抗cxcr4抗體及其用于治療癌癥的用途的制作方法

專利名稱：抗cxcr4抗體及其用于治療癌癥的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及能夠特異性結合趨化因子受體(CXCR)的新抗體，特別是鼠的、嵌合的和人源化的單克隆抗體，以及編碼這樣的抗體的氨基酸序列和核酸序列。根據一個方面，本發明涉及能夠特異性結合CXCR4和具有強抗腫瘤活性的新抗體、衍生化合物或功能片段。 本發明還包括這樣的抗體作為用于預防和/或治療性治療癌癥的藥物、以及在涉及癌癥診斷的方法或試劑盒中的用途。最后，本發明包括包含這樣的抗體與其它抗癌化合物比如抗體、毒素、細胞毒素/細胞增殖抑制劑的聯合或結合的組合物，及其用于預防和/或治療某些癌癥的用途。
背景技術：
趨化因子是特別地在免疫反應期間，控制白細胞沿著配體的化學梯度(稱為趨化因子梯度)遷移的小的分泌肽(ZlotnickA.等人，2000)。基于其NH2-末端半胱氨酸殘基的位置，將它們分成兩個主要的亞家族CC和CXC，其結合G蛋白偶聯受體，該受體的兩個主要的亞家族稱為CCR和CXCR。迄今，已經發現超過50個人類趨化因子和18個趨化因子受體。
許多癌癥具有復雜的趨化因子網狀，其影響腫瘤的免疫細胞浸潤以及腫瘤細胞生長、存活、遷移和血管生成。免疫細胞、內皮細胞和腫瘤細胞自身表達趨化因子受體，可以響應趨化因子梯度。人類癌癥活組織檢查樣品和小鼠癌癥模型的研究表明癌細胞趨化因子受體的表達與轉移能力的增加有關。來自不同癌癥類型的惡性細胞具有趨化因子受體表達的不同特征，但是趨化因子受體4(CXCR4)是最常發現的。來自至少23個不同類型的上皮起源、間充質起源和造血起源的人類癌癥的細胞表達CXCR4受體(Balkwill F.等人，2004)。
趨化因子受體4 (也稱為融合素、CD184、LESTR或HUMSTR)作為包含352個或360 個氨基酸的兩種同工型存在。殘基Asnll是糖基化的，殘基Tyr21是通過添加硫酸根修飾的，Cys 109和186使用受體細胞外部分上的二硫橋結合(Juarez J.等人，2004)。
該受體由不同類型的正常組織、天然的、非記憶T細胞、調節性T細胞、B細胞、嗜中性粒細胞、內皮細胞、初級單核細胞、樹突細胞、自然殺傷細胞、CD34+造血干細胞表達，且以低水平表達在心臟、結腸、肝、腎和腦中。CXCR4在白細胞轉運(trafficking)、B細胞淋巴細胞生成和髓細胞生成中起關鍵作用。
CXCR4受體在大量癌癥中過表達，所述癌癥包括但不限于結腸癌(Ottaiano A.等人，2004)、乳腺癌(Kato M.等人，2003)、前列腺癌(Sun Y. X.等人，2003)、肺癌[小細胞癌和非小細胞癌(Phillips R.J.等人，2003)]、卵巢癌(Scotton C. J.等人，2002)、胰腺 (Koshiba T.等人，2000)、腎癌、腦癌(Barbero S等人，200 、惡性膠質瘤和淋巴瘤。
迄今描述的CXCR4受體的唯一配體是基質細胞衍生的因子1 (SDF-I)或CXCL12。 SDF-I在淋巴結、骨髓、肝、肺中大量分泌，腎、腦和皮膚分泌的較少。CXCR4也被拮抗趨化因子識別，該拮抗趨化因子是III型人皰疹病毒編碼的病毒巨噬細胞炎癥蛋白II(vMIP-II)。
CXCR4/SDF-1軸在癌癥中起關鍵作用，直接參與遷移、侵入，導致轉移。實際上，癌細胞表達CXCR4受體，它們遷移并進入體循環。然后，癌細胞被滯留(arrested)在產生高水平SDF-I的器官的血管床中，其中SDF-I增殖、誘導血管生成和形成轉移性腫瘤(Murphy PM.，2001)。該軸也通過活化細胞外信號調節的激酶(ERK)途徑(Barbero S.等人，2003) 和血管生成(Romagnani P.，2004)參與細胞增殖。實際上，CXCR4受體及其配體SDF-I通過刺激VEGF-A表達顯然地促進了血管生成，所述VEGF-A表達轉而增加了 CXCR4/SDF-1的表達(Bachelder R. E.等人，200 。還已知與腫瘤相關的巨噬細胞(TAM)聚集在腫瘤的低氧區域，受刺激會與腫瘤細胞合作，促進血管生成。據觀察缺氧選擇性地上調包括TAM的各種細胞類型中CXCR4的表達(Mantovani A.等人，2004)。最近證實CXCR4/SDF-1軸調節 CXCR4+造血干細胞/祖細胞(HSC)的轉運/回位(homing)，可在新生血管形成中起作用。 證據顯示除了 HSC之外，功能性CXCR4也在來自其它組織(組織定向干細胞=TCSCs)的干細胞上表達，因此，SDF-I可在器官/組織再生所需的化學引誘CXCR4+TCSC中起關鍵作用， 但是這些TCSC也可以是癌癥發展的細胞起源(癌癥干細胞理論)。對于人類白血病，和最近對于幾種實體腫瘤，比如腦腫瘤和乳腺腫瘤，證實了癌癥的干細胞起源。存在幾個可以從正常CXCR4+組織/器官特異性干細胞衍生的CXCR4+的腫瘤實例，比如白血病、腦腫瘤、小細胞肺癌、乳腺癌、肝胚細胞瘤、卵巢癌和宮頸癌(Kucia M.等人，2005)。
使用針對CXCR4受體的單克隆抗體在體內證實了通過干擾CXCR4受體可以靶向癌癥轉移(MullerA.等人，2001)。簡而言之，已表明針對CXCR4受體(Mab 173R & D Systems) 的單克隆抗體顯著地減少了 SCID小鼠中常位乳腺癌模型(MDA-MB231)中淋巴結轉移的數量。另一個研究(Phillips R. J等人，2003)也顯示SDF-1/CXCR4軸在使用抗SDF-I多克隆抗體的常位肺癌模型(AM9)的轉移中起決定性作用，但是在該研究中，其對于腫瘤生長和血管生成都沒有作用。幾個其它的研究也描述了使用CXCR4的siRNA雙鏈(Liang Ζ.等人，200 生物穩定的CXCR4肽拮抗劑(Tamamura H.等人，200 對體內轉移的抑制，或使用 CXCR4 的小分子拮抗劑如 AMD 3100 (Rubin J. B.等人，2003 ；De Falco V.等人，2007)或 Mab (專利W02004/05^85 A2)對體內腫瘤生長的抑制。因此，CXCR4是證實的用于癌癥的治療靶點。
趨化因子受體2(CXCR2)是另一種趨化因子受體，也被描述為腫瘤學中感興趣的靶點。實際上，CXCR2在幾種腫瘤細胞類型中傳遞自分泌細胞生長信號，也可以通過促進血管生成間接地影響腫瘤生長(Tanaka T.等人2005)。
CXCR2趨化因子受體包含360個氨基酸。其主要在內皮細胞中表達，尤其是在新生血管形成期間。幾種趨化因子結合0乂0 2受體工乂(^5、-6、-7、11^-8、61 0-0、-0和y , 其屬于ERL+促血管生成趨化因子。所述CXCR2受體與CXCR4受體共享序列同源性37% 的序列同一性和48%的序列同源性。CXCR2/配體軸參與幾種腫瘤生長機制，比如轉移 (Singh RK.等人，1994)、細胞增殖(Owen J. D.等人，1997)和ERL+趨化因子介導的血管生成(Strieter R. M.等人，2004 ;Romagnani等人，2004)。最后，與腫瘤相關的巨噬細胞和嗜中性粒細胞是炎癥誘導的腫瘤生長的關鍵元素，趨化因子比如CXCL5、IL-8和GRO-α啟動嗜中性粒細胞的募集。
二聚化作為調節G蛋白偶聯受體功能的常見機制出現，所述G蛋白偶聯受體是趨化因子受體(Wang J.和Norcross Μ. 2008)。已經表明響應趨化因子結合的同源二聚化和異源二聚化是通過許多趨化因子受體的信號傳導的啟動和改變所需要的。不斷有證據支持所述受體二聚體或寡聚體可能是趨化因子受體的基本功能單元的概念。在沒有配體的情況下，發現了趨化因子受體二聚體，并且趨化因子誘導受體二聚體的構象變化。已知CXCR4與例如 δ 阿片類受體(DOR) (Hereld D.，2008)或 CCR2 (Percherancier Y.等人，2005)形成同二聚體，也形成異二聚體。在后一個實例中，來源于CXCR4的跨膜結構域的肽通過阻斷配體誘導的所述二聚體的構象轉換而抑制活化(Percherancier Y.等人，200 。另一個研究表明CXCR4-TM4肽(CXCR4的跨膜區的合成肽)降低了 CXCR4同二聚體的原體之間的能量轉移，并且抑制了惡性細胞中SDF-I誘導的遷移和肌動蛋白聚合(Wang J.等人，2006)。最近， 也描述了 CXCR7與CXCR4形成功能性異二聚體，并且增強了 SDF-I誘導的信號傳導(Sierro F.等人，2007)。組成型異二聚體的其它實例包括顯示CXCRl和CXCR2相互作用以及形成各自同二聚體的研究。對于它們中任一個與另外的GPCR(a (IA)腎上腺素受體)都沒有記錄到相互作用，表明CXCRl和CXCR2相互作用的特異性(Wilson S.等人，2005)。
如前所述，CXCR4和CXCR2受體是令人感興趣的腫瘤靶點。干擾那些受體將通過減少腫瘤細胞增殖、血管生成、腫瘤細胞遷移和侵入、腫瘤對嗜中性粒細胞和巨噬細胞的募集和通過抑制CXCR4癌干細胞，以非常有效的方式抑制腫瘤生長和轉移。
本發明的一個發明方面是產生誘導CXCR4 二聚體構象變化的小鼠單克隆抗體。 本發明包括能夠結合和誘導CXCR4同二聚體和CXCR4/CXCR2異二聚體構象變化的CXCR4 Mab 414H5(或其片段)，其在小鼠異種移植物和存活模型中都具有強抗腫瘤活性。本發明還包括能夠結合和誘導CXCR4同二聚體和CXCR4/CXCR2異二聚體構象變化的CXCR4 Mab 515H7(或其片段)，其具有強抗腫瘤活性。抗CXCR4 414H5 Mab抑制MDA-MB-231異種移植物模型中的腫瘤生長，并且增加了 U937模型中小鼠存活。它們誘導CXCR4同二聚體和 CXCR4/CXCR2異二聚體的構象變化。考慮到這兩種趨化因子受體在癌癥中的重要作用，這一新性質將是癌癥治療應用所感興趣的。
已經發現靶向受體的同二聚體和異二聚體增強了 Mab的治療效果。實際上，已經證實例如靶向IGF-IR和胰島素/IGF-I雜化受體的Mab (h7C10)對于抑制體內腫瘤生長比僅僅靶向 IGF-IR 的 Mab 更有效(Pandini G，2007)。
