專利名稱：一種從干羅漢果中提取多種活性成分的方法
技術領域：
本發明涉及一種天然產物的分離方法，更特別地說，是指一種采用閃式輔助提取 技術，通過樹脂分離得到羅漢果中多種活性成分的制備方法。
背景技術：
在2005年出版的《中國藥典》中收錄，羅漢果為葫蘆科植物。其成熟果實味甘、性 涼，具有清熱潤肺，滑腸通便等功效。羅漢果是我國傳統的藥用植物，其營養價值高，富含 糖、蛋白質、維生素、脂肪酸及多種氨基酸和微量元素，被譽為“東方神果”。羅漢果中的主要活性成分是強甜味的三萜類成分——羅漢果甜苷，約占干果重量 的4%。它是一類低熱量的天然甜味劑，比蔗糖甜300倍，但熱量僅為蔗糖的五十分之一。 因羅漢果甜苷甜度高，熱量低，水溶性及穩定性好，食用安全，我國已批準該產品為食品添 加劑，對肥胖癥及糖尿病患者可作為甜味劑代替蔗糖。因目前只重視對羅漢果甜苷的提取，丟棄殘渣和其余成分，這樣不僅造成資源的 浪費，而且給環境帶來污染。本發明專利申請采用閃式輔助提取技術，結合樹脂層析，分離 出多種有效成分，使羅漢果藥材得到最大限度的利用，從而降低生產成本，提高產品的附加值。
發明內容
本發明的目的是提出一種從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，屬于天然產物 有效成分的提取分離技術領域。先將干羅漢果的果皮、果肉分開，再將皮或肉分別加水閃 提，離心得沉淀物和上清。上清分別經兩次XAD層析，或上聚酰胺-XAD層析，D213柱脫色， 得甜苷、類黃酮；上述沉淀物經酸性溶液提取，D113柱分離得生物堿；廢液濃縮，乙醇分級 沉淀得多糖、低聚糖；廢渣用胃酶水解得多糖、低聚糖、氨基酸。本發明采用先進的提取技 術，實現了對羅漢果藥材的綜合利用，降低了生產成本，提高產品的附加值和經濟效益。本發明的從干羅漢果中提取多種活性成分包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入提取容器中，在溫度2 2 °C 30 °C下浸泡 30min 120min后，在轉速3500r/min 5500r/min下攪拌破碎，并勻菜30s 60s后制得 第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加5g 15g的去核干羅漢果；第二步離心分離將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速4000r/min 5000r/min下離 心分離lOmin 20min后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入質量百分比濃度0. 5% 的NaCl，再用質量百分 比濃度25%的NaOH調節第一上層清液的pH值為8 10，制得第一上柱液；
(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱 體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中無甜 苷；(3-D)柱體再用質量百分比濃度40% 60%的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在壓力 0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏，然后加入50ml 100ml去離子水溶
解浸膏制得第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出 柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度60°C 80°C下濃縮至浸膏， 浸膏在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第一產物——甜苷；第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用質量百分比濃度18%的HC1調節pH值為3 5，制得 第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱 體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中無多 酚；(4-D)柱體再用質量百分比濃度50% 80%的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在壓力 0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C 70°C條件下干 燥5h 10h后制得第二產物——多酚；第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度50°C 70°C下濃縮 至浸膏，然后在浸膏中加入質量百分比濃度70% 80%的乙醇，在0°C 4°C條件下靜置 20min 40min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入20ml 50ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管 中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，
得到第三上層清液和第三沉淀物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第三產 物——游離多糖；(5-F)在上述第二上層清液中加入1500ml 2000ml乙醇，并在0°C 4°C條件下 靜置20min 40min后，制得第二醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70% 80%;(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄 去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第四產 物——游離低聚糖；
第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml 400ml的HC1，在轉速為100r/min 500r/ min、水浴溫度40°C 60°C條件下攪拌反應180min 360min后，制得第二液態混合物；所 述HC1的質量百分比濃度為；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分 流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中無生 物堿；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3%的HC1洗脫生物堿，HC1洗脫液在壓力 0. 08MPa 0. 09MPa、溫度50°C 70°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C 70°C條件下干 燥5h 10h后制得第五產物——生物堿；第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入300ml 600ml去離子水，0. 