專利名稱：人工蛋白支架的制作方法
技術領域：
本發明一般涉及人工蛋白支架及其設計、生產和用途。尤其是，本發明涉及衍 生自蛋白質TOP 7折疊的人工蛋白支架。
背景技術：
自然界已提供了可以嵌入各種序列的短肽的許多蛋白質。抗體是眾所周知的實 例，并且具有由重鏈和輕鏈可變區定義的抗原結合結構域，其中每一可變區包括插在構 架區(FR)之間的互補決定區(CDR)。抗體重鏈和輕鏈兩者的CDR3環(loop)是通過如 下過程形成的其中外切核酸酶和末端轉移酶運作以將編碼肽環的基本上隨機的DNA序 列插入各V基因中。當該過程與存在于CDRl和CDR2環中的較為受限的多樣性聯合時， VH和VL結構域隨機配對，產生十分大數量的特異性蛋白質序列。所得的這些天然蛋白 質顯示極大多樣性的結合特異性。抗體V結構域的所謂FR可以有效地充當支架，在其 上融合CDR環。然而，抗體存在著許多必須解決的技術問題。例如，它們通常必須在哺乳動物 細胞中生成，這是昂貴且耗時的。此外，用于產生單克隆抗體的各種方法通常是緩慢 的、昂貴的或兩者兼有。由于這些問題，各個團體已在開發用于展示肽的備選蛋白質支 架。例如，LaVallie 等人((1993)Biotechnology 11 187-93 ；和美國專利號 5,270,181) 使用大腸桿菌硫氧還蛋白以避免包涵體形成的方式在大腸桿菌中展示肽。Colas等人 ((1996)Nature 380 548-50)擴展了這種方法，其證實可以將隨機肽插入硫氧還蛋白的天 然環中，并且硫氧還蛋白質-肽“適體”(aptamer)可以通過其與各種蛋白質的結合特異 性來選擇。其他團體已鑒定了其它可用作支架的天然蛋白質。然而，這些方法具有某些 局限性。一般而言，基于天然存在蛋白質的支架在通常生成該天然蛋白質的系統中表達 最好。例如，基于硫氧還蛋白的適體通常在大腸桿菌中表達。與之相反，基于III型纖 連蛋白的適體通常在哺乳動物細胞中和/或使用促進二硫鍵形成的分泌系統時得到最好 地表達。此外，天然蛋白質作為支架的使用總是具有一個固有風險，即天然蛋白質的未 知生物特性將干擾在特定的情況下其作為支架的功能。因此，本領域中對具有改良性質 的蛋白質支架系統存在需求。發明_既述本發明部分基于以下認識，從頭設計的完全人工蛋白可以具有蛋白質工程師 基于其預期用途的需要而指定的性質。本發明的核心是摻入或模擬Τορ7蛋白質的元件的 人工蛋白(Τορ7蛋白是一種由Kuhlmann等人(2003) Science 302 1364-1368從頭設計的 高度穩定的蛋白質)。這些人工蛋白經設計而高度穩定且有效折疊，在某些位置可以遺傳 摻入隨機或多樣的肽環。這些人工蛋白支架的穩定性使得可以摻入可能傾向于使蛋白質 不穩定的肽，從而允許蛋白質在盡管存在可能的失穩定性環的情況下折疊。如果引入隨 機化的氨基酸序列的話，則可以就結合預選靶分子的能力，篩選所得的蛋白質文庫。由 此類篩選得到的蛋白質可以用 于診斷和治療。
因此，在一方面，本發明提供具有Τορ7折疊的蛋白質。Τορ7為球狀蛋白質折 疊(Kuhlman等人，2003，Science 302，1364)且具有下列
氨基酸序列DIQVQVNIDDNGKNFDYTYTVTTESELQKVLNELKDYIKKQGAKRVRISITART KKEAEKFAAILIKVFAELGYNDINVTFDGDTVTVEGQLE(Fig.5)Top7折疊中的一個或多個環可以特異性地與預選靶分子結合，且該蛋白質與 該預選靶分子結合的解離常數不超過10 μ M(例如5-10 μ Μ、1-10 μ Μ、0.5-10 μ Μ、 0.1-10 μ Μ、0.05-10 μ Μ、0.01—10 μ Μ、0.001—10 μ M 等)。在另一方面，本發明提供了以Τορ7折疊規定兩端的蛋白質。在該蛋白質的一 端上的至少兩個環各比對應的Τορ7環長至少一個氨基酸。在一個實施方案中，這兩 個環中的一個或兩個環均特異性地與預選靶分子結合。在某些實施方案中，該蛋白質 與預選靶分子結合的解離常數不超過10 μ M(例如5-10 μ Μ、1-10 μ Μ、0.5-10 μ Μ、 0.1-10 μ Μ、0.05-10 μ Μ、0.01—10 μ Μ、0.001—10 μ M 等)。在另一方面，本發明提供了包括至少五個反平行鏈、至少兩個平行α-螺旋 和連接α-螺旋與β-鏈的環的蛋白質。通常，該平行α-螺旋形成一層，而該反平行