而且，抗CXCR4 Mabs 414H5 和 515H7 是 CXCR4 的沉默拮抗劑(silent antagonists)，在體外測定中，其不會改變基礎信號，但是在不同測定(GTP γ S結合、cAMP 釋放)中其抑制SDF-I誘導的信號傳導，并且也能夠在體外抑制SDF-I誘導的腫瘤細胞增殖和遷移。
充當部分激動劑或反向激動劑的分子在不存在配體的情況下顯示出內在活性。這些類型的分子甚至在不存在配體的情況下，分別穩定高親和力或低親和力的GPCR狀態，從而活化或抑制下游信號傳導級聯(Galandin等人，2007 ；Kenakin, 2004)。
在414H5和515H7Mab的情況下，這些分子表現為沉默拮抗劑，在不存在SDF-I的情況下對于CXCR4受體沒有任何內在活性。與部分或反向激動劑相比，該藥理學特征很可能與不利的副作用較少有關，如已經對于阿片類受體配體觀察到的(Bosier和Hermans， 2007)。實際上，414H5和515H7 Mab的功能活性完全取決于SDF-I的存在，在其中血流不表達、分泌或提供SDF-I配體的組織和器官中，沒有觀察到CXCR4受體活性的調節。因此，與具有陽性或陰性功效的其它CXCR4受體配體相比，414H5和515H7 Mab可能毒性更小。另外，沉默拮抗劑是藥理學空間(pharmacological space)中的少數種類(Wurch等人，1999，Kenakin,2004)。

發明內容
令人驚奇地，本發明人首次設法產生了能夠結合CXCR4，還能夠誘導CXCR4同二聚體和/或異二聚體構象變化的抗體。更特別地，本發明人的抗體能夠誘導CXCR4同二聚體和CXCR4/CXCR2異二聚體的構象變化。
在下文說明書中，復數表述“CXCR4 二聚體”必須理解為涵蓋CXCR4同二聚體和 CXCR4/CXCR2 異二聚體。
在此必須提及，在現有技術中從來沒有描述過這樣的抗體。而且，必須提及從來沒有描述過CXCR4/CXCR2異二聚體的存在。
本發明的一部分是發現了 CXCR4和C)(CR2形成的異二聚體的存在。
因此，在一個特別的方面，本發明涉及一種分離的復合物，其包含CXCR4/CXCR2異二聚體或由其組成。
優選地，所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的CXCR4復合部分是選自下述的兩個人類CXCR4同工型之一 -趨化因子(C-X-C基序)受體4同工型b[人類(Homo sapiens)]，其具有如在 Genbank登錄號NP_003458 SEQ ID No. 29下描述的序列 MEGISIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEPCFREENANFNKIFLPTIYSIIFLTGIVGN GLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGNFLC KAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKVVYVGVWIPA LLLTIPDFIFANVSEADDRYICDRFYPNDLWVVVFQFQHIMVGLILPGIVILSCYCI IISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFENT
VHKffISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGKRG GHSSVSTESESSSFHSS ； -趨化因子(C-X-C基序)受體4同工型a[人類]，其具有如在Genbank登錄號 ΝΡ_001008540 SEQ ID No. 30 下描述的序列 MSIPLPLLQIYTSDNYTEEMGSGDYDSMKEPCFREENANFNKIFLPTIYSIIFLTGI VGNGLVILVMGYQKKLRSMTDKYRLHLSVADLLFVITLPFWAVDAVANWYFGN FLCKAVHVIYTVNLYSSVLILAFISLDRYLAIVHATNSQRPRKLLAEKVVYVGVW IPALLLTIPDFIFANVSEADDRYICDRFYPNDLWVWFQFQHIMVGLILPGIVILSC YCIIISKLSHSKGHQKRKALKTTVILILAFFACWLPYYIGISIDSFILLEIIKQGCEFE NTVHKffISITEALAFFHCCLNPILYAFLGAKFKTSAQHALTSVSRGSSLKILSKGK RGGHSSVSTESESSSFHSS ； -替換性的轉錄剪接變體或其天然變體，其與具有SEQID No.四或30的這些b或 a同工型之一具有至少95%的同一性；和 -其片段，該片段能夠被其天然配體基質細胞衍生的因子1(SDF-I)特異性識別， 并且優選地具有至少100、150和200個氨基酸長度。
優選地，所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的CXCR2復合部分選自 -白細胞介素8受體β[人類]，其具有如在Genbank登錄號NP_001M8SEQ IDNo. 31下描述的序列 MEDFNMESDSFEDFWKGEDLSNYSYSSTLPPFLLDAAPCEPESLEINKYFVVIIY ALVFLLSLLGNSLVMLVILYSRVGRSVTDVYLLNLALADLLFALTLPIWAASKVN GWIFGTFLCKVVSLLKEVNFYSGILLLACISVDRYLAIVHATRTLTQKRYLVKFIC LSIWGLSLLLALPVLLFRRTVYSSNVSPACYEDMGNNTANWRMLLRILPQSFGFI VPLLIMLFCYGFTLRTLFKAHMGQKHRAMRVIFAVVLIFLLCWLPYNLVLLADT LMRTQVIQETCERRNHIDRALDATEILGILHSCLNPLIYAFIGQKFRHGLLKILAIH GLISKDSLPKDSRPSFVGSSSGHTSTTL ； -替換性的轉錄剪接變體或其天然變體，其與具有SEQID No. 31的白細胞介素8 受體β具有至少95%的同一性；和 -其片段，該片段能夠被IL-8特異性識別，并且優選地具有至少100、150和200個氨基酸長度。
在這一特別的方面，本發明還包括編碼包含所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的多肽的分離的RNA或DNA。
本發明進一步包括編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的核構建體，優選表達載體，比如質粒。
本發明進一步包括包含至少一種編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的部分 CXCR4的核構建體，優選表達載體，比如質粒，和編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的部分CXCR2的第二構建體，優選表達載體，比如質粒。
在這一方面，本發明進一步包括表達所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的重組宿主細胞的制備方法，其中該方法包括轉化所述宿主細胞的步驟 a)采用編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的核構建體，優選表達載體，比如質粒；或 b)采用至少一種編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的部分CXCR4的核構建體，優選表達載體，比如質粒，和編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的部分CXCR2的第二構建體，優選表達載體，比如質粒。
在一個優選的實施方式中，所述宿主細胞是真核細胞，比如哺乳動物細胞。
在一個優選的實施方式中，編碼所述CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的核構建體還編碼結合(特別地通過共價偶聯)CXCR4序列的第一標記，比如Iuc標記，和結合(特別地通過共價偶聯)CXCR2序列的第二標記，比如GFP標記(即，用于BRET分析)。
本發明還包括一種選擇具有抗癌活性或可用于制備用于治療癌癥的組合物的化合物的方法，其特征在于所述方法包括步驟 a)用待試驗的化合物接觸本發明的重組宿主細胞，該細胞表達所述CXCR4/CXCR2 異二聚體復合物；和 b)確定該化合物是否能夠調節，優選地抑制重組宿主細胞中該CXCR4/CXCR2異二聚體復合物的活性。
在第一個方面，本發明的一個主題是產生和選擇根據本發明的抗體的方法。
更特別地，本發明涉及一種選擇能夠抑制CXCR4的配體依賴性和配體非依賴性活化的抗CXCR4抗體，或其功能片段或衍生物之一的方法，所述方法包括下列步驟 i)篩選產生的抗體，并且選擇能夠特異性結合CXCR4和調節CXCR4活化的抗體； ii)測試步驟i)中的所選抗體，并且選擇能夠誘導CXCR4同二聚體構象變化的抗體，然后 iii)測試步驟ii)中的所選抗體，并且選擇能夠誘導CXCR4/CXCR2異二聚體構象變化的抗體。
表述“調節”必須理解為提高或抑制。優選地，本發明的所選抗體必須抑制CXCR4活化。
如前面解釋的，誘導CXCR4 二聚體的構象變化是本發明的一個重要方面，因為這樣的抗體將為更大群體的患者提供真正的好處。
抗體的產生可以由本領域技術人員通過任何已知方法來實現，所述方法比如例如用來自免疫的小鼠或與所選骨髓瘤細胞相容的其它物種(species)的脾細胞融合骨髓瘤細胞[Kohler和Milstein，1975，Nature，256 :495-497]。所述免疫的動物可以包括轉基因小鼠，其具有人類免疫球蛋白基因座，然后直接產生人類抗體。另一個可能的實施方式可以包括使用噬菌體展示技術篩選文庫。
篩選步驟i)可以由本領域技術人員通過任何已知方法或過程來實現。作為非限制性的實例，可以提及ELISA、BIAc0re、免疫組織化學、FACS分析和功能性篩選。一個優選的過程包括通過FACS分析CXCR4轉染子和至少一個腫瘤細胞以確保產生的抗體也能夠識別腫瘤細胞上的天然受體的篩選。該過程將更準確地描述在下列實施例中。