5g 1. Og胃蛋白酶，用 HC1調節pH值為2 3，在轉速為lOOr/min 500r/min、水浴溫度40°C 60°C條件下攪拌 反應300min 600min后，再在水浴溫度100°C條件下反應2min 3min，然后冷卻至22°C 35°C，制得酶解液；所述HC1的質量百分比濃度為18% ；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件 下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉 淀物；(7-C)用質量百分比濃度25%的NaOH調節第六上層清液的pH值為6 8，再裝入 離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件下離心分離lOmin 20min 后，取下離心管，得到第七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度60°C 80°C下濃縮至 50ml 100ml ；再加入150ml 200ml乙醇，并在0°C 4°C條件下靜置20min 40min后， 制得第三醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70% 80% ；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第六產 物——結合多糖；(7-G)在上述第八上層清液中加入1000ml 1500ml乙醇，0°C 4°C條件下靜置 20min 40min后，制得第四醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70% 80% ；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；(7-1)第九沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第七產 物——結合低聚糖；第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏；該浸膏然后在溫度50°C 70°C下干燥5h 10h后制得第八產物——氨基酸。所述的從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，100g的干羅漢果中能夠提取出純 度為90. 16士3%的3. 58g 3. 76g的甜苷、8. 04g 9. 32g的生物堿、純度為68. 63士3% 的3. 22g 3. 36g的多酚、純度為50. 13士3%的12. 13g 12. 41g的游離多糖、純度為 28. 97士3%的11. 35g 11. 72g的游離低聚糖、純度為46. 88士3%的2. 24g 2. 61g的結 合多糖、純度為34. 29 士 3 %的2. 10g 2. 47g的結合低聚糖、純度為60. 13 士 3 %的8. 09g 8. 78g的氨基酸。本發明制備方法的優點在于(1)在本發明中的第一步中采用閃式輔助提取技術，與傳統方法相比，在室溫下操 作，條件溫和，不耐熱的活性成分免遭破壞，而且提取時間短，溶劑用量少，提取效率高。(2)聚酰胺樹脂層析柱除鞣質等雜質效果好，可減輕XAD-16柱和D213柱的壓力， 大孔樹脂用量可減少50%，獲得的甜苷純度高，收率高，色澤好，且類黃酮純度高。(3)本發明采用XAD-16層析，甜苷收率和純度都高于其它非極性大孔樹脂。(4)本發明首次發現羅漢果含大量生物堿，這對研究羅漢果生物堿的活性和作用 機理，找到一個新的途徑。(5)本發明從層析后的廢液廢渣中提取了生物堿、多糖、低聚糖和氨基酸。這樣綜 合利用羅漢果，既避免資源的浪費，又降低了成本，提高了經濟效益。
圖1是本發明從干羅漢果中提取多種活性成分的工藝流程圖。圖2是采用實施例1的方法制得羅漢果中甜苷的高效液相色譜圖。圖2A是廣西桂林思特新技術公司出售羅漢果中甜苷的高效液相色譜圖。
具體實施例方式下面將結合附圖和實施例對本發明做進一步的詳細說明。參見圖1所示，本發明是一種從干羅漢果中提取出多種活性成分的方法，該提取 方法中包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入提取容器中，在溫度22 °C 30 °C下浸泡 30min 120min后，在轉速3500r/min 5500r/min下攪拌破碎，并勻菜30s 60s后制得 第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加5g 15g的去核干羅漢果；此步驟中的提取容器選取北京金鼎科技發展有限公司生產的JHBE-50型閃式提 取器。在本發明中，在22°C 30°C低溫環境下采用閃式提取方式對浸泡在去離子水中 的干羅漢果進行快速勻漿，不破壞羅漢果的活性成分的同時提取效率高。第二步離心分離將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速4000r/min 5000r/min下離 心分離lOmin 20min后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；
在本發明中，離心后的第一液態混合物在離心管中分為第一上層清液和第一沉淀 物；為了獲得多種活性成分(即多個產物，如甜苷、生物堿、多酚、游離多糖、游離低聚糖、結 合多糖、結合低聚糖和氨基酸)，本發明將分別對第一上層清液和第一沉淀物進行后續處理 進行詳細說明。第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入0.5% (質量百分比濃度)的NaCl，再用25% (質量百分比濃度)的NaOH調節第一上層清液的pH值為8 10，制得第一上柱液；(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱 體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中不含有 甜苷；在本發明中，柱液中是否有甜苷的檢測方法為薄層色譜法(色譜條件硅膠G薄層 板，展開劑為正丁醇-乙醇-水，體積比8 2 3，甜苷的比移值為0.4)；(3-D)柱體再用40% 60% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在 壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏，然后加入50ml 100ml去離子 水溶解浸膏制得第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出 柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度60°C 80°C下濃縮至浸膏， 浸膏在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第一產物(即甜苷)。從羅漢果中提取得到的甜苷是一類低熱量的天然甜味劑，比蔗糖甜300倍，但熱 量僅為蔗糖的五十分之一。我國已批準該產品為食品添加劑，對肥胖癥及糖尿病患者可作 為甜味劑代替蔗糖。1995年，在《中國中藥雜志》上“羅漢果中總皂甙的含量測定”文獻中結果得到羅 漢果中一般含甜苷3. 