酸。本發(fā)明第二個目的是提供制備上述單一化合物(即離子對化合物)的方法，包括根據(jù)以下反應(yīng)式進行制備所述的離子對化合物其中血根堿鹽與有機酸鈉鹽反應(yīng)完全后，產(chǎn)生沉淀，沉淀過濾、干燥得到所述的離子對化合物，血根堿鹽酸鹽來自中藥提取物的血根堿或化學(xué)合成的血根堿制成的鹽酸鹽。在一個實施方案中，上述反應(yīng)中將血根堿鹽和有機酸鈉鹽分別在6(TC-IO(TC下制成水溶液或飽和水溶液，過濾后再進行混合產(chǎn)生沉淀，過濾，干燥沉淀得到所述的離子對化合物，將所得的離子對化合物通過有機溶劑進行重結(jié)晶純化。本發(fā)明第三個目的是提供另一種制備上述單一化合物(即離子對化合物)的方法，包括(1)將血根堿鹽水溶液與有機酸鈉鹽水溶液混合，產(chǎn)生沉淀，沉淀經(jīng)過濾、干燥得離子對化合物；(2)將源自中藥提取物的血根堿或化學(xué)合成的血根堿溶解于有機溶劑中，然后加入有機酸攪拌直至反應(yīng)完全，濃縮干燥得離子對化合物；(3)將血根堿鹽、有機酸鈉鹽分別溶解于水中，然后將兩種溶液按等摩爾比進行混勻、攪拌得到大量沉淀，沉淀經(jīng)過濾、干燥得離子對化合物；或?qū)⒃醋灾兴幪崛∥锏难鶋A或化學(xué)合成的血根堿溶解于有機溶劑中，并將有機酸溶解于有機溶劑中，然后將兩種溶液按等摩爾比進行混合、攪拌直至反應(yīng)完全，濃縮干燥得離子對化合物；上述有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿溶劑。在一個實施方案中，上述方法還包括將所得的離子對化合物通過有機溶劑進行重結(jié)晶純化。在一個實施方案中，上述反應(yīng)還可以是血根堿鹽為鹽酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽或磷酸鹽；所述有機酸鈉鹽是由有機酸與NaOH、Na2C03或NaHC03反應(yīng)所得。本發(fā)明第四個目的提供一種上述方法所制備的血根堿的離子對化合物在制備抗菌消炎藥物中的用途，其中在一個實施方案中，所述的藥物是人用藥或獸用藥。本發(fā)明第五個目的提供含有上述血根堿的離子對化合物的除菌或消炎性日化產(chǎn)品，其中在一個實施方案中，所述的日化產(chǎn)品是化妝品、洗滌用品、口腔用品或身體清潔用品、香味劑、除臭劑、驅(qū)蟲滅害產(chǎn)品或其他日化產(chǎn)品等。本發(fā)明第六個目的是提供含有上述血根堿的離子對化合物的飼料添加劑或藥物飼料添加劑，其中在一個實施方案中，所述的飼料或飼料添加劑是家禽、牲畜或水產(chǎn)飼料添加劑或藥物飼料添加劑。定義除非特別指明，本發(fā)明所述的"離子對化合物"，或"離子對藥物"，是指大分子有機酸和有機堿通過分子間靜電吸引結(jié)合而生成的水不溶性化合物，具有親水性小，親脂性大的特點，其光譜也與形成離子對化合物之前不同。離子對化合物的形成改變了單體分子溶解性、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)，并可發(fā)揮各自活性，有可能產(chǎn)生協(xié)同作用，從而影響藥物療效；同時又易于穿透親脂性的細胞膜，改善吸收。"有機酸"是指一些具有酸性的有機化合物。最常見的有機酸是羧酸，其酸性源于羧基(-C00H)。除非特別指明，本發(fā)明所述的"有機酸"，又名"具有抗菌活性的有機酸"是某些中草藥的有效成分，多數(shù)具有抗真菌、抗細菌、抗病毒等生物活性。