用于防止細胞粘附的肽和組合物及其使用方法

專利名稱：：用于防止細胞粘附的肽和組合物及其使用方法
技術領域：
：本發明涉及經分離的天然肽和其用于防止細胞粘附的用途。
背景技術：
：微生物可以單個細胞形式在環境中自由游動，生存和繁殖(如浮游生物)，或者其可生長成高度有組織的多細胞群落，裝入自產聚合物基質(self-producedpolymericmatrix)中，與表面和界面緊密締合。后一種微生物生活方式被稱為生物膜。生物膜的形成代表著一種古老的受保護的生長模式，其允許微生物在不利環境中存活，并使微生物能分散和定植形成新的小生鏡[霍爾-斯德雷(Hall-Stoodley)等人，自然微生物學綜述(NatRevMicrobiol.)(2004)2(2):95-108]。生物膜的組成相當復雜，且不同微生物物種的組成不同，而且甚至同一物種在不同環境條件下的組成也不相同。盡管如此，生物膜的形成仍代表著微生物在環境中的正常生活方式，并且所有微生物都能夠產生生物膜。先前的研究揭露，細菌生物膜的形成經過多個蛋白質圖譜不同的發展階段[索爾(Sauer)等人，細菌學雜志(JBacteriol.)(2002)184(4)=1140-54]，從附著于表面開始，隨后遷移并分化形成小菌落，最終變成熟，涉及基質聚合物的表達。處于每一生物膜階段內的細菌都展現與浮游生物生長的相同群組細菌明顯不同的表型，并具有與之明顯不同的特性[索爾(Sauer)等人，細菌學雜志(JBacteriol.)(2004)186(21):7312-26]。生物膜是導致人類全身感染(例如醫院感染)的主要原因。在體內，生物膜可與組織(例如內耳、牙齒、齒齦、肺、心臟瓣膜和泌尿生殖道)締合。實際上，預計人體65%的細菌感染都由生物膜引起。此外，在形成生物膜后，微生物傾向于改變其特征，有時這種改變是徹底的，以致當生物為附著或聚集生物膜形式時，通常能殺死懸浮培養物中的生物的抗生素劑量對這些微生物完全無效(美國專利第7189351號)。引入體內的產品(例如隱形眼鏡、中心靜脈導管、機械心臟瓣膜和起搏器)或提供進入體內的路徑的產品所帶來的一個主要問題是微生物感染和必定會形成生物膜。由于這些感染難以用抗生素進行治療，故常常需要取出裝置，而這會對患者帶來創傷，并增加醫療成本。因此，對于這些醫療設備，此項技術中長期以來一直尋求使這些醫療設備和裝置抗微生物的手段和方法。PCT申請案第WO06/006172號揭示了抗淀粉樣蛋白試劑(諸如芳香族化合物)的用途，其可用于抑制生物膜的形成，或使現有生物膜崩解。所述申請案揭示，防止阿爾茨海默氏癥(Alzheimer)形成淀粉樣纖維的化合物可防止生物膜中纖維的形成，并且得出結論，具有芳香族臂的氨基酸可有效對抗生物膜。然而，這一分析仍局限于全長序列。
發明內容本發明提供廣譜天然因子，其可干擾多種微生物中生物膜形成的初始階段。從這些天然因子中，分離出具有高度保守序列的肽，并且呈現合成構象的這些肽在防止微生物粘附方面顯示出較高活性。在數種海洋微生物(包括各種已知種類的海葵)、數種魚類(包括斑馬魚(Daniorerio/zebrafish))禾口蘇類植物小立碗蘇亞種(Physcomitrellapatenssubsp.Patens.)中都發現了這一保守序列。上文提到的所有因子所顯示的活性都僅僅針對防止細菌基質粘附和由此引起的生物膜形成。這些因子沒有常常會觀察到的由抗生素肽和次級代謝物所顯示的致死性細菌活性，其通過強烈的微生物的“生物潛能”對快速自然選擇提供較強的選擇壓力。另一方面，針對細菌定植的多種抑制作用將拮抗細菌存活的基礎機制。因此，因其生命力而不太可能適應性改變所述機制。肖爾(Sher)等人(毒素(TOXiCOn)45=865-879,2005)使用生物信息學方法鑒別出了水螅表達的假定的生物活性蛋白質和多肽，其可作為其引誘系統(allomonalsystem)的組分。經顯示，水螅可表達刺胞動物磷酯酶A2毒素和屬于actinoporin家族的溶細胞素的直系同源物，并且表達與毒蛇類磷脂酶、富含半胱氨酸的分泌蛋白(cysteine-richsecretoryproetin,CRISP)、類前動力蛋白多肽和有毒脫氧核糖核酸酶類似的蛋白質。