專利名稱：：L-核苷的前體藥物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷(簡稱L-FMAU)的前體藥物及其在制備抗病毒藥物中的應用。本發明還涉及L-FMAU的前體藥物的制備方法。本發明同時還涉及含有L-FMAU的前體藥物的藥物組合物及其制備方法。
背景技術：
：2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-!3-L-阿拉伯糖尿苷(l-(2'-Deoxy-2'-fluoro-P-L-arabinofuranosyl)-5-methyluracil簡稱L-FMAU)是一種有抗病毒作用的L_型核苷。該化合物的化學名稱還可以被稱做2'-脫氧-2'-氟-13-L-阿拉伯糖胸苷或者N「(2'-脫氧-2'-氟-13-L-阿拉伯糖基)_5-甲基尿嘧啶，其商品名為Clevudine。中國專利95191415.4，美國專利5，567，688和美國專利5，565，438披露了一系列的有抗乙型肝炎病毒(HBV)和抗非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)活性的L-型核苷包括L-FMAU。美國專利6670342披露了L-FMAU還有抑制丁型肝炎病毒((H印atitisdeltavirus,HDV)的功能。根據文獻報道，L-FMAU的生物利用度較低，體內代謝的半衰期較短。抗微生物藥劑和化學治療(AntimicrobAgentsChemother.19970ct;41(10):2184-7)據報道，L-FMAU在美洲土撥鼠中的口服吸收不充分，生物利用度較低，只有約20%。另外還有文獻報道了L-FMAU口服吸收很慢，生物利用度(36±13)%低，半衰期較短。較短的半衰期和較低的生物利用度都會影響L-FMAU的臨床治療效果。半衰期短會使藥物的服用間隔縮短，生物利用度低會使得病人服用的劑量增大，加重病人身體代謝的負擔而且也會使藥物生產的成本上升。核苷類藥物經過結構修飾后可以得到核苷的前體藥物。核苷類藥物有多種類型的前體藥物，常見的有核苷的氨基酸酯，核苷的烷氧甲酰基衍生物，核苷的羧酸酯以及磷酸酯。前體藥物往往能夠提高母體藥物的生物利用度，降低藥物的毒副作用，延長藥物的作用時間或者改變藥物在體內的分布情況。最常見的核苷的前體藥物是核苷的氨基酸酯。已經應用于臨床的例子有纈更昔洛韋(valganciclovir)和纈昔洛韋。纈更昔洛韋是核苷類藥物更昔洛韋(ganciclovir)的纈氨酸酯。口服更昔洛韋的生物利用度極低(約69%)。纈更昔洛韋口服吸收的生物利用度為60%，是更昔洛韋的10倍，并可大大減少更昔洛韋的毒性。纈昔洛韋是阿昔洛韋的左旋纈氨酸酯鹽酸鹽。纈昔洛韋在首輪小腸循環和肝臟代謝中轉變為阿昔洛韋，轉變后阿昔洛韋的生物利用度為54%，比口服阿昔洛韋高35倍。其他核苷氨基酸酯前體藥物的例子可以在下列文獻中找到抗病毒化學和化學治療(AntiviralChemistry&chemotherapy)14:263-270，美國專利US5198539;分子藥物學(MolPharm.)2005Mar_Apr;2(2):157-67;藥物化學雜志(JMedChem.)2005Feb24;48(4):1274-7;生物有機化學藥物化學通訊(BioorgMedChemLett.)2004Mar8;14(5):1085-7.;藥學研究(PharmRes.)2003S印；20(9):1381-8。核苷類藥物的另外一種類型的前體藥物是烷氧甲酰基衍生物。該類前體藥物的一個例子是抗癌癥藥物卡培他濱(Capecitabine)。烷氧甲酰基衍生物只能被肝臟中一種特異性的羧酸酯酶(異構酶A)水解形成母體藥物，而不能被其他器官中的酶所降解，因此這類前體藥物具有事實上的肝臟靶向性。另外可參考的例子可以在中國專利申請02123469.8中找到。核苷類藥物的另外一種類型的前體藥物是羧酸酯衍生物。臨床上使用的例子有泛昔洛韋(Famciclovir)。泛昔洛韋是噴昔洛韋(Penciclovir)的雙乙酸酯前體藥物，泛昔洛韋在體內可以迅速地被水解脫去乙酰基并被氧化成噴昔洛韋。泛昔洛韋可以大大提高噴昔洛韋的生物利用度。核苷羧酸酯前體藥物另外的例子可以在下列文獻中找到藥物化學雜志(J.Med.Chem.)32，1738(1989)，藥學研究(Pharm.Res.)4No.2，120(1987)，抗微生物藥劑和化學治療(Antimicrob.AgentsChemother.)33No.1，110-112(1989)，世界專利申請W094/24134,W093/07163和W094/22887,美國專利US6，384，019和US5，216，142，歐洲專利EP343133。還有一種類型的核苷類藥物前體藥物是磷酸酯。該類該類前體藥物的一個例子是磷酸氟達拉濱，磷酸氟達拉濱為抗腫瘤核苷氟達拉濱的磷酸酯前體藥物，磷酸酯的引入提高了母體藥物的溶解度，便于制備成注射用制劑。核苷磷酸酯前體藥物更多的例子可以在下列文獻中找到分子藥物學(MolPharm.)2005May-Jun;2(3):233-41;核苷，核苷酸和核酸(NucleosidesNucleotidesNucleicAcids.)2003May_Aug;22(5-8):899-901;藥物化學雜志(JMedChem.)2003Oct9;46(21):4564-71;現代藥物設計(CurrPharmDes.)2003;9(18):1441-51。核苷，核苷酸和核酸(NucleosidesNucleotidesNucleicAcids.)2001Apr-Jul;20(4-7):315-21;生物有機化學藥物化學通訊(BioorgMedChemLett.)2001Jul9;11(13):1775-7。