81 %。采用本發明工藝制得的甜苷收率(即甜苷重量占原料重量的百 分比)較高，達到3. 76%，說明本工藝對甜苷進行了更有效的提取；與市售甜苷樣品(廣西 桂林思特新技術公司，甜苷含量70 %左右)相比，本工藝制得的甜苷純度較好，達到90 %以 上。第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用18% (質量百分比濃度)的HC1調節pH值為3 5， 制得第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱 體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中不含有 多酚；在本發明中，柱液中是否有多酚的檢測方法為紫外分光光度法；(4-D)柱體再用50% 80% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在 壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C 70°C條件 下干燥5h 10h后制得第二產物(多酚)；
現代醫學研究表明，多酚類物質具有降血糖、降血脂、抗氧化、清除機體內自由基， 抗衰老，增強機體免疫力的功能。第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度50°C 70°C下濃縮至 浸膏，然后在浸膏中加入質量百分比濃度為70% 80%的乙醇，在0°C 4°C條件下靜置 20min 40min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入20ml 50ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管 中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，
得到第三上層清液和第三沉淀物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第三產物(游 離多糖)；(5-F)在上述第二上層清液中加入1500ml 2000ml的乙醇(質量百分比濃度為 70% 80% )后，在0°C 4°C條件下靜置20min 40min，制得第二醇沉混合物；(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄 去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第四產物(游 離低聚糖)；第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml 400ml的HC1 (質量百分比濃度為)， 在轉速為100r/min 500r/min、水浴溫度40°C 60°C條件下攪拌反應180min 360min 后，制得第二液態混合物；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分 流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中不含 有生物堿；在本發明中，生物堿檢測方法為碘化鉍鉀反應，若出現紫棕色沉淀則判斷有生物 堿存在；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3%的HC1洗脫生物堿，HC1洗脫液在壓力 0. 08MPa 0. 09MPa、溫度50°C 70°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C 70°C條件下干 燥5h 10h后制得第五產物(生物堿)；采用第六步驟的工藝從羅漢果中提取出生物堿。生物堿是一類具有抗菌消炎、抗 腫瘤等功能的活性物質。第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入300ml 600ml去離 水，0. 5g 1. 0g胃蛋白酶，用HC1 (質量百分比濃度為18%)調節pH值為2 3，在轉速為lOOr/min 500r/min、水浴 溫度40°C 60°C條件下攪拌反應300min 600min后，再在水浴溫度100°C條件下反應 2min 3min，然后冷卻至22°C 35 °C，制得酶解液；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件 下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉 淀物；(7-C)用25% (質量百分比濃度)的NaOH調節第六上層清液的pH值為6 8， 再裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度60°C 80°C下濃縮至 50ml 100ml，再加入150ml 200ml的乙醇(質量百分比濃度為70 % 80 % )后，在 0°C 4°C條件下靜置20min 40min，制得第三醇沉混合物；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第六產物 (結合多糖)；(7-G)在上述第八上層清液中加入1000ml 1500ml的乙醇(質量百分比濃度為 70% 80% )后，在0°C 4°C條件下靜置20min 40min，制得第四醇沉混合物；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min 5000r/ min的條件下離心分離lOmin 20min后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；(7-1)第九沉淀物在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第七產物(結 合低聚糖)；多糖在抗病毒、抗凝血、抗衰老等方面發揮著重要的生物活性作用；低聚糖具有提 高機體免疫力、抗菌消炎、降血脂、防治齲齒和護肝等多種生物活性。第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0. 08MPa 0. 09MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏， 浸膏再在溫度為50°C 70°C條件下干燥5h 10h后制得第八產物(氨基酸)。氨基酸是生物體內構成蛋白質分子的基本單位，與生物的生命活動有著密切的關 系，它是生物體內不可缺少的營養成分之一。氨基酸在體內具有特殊的生理功能，一些氨基 酸還具有治療作用，例如谷氨酸、精氨酸、天門冬氨酸、胱氨酸等用于治療肝病疾病、消化道 疾病、腦病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、」L科營養和解毒等。在本發明中，三個實施例中提取制得的各產物均以100g的干羅漢果進行計量。實施例1 本實施從干羅漢果中提取出多種活性成分包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入閃式提取容器中，在溫度25°C下浸泡120min 后，在轉速3500r/min下攪拌破碎，并勻漿60s后制得第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加10g的去核干羅漢果；第二步離心分離