迄今為止，在從天然來源分離的肽中負責細胞毒性活性的特定序列尚未鑒別出來。除非另作定義，否則本文中使用的所有科技術語都具有與本發明所屬領域技術人員通常所了解相同的含義。盡管與本文中所述方法和材料類似或等效的方法和材料都可用于實施或測試本發明，但下文將描述適合的方法和材料。在出現矛盾的情況下，以本專利說明書(包括定義)為主。此外，材料、方法和實例只是說明性的，且不打算作限制。本文中使用的術語“包含”和“包括”應理解為詳細說明所述特征、整數、步驟或組分，但不排除添加其一個或一個以上其它特征、整數、步驟、組分或群組。本術語涵蓋術語“由……組成”和“基本上由……組成”。短語“基本上由……組成”當用于本文中時，應理解為詳細說明所述特征、整數、步驟或組分，但不排除添加其一個或一個以上其它特征、整數、步驟、組分或群組，而這只有當所述其它特征、整數、步驟、組分或群組不會顯著改變所主張的組合物、裝置或方法的基本和新穎特征時才能滿足。術語“方法”是指用于實現指定任務的方式、手段、技術和程序，包括(但不限于)化學、生物和生物物理
技術領域：
從業人員已知或易于由已知方式、手段、技術和程序開發的方式、手段、技術和程序。本文中使用的術語“約”是指士10%。本發明的其它特征和優勢將從以下實施方式和權利要求書顯而易見。本文中將參照所附圖式以舉例方式描述本發明。現將詳細說明各圖式，應注意，所示細節是示范性的，并且只是出于說明性論述本發明的優選實施例的目的，旨在提供被認為最有用且最易于理解的對本發明原理和概念方面的描述。為此，沒有試圖以比從根本上理解本發明所需的更多細節顯示本發明的結構細節，結合圖式進行的描述將使所屬領域技術人員了解如何在實踐中具體實施本發明的數種形式。圖中圖1顯示水溶性狀態的成孔溶細胞素海葵溶細胞素(sticholysirOli中IGWYA鏈的晶體結構，活性區以黃色標示；圖2顯示水溶性狀態的成孔溶細胞素海葵溶細胞素Ii中IGWYB鏈的晶體結構，活性區以黃色標示；圖3顯示真核成孔溶細胞素等指海葵毒素(equinatoxin)Ii的1KD6A鏈的結構，活性區以黃色標示；圖4顯示等指海葵毒素突變體的三維構造，活性區以黃色標示；圖5是顯示不同濃度的合成蛋白在M小時內對綠膿桿菌(I^eudomonasaeruginosa)ATCC27853生長的影響的柱形圖；無殺細菌或細菌生長抑制作用；圖6是顯示不同濃度的合成蛋白在M小時內對綠膿桿菌ATCC27853引起的生物膜形成的影響的柱形圖；圖7是顯示不同濃度的合成蛋白在M小時內對鮑氏不動桿菌(AcinetcAacterBaumannii)的臨床分離株生長的影響的柱形圖；無殺細菌或細菌生長抑制作用；圖8是顯示不同濃度的合成蛋白在M小時內對鮑氏不動桿菌的臨床分離株引起的生物膜形成的影響的柱形圖；圖9是顯示選自等指海葵(Actiniaequina)的觸手部分對鮑氏不動桿菌引起的生物膜形成的影響的柱形圖，其中PBS作為陽性對照物；圖10是顯示部分13對各種革蘭氏陽性細菌和革蘭氏陰性細菌引起的生物膜形成的影響的柱形圖；圖11是顯示來自迎風海葵屬(Anemonia)、垃圾葵屬(Aiptasia)和小立碗蘚屬(蘚類植物)的蛋白質濃度為50μg/m"1的粗提取物對綠膿桿菌的影響的柱形圖；圖12是顯示五種合成肽和來自蘚類植物小立碗蘚的粗物質的影響的柱形圖；圖13顯示通過在葡聚糖凝膠(S^hadex)G-IO柱上分離美麗海葵(Aiptasiapulchella)的粗提取物所得到的部分；圖14顯示通過再色譜分離圖13中的高分子量部分得到的峰；圖15顯示利用c-18柱反相高效液相色譜(RP-HPLC)分離圖14中的低分子量部分得到的部分；圖16A-B顯示根據本發明原理的肽的具有乳化劑臂的環狀頭的基本結構；和圖17是顯示產生具有乳化臂的環狀肽的流程圖。具體實施例方式本發明是包含經分離肽的組合物，所述經分離肽具有一個或一個以上與防止細菌基質粘附和由此引起的生物膜形成，以及任選防止細胞間粘附有關的作用。另外或其它，也可任選提供其它作用。在非限制性實例中，所述肽可從諸如水生生物和蘚類植物等生物提取，并任選且優選包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,FDYNWY,YDffNLY,YDffHLY和WDYNLY；和其使用方法。