有機酸對動物胃腸的微生物區(qū)系有著不同的作用，因為主要有害微生物生長的適宜pH值環(huán)境多為中性，而乳酸桿菌等有益微生物適宜在酸性環(huán)境中生長繁殖，有機酸通過降低胃腸道環(huán)境的pH值來達到間接降低有害病菌數(shù)量的作用，另外，有機酸還可以通過破壞病菌的細胞膜、抑制細菌的基礎(chǔ)代謝功能、調(diào)節(jié)細菌內(nèi)的pH值和有毒陰離子在細菌內(nèi)的聚集，達到抗菌作用。由于pH值、濃度和解離狀態(tài)的不同，不同有機酸具有不同的抗菌效果。以下表1列出了本發(fā)明中所涉及的具有抗菌活性的有機酸結(jié)構(gòu)式表1有機酸的機構(gòu)式7<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>"除菌或消炎性日化產(chǎn)品"，指含有本發(fā)明離子對藥物的化妝品、洗滌用品、口腔用品或身體清潔用品、香味劑、除臭劑、驅(qū)蟲滅害產(chǎn)品或其他日化產(chǎn)品。常見的日化產(chǎn)品包括:美容化妝品、清潔化妝品、護膚品、發(fā)用化妝品、藥皂或香皂或洗手液、洗滌劑或洗滌液或洗衣粉、消毒液或消毒劑、洗手液或除垢劑、牙膏、漱口水、鞋油、地板蠟等。"含有上述血根堿的離子對化合物的飼料添加劑或藥物飼料添加劑"指用于預(yù)防動物疾病的非營養(yǎng)性飼料添加劑，這類添加劑對動物沒有營養(yǎng)作用，但是可以通過防治疫病、促進動物消化吸收等作用來達到促進動物生長、提高飼料報酬，降低飼料成本，獲取更大經(jīng)濟效益之目的。常見的"含有上述血根堿的離子對化合物的飼料添加劑"包括抑菌促生長劑(抗生素、抗菌劑等)、激素類添加劑、酶類添加劑、微生物添加劑、驅(qū)蟲藥物添加劑、中藥添加劑、鎮(zhèn)靜類添加劑等。有益效果1.本發(fā)明所制備的血根堿離子對化合物具有親水性小，親脂性大的特點，改變了單體分子溶解性理化性質(zhì)，又易于穿透親脂性的細胞膜，改善吸收；2.所制備的血根堿離子對化合物既可發(fā)揮各自活性，也有產(chǎn)生協(xié)同作用，從而提高了生物利用度，進一步提升藥物療效；3.本發(fā)明利用血根堿與綠原酸，沒食子酸、苯甲酸等有機酸生成的離子對化合物，大大增加了血根堿的穩(wěn)定性，有利于長期保存和體內(nèi)使用；4.通過將血根堿離子對化合物的抗菌活性測定、生物利用度研究和毒理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，該離子對化合物可增強血根堿抗菌效果、提高了血根堿的生物利用度，并為擴大血根堿的抗菌譜提供了可能，減少耐藥菌株的產(chǎn)生。具體實施例方式如前所述，根據(jù)前面所公開的內(nèi)容，本領(lǐng)域的專業(yè)人員可最大限度地應(yīng)用本發(fā)明。應(yīng)當指出，本發(fā)明旨在提供一種新的抗菌消炎藥物。在以下具體實施方式部分提供了足以證實所述藥物的療效之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)制藥用途、日化產(chǎn)品用途以及飼料用途的常規(guī)技術(shù)，完全可以預(yù)料出本發(fā)明的血根堿離子對化合物能夠用于上述領(lǐng)域且能實現(xiàn)預(yù)期功能，因此下面的實施例可以幫助本領(lǐng)域的技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。血根堿制備工藝以博落回提取物或其他含血根堿的植物提取物為原料，加入適量水，加熱至609(TC溶解，濾過，濾液流經(jīng)裝好的大孔吸附樹脂層析柱中，再分別用不同濃度的乙醇_水溶液梯度洗脫，分別收集主要含有血根堿的洗脫液，再用乙醇或甲醇在適當條件下進行結(jié)晶，晶體加熱溶解于甲醇或乙醇中，加入鹽酸或硫酸與血根堿成鹽生成血根堿鹽酸鹽或血根堿硫酸氫鹽，所得血根堿的鹽酸鹽或硫酸氫鹽的純度達98%以上(HPLC)。