發明內容本發明的目的是提供一類抗病毒化合物，這類化合物可以用于預防和治療由乙型肝炎病毒(HBV)，丁型肝炎病毒(HDV)和非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)感染引起的疾病。這類化合物的結構如式(I)所示，是2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷(L-FMAU)的3'-前體藥物。該類化合物還包括的L-FMAU的3'-前體藥物在藥學上可接受的鹽。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>式(I)中^和I^可以相同或不同，Ri=氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基和烷基；R2=H，氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基和烷基。L-FMAU的3'-前體藥物在3'位上具有可生物裂解的基團，同時在5'位也可以選擇性地具有可被生物裂解的基團。L-FMAU的3'-前體藥物在體內可以被代謝成母體化合物L-FMAU或者L-FMAU的5'-磷酰化代謝產物。本發明提供的化合物或者本身具有抗病毒(HBV，HDV，EBV)活性，或者通過代謝成為有抗病毒活性的母體化合物L-FMAU以及L-FMAU的5'-磷酰化代謝產物而起到抗病毒的作用。總之，本發明提供了下列的物質和方法(a)提供了-類化合物，所說的化合物是2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13_L_阿拉伯糖尿苷的3'-前體藥物及其藥學上可接受的鹽；(b)2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷的3'-前體藥物及其藥學上可接受的鹽在制備治療或預防乙型肝炎病毒(HBV)，丁型肝炎病毒(HDV)和非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)感染的藥物中的應用；(c)含有2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷的3'-前體藥物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物；(d)用于制備2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷的3'-前體藥物及其藥學上可接受的鹽的方法，(e)用于制備含有2'-脫氧-2'-氟-5-甲基_|3_L_阿拉伯糖尿苷的3'-前體藥物或其藥學上可接受的鹽的藥物組合物的方法。術語氨基酸是指天然存在的和人工合成的a、13、Y或S氨基酸，并且包括氨基和側鏈上的活性基團被適當保護的氨基酸。天然氨基酸包括但不限于在天然蛋白質中出現的氨基酸，即甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、脯氨酸、絲氨酸，蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸、精氨酸和組氨酸。合成的或非天然氨基酸的例子有a-三氟亮氨酸，a-對-氟苯丙氨酸和a-3-三乙基丙氨酸等，還包括e-丙氨酸、e-纈氨酸、P-亮氨酸、P-異亮氨酸、P-脯氨酸、P-苯丙氨酸、|3_色氨酸、13-甲硫氨酸、|3-甘氨酸、13-絲氨酸、|3-蘇氨酸、|3_半胱氨酸、P_酪氨酸、P_天冬酰胺酸、P_谷氨酰胺酸、P_天冬氨酸、P_谷氨酸、P_賴氨酸、P-精氨酸或e-組氨酸。上述氨基酸可以是以單一對映體的形式存在，也可以是以消旋體或對映體混合物的形式存在。優選的氨基酸是L-構型的天然氨基酸。術語氨基酸殘基是指上述氨基酸除去羧基部分中的羥基后所殘余下來的基團，包括但不限于丙氨酰基、纈氨酰基、亮氨酰基、異亮氨酰基、脯氨酰基、苯丙氨酰基、色氨酰基、甲硫氨酰基、甘氨酰基、絲氨酰基、蘇氨酰基、半胱氨酰基、酪氨酰基、天冬酰胺酰基、谷氨酰胺酰基、天冬氨酰基、谷氨酰基、賴氨酰基、精氨酰基、組氨酰基、e-丙氨酰基、P-纈氨酰基、P-亮氨酰基、e-異亮氨酰基、P-脯氨酰基、e-苯丙氨酰基、e-色氨酰基、P_甲硫氨酰基、P_甘氨酰基、P_絲氨酰基、P_蘇氨酰基、P_半胱氨酰基、P_酪氨酰基、e-天冬酰胺酰基、e-谷氨酰胺酰基、e-天冬氨酰基、e-谷氨酰基、P-賴氨酰基、P-精氨酰基或P-組氨酰基。