將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速5000r/min下離心分離15min 后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入0.65% (質量百分比濃度)的NaCl，再用25%(質量百分比濃度)的NaOH調節第一上層清液的pH值為9.5，制得第一上柱液；(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱 體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中不含有 甜苷；(3-D)柱體再用60% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在壓力 0. 09MPa、溫度40°C下濃縮至浸膏，然后加入80ml去離子水溶解浸膏制得第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出 柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0. 09MPa、溫度70°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為60°C 條件下干燥8h后制得第一產物(即甜苷)。100g的干羅漢果中可以提取出純度為90. 16%的3. 76g的甜苷。純度采用高效液 相色譜法測試，如圖2、圖2A所示，兩圖相比，本發明方法制得的甜苷純度略高。色譜條件 Waters Sunfire C18色譜柱(150_X4. 6_，5 y m)；流動相A為水，B為乙腈；梯度洗脫條 件為0 40min，5 68%乙腈；流速為lml/min ；檢測波長為203nm ；進樣量為15 yl ；柱溫 為 22°C。第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用18% (質量百分比濃度)的此1調節？11值為4.5，制 得第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱 體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中不含有 多酚；在本發明中，多酚檢測方法為紫外分光光度法；(4-D)柱體再用75% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在壓力 0. 09MPa、溫度40°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C條件下干燥8h后制得第二產物(多 酚)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為68. 63%的3. 36g的多酚。純度測試采用用 分光光度計測定在760nm下的吸光度(紫外分光光度法)。第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0. 09MPa、溫度60°C下濃縮至浸膏，然后在浸膏中 加入質量百分比濃度為75%的乙醇，在4°C條件下靜置30min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下 離心分離15min后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入30ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下離心分離15min后，取下離心管，得到第三上層清液和第三沉淀
物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為60°C條件下干燥8h后制得第三產物(游離多糖)；(5-F)在上述第二上層清液中加入1800ml的乙醇(質量百分比濃度為75% )后， 在4°C條件下靜置30min，制得第二醇沉混合物；(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下 離心分離15min后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為60°C條件下干燥8h后制得第四產物(游離低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為50. 13 %的12. 41g的游離多糖、純度為 28. 97%的11. 72g的游離低聚糖。純度測試采用用分光光度計測定在620nm下的吸光度 (紫外分光光度法)。第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加350ml的HC1 (質量百分比濃度為)，在轉速為 300r/min、水浴溫度50°C條件下攪拌反應240min后，制得第二液態混合物；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下 離心分離15min后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分 流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中不含 有生物堿；在本發明中，生物堿檢測方法為碘化鉍鉀反應，若出現紫棕色沉淀則判斷有生物 堿存在；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3%的HC1洗脫生物堿，HC1洗脫液在壓力 0. 09MPa、溫度70°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第五產物(生 物堿)；100g的干羅漢果中可以提取出8. 32g的生物堿。由于生物堿在干羅漢果中為首次 發現，并且天然產物中生物堿存在的種類較多，故發明人未對其進行純度測試。第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入300ml去離子水，0. 5g胃蛋白酶，用HC1 (質量百分比 濃度為18% )調節pH值為2. 5，在轉速為300r/min、水浴溫度50°C條件下攪拌反應600min 后，再在水浴溫度10(TC條件下反應2min，然后冷卻至25°C，制得酶解液；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下離心分離 15min后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉淀物；(7-C)用25% (質量百分比濃度)的NaOH調節第六上層清液的pH值為7，再裝入 離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下離心分離15min后，取下離心管，得到第 七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0. 