鏈形成第二層。該蛋白質具有兩端，通常對應于α-螺旋和β-鏈的末端。該蛋白質 的兩端各自包括兩個連接α-螺旋與β-鏈的環和一個連接兩個β-鏈的環。在該蛋白質 一端上的至少兩個環各比對應Τορ7環長至少一個氨基酸。在一些實施方案中，該α-螺 旋和β “鏈規定α “碳主鏈，該主鏈的結構與Τορ7的α -螺旋和β -鏈的α -碳主鏈的 結構的均方根偏差(RMSD)不大于4.0 (例如不大于3.5、不大于3.0、不大于2.5、不大于 2.0、不大于1.9、不大于1.8、不大于1.7、不大于1.6、不大于1.5、不大于1.4、不大于 1.3、不大于1.2、不大于1.1或不大于1.0)。在某些實施方案中，兩個環中的至少一個與 預選靶分子特異性結合。例如，在一些實施方案中，該蛋白質與預選靶分子結合的解離 常數不超過 10 μ M(例如 5-10 μ Μ、1-10 μ Μ、0.5-10 μ Μ、0.1-10 μ Μ、0.05-10 μ Μ、 0.01-10 μ Μ、0.001-10μΜ等)。在另一方面，本發明提供了包括至少五個反平行鏈和至少兩個平行α-螺 旋的蛋白質，該α-螺旋和β-鏈規定具有如下結構的α-碳主鏈，所述結構與Τορ7的 α _螺旋和β -鏈的α -碳主鏈的結構的均方根偏差(RMSD)不大于4.0 (例如不大于3.5、 不大于3.0、不大于2.5、不大于2.0、不大于1.9、不大于1.8、不大于1.7、不大于1.6、 不大于1.5、不大于1.4、不大于1.3、不大于1.2、不大于1.1或不大于1.0)。該蛋白質包 括連接α“螺旋和β“鏈的環。該蛋白質的兩端各自包括兩個連接α“螺旋與β“鏈的 環和一個連接兩個鏈的環。在一端上的一個或多個環特異性地與預選靶分子結合， 且該蛋白質與所述預選靶分子結合的解離常數不超過10 μ M (例如5-10 μ Μ、1-10 μ Μ、 0.5-10 μ Μ、0.1-10 μ Μ、0.05-10 μ Μ、0.01-10 μ Μ、0.001-10 μ M 等)。在一些實施方 案中，平行α-螺旋(“α ”)禾口反平行β-鏈(“β ”)以β β α β α β β的次序存 在于單個多肽中。在其它實施方案中，該蛋白質包括兩個多肽，例如以異二聚體或同二 聚體的形式，每個多肽以β α β β的次序包括一個α-螺旋和三個反平行β-鏈。在任何一個前述蛋白質的一些實施方案中，至少三個環(例如在該蛋白質同一 端上的三個環)各比對應Τορ7環長至少一個氨基酸。
本發明還提供了包括與Τορ7或Τορ7衍生物的氨基酸序列有關的氨基酸序列的蛋 白質。一種此類衍生物的氨基酸序列在本文被稱為“RD1.3/1.4共有序列”，示為SEQ ID NO 5。已經將選自RD1.3/1.4共有序列的α -螺旋和β -鏈的部分的氨基酸連接起 來，示為SEQ ID NO: 6。另一種Top7衍生物的氨基酸序列被稱為“ RDl-DI-DeLys ”， 示為SEQ ID NO 2，已經將自其α -螺旋和β -鏈選擇的部分連接起來，示為SEQ ID NO 3。對涵蓋了預期顯示免疫原性減少的各種Top7衍生物的另外共有序列的對應選擇 部分的連接給出了 SEQ IDNO 7。特別地，對于SEQ ID Ν0.3、SEQ ID NO 6和SEQ ID NO 7中的每個，氨基酸1-5對應于第一 β-鏈的部分；氨基酸6-8對應于第二 β-鏈 的部分；氨基酸9-20對應于第一 α-螺旋的部分；氨基酸21-23對應于第三β-鏈的部 分；氨基酸24-32對應于第二 α-螺旋的部分；氨基酸33-37對應于第四β-鏈的部分； 且氨基酸38-42對應于第五β -鏈的部分。因此，在一方面，本發明提供了包括式B⑷-L (45)-A(5)-L (56)-B (6)-L (67)-B (7)的氨基酸序列的蛋白質。