烷氧甲酰基是指結構式-C(O)-O-R所示的有機基團，其中R二烷基；有機羧酸酰基是指結構式-C(O)-R所示的有機基團，其中R=烷基；磷酰基是指下列結構式所示的基團，其中Ra，Rb可以相同或不同，Ra，Rb各自為H或烷基；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>術語烷基除特別指出外，指Q-(^的飽和或不飽和的直鏈、分支或環狀的脂肪烴基，和C6_C2。的芳香基和芳香烴基。非限定性例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、環丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、環戊基、異戊基、新戊基、己基、異己基、環己基、環己基甲基、3_甲基戊基、2，2-二甲基丁基和2，3-二甲基丁基，苯基，苯甲基，苯乙基，萘基，對甲基苯基。上述烷基還可以具有取代基。取代基的部分選自羥基、巰基、鹵素、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸根、膦酸、羧基，磷酸根或膦酸根。取代基部分根據需要可以是不保護的或者受到保護的。術語保護和保護基的概念是有機化學領域內技術人員所公知，可參考Greene等著的《有機合成中的保護基團》(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWileyandSons,)第二片反，1991。L-FMAU的前體藥物是指在生物體內通過代謝(包括水解或氧化)可以形成L-FMAU或L-FMAU的5'-磷酸酯的化合物。本文中所說的L-FMAU基本上是以純的對映體形式存在的，基本上不含有別的立體異構體，對映體純度在95%以上。在一種實施方案中，L-FMAU的前體藥物只在3'-位上有可裂解基團，非限定性例子包括3'_氨基酸酯，3'_有機羧酸酯，3'_烷氧甲酸酯和3'-磷酸酯。在第二種實施方案中，L-FMAU的前體藥物在3'-位和5'-位上都有可裂解基團，并且3'_位和5'-位上的基團是相同的。非限定性例子包括L-FMAU的3'，5'-二氨基酸酯，3'，5'-二有機羧酸酸酯和3'，5'-二烷氧甲酸酯。在第三種實施方案中，L-FMAU前體藥物在3'-位和5'-位上都有可裂解基團，并且3'-位和5'-位上的基團是不相同的，非限定性例子包括L-FMAU的3'-氨基酸酯-5'-有機羧酸酸酯，3'-氨基酸酯-5'-烷氧甲酸酯，3'-有機羧酸酸酯-5'-氨基酸酯，3'-烷氧甲酸酯_5'_氨基酸酯，3'-有機羧酸酸酯-5'-烷氧甲酸酯，3'-烷氧甲酸酯-5'-有機羧酸酸酯，還包括由兩種不同的氨基酸形成的3'，5'-二氨基酸酯，兩種不同的烷氧甲酸形成的3'，5'-二烷氧甲酸酯或兩種不同的有機羧酸酸形成的3'，5'-二有機羧酸酸酯。上述L-FMAU前體藥物還可以鹽的形式存在。例如含有氨基酸殘基的L-FMAU前體藥物上的氨基可以同具有足夠酸度的酸形成穩定的鹽。合適的酸可以是一元酸或多元酸，包括無機酸，有機磺酸，有機羧酸以及含有酸性基團的有機化合物或天然產物。優選的酸應該是無毒性或毒性很低的酸，尤其是在成鹽后作為藥物活性成份使用時，所選用的酸需要安全無毒。合適的無機酸包括硫酸，磷酸，硝酸，鹽酸，氫碘酸，氫溴酸，氫氟酸等，合適的有機磺酸包括C6—16芳基磺酸、(V16雜芳基磺酸和C卜16烷基磺酸，如牛磺酸，苯磺酸、對甲苯磺酸，a_萘磺酸、P-萘磺酸、(S)-樟腦磺酸、甲磺酸、乙磺酸、正丙磺酸、異丙磺酸、正丁磺酸、仲丁磺酸、異丁磺酸、叔丁磺酸、戊磺酸和己磺酸。有機羧酸可以是一元或多元羧酸，包括C卜16烷基羧酸、Ce—16芳基羧酸和(;—16雜芳基羧酸，如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、戊二酸、酒石酸、檸檬酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、馬來酸，草酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、杏仁酸，桂皮酸，扁桃酸，水楊酸和1-苯氧基苯甲酸，煙酸，泛酸。有機羧酸還包括氨基酸，合適的氨基酸有許多，尤其是作為蛋白質組分而發現的天然氨基酸，例如天冬氨酸，谷氨酸，纈氨酸。含有酸性基團的有機化合物或天然產物包括抗壞血酸，齊墩果酸，烏索酸，熊果酸，甘草酸，甘草次酸，丹參酸，阿魏酸，葡萄糖醛酸，葡萄糖酸和果糖酸。含有酸性基團的L-FMAU前藥例如L-FMAU-3'-谷氨酸酯和L-FMAU-3'-單磷酸酯可以與金屬離子例如堿金屬，堿土金屬和過渡金屬離子(鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋁、銅、鐵等)形成鹽，還可以與銨或有機銨離子形成鹽(單甲銨鹽、二甲銨鹽、三乙銨鹽、二乙銨鹽、單乙醇胺鹽、苦參堿鹽)，含有多個酸性基團或能成多價鹽的前藥還可以與上述一種以上的離子形成混合鹽。