實施例1:血根堿鹽酸鹽與莽草酸鈉生成的離子對化合物的制備方法將血根堿鹽酸鹽(由湖南省中藥提取工程研究中心提供)10.0g溶于1000mL水中，加熱至9(TC以上，直至血根堿鹽酸鹽全都溶解，制成血根堿鹽酸鹽水溶液(A);將莽草酸鈉鹽1.lg溶于200mL水中配制成莽草酸鈉鹽水溶液(B);在90°C以上條件下將(B)緩慢加入到(A)中，9(TC不斷攪拌，反應(yīng)30min，冷卻至室溫，過濾沉淀，用純凈水充分洗滌沉淀，沉淀6(TC真空干燥，即得淡黃色晶體，進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿莽草酸的離子對化合物。實施例2:血根堿與鼠尾草酸生成的離子對化合物的制備方法將血根堿(由湖南省中藥提取工程研究中心提供)10.Og溶于2000mL乙醇中，攪拌溶解。然后直接加入鼠尾草酸10.Og，常溫下攪拌45min，濃縮，干燥得到沉淀物，再用乙酸乙酯精制得到淡黃色晶體，通過進行^-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿鼠尾草酸的離子對化合物。實施例3:血根堿鹽酸鹽與迷迭香酸鈉生成的離子對化合物的制備方法取血根堿鹽酸鹽(由湖南省中藥提取工程研究中心提供)4.5g溶于1L水中，然后加入4.Og迷迭香酸鈉，于8(TC攪拌30min，冷卻后，過濾沉淀，洗滌，干燥，再進一步用甲醇精制得到淡黃色晶體。通過進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿迷迭香酸鈉的離子對化合物。實施例4:血根堿與綠原酸生成的離子對化合物的制備方法取血根堿(由湖南省中藥提取工程研究中心提供)3.5g溶解于甲醇溶劑中，再直接加入3.5g綠原酸。常溫攪拌30min，濃縮，干燥，再進一步用乙醇精制得到淡黃色晶體。通過進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿綠原酸的離子對化合物。實施例5:血根堿鹽酸鹽與苯甲酸鈉生成的離子對化合物的制備方法取血根堿鹽酸鹽(由湖南省中藥提取工程研究中心提供)4.5g溶于1L水中，然后加入1.5g苯甲酸鈉，于8(TC攪拌30min，冷卻后，過濾沉淀，洗滌，干燥，再進一步用甲醇精制得到淡黃色晶體。通過進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿綠原酸的離子對化合物。實施例6:血根堿與沒食子酸生成的離子對化合物的制備方法取血根堿3.5g溶解于丙酮溶劑中，再取沒食子酸2.Og溶解于丙酮中，將兩者溶液混合，常溫下攪拌30min。濃縮，干燥，將所得沉淀用乙酸乙酯精制得淡黃色晶體。通過進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿沒食子酸的離子對化合物。實施例7:血根堿與水楊酸生成的離子對化合物的制備方法取水楊酸1.4g溶解乙酸乙酯100ml中，然后加入.3.5g血根堿，常溫下攪拌45min，濃縮，干燥，將所得沉淀用甲醇精制的淡黃色晶體。通過進行力-NMR、"C-NMR、MS分析得到的化合物為血根堿水楊酸的離子對化合物。實施例8:血根堿離子對化合物的體外抗菌活性測定將上述所制備的血根堿與綠原酸生成的離子對化合物、血根堿與水楊酸生成的離子對化合物、血根堿與苯甲酸生成的離子對化合物、血根堿與沒食子酸生成的離子對化合物、血根堿與迷迭香酸生成的離子對化合物生成的離子對化合物與血根堿進行抑菌活性測定。