表述“調節CXCR4活化”旨在調節至少一個在如下實施例4、5、7和13中描述的活性 優選地調節 -特別地在穩定地表達人野生型CXCR4受體的真核轉化細胞膜，比如CHO-Kl膜上通過競爭，在細胞膜上受體CXCR4上的配體SDF-I的特異性結合(參見實施例4)； -在細胞膜上受體CXCR4上的GTPy S的特異性結合(參見實施例5)，特別地是在穩定地和組成性表達野生型CXCR4受體膜的真核轉化細胞膜上，比如ΝΙΗ-3Τ3細胞膜上； -CXCR4介導的cAMP生成的抑制(參見實施例7)；和 -CXCR4受體介導的細胞內鈣貯存的動員(參見實施例13)。
更優選地，至少一種這些活性的調節是抑制所述活性。
在本發明的方法選擇的步驟ii)和iii) 一個優選的實施方式中，所述步驟ii)和 iii)包括通過 BRET 分析分別在表達 C)(CR4-RLuc/C)(CR4-YFP 和 C)(CR4-Rluc/CXCR2-YFP 的細胞上評價抗體，并選擇能夠抑制BRET信號至少40%，優選地45%、50%、55%和最優選地 60%的抗體。
BRET技術是一種稱為蛋白質二聚化的代表技術[Angers等人，PNAS，，2000，97 3684-89]。
在該方法的步驟ii)和iii)中使用的BRET技術是本領域技術人員所熟知的，將詳細描述在下述實施例中。更特別地，BRET(生物發光共振能量轉移)是一種生物發光供體(Renilla熒光素酶(Rluc))和熒光受體GFP的突變體(綠色熒光蛋白)或YFP (黃色熒光蛋白)之間出現的非放射性能量轉移。在目前的情況下，使用EYFP(增強的黃色熒光蛋白)。轉移的功效取決于供體和受體之間的方向和距離。然后，只有當兩個分子非常接近(I-IOnm)時才出現能量轉移。該性質可用于進行蛋白質-蛋白質相互作用測定。實際上， 為了研究兩個配偶體(partners)之間的相互作用，將第一個配偶體遺傳融合至Renilla熒光素酶，將第二個配偶體遺傳融合至GFP的黃色突變體。融合蛋白通常(但不是必須地)在哺乳動物細胞中表達。在其膜可滲透性底物(腔腸素(coelenterazine))的存在下，Rluc 發射藍光。如果GFP突變體距離IUuc小于10納米，則可以出現能量轉移，可以檢測到另外的黃色信號。BRET信號測量為受體發射的光和供體發射的光的比例。因此，當使兩個融合蛋白接近時，或者如果構象變化引起mUC和GFP突變體接近時，BRET信號將增加。
如果BRET分析包括在優選的實施方式中，可以使用本領域技術人員已知的任何方法測量CXCR4 二聚體的構象變化。可以提及下述技術，但不限于此FRET(熒光共振能量轉移)、HTRF (均相時間分辨熒光)、FLIM(熒光壽命成像顯微鏡檢查)或SW-FCCS單波長熒光交叉相關光譜)。
也可以使用其它常規技術，比如免疫共沉淀、α篩選、化學交聯、雙雜交、親和色譜、ELISA 或 Far western 印跡。
在根據本發明的方法的一個特別的方面，步驟ii)包括在同時表達CXCR4_RLuc/ CXCR4-YFP的細胞上通過BRET分析來評價抗體和選擇能夠抑制至少40%的BRET信號的抗體。
在根據本發明方法的另一個特別的方面，步驟iii)包括在同時表達CXCR4_RLuc/ CXCR2-YFP的細胞上通過BRET分析來評價抗體和選擇能夠抑制至少40%的BRET信號的抗體。
在第二個方面，本發明的一個主題是通過所述方法獲得的分離的抗體或其功能片段或衍生物之一。所述抗體或其所述片段或衍生物之一能夠特異性結合人類CXCR4，而且， 如有必要，其優選地還能夠抑制其配體的自然連接，所述抗體也能夠誘導CXCR4 二聚體的構象變化。
表述“功能片段和衍生物”將在本說明書中隨后詳細地定義。
在此必須理解，本發明并不涉及天然形式的抗體，即其不是在其自然環境中，而是其能夠通過純化從天然來源分離或獲得，或者通過遺傳重組或通過化學合成獲得，以及其可以包含將進一步描述的非天然氨基酸。
更特別地，根據本發明的另一個方面，其要求一種抗體、或其功能片段或衍生物之一，所述抗體的特征在于其包含至少一個選自包含氨基酸序列SEQ ID No. 1至12的⑶R的互補決定區⑶R。
更特別地，根據本發明的另一個方面，其要求一種抗體、或其功能片段或衍生物之一，所述抗體的特征在于其包含至少一個選自包含氨基酸序列SEQ ID No. 2、5或40至49 的⑶R的互補決定區⑶R。
根據第一個方面，本發明涉及一種分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段，其包含至少一個選自序列SEQ ID No. 1、2、3、4、5或6的⑶R的⑶R或至少一個如下⑶R 在優化比對之后，其序列與序列SEQ ID No. 1、2、3、4、5或6具有至少80%，優選85%、90%、95% 和98%的同一性。
根據另一個方面，本發明涉及一種分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段，其包含至少一個選自序列SEQ ID No. 40、2、41、42、5或43的⑶R的⑶R或至少一個如下⑶R 在優化比對之后，其序列與序列SEQ ID No.40、2、41、42、5或43具有至少80%，優選85%、 90%、95%禾口 98%的同一性。
抗體的“功能片段”特別地指抗體片段，比如片段Fv、scFv(sc =單鏈)、Fab、 F(ab，)2、Fab，、SCFv-FC或雙特異抗體(diabodies)、或半衰期已增加的任何片段。這樣的功能片段將在本說明書中隨后詳細描述。
抗體的“衍生化合物”或“衍生物”特別地指由肽骨架和用于保持其識別CXCR4能力的原始抗體的至少一個⑶R組成的結合蛋白。這樣的衍生化合物是本領域技術人員熟知的，將在本說明書中隨后更詳細地描述。
更優選地，本發明包括通過遺傳重組或化學合成獲得的根據本發明的抗體、其衍生化合物或其功能片段，特別是嵌合的或人源化的。
根據一個優選的實施方式，根據本發明的抗體或其衍生化合物或功能片段的特征在于其由單克隆抗體組成。
“單克隆抗體”應理解為指來源于幾乎同質的抗體群的抗體。更特別地，除了可以以最小比例發現的很少可能天然出現的突變之外，群中的單個抗體是相同的。換句話說，單克隆抗體是由來源于單個細胞克隆(例如雜交瘤、用編碼同質性抗體的DNA分子轉染的真核宿主細胞、用編碼同質性抗體的DNA分子轉染的原核宿主細胞等)生長的同質性抗體組成，其特征通常是一個且僅僅一個種類和亞類的重鏈，和僅僅一種類型的輕鏈。單克隆抗體是高度特異性的，并針對單一抗原。另外，與通常包括針對各種決定簇或表位的各種抗體的多克隆抗體制劑相比，每個單克隆抗體針對抗原的單一表位。
在此必須理解，本發明并不涉及天然形式的抗體，S卩，其不是從其自然環境中取得的，而是通過純化從天然來源分離或獲得的，或者通過遺傳重組或化學合成獲得的，因而， 其可以帶有如下所述的非天然氨基酸。
更特別地，根據本發明的一個優選的實施方式，所述抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No. 1、2或3的 ⑶R的⑶R、或至少一個如下⑶R 在優化比對之后，其序列與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80 %，優選85 %、90 %、95%和98%的同一性；或者其包括重鏈，該重鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No. 4、5或6的⑶R的⑶R，或至少一個如下⑶R 在優化比對之后， 其序列與序列SEQ ID No. 4、5或6具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%的同一性。
根據另一個實施方式，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 1、2或3的三種⑶R中的至少一個，或至少一個在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 1、2或3具有至少80%，優選85%、90%、95%和98% 的同一性的序列。
在一個優選的方式中，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括包含下述三種⑶R的輕鏈分別為⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其中 -⑶R-Ll包含序列SEQID No. 1或9，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 1或9 具有至少80%同一性的序列； -⑶R-L2包含序列SEQID No. 2或10，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2或 10具有至少80%同一性的序列；和 -⑶R-L3包含序列SEQID No. 3，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 3具有至少80%同一性的序列。
根據一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 1的⑶R-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列SEQ ID No. 3 的 CDR-L3。
根據另一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 9的⑶R-Ll、序列SEQ ID No. 10的CDR-L2和序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3。
更特別地，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列SEQ ID No. 4、5或6的三種⑶R中的至少一個，或至少一個在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 4、5或6具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%的同一性的序列。