其它序列如下文所述。在醫學方面，一個重要問題是微生物生物膜的形成。對于人類來說，生物膜是引起全身感染(例如醫院感染)的原因，并且當將產品引入體內(例如隱形眼鏡、中心靜脈導管、機械心臟瓣膜和起搏器)時會成為關注的重點。8在許多工業中，包括食品業、制藥業、涂料工業、水、船業工程業，生物膜也是一個問題，其會帶來多種不利的影響，包括加速工業系統的腐蝕、油酸化和生物污損。舉例來說，在海洋或淡水環境中，包括冷卻或脫鹽設施、灌溉站和發電站中的冷卻塔、水管和過濾器，以及膜，諸如用于廢水和脫鹽系統中的膜，生物粘附于任何表面都可能引起生物污損。在養魚場的水產養殖系統中，也會發生生物污損。此外，全世界的商業船隊每年要消耗約三億噸燃料。如果不采取抗污損措施，燃料消耗將增加多達40%，相當于每年額外消耗一億兩千萬噸燃料。在2000年，預計這一經濟成本為約七十五億美元；近來的預計值達到三百億美元。由于在生物膜內生長的微生物高度組織，并且能經受不利的環境，諸如高溫和抗微生物劑(例如抗生素)，使得很難去除生物膜。海洋和淡水植物和生物，包括軟體水生無脊椎動物、魚類和蘚類植物，都被多種微生物所包圍。由于這些植物和生物缺乏特異性免疫，故其會產生數種可防止微生物定植于其體表上的因子。最“敏感”的生物是屬于刺胞動物門的無脊椎動物，包括海葵、珊瑚、水母、水螅蟲、水母體和海扇。這些軟體生物沒有物理防護，諸如鱗或殼，使用蛋白質和次級代謝物來保護其免受周圍微生物環境影響。先前曾報導過，海洋生物(例如海綿動物)產生的次級代謝物展現出抗細菌和抗真菌活性[阿曼德(Amade)等人，同上文]。此外，也已經顯示海葵(例如等指海葵)可產生有毒的成孔肽(即等指海葵毒素)，其與其它小的抗微生物肽類似，能溶解和殺死真核細胞[安德魯斯(Anderluh)等人，同上文]。盡管此項技術中已知，多種蛋白質的全長序列都與其細胞溶解功能有關，但先前尚未鑒別出負責細胞溶解作用的特定肽。本發明者已經證實，使用液相色譜分離法從海葵獲得的數個活性部分能夠高水平防止微生物粘附于無生命表面。海葵包括46個科，可見于世界各地的水源。大部分海葵都是固著動物，具有專門的足用來將其錨定于軟基質中，或使其附著于巖石和珊瑚上。屬于不同屬等指海葵(Actiniaequine)、垃圾葵屬和迎風海葵屬的數種海葵顯示出抗粘附活性。經顯示，海葵細胞毒素的N末端區與細胞毒性作用有關[參見科瑞斯坦(KristanK)，博得思科(PodlesekZ)，霍尼克(HojnikV)，古提雷茲-艾格雷(Gutierrez-AguirreI)，格尼卡(GundarG)，特克(TurkD)，剛撒雷茲-瑪納斯(Gonzalez-ManasJM)，雷克(LakeyJH)，馬斯克(MadekP)，安德魯斯(AnderluhG)(2004)等指海葵毒素(一種真核成孔毒素)形成孔需要柔性N末端區和穩定的β夾層(Poreformationbyequinatoxin,aneukaryoticpore-formingtoxin,requiresaflexibleN-terminalregionandastablebetasandwich).生物化學雜志(JBiolChem.)279(45):46509-46517]。本發明者也已經在魚類中鑒別出與海葵細胞毒素C末端區(不涉及細胞毒性的區域)具有某種類似之處的蛋白質。這一蛋白質具有高度保守的區域，功能尚不了解，這一區域也是一個富含Trp的結構域，并且對于蛋白質結合脂質膜極為重要。本發明者還在蘚類植物小立碗蘚中發現這一區域。因此，本發明者假定，這一區域提供了一種對于防止生物膜形成特別有效的肽，而這種肽沒有細胞毒性活性。本發明者已經表征和分離出一種具有高度有效的抗生物膜特性的天然肽，其包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY、FDYNFY、FDYNLY、WDYNLY、FDYNWY、YDffNLY和YDWHLY。根據一些實施例，所述肽包含由約30、約40或約50個氨基酸構成的一部分序列。