菌種系湖南省微生物研究所分離鑒定所得，菌種分別是大腸桿菌，金黃色葡萄球菌試驗樣品的配置濃度均為2000i！g/mL;抗菌過程中設(shè)相應(yīng)溶解基質(zhì)對照；采用瓊脂平板擴散法和試管稀釋法測定。MIC測定方法取無菌試管13支，排成一排，除第1管加入1.8mLMH用肉湯稀釋1000倍的菌液，其余每管加入MH肉湯lmL，在第1管加入抗菌藥物原液0.2mL混勻，然后吸取lmL至第2管，混勻后再吸取lmL至第3管，如此連續(xù)倍比稀釋至第12管，并從第12管中吸取lmL棄去，第13管為不含藥物的生長對照。37t:培養(yǎng)24h，以無細菌生長的最低濃度為最小抑菌濃度(MIC)。表2體外抗菌實驗結(jié)果n=6<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注A:血根堿；AL:血根堿與綠原酸生成的離子對化合物；AS:血根堿與水楊酸生成的離子對化合物；AB:血根堿與苯甲酸生成的離子對化合物；AM:血根堿與沒食子酸生成的離子對化合物；AD:血根堿與迷迭香酸生成的離子對化合物。經(jīng)體外抗菌活性測定實驗，上述研究血根堿離子對化合物對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌具有較強的抑菌作用，其MIC均低于血根堿，說明由于血根堿與有機酸存在的協(xié)同作用，增強了血根堿和有機酸生成的離子對化合物的抗菌效果。實施例9:血根堿離子對化合物的生物利用度試驗采用HPLC-UV法研究血根堿、血根堿與綠原酸生成的離子對化合物、血根堿與水楊酸生成的離子對化合物、血根堿與苯甲酸生成的離子對化合物、血根堿與沒食子酸生成的離子對化合物、血根堿與迷迭香酸生成的離子對化合物生成的離子對化合物共5種離子對化合物以灌胃方式給藥后的血藥濃度，比較藥代動力學(xué)參數(shù)，以揭示藥物在動物體內(nèi)動態(tài)變化的規(guī)律及其生物利用度。儀器與試劑Agilent1100高效液相色譜儀，QuatPump泵，VWD紫外-可見檢測器，Agilent全自動進樣器，Agilent色譜工作站。移液器，GILSON;FZQ_2型渦旋混合器(江蘇泰縣醫(yī)療器械廠)；TGL-16G高速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。甲醇、乙腈、冰醋酸均為色譜純，鹽酸、乙酸乙酯為分析純，水為亞沸蒸餾水。實驗動物成年Beagle犬，體重(9kg±0.6kg)，雌雄各半。色譜條件色譜柱反相C18柱LichrospherCR(4.6mmX250mrn，5ym);流動相乙腈_1%的冰醋酸水溶液(10:90);流速1.OmLmin—1;柱溫30。C;波長:284nm;進樣量:20iiL。血漿樣品處理取血漿樣品0.5mL，加入1%冰醋酸50mL，渦旋混勻，再加入(3mo1L—1)鹽酸溶液300mL，邊加邊渦旋，加入乙酸乙酯萃取4次，每次2mL，分離乙酸乙酯層，合并，于37t:水浴下N2吹干，殘渣用甲醇200mL溶解，離心，取上清液備用。進樣20yL，記錄峰面積，采用外標標準曲線法以峰面積比值定量。樣品采集與處理給藥前采集空白血樣，給藥組于O，O.25，0.5，1.0，1.5，2.0，4.0，5.0，7.0，9.0，12.0，24.Oh在下肢靜脈取血5mL，將采集到的血樣置含肝素離心管中，離心(2000rmin—010min，取上層血槳-20。C儲存。藥代動力學(xué)參數(shù)的計算DAS軟件擬合計算，確定房室模型，主要藥動學(xué)參數(shù)見表3。