甚至更優選地，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括包含下述三種⑶R的重鏈分別為⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中 -CDR-Hl包含序列SEQ ID No. 4、7或11，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 4、 7或11具有至少80%同一性的序列； -⑶R-H2包含序列SEQID No. 5或12，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5或 12具有至少80%同一性的序列；和 -⑶R-H3包含序列SEQID No. 6或8，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 6或8 具有至少80%同一性的序列。
根據一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列SEQ ID No. 7的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 5的CDR-H2和序列SEQ ID No. 8 的 CDR-H3。
根據另一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列SEQ ID No. 11的⑶R-Hl、序列SEQ ID No. 12的CDR-H2和序列 SEQ IDNo. 6 的 CDR-H3。
更特別地，根據本發明的一個優選的實施方式，所述抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No.40、2或41 的⑶R的⑶R、或至少一個如下⑶R 在優化比對之后，其序列與序列SEQ ID No. 40、2或41 具有至少80 %，優選85 %、90 %、95 %和98 %的同一性；或者其包括重鏈，該重鏈包含至少一個選自氨基酸序列SEQ ID No. 42、5或43的⑶R的⑶R，或至少一個如下⑶R 在優化比對之后，其序列與序列SEQ ID No. 42、5或43具有至少80%，優選85%、90%、95%和98% 的同一性。
根據另一個實施方式，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 40、2或41的三種⑶R中的至少一個，或至少一個在優化比對之后，與序列SEQ ID似.40、2或41具有至少80%，優選85%、90%、95%和 98%同一性的序列。
在一個優選的方式中，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括包含下述三種⑶R的輕鏈分別為⑶R-L1、⑶R-L2和⑶R-L3，其中 -CDR-Ll包含序列SEQ ID No. 40或46，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 40或46具有至少80%同一性的序列； -⑶R-L2包含序列SEQID No. 2或47，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2或 47具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-L3包含序列SEQ ID No. 41，或在優化比對之后與序列SEQ ID No 41具有至少80%同一性的序列。
根據一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 40的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列SEQ ID No. 41 的 CDR-L3。
根據另一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序列SEQ ID No. 46的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 47的CDR-L2和序列 SEQ ID No. 41 的 CDR-L3。
更特別地，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列SEQ ID No. 42、5或43的三種⑶R中的至少一個，或至少一個在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 42、5或43具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
甚至更優選地，本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括包含下述三種⑶R的重鏈分別為⑶R-H1、⑶R-H2和⑶R-H3，其中 -CDR-Hl包含序列SEQ ID No. 42、44或48，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 42、44或48具有至少80%同一性的序列； -⑶R-H2包含序列SEQID No. 5或49，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5或 49具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-H3包含序列SEQ ID No. 45或43，或在優化比對之后與序列SEQ ID No. 45 或43具有至少80%同一性的序列。
根據一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈,該重鏈包含序列SEQ ID No. 44的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 5的CDR-H2和序列SEQ ID No. 45 的 CDR-H3。
根據另一個特別的實施方式，抗體或其衍生化合物或功能片段之一的特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列SEQ ID No. 48的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 49的CDR-H2和序列 SEQ ID No. 43 的 CDR-H3。
在本說明書中，術語“多肽”、“多肽序列”、“肽”和“連接抗體化合物或其序列的蛋白”是可互換的。
在此必須理解，本發明并不涉及天然形式的抗體，S卩，其不是從自然環境中取得的，而是通過純化從天然來源分離或獲得的，或者通過遺傳重組或化學合成獲得的，因而， 其可以帶有如下所述的非天然氨基酸。
在第一個實施方式中，互補決定區或CDR指如Kabat等人(Kabat等人，Sequences of proteins of immunological interest,第 5版,U. S. Department of Health and Human krvices，NIH，1991及后來的版本)定義的免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的高變區。存在三條重鏈⑶R和三條輕鏈⑶R。在此，術語“⑶R”和“⑶Rs”用于指，取決于具體情形，一種或多種或者甚至全部包含大多數如下氨基酸殘基的區域所述氨基酸殘基負責抗體與其識別的抗原或表位的結合親和力。
在第二個實施方式中，CDR區或CDR旨在指IMGT所定義的免疫球蛋白的重鏈和輕鏈的高變區。
將IMGT唯一的編號定義為與可變結構域比較，無論抗原受體或鏈類型或物種是什么[Lefranc M. -P. , Immunology Today 18,509(1997)/Lefranc Μ. -P. , The Immunologist, 7,132-136 (1999) /Lefranc, Μ. -P. , Pommie, C. , Ruiz, Μ. , Giudicelli, V., Foulquier, Ε. , Truong, L. , Thouvenin-Contet, V.禾口 Lefranc, Dev. Comp. Immunol. ,27, 55-77 (2003)]。在IMGT唯一編號中，保守性氨基酸總是具有相同位置，例如半胱氨酸23 (第 1個CYQ，色氨酸41 (保守性TRP)、疏水性氨基酸89、半胱氨酸104 (第2個CYQ、苯丙氨酸或色氨酸118 (J-PHE或J-TRP)。所述IMGT唯一編號提供了框架區(FR1-IMGT 位置1至26， FR2-IMGT :39 至 55，FR3-IMGT :66 至 104和 FR4-IMGT :118 至 128)和互補決定區 CDR1-IMGT 27至38，CDR2-IMGT 56至65和CDR3-IMGT :105至117的標準化定界。由于縫隙(gap) 代表未占用的位置，⑶R-IMGT長度(在括號之間顯示，并用點分開，例如[8. 8. 13])成為關鍵信息。在2D圖解中使用IMGT唯一編號，命名為IMGT Colliers de Perles[Ruiz, Μ.和 Lefranc, Μ. -P. ,Immunogenetics,53,857-883(2002)/Kaas,Q.禾口 Lefranc, Μ. -P. ,Current Bioinformatics，2，21-3(K2007)]，以及在 IMGT/3D 結構 DB 中的 3D 結構中使用[Kaas，Q.， Ruiz, Μ.禾口 Lefranc, Μ·-P. , T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res.，32，D208-D210(2004)] ο 存在三條重鏈⑶R和3條輕鏈⑶R。此處使用術語⑶R或⑶Rs用于指，取決于具體情形，包含大多數如下氨基酸殘基的這些區域中的一種或幾種或者甚至全部這些區域 所述氨基酸殘基負責抗體與其識別的抗原或表位的親和力結合。