09MPa、溫度70°C下濃縮至60ml，再加入200ml的 乙醇(質量百分比濃度為70% )后，在4°C條件下靜置30min，制得第三醇沉混合物；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下離心分離15min后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第六產物(結合多糖)；(7-G)在上述第八上層清液中加入1500ml的乙醇(質量百分比濃度為70% )后， 在4°C條件下靜置30min，制得第四醇沉混合物；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為5000r/min的條件下 離心分離15min后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；(7-1)第九沉淀物在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第七產物(結合低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為46. 88%的2. 61g的結合多糖、純度為 34. 29%的2. 41g的結合低聚糖。純度測試采用用分光光度計測定在620nm下的吸光度(紫 外分光光度法)。第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0.09MPa、溫度45°C下濃縮至浸膏，浸膏再在溫度為 60°C條件下干燥8h后制得第八產物(氨基酸)。100g的干羅漢果中可以提取出純度為60. 13%的8. 32g的氨基酸。純度采用氨基 酸測定儀測試。實施例2 本實施從干羅漢果中提取出多種活性成分包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入提取容器中，在溫度30°C下浸泡30min后，在 轉速5500r/min下攪拌破碎，并勻漿30s后制得第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加5g的去核干羅漢果；第二步離心分離將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速4000r/min下離心分離20min 后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入(質量百分比濃度)的NaCl，再用25% (質量 百分比濃度)的NaOH調節第一上層清液的pH值為8，制得第一上柱液；(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱 體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中不含有 甜苷；在本發明中，甜苷檢測方法為薄層色譜法(色譜條件硅膠G薄層板，展開劑為正 丁醇-乙醇-水，體積比8 2 3，甜苷的比移值為0.4)；(3-D)柱體再用40% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在壓力 0. 08MPa、溫度50°C下濃縮至浸膏，然后加入50ml去離子水溶解浸膏制得第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出 柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0. 08MPa、溫度80°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為70°C 條件下干燥5h后制得第一產物(即甜苷)。
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100g的干羅漢果中可以提取出純度為89. 77%的3. 58g的甜苷。第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用18% (質量百分比濃度)的HC1調節pH值為3，制得 第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱 體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中不含有 多酚；在本發明中，多酚檢測方法為紫外分光光度法；(4-D)柱體再用50% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在壓力 0. 08MPa、溫度50°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第二產物(多 酚)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為67. 03%的3. 22g的多酚。第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0. 08MPa、溫度70°C下濃縮至浸膏，然后在浸膏 中加入質量百分比濃度為70%的乙醇，在0°C條件下靜置20min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下 離心分離20min后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入50ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管中，在轉 速為4000r/min的條件下離心分離20min后，取下離心管，得到第三上層清液和第三沉淀 物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第三產物(游離多糖)；(5-F)在上述第二上層清液中加入1500ml的乙醇(質量百分比濃度為70% )后， 在0°c條件下靜置20min，制得第二醇沉混合物；(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下 離心分離20min后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為70°C條件下干燥5h后制得第四產物(游離低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為49. 11 %的12. 13g的游離多糖、純度為 28. 01%的11. 35g的游離低聚糖。第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml的HC1 (質量百分比濃度為)，在轉速為 lOOr/min、水浴溫度40°C條件下攪拌反應180min后，制得第二液態混合物；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下 離心分離20min后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分 流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中不含 有生物堿；在本發明中，生物堿檢測方法為碘化鉍鉀反應，若出現紫棕色沉淀則判斷有生物堿存在；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3%的HC1洗脫生物堿，HC1洗脫液在壓力 0. 