根據一些實施例，所述肽選自由以下組成的群組LFSVPYDYNWYSNWff、FSVPYDYNLYSNffff,MFSVPFDYNFYSNffff,MFSVPFDYNLYSNffff,MFSVPFDYNLYTNffff,MffSVPFDYNLYSNffff,MFSVPffDYNLYKNffF,MFSVPFDYNLYKNffL,MFSVPFFDYNffYSNffff,LFSVPFDYNLYSNffff,LFSVPYDYNWYSNffff,MASIPYDffNLYQSffA,MASIPYDffNLYSAffA禾口MASIPYDWHLYNAWA。如下文和以下實例部分中所示，本發明者已經使用串聯質譜(MS/MS)分析鑒別出從美麗海葵提取的活性部分。本發明者使用clustaLW程序鑒別出數種海葵細胞毒素蛋白的具有生物意義的多重序列比對，并鑒別出適用于聚合酶鏈反應(PCR)的海葵細胞毒素通用引物。分別擴增來自兩種不同海葵即垃圾葵和蛇發海葵(anemoniaviridansm)的250bp細胞毒素蛋白質區的序列Eqt-F=GTRTCGACAACGAGTCRGG，和Eqt_R252:TGACATYCCACCAGTTGCTG。將這些區域翻譯成肽，并使用BlastX與基因庫(genebank)相比較，顯示這些區域是海葵細胞毒素的保守結構域的一部分。如下文實例部分中較為詳細地論述以及圖5到8中所示，本發明者比較了來自海葵和蘚類植物的多種合成肽的活性，并且發現這些肽可防止生物膜形成[圖6和8到12]，但不能殺死或抑制細菌生長[圖5和7]。對數種細菌物種展現抗粘附作用(圖10)，使得本發明者得出結論，活性物質不具有物種特異性，而是對多種微生物物種都具有活性。舉例來說，已經在以下天然蛋白質中鑒別出保守肽區LFSVPYDYNWYSNWWFSVPYDYNLYSNV7WMFSVPPDYNFYSNWWMFSVPFDYNLYSNWWMFSVPFDYNLYTNWWMWSVPFDYNLYSNWWMFSVPWDYNLYKNWFMFSVPFDYNLYKNWLEqT-IVActinoporinOr-A來自公主海葵(Heteractismagnifica)的HMgIIIAvt-IRTX-APstx20小立碗蘚斑馬魚黑青斑河豚(Tetraodonnigroviridis)本發明的肽任選且優選包含序列CMFSVPFDYNWYSNWWC。本發明的肽任選且優選包含在具有約100到約300個氨基酸的蛋白質中。不希望受單一假定的限制，根據兩種海葵細胞毒素(等指海葵毒素和海葵溶細胞素)的三維結構，如圖1到4中所示，活性區是面向外的。圖1和2分別顯示了溶細胞素海葵溶細胞素Ii的IGWY的A鏈和B鏈的晶體結構。圖3顯示了真核成孔溶細胞素等指海葵毒素Ii的1KD6的A鏈的結構。圖4描述了等指海葵毒素突變體的三維構造，其在8、18和69位引入了三個半胱氨酸(1TZQ的A鏈)。先前已經顯示，這一突變體不具有溶血活性(科瑞斯坦(KristanK)，博得思科(PodlesekZ)，霍尼克(HojnikV)，古提雷茲-艾格雷(Gutierrez-AguirreI)，格尼卡(GuitarG)，特克(TurkD)，剛撒雷茲-瑪納斯(Gonzalez-ManasJM)，雷克(LakeyJH)，馬斯克(MadekP)，安德魯斯(AnderluhG)(2004)等指海葵毒素(一種真核10成孔毒素)形成孔需要柔性N末端區和穩定的β夾層(Poreformationbyequinatoxin,aneukaryoticpore-formingtoxin,requiresaflexibleN-terminalregionandastablebetasandwich).生物化學雜志(JBiolChem.)279(45):46509-46517)。因此，這種蛋白質喪失其細胞毒性，但仍具有抗細胞粘附的活性。參照圖式和隨附描述可更好地理解本發明的原理和操作。在詳細解釋本發明的至少一個實施例之前，應了解，本發明的應用不局限于以下描述中所闡述或各實例中所示范的細節。本發明能夠以各種方式實施或進行其它實施例。還應了解，本文中使用的措辭和術語都是出于描述的目的，并不應將其視為限制。