為了更清楚，必須理解在下述說明書中，更特別地在表2和3中，⑶R以IMGT編號、 kabat編號和普通編號定義。
普通編號將每種⑶R的殘基部分重新分組，所述每種⑶R與IMGT和Kabat編號系統所定義的CDR相同。
IMGT編號系統根據如上定義的IMGT系統定義了⑶R，而kabat編號系統根據如上定義的kabat系統定義了⑶R。
更特別地，CDR-Ll由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ ID No. 1 (QSLYNSRTRKNY)和 kabat 編號系統中的 SEQ ID No. 9 (KSSQSLYNSRTRKNYLA)組成。
對于CDR-L2，其由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ ID No. 2 (WAS)和kabat 編號系統中的SEQ ID No. 10 (WASTRES)組成。
CDR-L3由三個編號系統中每個的SEQ ID No. 3 (KQSYNLRT)組成。
對于重鏈，⑶R-Hl由普通編號系統中的SEQ ID No. 4 (TDYY)、IMGT編號系統中的 SEQ ID No. 7 (GFTFTDYY)和 kabat 編號系統中的 SEQ ID No. ll(TDYYMS)組成。
CDR-H2由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ ID No. 5 (IRNKANGYTT)和kabat 編號系統中的 SEQ ID No. 12 (FIRNKANGYTTEYSASVKG)組成。
最后，CDR-H3由普通編號系統和kabat編號系統中的SEQ ID No. 6 (DIPGFAY)組成，然而其由IMGT編號系統中的SEQ ID No. 8 (ARDIPGFAY)組成。
更特別地，CDR-Ll由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ IDNo. 40 (QSLFNSRTRKNY)和 kabat 編號系統中的 SEQ ID No. 46 (KSSQSLFNSRTRKNYLA)組成。
對于CDR-L2，其由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ ID No. 2 (WAS)和kabat 編號系統中的SEQ ID No. 47 (WASARDS)組成。
CDR-L3由三個編號系統中每個的SEQ ID No. 41 (MQSFNLRT)組成。
對于重鏈，⑶R-Hl由普通編號系統中的SEQ ID No. 42 (DNY)、IMGT編號系統中的 SEQ ID No. 44 (GFTFTDNY)和 kabat 編號系統中的 SEQ ID No. 48 (DNYMS)組成。
CDR-H2由普通編號系統和IMGT編號系統中的SEQ ID No. 5 (IRNKANGYTT)禾Π kabat 編號系統中的 SEQ ID No. 49 (FIRNKANGYTTDYSASVRG)組成。
最后，CDR-H3由普通編號系統和kabat編號系統中的SEQ ID No. 43 (DVGSNYFDY) 組成，然而其由IMGT編號系統中的SEQ ID No. 45 (ARDVGSNYFDY)組成。
在本發明的意義上，兩個核酸或氨基酸序列之間的“百分數同一性”指兩個進行比較的序列之間在優化比對后獲得的相同的核苷酸或氨基酸殘基的百分數，該百分數是純粹統計學上的，并且兩個序列之間的區別沿其長度隨機分布。兩個核酸或氨基酸序列之間的比較通常通過比較兩個在優化比對后的序列而進行，所述比較能夠分段進行或使用“比對窗口”進行。用于比較的序列的優化比對，除了手工比較之外，可以通過Smith和Waterman 的局部同源性算法(1981) [Ad. App. Math. 2 :482]、通過Neddleman和^msch的局部同源性算法(1970) [J. Mol. Biol. 48 :443]、通過 Pearson 和 Lipman 的相似性查找法(1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85 :2444]或通過使用這些算法的計算機軟件(威斯康星遺傳學軟件包，遺傳學計算機組，575kience Dr.，Madison，WI 的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，或通過比較軟件BLAST NR或BLAST P)進行。
兩個核酸或氨基酸序列之間的百分數同一性通過比較兩個優化比對的序列確定， 其中，與用于兩個序列之間優化比對的參照序列相比，待比較的核酸或氨基酸序列可以具有添加或缺失。通過如下方法計算百分數同一性確定兩個序列，優選兩個全序列之間相同氨基酸核苷酸或殘基的位置數目，將相同位置的數目除以比對窗口中的位置總數，并將結果乘以100以獲得兩個序列之間的百分數同一性。
例如，可使用在網址 http//www. ncbi. nlm. nih. gov/gorf/bl2. html 可獲得的 BLAST 程序〃 BLAST 2 序列〃(Tatusova 等人，“Blast 2 sequences-a new tool for comparing protein and nucleotide sequences " , FEMS Microbiol,1999, Lett. 174 M7-250)，使用缺省參數(特別是參數“開放縫隙罰分” :5和“延伸縫隙罰分” :2 ；所選的矩陣是例如程序建議的"BLOSUM 62"矩陣)；直接通過該程序計算兩個待比較序列之間的百分數同一性。
對于顯示出與參照氨基酸序列具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列而言，優選的實例包括包含參照序列、某些修飾，特別是至少一個氨基酸的刪除、添加或置換、截短或延伸的那些。在置換一個或多個連續或不連續氨基酸的情況下， 其中被置換的氨基酸被“等同”氨基酸替換的置換是優選的。在此，表述“等同氨基酸”指可能被結構性氨基酸之一置換，然而并未改變相應抗體和下述定義的那些具體實例的生物活性的任何氨基酸。
等同氨基酸可根據其與被置換氨基酸的結構同源性或根據各種可能產生的抗體之間生物活性的比較性試驗結果而確定。
作為非限制性實例，下表1概述了可能進行卻沒有引起相應修飾抗體的生物活性發生顯著改變的可能的置換；在相同條件下，反向置換當然是可能的。
表 1
原始殘基置換Ala(A)Val，Gly，ProArg(R)Lys, HisAsn(N)GlnAsp(D)GluCys(C)SerGln(Q)AsnGlu(G)AspGly(G)AlaHis(H)ArgIle(I)LeuLeu (L)He, Val, MetLys (K)ArgMet (M)LeuPhe(F)TyrPro (P)AlaSer(S)Thr，CysThr(T)SerTrp(W)TyrTyr (Y)Phe, TrpVal (V)Leu, Ala 本領域技術人員已知，在本領域的現狀下，發現六個CDR之間的最大可變性(長度和組成)位于三條重鏈CDR上，更特別地，在這條重鏈的CDR-H3上。因此，很顯然本發明所述抗體或其衍生化合物或功能片段之一的優選特征性CDR是重鏈的三種CDR，即，對于 414H5，其是由分別根據IMGT和Kabat定義的序列SEQID No. 7、5、8禾口 11、12、6編碼的CDR， 對于515H7，其是由分別根據IMGT和Kabat定義的序列SEQ ID No. 44、5、45和48、49、43 編碼的⑶R。甚至更優選地，對于414H5，所述⑶R對應于由序列SEQ ID No. 8或6編碼的 CDR-H3，對于515H7，所述CDR對應于由序列SEQ ID No. 45或43編碼的CDR-H3。
在一個特定實施方式中，本發明涉及鼠抗體或其衍生化合物或功能片段。
本發明的另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 ⑶R-Ll，其具有序列SEQ ID No. 1，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 1具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列； ⑶R-L2，其具有序列SEQ ID No. 2，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；和 ⑶R-L3，其具有序列SEQ ID No. 3，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 3具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 ⑶R-Hl，其具有序列SEQ ID No. 4，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 4具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列； ⑶R-H2，其具有序列SEQ ID No. 5，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；和 ⑶R-H3，其具有序列SEQ ID No. 6，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 6具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