第一種實施方案提供的化合物可以用下式來表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>式(II)中&=氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基和烷基優選的化合物有L-FMAU的3'-氨基酸酯，包括3'-O-(L-纈氨酰基)_2'-脫氧-2'_氟_5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷，3'_0-仏-異亮氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷，3'_0-仏-丙氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷，3'-O-(L-苯丙氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷，3'-O-(L-賴氨酰基)-2'_脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷，3'-O-(L-天冬氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷。L-FMAU的3'-有機羧酸酯，包括低級脂肪酸酯，高級脂肪酸酯和芳香羧酸酯3'-0-苯甲酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷，3'-0-乙酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷，3'_0-反油酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷，3'-0-硬脂酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷，L-FMAU的3'-烷氧甲酸酯，包括3'_0_正丁氧酰基-2'-脫氧-2'_氟_5_甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷，3'-0-異丁氧酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷，3'-0-正戊氧酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷，3'-0-正己氧酰基_2'_脫氧-2'-氟-5-甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷；L-FMAU的3'-磷酸酯L-FMAU的3'-單磷酸酯，L-FMAU的3'-二磷酸酯和L-FMAU的3'-三磷酸酯，L-FMAU的3'-單磷酸-雙乙酰巰乙基酯。式(II)所示的L-FMAU的3'-前藥可以用如下列反應方程式所示方法來制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>首先使用合適的保護基團P選擇性地保護L-FMAU的5'-羥基得到關鍵的中間體A。保護基團P可以是有機化學中已知的任意的保護基，可以選用的保護基的非限定性例子包括三烷基硅烷基和取代或非取代的三苯基甲基，優選的保護基包括三甲基硅烷基(TMS-)，叔丁基二甲基硅烷基(TBDMS-)，叔丁基二苯基硅烷基(TBDPS-)，三異丙基硅烷基(TPriS-)，三苯基甲基(Tr-)，4，4'-雙甲氧基三苯甲基(DMT-)和4-單甲氧基三苯甲基(匪T-)。由三烷基硅烷基或三苯基甲基選擇性保護L-FMAU的5'-羥基的反應條件可以選用通常的選擇性保護核苷的5'-羥基的反應條件。例如三烷基硅烷基的保護可以用三烷基氯硅烷與核苷在咪唑的存在下反應，反應溶劑通常為二甲基甲酰胺(DMF)、四氫呋喃(THF)或二氯甲烷，反應溫度一般在-l(TC和3(rC之間。三烷基氯硅烷與核苷的比例一般在1.2:1到2:l之間。三苯基甲基類保護基保護5'-羥基的反應一般在吡啶中進行，用取代或非取代的三苯基氯甲烷作為烷基化試劑，還可以選用對二甲基胺基吡啶(DMAP)作為催化劑。反應溫度一般在室溫到12(TC之間，取代或非取代的三苯基氯甲烷與核苷的比例一般在1.2:1—3:i之間。得到5'-保護的中間體A后，可以使用任意的已知方法來制備3'-羥基的衍生物B，最后使用任意的已知方法脫去5'-保護基以及3'-基團上可能具有的保護基團，例如氨基酸殘基上的氨基保護基，得到L-FMAU的3'-前藥(II)。L-FMAU的3'-氨基酸酯可以通過上述的合成路線來制備。中間體A上的3'-羥3'位衍生化基可以用任意已知的合成氨基酸酯的方法來酯化得到3'-氨基酸酯。—種可行的方法是將氨基適當保護的氨基酸在適當的溶劑中同中間體A在縮合劑的存在下縮合得到3'-氨基酸酯。