表3Beagle犬灌胃藥物后的主要藥代動力學(xué)參數(shù)12<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注A:血根堿；AL:血根堿與綠原酸生成的離子對化合物；AS:血根堿與水楊酸生成的離子對化合物；AB:血根堿與苯甲酸生成的離子對化合物；AM:血根堿與沒食子酸生成的離子對化合物；AD:血根堿與迷迭香酸生成的離子對化合物。結(jié)果表明，血根堿離子對化合物組與血根堿組比較，Tmax縮短，Cmax提高，生物利用度大大提高。實施例10:血根堿與莽草酸離子對化合物對于家畜白痢疾病的作用根據(jù)將實施例1的方法，制備的血根堿與莽草酸離子對化合物。按0.05%的重量比降血根堿與莽草酸離子對化合物與飼料混合，用于喂養(yǎng)10只仔豬(其中6只為白痢仔豬)，統(tǒng)計5天內(nèi)的出現(xiàn)白痢的仔豬數(shù)目，得到表4.表4藥物對家畜白痢疾病的治療作用<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>由表4可知，處理組的仔豬3天后基本上不再有白痢仔豬，并且仔豬的白痢癥狀得到明顯的改善。相比之下，對照組的健康仔豬在第4天全部患上白痢癥。實施例11:血根堿與莽草酸離子對化合物對于家禽白痢疾病的作用根據(jù)將實施例1的方法，制備的血根堿與莽草酸離子對化合物。按0.01%的重量比降血根堿與莽草酸離子對化合物與飼料混合，用于喂養(yǎng)30只商品代羅曼蛋雞(其中15只為白痢雞)，統(tǒng)計5天內(nèi)的出現(xiàn)白痢的雞數(shù)目，得到表5。表5藥物對家禽白痢疾病的治療作用序30雞臼色糞便的雞數(shù)號0天1天2天3天4天5天1對照組1519252730302處理組15117110由表5可知，處理組3天后基本上不再有白痢雞，并且白痢癥狀得到明顯的改善。相比之下，對照組健康雞在第4天全部患上白痢癥。綜合所述，本發(fā)明的血根堿離子對化合物具有親水性小，親脂性大的特點，改變了血根堿單體分子溶解性、穩(wěn)定性等理化性質(zhì)；通過對血根堿、有機酸和該離子對化合物的抗菌活性測定，發(fā)現(xiàn)血根堿和有機酸存在協(xié)同作用，兩者生成的離子對化合物的抗菌效果明顯增強；另外，通過對血根堿和該離子對化合物生物利用度研究，發(fā)現(xiàn)有機酸與血根堿生成離子對化合物的生物利用度明顯增加，從而可有效地提高血根堿的臨床療效。因此，本發(fā)明的血根堿離子對化合物具有廣闊的制藥用途前景，并且還可用于動物飼料、日化產(chǎn)品的生產(chǎn)中。權(quán)利要求一種血根堿的離子對化合物，其具有通式I所示的結(jié)構(gòu)，其中，有機酸RCOO-選自具有抗菌活性的綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、熊果酸、苯甲酸、水楊酸、酒石酸、乳酸、山梨酸、延胡索酸、蘋果酸、檸檬酸、馬來酸、甘草酸、甘草次酸、鼠尾草酸、對羥基桂皮酸、迷迭香酸、琥珀酸、阿魏酸、原兒茶酸、肉桂酸、咖啡酸、菊苣酸或土槿皮乙酸。FSA00000015382100011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的離子對化合物，其中所述的有機酸RC00—選自綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、鼠尾草酸、迷迭香酸、苯甲酸或水楊酸。3.