根據本發明的一個方面，提供一種包含分離的天然肽的組合物，所述肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY,YDffNLY和YDWHLY。根據本發明另一方面，提供一種防止單細胞生物粘附于表面的方法，所述方法包含使細胞與包含分離的天然肽的組合物接觸，由此防止細胞粘附于表面，所述天然肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY,YDffNLY禾口YDWHLY。根據本發明一些實施例，優選提供一種結構域，其包含至少一種上述肽且有效防止細胞粘附于表面。更優選所包括的結構域是蛋白質的一部分。任選且最優選這一結構域展現抗粘附特性，例如以便防止生物膜形成和/或處理生物膜，但不展現細胞毒性特性。示范性結構域的非限制性選擇提供于下表中。權利要求1.一種肽，其選自由以下組成的群組YDYNWY、YDYNLY、FDYNFY、FDYNLY、WDYNLY、FDYNWY、YDffNLY和YDWHLY。2.一種防止單細胞生物粘附于表面的方法，所述表面選自由織物、纖維、泡沫材料(foam)、薄膜、混凝土、磚石建筑、玻璃、金屬和塑料組成的群組，所述方法包含使所述單細胞生物與無細胞毒性或細胞抑制活性且包含肽的組合物接觸，所述肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY,YDffNLY和YDWHLY，其中所述組合物防止或減少所述單細胞生物粘附于所述表面。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列YDYNWY是包含在具有序列LFSVPYDYNWYSNWff或LFSVPYDYNLYSNWff的蛋白質中。4.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列YDYNLY是包含在具有序列MFSVPYDYNLYSNWV的蛋白質中。5.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列FDYNFY是包含在具有序列MFSVPFDYNFYSNWff或LFSVPFDYNFYSNWff的蛋白質中。6.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列FDYNLY是包含在具有選自由以下組成的群組的序列的蛋白質中LFSVPFDYNLYSNWW、LFSIPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYTNWff、MWSVPFDYNLYSNWff和MFSVPFDYNLINWL。7.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列WDYNLY是包含在具有序列MFSVPFDYNLYKNWL或MFSVPFDYNLINWF的蛋白質中。8.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列FDYNWY是包含在具有序列MFSVPFDYNWYSNWff的蛋白質中。9.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列YDWNLY是包含在具有序列MASIPYDffNLYQSffA或MASIPYDWNLYSAWA的蛋白質中。10.根據權利要求2所述的方法，其中所述序列YDWHLY是包含在具有序列MASIPYDffHLYNAffA的蛋白質中。11.根據權利要求2所述的方法，其中所述肽是從水生生物中分離。12.根據權利要求11所述的方法，其中所述水生生物是選自由魚類和固著生物組成的群組。13.根據權利要求12所述的方法，其中所述固著生物是選自由美麗海葵(Aiptesiapulchella)和蛇發海葵(Anemoniaviridans)組成的群組的海葵。14.根據權利要求2所述的方法，其中所述肽是從蘚類植物中分離。15.