B (4)、A (5)、B (6)和B (7)對應于⑴SEQID NO : 3或 與SEQ ID NO: 3的氨基酸21-42至少80%相同的序列(例如，在不超過四個位置、不超 過三個位置、不超過兩個位置或不超過一個位置不同于氨基酸21-42)的氨基酸21-23、 24-32、33-37 和 38-42 ；或(ii) SEQ IDNO 6 或與 SEQ ID NO 6 的氨基酸 21-42 至少 90%相同的序列(例如，在不超過兩個位置、不超過一個位置不同于氨基酸21-42)的氨 基酸 21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii) SEQ IDNO 7 或與 SEQ IDNO 7 的氨基 酸 21-42 至少 95%相同的序列的氨基酸 21-23、24-32、33-37 和 38-42。L (45)、L(56) 和L(67)的最小長度分別為10個氨基酸、7個氨基酸和4個氨基酸。L(45)、L(56)禾口 L(67)中的至少一個與預選靶分子特異性結合，該蛋白質與所述預選靶分子結合的親和力 常數不超過10 μ M。在另一方面，本發明提供了包括式B(4)-L(45)-A(5)-L(56)-B(6)-L(67)-B(7) 的氨基酸序列的蛋白質。B(4)、A(5)、B (6)禾Π B (7)對應于(i) SEQID NO : 3或與 SEQ ID NO 3的氨基酸21-42至少80%相同的序列(例如，在不超過四個位置、不超 過三個位置、不超過兩個位置或不超過一個位置不同于氨基酸21-42)的氨基酸21-23、 24-32、33-37 和 38-42 ；或(ii) SEQ IDNO 6 或與 SEQ ID NO 6 的氨基酸 21-42 至少 90%相同的序列(例如，在不超過兩個位置、不超過一個位置不同于氨基酸21-42)的氨 基酸 21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii) SEQ ID NO 7 或與 SEQ ID NO 7 的氨基 酸 21-42 至少 95%相同的序列的氨基酸 21-23、24-32、33-37 和 38-42。L(45)、L (56) 和L(67)的最小長度分別為10個氨基酸、7個氨基酸和4個氨基酸，且L(45)、L(56)和 L(67)中的至少兩個各自超過其最小長度至少一個氨基酸。在一些實施方案中，L(45)、 L(56)和L(67)中的至少一個與預選靶分子特異性結合，該蛋白質與所述預選靶分子結合 的親和力常數不超過10 μ M。在某些實施方案中，本發明的蛋白質包括兩個式B (4)-L (45)-A(5)-L (56)-B (6 )-L (67)-B (7)的氨基酸序列(例如在分開的多肽鏈上)。在另一方面，本發明 提供了包括式B⑴-L (12) -B (2) -L (23) -A(3) -L (34) -B⑷ -L(45)-A(5)-L(56)-B(6)-L(67)-B(7)的氨基酸序列的蛋白質。B(I)、B(2)、A⑶、 B (4)、A(5)、B (6)禾Π B (7)對應于(i) SEQ ID NO 3 或與 SEQ ID NO 3 的氨基酸1-42至少80%相同的序列(例如，在不超過八個位置、不超過七個位置、不超過六個位 置、不超過五個位置、不超過四個位置、不超過三個位置、不超過兩個位置或不超過一 個位置不同于氨基酸1-42)的氨基酸1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37和38-42 ； 或(ii) SEQ ID NO 6或與SEQ ID NO 6的氨基酸1-42至少90%相同的序列(例如， 在不超過四個位置、不超過三個位置、不超過兩個位置或不超過一個位置不同于氨基酸 1-42)的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii) SEQ ID NO 7或與SEQ ID NO: 7至少95%相同的序列的氨基酸1-5、6-8、9-20, 21-23、24-32、 33-37 和 38-42。L(12)、L(23), L(34), L(45), L(56)和 L(67)的最小長度分別為 10 個氨基酸、7個氨基酸、9個氨基酸、10個氨基酸、7個氨基酸和4個氨基酸。L(12)、 L(23), L(34), L(45), L(56)和L(67)中的至少一個與預選靶分子特異性結合，該蛋白 質結合所述預選靶分子的親和力常數不超過10 μ M。