08MPa、溫度50°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50°C條件下干燥10h后制得第五產物(生 物堿)；100g的于羅漢果中可以提取出8. 04g的生物堿。第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入600ml去離子水，1. 0g胃蛋白酶，用HC1 (質量百分比 濃度為18% )調節pH值為2，在轉速為lOOr/min、水浴溫度60°C條件下攪拌反應300min 后，再在水浴溫度100°C條件下反應3min，然后冷卻至35°C，制得酶解液；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下離心分離 20min后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉淀物；(7-C)用25% (質量百分比濃度)的NaOH調節第六上層清液的pH值為6，再裝入 離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下離心分離20min后，取下離心管，得到第 七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0. 08MPa、溫度60°C下濃縮至100ml，再加入150ml 的乙醇(質量百分比濃度為80% )后，在0°C條件下靜置20min，制得第三醇沉混合物；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下 離心分離20min后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為50°C條件下干燥10h后制得第六產物(結合多糖)；(7-G)在上述第八上層清液中加入1000ml的乙醇(質量百分比濃度為80% )后， 在0°c條件下靜置20min，制得第四醇沉混合物；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min的條件下 離心分離20min后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；(7-1)第九沉淀物在溫度為50°C條件下干燥10h后制得第七產物(結合低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為45. 08%的2. 24g的結合多糖、純度為 31. 49%的2. 10g的結合低聚糖。第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0. 08MPa、溫度50°C下濃縮至浸膏，浸膏再在溫度為 70°C條件下干燥5h后制得第八產物(氨基酸)。100g的干羅漢果中可以提取出純度為58. 73%的8. 09g的氨基酸。實施例3 本實施從干羅漢果中提取出多種活性成分包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入提取容器中，浸泡90min后，在轉速4500r/min 下攪拌破碎，并勻漿45s后制得第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加15g的去核干羅漢果；第二步離心分離將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速4500r/min下離心分離lOmin
后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；
第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入0.5% (質量百分比濃度)的NaCl，再用25% (質 量百分比濃度)的NaOH調節第一上層清液的pH值為10，制得第一上柱液；(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱 體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中不含有 甜苷；在本發明中，甜苷檢測方法為薄層色譜法(色譜條件硅膠G薄層板，展開劑為正 丁醇-乙醇-水，體積比8 2 3，甜苷的比移值為0.4)；(3-D)柱體再用50% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在壓力 0. 085MPa、溫度40°C 50°C下濃縮至浸膏，然后加入50ml 100ml去離子水溶解浸膏制得 第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出 柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0.085MPa、溫度60°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為 50°C條件下干燥10h后制得第一產物(即甜苷)。100g的干羅漢果中可以提取出純度為90. 61%的3. 66g的甜苷。第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用18% (質量百分比濃度)的HC1調節pH值為5，制得 第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱 體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中不含有 多酚；在本發明中，多酚檢測方法為紫外分光光度法；(4-D)柱體再用60% (質量百分比濃度)的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在壓力 0. 085MPa、溫度45°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為60°C條件下干燥10h后制得第二產物 (多酚)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為66. 03%的3. 25g的多酚。第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0. 