根據權利要求14所述的方法，其中所述蘚類植物選自由以下組成的群組小立碗蘚(Physcomitrellapatens)、葫聲蘚(Funariahygrometrica)；真核生物(Eukaryota)；綠色植物(Viridiplantae)；鏈形植物(Sti^ptophyta)；胚生植物(Embryophyta)苔蘚植物(Bryophyta)；蘚類植物總綱V(MossSuperclassV)；真蘚植物綱(Bryopsida)；葫蘆蘚亞綱(Funariidae)；葫蘆蘚目(Funariales)；葫蘆蘚科(Funariaceae)；和小立碗蘚屬(Physcomitrella)。16.根據權利要求2所述的方法，其中所述組合物耐凍干。17.根據權利要求2所述的方法，其中所述組合物抑制細胞集合。18.根據權利要求2所述的方法，其中所述單細胞生物是包含在生物膜中。19.根據權利要求2所述的方法，其中所述單細胞生物選自由細菌、真菌、原生動物和古生菌組成的群組。20.根據權利要求19所述的方法，其中所述真菌包含酵母。21.根據權利要求2所述的方法，其中所述組合物呈選自由噴霧、凝膠和涂料組成的群組的形式。22.—種醫療裝置，其包含無細胞毒性或細胞抑制活性且包含分離的肽的組合物，所述分離的肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY、YDffNLY和YDWHLY，其中所述組合物是涂覆于所述裝置表面上，或并入所述醫療裝置的聚合物基質中，且所述醫療裝置是體內裝置或體外裝置。23.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述裝置是可植入型醫療裝置或醫療儀ο24.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列YDYNWY是包含在具有序列LFSVPYDYNWYSNffff或LFSVPYDYNLYSNWff的蛋白質中。25.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列YDYNLY是包含在具有序列MFSVPYDYNLYSNWV的蛋白質中。26.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列FDYNFY是包含在具有序列MFSVPFDYNFYSNWff或LFSVPFDYNFYSNWff的蛋白質中。27.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列FDYNLY是包含在具有選自由以下組成的群組的序列的蛋白質中LFSVPFDYNLYSNWW、LFSIPFDYNLYSNWW、MFSVPFDYNLYSNWW、MFSVPFDYNLYTNWff、MWSVPFDYNLYSNWff和MFSVPFDYNLINWL。28.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列WDYNLY是包含在具有序列MFSVPFDYNLYKNWL或MFSVPFDYNLINWF的蛋白質中。29.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列FDYNWY是包含在具有序列MFSVPFDYNWYSNWff的蛋白質中。30.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列YDWNLY是包含在具有序列MASIPYDWNLYQSWA或MASIPYDWNLYSAWA的蛋白質中。31.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述序列YDWHLY是包含在具有序列MASIPYDffHLYNAffA的蛋白質中。32.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述肽是從水生生物中分離。33.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述水生生物是選自由魚類和固著生物組成的群組。34.根據權利要求33所述的醫療裝置，其中所述固著生物是選自由美麗海葵和蛇發海葵組成的群組的海葵。