本發明的再另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 -CDR-Ll，其具有序列SEQ ID No. 1，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 1具有至少80%同一性的序列； -CDR-L2，其具有序列SEQ ID No. 2，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-L3，其具有序列SEQ ID No. 3，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 3具有至少80%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 -⑶R-Hl，其具有序列SEQID No. 7，或具有在優化比對之后與序列SEQ IDNo. 7具有至少80%同一性的序列； -CDR-H2，其具有序列SEQ ID No. 5，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-H3，其具有序列SEQ ID No. 8，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 8具有至少80%同一性的序列。
本發明的再另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 -CDR-Ll，其具有序列SEQ ID No. 9，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 9具有至少80%同一性的序列； -CDR-L2，其具有序列SEQ ID No. 10，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 10 具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-L3，其具有序列SEQ ID No. 3，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 3具有至少80%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 -⑶R-Hl，其具有序列SEQID No. 11，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 11 具有至少80%同一性的序列； -⑶R-H2，其具有序列SEQID No. 12，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 12 具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-H3，其具有序列SEQ ID No. 6，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 6具有至少80%同一性的序列。
根據本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括 -輕鏈，其包含序歹IjSEQ ID No. 1的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3 ；和 -重鏈，其包含序歹IjSEQ ID No. 7的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 5的CDR-H2和序列 SEQ ID No. 8 的 CDR-H3。
在另一個實施方式中，根據本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括 -輕鏈，其包含序歹IjSEQ ID No. 9的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 10的CDR-L2和序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3 ；和 -重鏈，其包含序歹IjSEQ ID No. 11 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 12 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 6 的 CDR-H3。
根據再另一個實施方式，本發明的抗體或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括輕鏈序列，該輕鏈序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 13或在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 13具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；或者在于其包括重鏈序列，該重鏈序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 14或在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 14 具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
本發明的另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 ⑶R-Ll，其具有序列SEQ ID No. 40，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 40 具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列； ⑶R-L2，其具有序列SEQ ID No. 2，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；和 CDR-L3，其具有序列SEQ ID No. 41，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 41 具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 ⑶R-Hl，其具有序列SEQ ID No. 42，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 42 具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列； ⑶R-H2，其具有序列SEQ ID No. 5，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；和 ⑶R-H3，其具有序列SEQ ID No. 43，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 43 具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
本發明的再另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 -CDR-Ll，其具有序列SEQ ID No. 40，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 40 具有至少80%同一性的序列； -CDR-L2，其具有序列SEQ ID No. 2，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 2具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-L3，其具有序列SEQ ID No. 41，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 41 具有至少80%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 -⑶R-Hl，其具有序列SEQID No. 44，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 44 具有至少80%同一性的序列； -CDR-H2，其具有序列SEQ ID No. 5，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 5具有至少80%同一性的序列；和 -⑶R-H3，其具有序列SEQID No. 45，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 45 具有至少80%同一性的序列。
本發明的再另一個實施方式公開了一種抗體或其衍生化合物或功能片段，其包括包含下列三種⑶R的輕鏈 -CDR-Ll，其具有序列SEQ ID No. 46，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 46 具有至少80%同一性的序列； -CDR-L2，其具有序列SEQ ID No. 47，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 47 具有至少80%同一性的序列；和 -CDR-L3，其具有序列SEQ ID No. 41，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 41 具有至少80%同一性的序列，和 包含下述三種⑶R的重鏈 -⑶R-Hl，其具有序列SEQID No. 48，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 48 具有至少80%同一性的序列； -⑶R-H2，其具有序列SEQID No. 49，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 49 具有至少80%同一性的序列；和 -⑶R-H3，其具有序列SEQID No. 43，或具有在優化比對之后與序列SEQ ID No. 43 具有至少80%同一性的序列。