可以選用的縮合劑的非限定性例子有碳化二亞胺類縮合劑如二環己基碳化二亞胺(DCC)或1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDCHC1);N，N'-羰基二咪唑(DCI);1-羥基-苯并-三氮唑(H0Bt)，和卡特縮合劑(BOP)等。氨基酸的保護基可以選用任意已知的保護基，保護基的優選的非限定性例子有苯甲氧羰酰基(CBZ-)，叔丁氧羰酰基(BOC-)和芴甲氧羰酰(Fmoc-)。反應的溶劑選擇能夠達到必要的反應溫度并能夠溶解反應成分的任何反應溶劑。非限制性的例子為任何非質子溶劑，包括但不限于烷烴或卣代烷溶劑，如己烷、環己烷、二氯甲烷或二氯乙烷、甲苯，丙酮、乙酸乙脂、二噻烷、THF、二氧雜環己烷、乙腈、乙醚、妣啶、二甲基甲酰胺(匿F)、二甲亞砜(匿S0)、二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷酮(畫P)或它們的任何組合。反應還可以用適當的催化劑來加速反應，催化劑的非限定性例子有_二甲基胺基吡啶(DMAP)，吡啶，咪唑和醋酸。反應溫度一般在室溫到9(TC之間，反應時間一般在12小時-36小時之間。L-FMAU的3'_氨基酸酯另外的一種制備方法包括將5'-保護的中間體A與氨基酸的N-羰基環內酸酐(N-carboxyanhydride，NCA)反應。氨基酸的N-羰基環內酸酐(N-carboxyanhydride，NCA)具有如下列結構式所示的4_取代的2_氧_4_氮雜-1，3-二酮環戊烷結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>上式其中P'為H或任意的氨基保護基，R'為氨基酸側鏈基團。氨基酸的N-羰基環內酸酐可以和自由的羥基反應，形成羥基的氨基酸酯，并釋放(A做為副產物。通常氨基酸的N-羰基環內酸酐反應活性較強，酯化反應的溫度一般控制在室溫左右，活性較弱的氨基酸的N-羰基環內酸酐反應溫度可以適當提高，但一般不超80°C。適當的有機堿如三乙胺和吡啶可以用來加速反應。氨基酸的N-羰基環內酸酐可以參考例如美國專利6，479，665所披露的方法來制備。L-FMAU的3'-氨基酸酯別的合成方法包括使用羧基被活化的氨基酸衍生物與中間體A反應。羧基被活化的氨基酸包括氨基酸的活潑酯如氨基酸的五氟苯酯和氨基酸的N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS酯)，氨基酸的酸酐，氨基酸的酰氯等。L-FMAU的3'_羧酸酯前藥可以由中間體A用任意已知的酯化方法來制備。通常可以用中間體A和活化的羧酸如酸酐和酰氯等反應得到。例如L-FMAU的3'_苯甲酸酯就可以利用中間體A與苯甲酸酰氯反應后脫去5'-保護基得到，L-FMAU的3'-乙酸酯可以利用中間體A與乙酸酐反應后脫去5'-保護基得到。L-FMAU的3'-烷氧甲酸酯可以用中間體A和氯甲酸烷基酯反應后除去5'保護基得到。反應通常在非質子極性溶劑例如乙腈、二氯甲烷、DMF和NMP中在有機堿(三乙胺，吡啶)的存在下進行。氯甲酸烷基酯L-FMAU的3'_磷酸酯前藥可以用中間體A和化學磷酸化試劑反應后氧化并脫去保護基后得到化學磷酸化試劑第二種實施方案提供的化合物是式(III)所示的L-FMAU的3'，5'-前體藥物，所說的化合物在3'_位和5'-位具有相同基團。式(III)中&=氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基和烷基優選的化合物有L-FMAU的3'_5'-雙氨基酸酯例如L-FMAU的3'_5'-雙L_纈氨酸酯，3'_5'-雙L-異亮氨酸酯，3'-5'-雙L-苯丙氨酸酯；L-FMAU的3，_5'-雙羧酸酯例如L-FMAU的3，_5'-雙乙酸酯，3'_5'-雙反油酸酯，3'_5'-雙月桂酸酯；L-FMAU的3'_5'-雙烷氧甲酸酯例如L-FMAU的3'-5'-雙正丁基氧甲酸酯，3'-5'-雙異丁基氧甲酸酯，3'-5'-雙正戊基氧甲酸酯，3'-5'-雙正己基氧甲酸酯。3'-位和5'-位具有相同基團的L-FMAU的3'_5'-前藥可以用L-FMAU為原料直接衍生化而得到。L-FMAU的3'_5'-雙氨基酸酯前藥可以用L-FMAU與適當保護的氨基酸在縮合劑11的存在下縮合得到，也可以用L-FMAU與氨基酸的N-羰基環內酸酐，氨基酸的五氟苯酯，氨基酸的N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS酯)，氨基酸的酸酐和氨基酸的酰氯等活化的氨基酸反應制得。通常情況下，氨基酸與L-FMAU反應的摩爾比大于2:l，有些情況下反應得到3'_氨基酸酯，5'-氨基酸酯和3'_5'-雙氨基酸酯的混合物，氨基酸需要大大過量才能使得反應完全。L-FMAU的3'_5'_雙羧酸酯可以用L-FMAU為原料用任意已知的酯化方法來制備。通常可以用酸酐和酰氯等酯化劑與L-FMAU反應，酯化劑的量一般大于L-FMAU量的兩倍以減少3'-單酯和5'-單酯等副產物的含量。L-FMAU的3'_5'-雙烷氧甲酸酯可以用L-FMAU與氯甲酸烷基酯反應得到。