35.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述肽是從蘚類植物中分離。36.根據權利要求35所述的醫療裝置，其中所述蘚類植物選自由以下組成的群組小立碗蘚、葫蘆蘚；真核生物；綠色植物；鏈形植物；胚生植物；苔蘚植物；蘚類植物總綱V；真蘚植物綱；葫蘆蘚亞綱；葫蘆蘚目；葫蘆蘚科；和小立碗蘚屬。37.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述組合物耐凍干。38.根據權利要求22所述的醫療裝置，其中所述組合物抑制細胞集合。39.一種處理水以防止或減少生物膜形成或過濾器污損的方法，其包含用無細胞毒性或細胞抑制活性且包含分離的肽的組合物處理所述水，所述分離的肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY,YDffNLY和YDWHLY。40.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列YDYNWY是包含在具有序列LFSVPYDYNWYSNWff或LFSVPYDYNLYSNWff的蛋白質中。41.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列YDYNLY是包含在具有序列MFSVPYDYNLYSNWV的蛋白質中。42.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列FDYNFY是包含在具有序列MFSVPFDYNFYSNWff或LFSVPFDYNFYSNWff的蛋白質中。43.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列FDYNLY是包含在具有選自由以下組成的群組的序列的蛋白質中LFSVPFDYNLYSNWW、LFSIPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYTNWff、MWSVPFDYNLYSNWff和MFSVPFDYNLINWL。44.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列WDYNLY是包含在具有序列MFSVPFDYNLYKNWL或MFSVPFDYNLINWF的蛋白質中。45.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列FDYNWY是包含在具有序列MFSVPFDYNWYSNWff的蛋白質中。46.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列YDWNLY是包含在具有序列MASIPYDWNLYQSWA或MASIPYDWNLYSAWA的蛋白質中。47.根據權利要求39所述的方法，其中所述序列YDWHLY是包含在具有序列MASIPYDffHLYNAffA的蛋白質中。48.根據權利要求39所述的方法，其中所述肽是從水生生物中分離。49.根據權利要求48所述的方法，其中所述水生生物是選自由魚類和固著生物組成的群組。50.根據權利要求49所述的方法，其中所述固著生物是選自由美麗海葵和蛇發海葵組成的群組的海葵。51.根據權利要求39所述的方法，其中所述肽是從蘚類植物中分離。52.根據權利要求51所述的方法，其中所述蘚類植物選自由以下組成的群組小立碗蘚、葫蘆蘚；真核生物；綠色植物；鏈形植物；胚生植物；苔蘚植物；蘚類植物總綱V；真蘚植物綱；葫蘆蘚亞綱；葫蘆蘚目；葫蘆蘚科；和小立碗蘚屬。53.根據權利要求39所述的方法，其中所述組合物耐凍干。54.根據權利要求39所述的方法，其中所述組合物抑制細胞集合。55.根據權利要求39所述的方法，其中將所述經處理的水應用于反滲透過濾器。56.根據權利要求39所述的方法，其中所述生物膜是由選自由細菌、真菌、原生動物和古生菌組成的群組的單細胞生物形成。57.根據權利要求56所述的方法，其中所述真菌包含酵母。58.