085MPa、溫度50°C下濃縮至浸膏，然后在浸膏 中加入質量百分比濃度為80%的乙醇，在2°C條件下靜置40min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下 離心分離lOmin后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入20ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管中，在轉 速為4500r/min的條件下離心分離lOmin后，取下離心管，得到第三上層清液和第三沉淀 物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為50°C條件下干燥10h后制得第三產物(游離多糖)；(5-F)在上述第二上層清液中加入2000ml的乙醇(質量百分比濃度為80% )后，在2°C條件下靜置40min，制得第二醇沉混合物；(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下 離心分離lOmin后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為50°C條件下干燥10h后制得第四產物(游離低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為50. 41 %的12. 38g的游離多糖、純度為 29. 07%的11. 6lg的游離低聚糖。第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加400ml的HC1 (質量百分比濃度為)，在轉速為 500r/min、水浴溫度60°C條件下攪拌反應360min后，制得第二液態混合物；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下 離心分離lOmin后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分 流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中不含 有生物堿；在本發明中，生物堿檢測方法為碘化鉍鉀反應，若出現紫棕色沉淀則判斷有生物 堿存在；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3%的HC1洗脫生物堿，HC1洗脫液在壓力 0. 085MPa、溫度60°C下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為60°C條件下干燥8h后制得第五產物(生 物堿)；100g的干羅漢果中可以提取出8. 23g的生物堿。第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入450ml去離子水，0. 8g胃蛋白酶，用HC1 (質量百分比 濃度為18% )調節pH值為3，在轉速為500r/min、水浴溫度40°C條件下攪拌反應450min 后，再在水浴溫度100°C條件下反應2. 5min，然后冷卻至30°C，制得酶解液；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下離心分離 lOmin后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉淀物；(7-C)用25% (質量百分比濃度)的NaOH調節第六上層清液的pH值為8，再裝入 離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下離心分離lOmin后，取下離心管，得到第 七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0. 085MPa、溫度80°C下濃縮至80ml，再加入180ml 的乙醇(質量百分比濃度為75% )后，在2°C條件下靜置40min，制得第三醇沉混合物；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下 離心分離lOmin后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為60°C條件下干燥8h后制得第六產物(結合多糖)；(7-G)在上述第八上層清液中加入1800ml的乙醇(質量百分比濃度為75% )后， 在2°C條件下靜置40min，制得第四醇沉混合物；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4500r/min的條件下 離心分離lOmin后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；
(7-1)第九沉淀物在溫度為60°C條件下干燥8h后制得第七產物(結合低聚糖)；100g的干羅漢果中可以提取出純度為45. 17%的2. 57g的結合多糖、純度為 35. 02%的2. 34g的結合低聚糖。第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0. 085MPa、溫度40°C下濃縮至浸膏，浸膏再在溫度為 50°C條件下干燥10h后制得第八產物(氨基酸)。100g的干羅漢果中可以提取出純度為60. 41%的8. 26g的氨基酸。
權利要求
一種從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，其特征在于該提取方法中包括有下列步驟第一步閃式輔助制第一液態混合物將去核的干羅漢果和去離子水放入提取容器中，在溫度22℃～30℃下浸泡30min～120min后，在轉速3500r/min～5500r/min下攪拌破碎，并勻漿30s～60s后制得第一液態混合物；用量100ml的去離子水中添加5g～15g的去核干羅漢果；第二步離心分離將第一液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速4000r/min～5000r/min下離心分離10min～20min后，取下離心管，獲得第一上層清液和第一沉淀物；第三步制甜苷(3-A)在第一上層清液中加入質量百分比濃度0.5％～1％的NaCl，再用質量百分比濃度25％的NaOH調節第一上層清液的pH值為8～10，制得第一上柱液；(3-B)將第一上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱體制得第一收集液；(3-C)待第一上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第一收集液中無甜苷；(3-D)柱體再用質量百分比濃度40％～60％的乙醇洗脫甜苷，乙醇洗脫液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度40℃～50℃下濃縮至浸膏，然后加入50ml～100ml去離子水溶解浸膏制得第二上柱液；(3-E)將第二上柱液通過D型大孔吸附樹脂層析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱體制得第二收集液；(3-F)將第二收集液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度60℃～80℃下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第一產物——甜苷；第四步制多酚(4-A)將上述第一收集液用質量百分比濃度18％的HCl調節pH值為3～5，制得第三上柱液；(4-B)將第三上柱液通過XAD型大孔吸附樹脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱體制得第三收集液；(4-C)待第三上柱液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