根據本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括 -輕鏈，其包含序歹IjSEQ ID No. 40的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列 SEQ ID No. 41 的 CDR-L3 ；禾口 -重鏈，其包含序列SEQID No. 44的CDR-Hl、序列SEQ IDNo. 5的CDR-H2和序列 SEQ ID No. 45 的 CDR-H3。
在另一個實施方式中，根據本發明的抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括 -輕鏈，其包含序列SEQ ID No. 46 的 CDR-Ll、序列 SEQ ID No. 47 的 CDR-L2 和序列 SEQ ID No. 41 的 CDR-L3 ；禾口 -重鏈，其包含序列SEQ ID No. 48 的 CDR-H1、序列 SEQ ID No. 49 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 43 的 CDR-H3。
根據再另一個實施方式，本發明的抗體或其衍生化合物或功能片段的特征在于其包括輕鏈序列，該輕鏈序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 50或在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 50具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列；且在于其包括重鏈序列，該重鏈序列包含氨基酸序列SEQ ID No. 51或在優化比對之后，與序列SEQ ID No. 51具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列。
如上可見，本發明還涉及來源于本發明所述抗體的任何化合物。更特別地，本發明的抗體或其衍生化合物或功能片段的特征在于所述衍生化合物由結合蛋白組成，該結合蛋白包含肽支架，在該肽支架上以保留原始抗體的全部或部分互補位識別特性的方式移植了至少一種CDR。
本發明中所述的六個CDR序列之中的一個或多個序列也可以存在于各種免疫球蛋白的蛋白支架上。在這種情況下，蛋白序列使重新構建有利于移植的CDR折疊的肽骨架成為可能，使其保留了其互補位抗原識別特性。
通常，本領域技術人員知道如何確定蛋白支架的類型，在所述蛋白支架上移植了至少一種來自原始抗體的⑶R。更特別地，已知選擇這種支架必須滿足最大數量的下列條件 (SkerraA. , J. Mol.Recogn.，2000，13 :167-187) -良好的種系發生保守性； -已知的三維結構(例如，通過結晶學、NMR光譜學或本領域技術人員已知的任何其它技術)； -小尺寸； -幾乎沒有或沒有轉錄后修飾；和/或 -易于產生、表達和純化。
這樣的蛋白支架的來源可以是但不限于選自下列的結構纖連蛋白，優選III型纖連蛋白結構域 10、脂籠蛋白(Iipocalin) ,anticalin (Skerra A. , J. Biotechnol.，2001， 74(4) :257-75)、來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)蛋白A的結構域B的蛋白Z、硫氧還蛋白A(thioredoxin Α)或帶有如“錨蛋白重復序列” (Kohl等人，PNAS，2003， vol. 100，No. 4,1700-1705) “犰狳(armadillo)重復序列”、“富含亮氨酸的重復序列”和 “三十四肽(tetratricop印tide)重復序列”的重復基序的蛋白。
還應提及來源于毒素，比如例如蝎子、昆蟲、植物、軟體動物等的毒素的支架和神經元NO合酶(PIN)的蛋白抑制劑。
這樣的雜合構建體的非限制方式的一個實例是在PIN的一個環內插入抗⑶4抗體的CDR-Hl (重鏈)，即UBS. 2，因此獲得的新的結合蛋白保留了與原始抗體相同的結合特性(Bes 等人，Biochem. Biophys. Res. Commun.，2006，343 (1)，334-344)。在純粹說明性基礎上， 還可以提及將抗溶菌酶VHH抗體的⑶R-H3(重鏈)移植到新制癌菌素(neocarzinostatin) 的一個環上(Nicaise 等人，Protein Science, 2004，13 (7) :1882-1891)。
最后，如上所述，這樣的肽支架可以包含一至六個來自原始抗體的⑶R。優選地，但非必要的，本領域技術人員將選擇至少一個來自重鏈的CDR，已知后者主要負責抗體的特異性。選擇一個或多個相關CDR對于本領域技術人員而言是顯而易見的，本領域技術人員然后將選擇合適的已知技術(Bes等人，FEBS letters 508，2001，67-74)。
本發明的一個特定方面涉及一種選擇來源于根據本發明抗體的化合物的方法，所述衍生化合物能夠抑制體外和/或體內腫瘤細胞生長，并且所述衍生化合物包含其上移植了至少一個抗體CDR的肽支架，該方法的特征在于其包括下述步驟 a)在允許腫瘤細胞生長的條件下，使由其上移植了至少一個抗體⑶R的肽支架組成的化合物在體外接觸包含能夠生長的腫瘤細胞的生物樣品；和 b)如果所述化合物能夠抑制這些腫瘤細胞的生長，并且其特征在于所述至少一個移植的CDR選自下列CDR，選擇所述化合物 -序列SEQ ID No. 1、9、40、46 的 CDR 或在優化比對后與序列 SEQ ID No. 1、9、40、 46具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR ； -序歹IjSEQ ID No. 2、10、47的CDR或在優化比對后與序列SEQ ID No. 2、10、47具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列的⑶R ； -序列SEQID No. 3、41的CDR或在優化比對后與序列SEQ ID No. 3、41具有至少 80 %，優選85 %、90 %、95 %和98 %同一性的序列的CDR ； -序列SEQ ID No. 4、7、11、42、44、48 的 CDR 或在優化比對后與序列 SEQ ID No. 4、 7、11、42、44、48具有至少80%，優選85%、90%、95%禾口 98%同一性的序列的CDR ； -序歹IjSEQ ID No. 5、12、49的CDR或在優化比對后與序列SEQ ID No. 5、12、49具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR ；禾口 -序列SEQ ID No. 6、8、43、45 的 CDR 或在優化比對后與序列 SEQ ID No. 6、8、43、 45具有至少80%，優選85%、90%、95%和98%同一性的序列的CDR。
根據一個優選的方式，所述方法可以在步驟a)中包括使包含其上移植了至少兩個或三個抗體CDR的肽支架的化合物在體外接觸。
根據該方法的一個甚至更優選的方式，所述肽支架選自其結構在上述提及的支架或結合蛋白。
顯而易見地，這些實施例絕不是限制性的，并且應將任何對于本領域技術人員是已知的或顯而易見的其它結構視為涵蓋在本專利申請給予的保護之內。
因此，本發明涉及其特征在于肽支架選自下列蛋白的抗體或其衍生化合物或功能片段a)種系發生保留良好的蛋白，b)結構堅固的蛋白，c)具有熟知的3D分子組成的蛋白，d)小尺寸的蛋白和/或e)包含可以通過刪除和/或插入修飾而未改變穩定性特性的區域的蛋白。
根據一個優選的實施方式，本發明所述的抗體、或其衍生化合物或功能片段的特征在于所述肽支架選自i)來自纖連蛋白的支架，優選3型纖連蛋白結構域10的支架、脂籠蛋白、anticalin、來自金黃色葡萄球菌的蛋白A結構域B的蛋白Z、硫氧還蛋白A或具有
22如“錨蛋白重復序列” (Kohl等人，PNAS，2003，vol. 100，No. 4，1700-1705)、“犰狳重復序列”、
“富含亮氨酸的重復序列”和“三十四肽重復序列”的重復基序的蛋白，或iii)神經元NO合酶(PIN)的蛋白抑制劑。
本發明的另一個方面涉及如上所述抗體的功能片段。
更特別地，本發明的目標是抗體或其衍生化合物或功能片段，其特征在于所述功能片段選自片段Fv、Fab、(Fab，)2、Fab，、scFv、scFv-Fc和雙特異抗體，或任何其半衰期增加的片段，如PEG化的片段。
根據本發明的抗體的這種功能片段由下列組成，例如，片段Fv、SCFv(SC =單鏈)、 Fab、F(ab' )2、Fab\ scFv-Fc或雙特異抗體或任何其半衰期通過化學修飾而增加的片段， 比如添加聚亞烷基二醇，比如聚乙二醇(PEG化)(PEG化的片段被稱作Fv-PEG、scFv-PEG、 Fab-PEG, F (ab，)2_PEG和Fab，-PEG)，或摻入脂質體、微球體或PLGA，所述片段具有至少一個本發明的特征性CDR，該CDR特別能夠以一般方式發揮出其來源抗體的活性，即使是部分活性。
優選地，所述功能片段包含或包括衍生其的抗體可變重鏈或輕鏈的部分序列，所述部分序列足以保留與其來源抗體相同的結合特異性，和足夠的親和力，優選至少等于其來源抗體的親和力的1/100，更優選至少是其來源抗體的親和力的1/10。
這樣的功能片段將包含其來源抗體序列的至少五個氨基酸，優選6、7、8、10、15、 25、50或100個連續氨基酸。
優選地，這些功能片段將是？18沖1 油4(油，)2、F(ab，)、scFv-Fc或雙特異抗體類型，這些功能片段通常具有與其來源抗體相同的結合特異性。根據本發明，本發明的抗體片段可以通過比如酶消化的方法(包括胃蛋白酶或番木瓜蛋白酶)和/或通過化學還原分裂二硫鍵的方法從上述抗體獲得。抗體片段還可以通過重組遺傳學技術(也是本領域技術人員所知)或通過例如自動肽合成儀，比如Applied BioSystems等銷售的自動肽合成儀，通過肽合成獲得。
為了更清楚，下表2概述了對應于本發明抗體的各種氨基酸序列。
表2(其中Mu.=鼠的，Ch.=嵌合的)
_抗體 I CDR編號I重鏈輕鏈SEQ ID NO.