在一些實施方案中，B(l)、B (2)、 A (3)、B (4)、A (5)、B (6)和 B (7)對應于⑴ SEQ IDNO 3 或與 SEQ ID NO 3 至少 85%相同的序列的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(ii) SEQ IDNO 6或與SEQ ID NO: 6至少95 %相同的序列的氨基酸1-5、6-8、9-20, 21-23、 24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii) SEQ ID NO 7 的氨基酸 1-5、6-8、9-20, 21-23、 24-32、 33-37 和 38-42。在另一方面，本發明提供了包括式B⑴-L (12) -B (2) -L (23) -A(3) -L (34) -B⑷ -L(45)-A(5)-L(56)-B(6)-L(67)-B(7)的氨基酸序列的蛋白質。B(I)、B(2)、A⑶、 B (4)、A(5)、B (6)禾Π B (7)對應于(i) SEQ ID NO 3 或與 SEQ ID NO 3 的氨基酸 1-42至少80%相同的序列(例如，在不超過八個位置、不超過七個位 置、不超過六個位 置、不超過五個位置、不超過四個位置、不超過三個位置、不超過兩個位置或不超過一 個位置不同于氨基酸1-42)的氨基酸1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37和38-42 ； 或(ii) SEQ ID NO 6或與SEQ ID NO 6的氨基酸1-42至少90%相同的序列(例如， 在不超過四個位置、不超過三個位置、不超過兩個位置或不超過一個位置不同于氨基酸 1-42)的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii) SEQ ID NO 7或與SEQ ID NO: 7的氨基酸1-42至少95%相同的序列的氨基酸1-5、6-8、9-20, 21-23、24-32、33-37 和 38-42。L(12)、L(23), L(34), L(45), L(56)和 L(67)的最 小長度分別為10個氨基酸、7個氨基酸、9個氨基酸、10個氨基酸、7個氨基酸和4個氨 基酸。在一些實施方案中，L(12)、L(34)或L(56)中的至少兩個各自超過其最小長度 至少一個氨基酸。在一些實施方案中，L(23)、L(45)或L(67)中的至少兩個各自超過 其最小長度至少一個氨基酸。在另一方面，本發明提供了包括式B (1) -L (12) -B (2) -L (23) -A(3) -L (34) -B (4) -L(45)-A(5)-L(56)-B(6)-L(67)-B(7)的氨基酸序列的蛋白質。B(I)、B(2)、A⑶、 B (4)、A(5)、B (6)禾Π B (7)對應于(i) SEQ ID NO 3 或與 SEQ ID NO 3 的氨基酸 1-42至少85%相同的序列(例如，在不超過六個位置、不超過五個位置、不超過四個位 置、不超過三個位置、不超過兩個位置或不超過一個位置不同于氨基酸1-42)的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(ii) SEQ ID NO 6 或與 SEQ ID NO 6的氨基酸1-42至少95%相同的序列(例如，在不超過兩個位置或不超過一個位置 不同于氨基酸 1-42)的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 ；或(iii)SEQ ID NO 7 的氨基酸 1-5、6-8、9-20, 21-23、24-32、33-37 和 38-42。L(12)、 L(23), L(34), L(45), L(56)和L (67)的最小長度分別為10個氨基酸、7個氨基酸、 9個氨基酸、10個氨基酸、7個氨基酸和4個氨基酸，并且L(12)、L(23), L(34), L(45), L(56)或L(67)超過其最小長度至少一個氨基酸。