第三種實施方案提供的化合物是式(VI)所示的L-FMAU的3'，5'-前體藥物，并且在3'_位和5'-位具有不相同的基團。OR，OR,(VI)式VI中R"!^為不同的基團，&各自分別為氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基或烷基。優選的化合物有5'-0-反油酰基-3'-O-(L-纈氨酰基)-2'_脫氧_2'-氟_5_甲基-|3_L_阿拉伯糖尿苷，5'_0-反油酰基-3'-0-(L-異亮氨酰基)-2'-脫氧_2'_氟_5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷，5'-0-反油酰基-3'-O-(L-苯丙氨酰基)_2'_脫氧-2'-氟_5_甲基-|3阿拉伯糖尿苷，5'-0-正丁基氧甲酰基-3'-0-(L-纈氨酰基)_2'-脫氧_2'-氟_5_甲基-P_L_阿拉伯糖尿苷5'-O-正丁基氧甲酰基-3'_0-仏-異亮氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷5'-O-正丁基氧甲酰基-3'_0-仏-苯丙氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷式(VI)所示的L-FMAU的3'-5'-前藥可以用如下列反應方程式所示方法來制備12生化首先使用合適的保護基團P選擇性地保護L-FMAU的5'-羥基得到關鍵的中間體A。用任意的已知方法來制備3'-羥基的衍生物B，然后使用任意的已知方法脫去5'-保護基得到中間體C。用任意的已知方法將中間體C的5'-羥基衍生化后得到中間體D，再脫去中間體D上的可能存在的保護基得到化合物(VI)。L-FMAU可以參考中國專利95191415或別的文獻來合成，也可以用下列反應式所示的方法來合成13<formula>formulaseeoriginaldocumentpage14</formula>5'羥基用叔丁基二苯基硅烷基保護的中間體A還可以用下列反應方程式所示的方法來合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>該方法以2-脫氧-2-氟-L-阿拉伯糖為原料，在甲醇中以酸為催化劑合成2-脫氧-2-氟-a-L-阿拉伯糖甲基苷，用叔丁基二苯基硅烷基選擇性地保護5-位的一級羥基后再用苯甲酰基保護3-位羥基。5-0-叔丁基二苯基硅烷基-3-0-苯甲酰基-1-0_甲基_2-脫氧_2-氟-L-阿拉伯糖與硅烷保護的胸腺嘧啶在路易斯酸的催化下反應得到5-0-叔丁基二苯基硅烷基-3-0-苯甲酰基-L-FMAU，該化合物在弱堿的作用下水解掉苯甲酰基得到5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU。2-脫氧-2-氟-L-阿拉伯糖可以參照文獻NucleosidesNucleotidesNucleicAcids.2002;21(2):155-63.來合成，也可以通過用弱堿水解1，3，5-三-0-苯甲酰基-2-脫氧-2-氟-a-L-呋喃阿拉伯糖來得到。本發明提供的L-FMAU的前體藥物可以通過任何適合所治療疾病的途徑給藥。一般地，L-FMAU的前體藥物及其生理上可接受的鹽經口服給藥，但也可以通過包括經直腸、陰道、經鼻、局部(包括眼睛、口腔和舌下)和非胃腸(包括皮下、肌肉、靜脈內、皮內、鞘內和硬腦膜外)等途徑給藥。雖然L-FMAU的前體藥物及其生理上可接受的鹽能夠以純物質的形式給藥，但通常以藥物制劑的形式給藥。藥物制劑包含L-FMAU的前體藥物及其生理上可接受的鹽以及一種或多種藥用載體，視需要，還可含其他治療成分或輔助成分，例如其他抗病毒劑、免疫促進劑和保護肝臟藥物等等。藥用載體包括粘合劑、稀釋劑、崩解劑、防腐劑、分散劑、助流劑(抗粘附劑)和潤滑劑。15適合口服的固體制劑包括片劑，膠囊劑，粉劑，顆粒劑，滴丸和散劑等；適合口服的制劑還包括大丸劑，酊劑或糊劑。片劑可以是普通片劑，也可以是分散片，泡騰片，緩釋片，控釋片或腸溶片。膠囊劑可以是普通膠囊制劑，也可以是緩釋膠囊，控釋膠囊或腸溶膠囊。L-FMAU的前體藥物及其生理上可接受的鹽還能夠以注射的方式給藥，制劑包括粉針和注射液體。具體實施方式實施例1,〇、HOz1-0-甲基-L-呋喃核糖的制備CH2〇HMeOHCH20HHCI(g)在(TC往甲醇(250ml)中通HCl氣體至溶液飽和，然后將L_核糖(50g)溶于其中，繼續通HCl氣反應3hr。以固體碳酸鈉中和反應液至pH=7，過濾，將反應液減壓蒸干得黃色糖漿狀1-0-甲基-L-呋喃核糖60克，直接用于下步反應。實施例21-0-甲基-2，3，5-三-0-苯甲酰基_L_呋喃核糖的制備CH，OHBzCICH2OBzOHOHOBzOBz1-0-甲基-L-呋喃核糖60克溶解于吡啶(800ml)中，(TC下攪拌，滴加苯甲酰氯(200ml)，反應液由淡黃色變為粉紅色，且有大量固體出現(吡啶鹽酸鹽)，然后恢復室溫攪拌反應17hr。將上述反應液抽濾后棄去固體并減壓蒸干濾液，殘留物加(^2(:12(500ml)溶解，依次以1%HCl溶液(500mlX3)，水溶液(500mlX3)，KHC03溶液(500mlX2)洗滌。