414H5CDR-Ll1
—CDR-L22
普通一 CDR-L33
CDR-Hl —4
一 CDR-H25
_ CDR-H3 一6
CDR-Ll1
~CDR-L22
IMGT— CDR-L33
CDR-Hl___7
一 CDR-H25 ___ CDR-H3 8
權利要求
1.一種用于選擇能夠抑制CXCR4活化的抗CXCR4抗體或其功能片段或衍生物之一的方法，特征在于其包括下述步驟i)篩選產生的抗體，并且選擇能夠特異性結合CXCR4和還能夠調節CXCR4活化的抗體； )測試步驟i)中選擇的抗體，并且選擇能夠誘導CXCR4同二聚體構象變化的抗體，然后iii)測試步驟ii)中選擇的抗體，并且選擇能夠誘導CXCR4/CXCR2異二聚體構象變化的抗體。
2.根據權利要求1的方法，其中步驟ii)包括通過BRET分析，在表達CXCR4-RLuc/ CXCR4-YFP的細胞上評價抗體，并選擇能夠抑制BRET信號至少40%的抗體。
3.根據權利要求1的方法，其中步驟iii)包括通過BRET分析，在表達CXCR4-RLuc/ CXCR2-YFP的細胞上評價抗體，并選擇能夠抑制BRET信號至少40%的抗體。
4.一種能夠通過權利要求1所述方法獲得的分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段。
5.根據權利要求4的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其由單克隆抗體組成。
6.根據權利要求4的分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括至少一個選自下述的⑶R 包含至少SEQ ID No. 1、2、3、4、5或6的序列的⑶R。
7.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序歹Ij SEQ ID No. 1 的 CDR-Ll、序列 SEQ ID No. 2 的 CDR-L2 和序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3。
8.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序歹Ij SEQ ID No. 9 的 CDR-Ll、序列 SEQ ID No. 10 的 CDR-L2 和序列 SEQ ID No. 3 的 CDR-L3。
9.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列 SEQ ID No. 7 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 5 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 8 的 CDR-H3。
10.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序歹Ij SEQ ID No. 11 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 12 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 6 的 CDR-H3。
11.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括-輕鏈,其包含序列SEQ ID No. 1的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列SEQ ID No. 3 的 CDR-L3 ；和-重鏈,其包含序歹Ij SEQ ID No. 7 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 5 的 CDR-H2 序列 SEQ ID No. 8 的 CDR-H3。
12.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括-輕鏈，其包含序歹Ij SEQ IDNo. 9的CDR-Ll、序列SEQ IDNo. 10的CDR-L2和序列SEQ ID No. 3 的 CDR-L3 ；禾口-重鏈,其包含序歹Ij SEQ ID No. 11 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 12 的 CDR-H2 序列 SEQID No. 6 的 CDR-H3。
13.根據權利要求6的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 13的輕鏈序列，并且在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 14的重鏈序列。
14.根據權利要求4的分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括至少一個選自下述的CDR.包含至少SEQ ID No. 40、2、41、42、5或43的序列的CDR。
15.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序歹Ij SEQ ID No. 40 的 CDR-Ll、序列 SEQ ID No. 2 的 CDR-L2 和序列 SEQ ID No. 41 的 CDR-L3。
16.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括輕鏈，該輕鏈包含序歹Ij SEQ ID No. 46 的 CDR-Ll、序列 SEQ ID No. 47 的 CDR-L2 和序列 SEQ ID No. 41 的 CDR-L3。
17.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列 SEQ ID No. 44 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 5 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 45 的 CDR-H3。
18.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括重鏈，該重鏈包含序列 SEQ ID No. 48 的 CDR-Hl、序列 SEQ ID No. 49 的 CDR-H2 和序列 SEQ ID No. 43 的 CDR-H3。
19.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括-輕鏈,其包含序列SEQ ID No. 40的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 2的CDR-L2和序列SEQ ID No. 41 的 CDR-L3 ；禾口-重鏈,其包含序列SEQ ID No. 44的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 5的CDR-H2和序列SEQ ID No. 45 的 CDR-H3。
20.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括-輕鏈，其包含序列SEQ ID No. 46的CDR-Ll、序列SEQ ID No. 47的CDR-L2和序列SEQ ID No. 41 的 CDR-L3 ；禾口-重鏈，其包含序列SEQ ID No. 48的CDR-Hl、序列SEQ ID No. 49的CDR-H2和序列SEQ ID No. 43 的 CDR-H3。
21.根據權利要求14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 50的輕鏈序列，并且在于其包括包含氨基酸序列SEQID No. 51的重鏈序列。
22.—種鼠雜交瘤，其選自2007年10月22日以保藏號1-3860提交至巴黎巴斯德研究所CNCM的雜交瘤或2008年6月25日以保藏號1-4019提交至巴黎巴斯德研究所CNCM的雜交瘤。
23.一種根據權利要求22的雜交瘤分泌的抗體。
24.根據權利要求6或14的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包含嵌合抗體。
25.根據權利要求6和對的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 64的輕鏈序列，并且在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 65的重鏈序列。
26.根據權利要求14和M的抗體、或其衍生化合物或功能片段，特征在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 66的輕鏈序列，并且在于其包括包含氨基酸序列SEQ ID No. 67的重鏈序列。
27.一種分離的核酸，特征在于其選自下述核酸-核酸、DNA或RNA，用于編碼根據權利要求4至21和23至沈之一的抗體或其衍生化合物或功能片段；-與a)中定義的核酸互補的核酸；-能夠在高度嚴謹條件下與核酸序列SEQ ID No. 15至沈或SEQ ID No. 52至61的至少一個CDR雜交的至少18個核苷酸的核酸；或-能夠在高度嚴謹條件下與核酸序列SEQ ID No. 27或SEQ ID No. 62或SEQ ID No. 68 或70的至少輕鏈和/或核酸序列SEQ ID No.觀或SEQ ID No. 63或SEQ ID No. 69或71 的重鏈雜交的至少18個核苷酸的核酸。
28.一種由根據權利要求27的核酸組成的載體。
29.一種包含根據權利要求觀的載體的宿主細胞。
30.一種包含由根據權利要求四的載體轉化的細胞的除了人類之外的轉基因動物。
31.一種用于制備根據權利要求4至21和23至沈之一的抗體、或其衍生化合物或功能片段的方法，特征在于所述方法包含下述步驟-在培養基和合適的培養條件下培養根據權利要求四的宿主細胞；和-從培養基中或從所述培養細胞中回收如此產生的所述抗體或其功能片段之一。
32.根據權利要求4至21和23至沈之一的抗體、或其衍生化合物或功能片段，用作藥物。
33.一種組合物，其包含作為活性成分的由根據權利要求4至21、23至沈和32之一的抗體或其衍生化合物或功能片段組成的復合物。
34.根據權利要求33的組合物，特征在于其另外包括作為用于同時、分開或延長方式使用的聯合產品的不同于針對CXCR4抗體的抗腫瘤抗體。
35.根據權利要求33或34的組合物，特征在于其另外包括作為用于同時、分開或延長方式使用的聯合或結合產品的細胞毒劑/細胞增殖抑制劑、細胞毒素和/或放射性同位素。
36.根據權利要求33至35之一的組合物，用作藥物。
37.根據權利要求4至21、23至沈和32之一的抗體或其衍生化合物或功能片段，和/ 或根據權利要求33至36中任一項的組合物，作為用于調節細胞中CXCR4活性的藥物。
38.根據權利要求4至21、23至沈和32之一的抗體或其衍生化合物或功能片段，和/ 或根據權利要求33至36中任一項的組合物，用于預防或治療癌癥。
39.根據權利要求38的抗體、或其衍生化合物或功能片段和/或組合物，特征在于所述癌癥為選自下述的癌癥前列腺癌、骨肉瘤、肺癌、乳腺癌、子宮內膜癌、多發性骨髓瘤、卵巢癌、胰腺癌和結腸癌。
全文摘要
本發明涉及能夠結合CXCR4以及還誘導CXCR4同二聚體和/或異二聚體構象變化的新的分離的抗體、或其衍生化合物或功能片段。更特別地，本發明涉及對CXCR4蛋白有特異性的414H5和515H7抗體，及其用于治療癌癥的用途。本發明還涵蓋由這樣的抗體組成的藥物組合物和選擇這樣的抗體的方法。
文檔編號C07K16/28GK102209730SQ200980144491
公開日2011年10月5日 申請日期2009年10月1日 優先權日2008年10月1日
發明者C·克林格-阿穆, V·格勒尼耶-科薩內爾 申請人:皮埃爾法布雷醫藥公司