一種防止或減少非動物體來源的外部流體中生物膜形成的方法，所述方法包含用無細胞毒性或細胞抑制活性且包含分離的肽的組合物處理所述流體，所述分離的肽包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY,FDYNFY,FDYNLY,WDYNLY,FDYNWY,YDffNLY和YDWHLY。59.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列YDYNWY是包含在具有序列LFSVPYDYNWYSNWff或LFSVPYDYNLYSNWff的蛋白質中。60.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列YDYNLY是包含在具有序列MFSVPYDYNLYSNWV的蛋白質中。61.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列FDYNFY是包含在具有序列MFSVPFDYNFYSNWff或LFSVPFDYNFYSNWff的蛋白質中。62.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列FDYNLY是包含在具有選自由以下組成的群組的序列的蛋白質中LFSVPFDYNLYSNWW、LFSIPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYSNWff,MFSVPFDYNLYTNWff、MWSVPFDYNLYSNWff和MFSVPFDYNLINWL。63.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列WDYNLY是包含在具有序列MFSVPFDYNLYKNWL或MFSVPFDYNLINWF的蛋白質中。64.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列FDYNWY是包含在具有序列MFSVPFDYNWYSNWff的蛋白質中。65.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列YDWNLY是包含在具有序列MASIPYDWNLYQSWA或MASIPYDWNLYSAWA的蛋白質中。66.根據權利要求58所述的方法，其中所述序列YDWHLY是包含在具有序列MASIPYDffHLYNAffA的蛋白質中。67.根據權利要求58所述的方法，其中所述肽是從水生生物中分離。68.根據權利要求67所述的方法，其中所述水生生物是選自由魚類和固著生物組成的群組。69.根據權利要求68所述的方法，其中所述固著生物是選自由美麗海葵和蛇發海葵組成的群組的海葵。70.根據權利要求58所述的方法，其中所述肽是從蘚類植物中分離。71.根據權利要求70所述的方法，其中所述蘚類植物選自由以下組成的群組小立碗蘚、葫蘆蘚；真核生物；綠色植物；鏈形植物；胚生植物；苔蘚植物；蘚類植物總綱V；真蘚植物綱；葫蘆蘚亞綱；葫蘆蘚目；葫蘆蘚科和小立碗蘚屬。72.根據權利要求58所述的方法，其中所述組合物耐凍干。73.根據權利要求58所述的方法，其中所述組合物抑制細胞集合。74.根據權利要求58所述的方法，其中將所述流體應用于反滲透過濾器。75.根據權利要求58所述的方法，其中所述生物膜是由選自由細菌、真菌、原生動物和古生菌組成的群組的單細胞生物形成。76.根據權利要求75所述的方法，其中所述真菌包含酵母。全文摘要本發明提供包含經分離肽的組合物，所述肽可從諸如水生生物和蘚類植物(moss)等生物提取，且例如任選包含選自由以下組成的群組的序列YDYNWY、YDYNLY、FDYNFY、FDYNLY、FDYNWY、YDWNLY、YDWHLY和WDYNLY，或本文中描述的任何其它序列；以及其使用方法，包括用于處理微生物生物膜或防止形成微生物生物膜以及防止細胞粘附于表面。文檔編號C07K7/06GK102171239SQ200980138283公開日2011年8月31日申請日期2009年9月23日優先權日2008年9月24日發明者亨·凱斯滕博伊姆,阿米爾·茲洛特金申請人:特爾哈肖梅爾醫學研究基礎設施和服務有限公司