有機層加活性炭(50g)，加熱回流O.5hr脫色，液體冷卻至室溫后以無水Na^04除水，然后通過硅膠層和沙層過濾除色。最后將濾液蒸干得黃色糖漿狀1-0-甲基-2，3，5-三-0-苯甲酰基-L-呋哺核糖，直接用于下步反應。實施例31-0-乙酰基-2，3，5-三-0-苯甲酰基-!3-L-呋喃核糖的制備CH2OBzAC,O,AcOHAcOOBzOBzconc-H2S04CH2〇BzBzOBz16將上步反應得到的1-0-甲基-2，3，5-三-0-苯甲酰基-L-呋喃核糖以72mlAc0H和167mlAc20溶解于lOOOml圓底燒瓶中，(TC攪拌并滴加24mlCOnc-H2S04，溶液由橙紅色變為棕黑色，滴加完后，反應液放置至恢復室溫，再置于冰箱過夜。反應液傾入350ml冰水中，攪勻靜置，液體分層，加入lOOOml乙酸乙酯，分別以水溶液(500mlX3)，KHC03溶液(500mlX2)，鹽水(500mlX2)萃取。分取有機層以無水NaS04除水后，加活性炭(50g)，加熱回流0.5hr，液體冷卻至室溫后通過硅膠層和沙層過濾除色。最后將濾液減壓蒸干，加甲醇重結晶得(92克)灰白色l-O-乙酰基-2，3，5-三-0-苯甲酰基-e-L-呋喃核糖。實施例41，3，5-三-0-苯甲酰基-a-L-呋喃核糖的制備CH2OBzBzO、HBr(g)CH2CI;OBzOBzOHOBz將CH2C12(lOOOml)置于3000ml三頸燒瓶中，(TC通HBr氣體使溶液飽和，一次性加入1-0-乙酰基-2，3，5-三-0-苯甲酰基-!3-L-呋喃核糖(90g)在1000mlCH2Cl2中的溶液，混合液在(TC下攪拌反應3.5hrs。然后在常溫下將反應液濃縮，減壓蒸發至原體積的一半。濃縮液加550mlH20后常溫下攪拌反應2hrs，溶液由橙紅色變為無色。分取有機層，加無水N^S04去除殘留水分，然后減壓蒸干有機層，殘余物用CH^12和石油醚的混合物重結晶得(48克)白色固體狀l，3，5-三-0-苯甲酰基-a-L-呋喃核糖。實施例51，3，5-三-0-苯甲酰基-2-0-咪唑磺酸基-a-L-呋喃阿拉伯糖的制AcOChUOBzBzOCH2〇BzSO。CI，BzOimidazoleOHOBzDMF,CH2CI2ImSOCH2OBzOBz1，3，5-三-0-苯甲酰基-a-L-呋喃核糖(46g)以無水CH2C12(390ml)和無水DMF(120ml)溶解于lOOOml三頸燒瓶中，并通N2。該反應液于-15t:攪拌，同時滴加磺酰氯(25ml)，滴加完畢后反應繼續在低溫攪拌0.5hr，緩慢升至室溫繼續反應4h，然后于Ot:下分三次加入咪唑(imidazole67g)，恢復至室溫反應17hr。反應液傾入冰水(1500ml)中，并以CH2C12(500mlX3)萃取，然后分取有機層，用水洗，再以無水Na2S04干燥后濃縮，濃縮液用硅膠柱分離純化(EtOAc:Hexane/1:5-1:6)后得淡黃白色固體(32g)為1，3，5-三-0-苯甲酰基-2-0-咪唑磺酸基-a-L-呋喃核糖。實施例61，3，5-三-0-苯甲酰基-2-脫氧_2_氟-a_L_呋喃阿拉伯糖的制備17<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>1，3，5-三-0-苯甲酰基-2-0-咪唑磺酸基-a-L-呋喃核糖(30g)和KH&(20g)于500ml聚四氟乙烯坩堝中用2，3-丁二醇(330ml)溶解，通N2下攪拌反應，加熱至150°C后加入冊/1120(40%12ml)，混合液繼續升溫至16(TC，攪拌反應lhr。以冰鹽水終止反應，加CH2Cl2(500mlX4)萃取，分取有機層再依次以鹽水，水，NaHC03溶液洗，然后用無水Na2S04除去殘存水分，減壓蒸干得糖漿液，加95%乙醇重結晶得(18g)白色固狀1，3，5-三-0-苯甲酰基-2-去氧-2-氟-a_L_呋喃阿拉伯糖。實施例7l-溴-2-脫氧-2-氟-3，5-二0-苯甲酰基-a-L-呋喃阿拉伯糖的制BzOCH2OBzHBr,AcOHOBzCH。OBzOBz1，3，5-三-0-苯甲酰基-2-去氧-2-氟-a_L_呋喃核糖(15g)溶解于CH2C12(330ml)同時加入HBr/AcOH(45%w/v46ml)，混合液于室溫下避光攪拌反應24hr。反應液減壓蒸干后加CH2C12(500ml)分別以水、NaHC03溶液洗，分取有機層用無水Na2S04除去殘存水分，減壓蒸干得糖漿液，(或者反應液蒸干后直接加甲苯重復旋蒸3次)，為1-溴-2-去氧-2-氟-3，5-—實施例8N「(3'，5'糖)-5-甲基尿嘧啶的制備.0-苯甲酰基-a-L-呋喃阿拉伯糖，直接用于下步反應。二0-苯甲酰基-2'-脫氧_2'-氟-P-L-呋喃阿拉伯H，COSiMe，CH2〇BzOSiMeCH，O已zOBz1,2-dichloroethaneOBz胸腺嘧啶(5g)和少許硫酸銨在HMDS(六甲基二硅胺烷100ml)禾P1，2_二氯乙烷(100ml)中通^回流反應17hrs，待白色固體消失，溶液變澄清后減壓蒸干，得硅烷化的胸腺嘧啶溶液。