權(quán)利要求1或2的離子對化合物的制備方法，包括按以下反應(yīng)制備得到的離子對化合物其中血根堿鹽與有機酸鈉鹽反應(yīng)完全后，產(chǎn)生沉淀，沉淀過濾、干燥得到所述的離子對化合物，血根堿鹽酸鹽來自中藥提取物的血根堿或化學(xué)合成的血根堿制成的鹽酸鹽；所述的有機酸鈉鹽中的有機酸選自具有抗菌活性的綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、熊果酸、苯甲酸、水楊酸、酒石酸、乳酸、山梨酸、延胡索酸、蘋果酸、檸檬酸、馬來酸、甘草酸、甘草次酸、鼠尾草酸、對羥基桂皮酸、迷迭香酸、琥珀酸、阿魏酸、原兒茶酸、肉桂酸、咖啡酸、菊苣酸或土槿皮乙酸。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中上述反應(yīng)中將血根堿鹽和有機酸鈉鹽分別在60°C-IO(TC下制成水溶液或飽和水溶液，過濾后再進行混合產(chǎn)生沉淀，過濾，干燥沉淀得到所述的離子對化合物，將所得的離子對化合物通過有機溶劑進行重結(jié)晶純化。5.根據(jù)權(quán)利要求3任一項所述的離子對化合物的制備方法，由以下三種方式中的任一種方式反應(yīng)制備得到(1)將血根堿鹽水溶液與有機酸鈉鹽水溶液混合，產(chǎn)生沉淀，沉淀經(jīng)過濾、干燥得離子對化合物；(2)將源自中藥提取物的血根堿或化學(xué)合成的血根堿溶解于有機溶劑中，然后加入有機酸攪拌直至反應(yīng)完全，濃縮干燥得離子對化合物；(3)將血根堿鹽、有機酸鈉鹽分別溶解于水中，然后將兩種溶液按等摩爾比進行混勻、攪拌得到大量沉淀，沉淀經(jīng)過濾、干燥得離子對化合物；或?qū)⒃醋灾兴幪崛∥锏难鶋A或化學(xué)合成的血根堿溶解于有機溶劑中，并將有機酸溶解于有機溶劑中，然后將兩種溶液按等摩爾比進行混合、攪拌直至反應(yīng)完全，濃縮干燥得離子對化合物；上述有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯或氯仿溶劑。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，還包括將所得的離子對化合物通過有機溶劑進行重結(jié)晶純化。7.根據(jù)權(quán)利要求3-6任一項所述的方法，所述的是血根堿鹽為鹽酸鹽、硫酸氫鹽、硝酸鹽或磷酸鹽；所述有機酸鈉鹽是由有機酸與NaOH、Na2C03或NaHC03反應(yīng)所得。8.權(quán)利要求1或2所述的離子對化合物，或權(quán)利要求3-7所制備的離子對化合物在制備抗菌消炎藥物中的用途，其中所述的藥物是人用藥或獸用藥。9.含有權(quán)利要求1-7任意一項所述離子對化合物的除菌或消炎性日化產(chǎn)品。10.含有權(quán)利要求l-7任意一項所述離子對化合物的的飼料添加劑或藥物飼料添加劑，其中所述的飼料添加劑或藥物飼料添加劑是家禽、牲畜或水產(chǎn)飼料添加劑或藥物飼料添加劑。全文摘要本發(fā)明涉及血根堿離子對化合物的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明中血根堿與有機酸反應(yīng)，有機酸主要包括綠原酸、沒食子酸、莽草酸、齊墩果酸、熊果酸、苯甲酸、水楊酸、酒石酸、乳酸、山梨酸、延胡索酸、蘋果酸、檸檬酸、馬來酸、甘草酸、甘草次酸、鼠尾草酸、對羥基桂皮酸、迷迭香酸、琥珀酸、阿魏酸、原兒茶酸、肉桂酸、咖啡酸、菊苣酸或土槿皮乙酸。血根堿與有機酸生成的離子對化合物具有抗菌生物活性，本發(fā)明涉及含有血根堿離子對化合物在藥品、獸藥或日化用品的應(yīng)用。文檔編號C07C67/28GK101781306SQ201010110350公開日2010年7月21日申請日期2010年2月9日優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日發(fā)明者曾建國,杜方麓,談滿良,賀曉華申請人:曾建國