第三收集液中無多酚；(4-D)柱體再用質量百分比濃度50％～80％的乙醇洗脫多酚，乙醇洗脫液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度40℃～50℃下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第二產物——多酚；第五步制游離多糖和游離低聚糖(5-A)將上述第三收集液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度50℃～70℃下濃縮至浸膏，然后在浸膏中加入質量百分比濃度70％～80％的乙醇，在0℃～4℃條件下靜置20min～40min后制得第一醇沉混合物；(5-B)將第一醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第二上層清液和第二沉淀物；(5-D)在第二沉淀物中加入20ml～50ml無水乙醇溶解后，裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第三上層清液和第三沉淀物，棄去第三上層清液；(5-E)第三沉淀物在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第三產物——游離多糖；(5-F)在上述第二上層清液中加入1500ml～2000ml乙醇，并在0℃～4℃條件下靜置20min～40min后，制得第二醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70％～80％；(5-G)將第二醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第四上層清液和第四沉淀物，棄去第四上層清液；(5-H)第四沉淀物在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第四產物——游離低聚糖；第六步制生物堿(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml～400ml的HCl，在轉速為100r/min～500r/min、水浴溫度40℃～60℃條件下攪拌反應180min～360min后，制得第二液態混合物；所述HCl的質量百分比濃度為1％；(6-B)將第二液態混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第五上層清液和第五沉淀物；(6-C)將第五上層清液通過D型離子交換樹脂層析柱，吸附生物堿，未吸附的成分流出柱體制得第四收集液；(6-D)待第五上層清液全部過柱后，用去離子水沖洗柱體，直至第四收集液中無生物堿；(6-E)柱體再用質量百分比濃度為3％的HCl洗脫生物堿，HCl洗脫液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度50℃～70℃下濃縮至浸膏，浸膏在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第五產物——生物堿；第七步制結合多糖和結合低聚糖(7-A)在第五沉淀物中加入300ml～600ml去離子水，0.5g～1.0g胃蛋白酶，用HCl調節pH值為2～3，在轉速為100r/min～500r/min、水浴溫度40℃～60℃條件下攪拌反應300min～600min后，再在水浴溫度100℃條件下反應2min～3min，然后冷卻至22℃～35℃，制得酶解液；所述HCl的質量百分比濃度為18％；(7-B)將酶解液裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第六上層清液和第六沉淀物，棄去第六沉淀物；(7-C)用質量百分比濃度25％的NaOH調節第六上層清液的pH值為6～8，再裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第七上層清液和第七沉淀物，棄去第七沉淀物；(7-D)將第七上層清液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度60℃～80℃下濃縮至50ml～100ml；再加入150ml～200ml乙醇，并在0℃～4℃條件下靜置20min～40min后，制得第三醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70％～80％；(7-E)將第三醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第八上層清液和第八沉淀物；(7-F)將第八沉淀物在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第六產物——結合多糖；(7-G)在上述第八上層清液中加入1000ml～1500ml乙醇，0℃～4℃條件下靜置20min～40min后，制得第四醇沉混合物；所述乙醇的質量百分比濃度為70％～80％；(7-H)將第四醇沉混合物裝入離心機的離心管中，在轉速為4000r/min～5000r/min的條件下離心分離10min～20min后，取下離心管，得到第九上層清液和第九沉淀物；(7-I)第九沉淀物在溫度為50℃～70℃條件下干燥5h～10h后制得第七產物——結合低聚糖；第八步制氨基酸將上述第九上層清液在壓力0.08MPa～0.09MPa、溫度40℃～50℃下濃縮至浸膏；該浸膏然后在溫度50℃～70℃下干燥5h～10h后制得第八產物——氨基酸。
2.根據權利要求1所述的從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，其特征在于第一 步中的提取容器為閃式提取器。
3.根據權利要求1所述的從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，其特征在于100g的 干羅漢果中能夠提取出純度為90. 16士3%的3. 58g 3. 76g的甜苷； 純度為68. 63士3%的3. 22g 3. 36g的多酚； 純度為50. 13士3%的12. 13g 12. 41g的游離多糖； 純度為28. 97士3%的11.35g 11. 72g的游離低聚糖; 純度為46. 88士3%的2. 24g 2. 61g的結合多糖； 純度為34. 29士3%的2. 10g 2. 47g的結合低聚糖； 純度為60. 13士3%的8. 09g 8. 78g的氨基酸； 8. 04g 9. 32g的生物堿。
全文摘要
本發明公開了一種從干羅漢果中提取多種活性成分的方法，屬于天然產物有效成分的提取分離技術領域。先將干羅漢果去核，再將果皮和果肉進行加水閃提、離心得沉淀物和上清。上清分別經兩次XAD層析，或上聚酰胺-XAD層析，D213柱脫色，得甜苷、多酚；上述沉淀物經酸性溶液提取，D113柱分離得生物堿；廢液濃縮，乙醇分級沉淀得多糖、低聚糖；廢渣用胃酶水解得多糖、低聚糖、氨基酸。本發明采用先進的提取技術，實現了對羅漢果藥材的綜合利用，降低了生產成本，提高產品的附加值和經濟效益。
文檔編號C07H3/06GK101851265SQ201010107948
公開日2010年10月6日 申請日期2010年2月5日 優先權日2010年2月5日
發明者劉兆, 劉燦, 劉靜, 楊曄, 王志濱, 榮永海, 榮龍 申請人:北京航空航天大學