在一些實施方案中，B(l)、 B (2)、A (3)、B (4)、A (5)、B (6)和 B (7)對應于 SEQ ID NO 3 或與其至少 90%相同 或至少95%相同的序列的氨基酸1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37和38-42。在一 些實施方案中，該蛋白質以取決于L(12)、L(23), L(34), L(45), L(56)禾Π /或L(67) 的氨基酸序列的方式特異性結合預選靶分子。對于包括式(1)-L(12)-B (2)-L (23)-A (3)-L (34)-B (4)-L (45)-A (5)-L (56)-B(6)-L(67)-B(7)的氨基酸序列的任何蛋白質，在一些實施方案中，L(12)、L(23), L(34), L(45), L(56)和L(67)中的至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或所有 六個超過其最小長度至少一個氨基酸。這些長度組合描述于下表1中，其中“min”表 示該長度等于最小長度，“>min”表示該長度超過最小長度至少一個氨基酸。表 1
實施方案 L (12) L (23) L (34) L (45) L (56) L (67)
1minminminminminmin
2minminminminmin> min
3minminminmin> min min
4minminminmin> min > min
5minminmin> min minmin
6minminmin> min min> min
7minminmin> min > min min
8minminmin> min > min > min
9minmin> min minminmin
10minmin> min minmin> min
11minmin> min min> min min
12minmin> mi n min> min > min
權利要求
1.一種蛋白質，其衍生自野生型蛋白質Top 7，包含兩個平行α _螺旋和五個反平行 β-鏈以及連接α-螺旋和β-鏈的環，其中所述蛋白質的兩端各自包括連接α-螺旋與 β-鏈的兩個環和連接兩個β-鏈的一個環，其中在所述蛋白質的一端上的至少兩個環 各比對應Τορ7環長至少一個氨基酸，且所述兩個環中的至少一個與預選靶分子特異性結 合。
2.權利要求1的蛋白質，其中所述α-螺旋和β-鏈規定具有如下結構的α-碳主 鏈，所述結構與Τορ7的α-螺旋和β-鏈的α-碳主鏈的結構的均方根偏差(RMSD)不 大于4.0。
3.權利要求2的蛋白質，其中所述RMSD不大于2.0。
4.根據權利要求1-3中任一項的蛋白質，其中所述蛋白質與所述預選靶分子結合的解 離常數不超過10 μ Μ。
5.根據權利要求1-4中任一項的蛋白質，其中所述平行α-螺旋(“ α ”)和反平行 β-鏈(“β”)以ββαβαββ的次序存在于單個多肽中。
6.根據權利要求1-5中任一項的蛋白質，其中所述蛋白質包括至少兩個多肽，每個多 肽以β α β β的次序包括一個α-螺旋(“ α ”)和三個反平行β _鏈(“ β ”)。
7.根據權利要求1-6中任一項的蛋白質，其中至少三個環比對應Τορ7環長至少一個 氨基酸。
8.權利要求7的蛋白質，其中所述三個環在所述蛋白質的同一末端上。
9.根據權利要求1-8中任一項的蛋白質，其包括式B⑷-L(45) -A (5) -L (56) -B (6) -L (67)-B (7)的氨基酸序列，其中B(4)、A (5)、B (6)、和B (7)對應于下列序列的氨基酸 21-23、24-32、33-37 和 38-42 (i) SEQ IDNO 3 或與 SEQ ID NO 3 的氨基酸 21-42 至少80%相同的氨基酸序列；或(ii) SEQ ID NO 6或與SEQ ID NO 6的氨基酸21-42 至少90%相同的氨基酸序列；或(iii)與SEQIDN0 7至少95%相同的序列，其中(i)L (45)的最小長度是10個氨基酸，(ii)L(56)的最小長度是7個氨基酸，(iii)L (67)的最小長度是4個氨基酸，且(iv)L(45)、L(56)或L (67)中的至少一個特異性結合預選靶分子，且L (45)、L (56) 或L (67)中的至少兩個各自超過其最小長度至少一個氨基酸。
10.根據權利要求9的蛋白質，其中所述蛋白質包括式B(4)-L (45)-A (5)-L (56)-B ( 6)-L (67)-B (7)的兩個氨基酸序列。
11.根據權利要求9或10的蛋白質，其中L(45)、L(56)或L(67)中的至少一個特異 性結合預選靶分子，其中所述蛋白質與所述預選靶分子結合的解離常數不超過10 μ M。
12.根據權利要求1-8中任一項的蛋白質，其包括式B⑴-L(12) -B (2) -L (23) -A(3)-L (34)-B (4)-L (45)-A(5)-L (56)-B (6)-L (67)-B (7)的氨基酸序列，其中 B(I)、B (2)、 Α(3)、Β(4)、Α(5)、B(6)和 B(7)對應于下列序列的氨基酸 1-5、6-8、9-20, 21-23、 24-32、33-37和38-42 (i)與SEQID NO 3至少80%相同的氨基酸序列；或(ii)與 SEQ ID NO 6至少90%相同的序列；或(iii)與SEQ ID NO 7至少95%相同的序列， 其中(i)L (12)的最小長度是10個氨基酸，(ii)L(23)的最小長度是7個氨基酸，(iii)L(34)的最小長度是9個氨基酸，(iv)L(45)的最小長度是10個氨基酸，(v)L (56)的最小長度是7個氨基酸，(vi)L (67)的最小長度是4個氨基酸，且(vii)L (12)、L (23)、L (34)、L (45)、L (56)或 L (67)中的至少一個特異性結合預選 靶分子，其中所述蛋白質與所述預選靶分子結合的解離常數不超過10 μ Μ。
13.根據權利要求12的蛋白質，其中B(I)、B⑵、A⑶、B⑷、A(5)、B(6)和 B(7)對應于下列序列的氨基酸 1-5、6-8、9-20、21-23、24-32、33-37 和 38-42 (i)與 SEQ ID NO 3至少85 %相同的序列或(ii)與SEQ ID N0.6至少95 %相同的序列。
14.根據權利要求12或13的蛋白質，其中L(12)長度大于10個氨基酸。
15.根據權利要求12-14中任一項的蛋白質，其中L(23)長度大于7個氨基酸。
16.根據權利要求12-15中任一項的蛋白質，其中L(34)長度大于9個氨基酸。
17.根據權利要求12-16中任一項的蛋白質，其中L(45)長度大于10個氨基酸。
18.根據權利要求12-17中任一項的蛋白質，其中L(56)長度大于7個氨基酸。
19.根據權利要求12-18中任一項的蛋白質，其中L(67)長度大于4個氨基酸。
20.根據權利要求1-19中任一項的蛋白質，其還包括與其穩定結合的效應子和/或可 檢測標記。
21.根據權利要求1-20中任一項的蛋白質，其中所述蛋白質(i)不特異性結合〔04，和/或(ii)不包含人免疫缺陷病毒肽，和/或(iii)不包含免疫原性人免疫缺陷病毒肽，和/或(iv)不包含病毒或細菌肽。
22.融合蛋白，其包含至少兩個根據前述權利要求中任一項的蛋白質。
23.蛋白質文庫，其包含多個不同的根據權利要求1-21中任一項的蛋白質，其中所述 不同蛋白質在一個或多個環的氨基酸序列上彼此不同。
24.核酸文庫，其編碼權利要求23的蛋白質文庫。
25.核酸，其編碼根據權利要求1-21中任一項的蛋白質或權利要求22的融合蛋白。
26.一種鑒定特異性結合預選靶分子的蛋白質的方法，所述方法包括將根據權利要求 23的蛋白質文庫暴露于靶分子；和鑒定至少一個與所述靶分子結合的蛋白質。
27.—種用于檢測靶分子的方法，所述方法包括在允許靶分子，如果存在的話，與根 據權利要求1-21中任一項的蛋白質結合的條件下將樣品暴露于所述蛋白質；和檢測包含 所述蛋白質和所述靶分子的復合物的存在或不存在。
全文摘要
本發明提供與人工蛋白Top7或與Top7衍生物具有一種或多種相似性的蛋白質。本發明的蛋白質具有一個或多個環比對應Top7環長和/或能與預選靶分子結合。本發明還提供可以用于產生本發明蛋白質的核酸和細胞及其使用方法。
文檔編號C07K14/00GK102015752SQ200980114627
公開日2011年4月13日 申請日期2009年4月24日 優先權日2008年4月25日
發明者J·H·戴維斯 申請人:默克專利有限公司