將上步反應得到的1-溴_2-脫氧-2-氟-3，5-二0-苯甲酰基_a_L_呋喃核糖加入硅烷化的胸腺嘧啶溶液，通K回流反應36小時。反應用水終止，以CHCl3萃取。分取有機層再依次以鹽水，水洗，然后用無水化2504除去殘存水分。有機層減壓蒸干所得粗品，用硅膠柱分離純化(MeOH:CH2Cl2/05%)后18得到白色固體(12.45g)為Nl-(3'，5'-二0-苯甲酰基2'-脫氧-2'-氟-!3-L-呋哺阿拉伯糖)-5_甲基尿嘧啶。實施例9L-FMAU的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>Nr(3'，5'-二0_苯甲酰基2'-去氧_2'-氟_|3-卜呋喃阿拉伯糖)-5-甲基尿嘧啶(12g)溶解于NH3/CH30H(200ml)，室溫攪拌反應24hr。反應液減壓濃縮，以硅膠柱分離純化(MeOH:CH2Cl2/5%)后得到白色固體，甲醇重結晶后得到L-FMAU4.6克。質譜(FAB-MS):261(M+l)，核磁數據與文獻報道的相符。實施例105'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>稱取2.77gL-FMAU和2.13g咪唑，用60mlDMF溶解后，置于冰水浴中，在惰性氣體(N2)保護下加入3.73ml叔丁基二苯基氯硅烷(TBDPS-C1)，反應至TLC顯示反應完全。減壓抽干，CH2C12溶解，水洗，再以無水NaS04除水，抽干得到產物用少量CH2C12重結晶得固體5.2g。質譜(FAB-MS):499(M+1)。實施例115'-0-叔丁基二甲基硅烷基-L-FMAU的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>稱取1.3gL-FMAU和1.02g咪唑，用20mlDMF溶解后，置于冰水浴中，在惰性氣體(N2)保護下加入0.85g克叔丁基二甲基氯硅烷(TB匿S-C1)，反應至TLC顯示反應完全。減壓抽干，CH2C12溶解，水洗，再以無水NaS04除水，抽干得到產物1.53g。質譜(FAB-MS):375(M+l)。實施例125'-0-(4，4'_雙甲氧基三苯甲基)-L-FMAU的制備稱取1.3gFMAU，溶解于20ml吡啶中，加入3.8gDMT-C1，50mgDMAP，于90°C油浴中反應48hr，抽干吡啶，用CH2C12溶解，過硅膠柱得到5，-O-DMT-L-FMAU1.63g。質譜(FAB-MS):563(M+1)。實施例133'-0-仏-纈氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽。5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU1.Og以20ml無水DMF溶解，加入1.lgBoc-L-纈氨酸(L-Boc-Val)和0.87gDCC，反應混合物置于5(TC水浴中反應48h，至TLC顯示反應完全，過濾，濾液用二氯甲烷100ml稀釋后用碳酸氫鈉水溶液洗滌，除水，抽干溶劑得到1.32g油狀物。將所得油狀物溶于15mlTHF中，加入2ml2M的「CH3(CH2)3」4NF的THF溶液，反應120min，TLC顯示反應完全，反應液用二氯甲烷100ml稀釋后用水洗滌，除水，抽干溶劑。將殘留物溶解于無水THF10ml中，冷卻至0°C，加入3ml氯化氫THF的飽和溶液，反應4小時后TLC顯示反應完全。加入乙醚20ml，有白色固體析出。過濾收集固體，用少量甲醇重結晶，過濾，真空干燥后得到白色晶體0.32克。質譜(FAB-MS):360(M+1);UV(MeOH)入max=261nm;元素分析C15H23C1FN306計算值C，45.52;H，5.86;N，10.62;F，4.80;C1，8.96測定值C，45.76;H，5.83;N，10.57;F，4.78;C1，9.01實施例143'-0-(卜異亮氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽。20<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>取1.5g5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU，以40mlDMF溶解，加入50毫克DMAP，2.lgN-Cbz-L-異亮氨酸羰基環內酸酐(參照美國專利US6479665制得)，反應混合物慢慢升溫至5(TC，反應至氣體釋放停止并且TLC顯示反應完全。真空除去溶劑，殘留物用二氯甲烷100ml溶解，分別用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌后真空除去溶劑得到油狀物。將所得油狀物溶于20mlTHF中，加入3ml2M的「CH3(CH2)3」4NF的THF溶液，反應120min，TLC顯示反應完全。反應液用二氯甲烷100ml稀釋后用水洗滌，除水，抽干溶劑。將殘留物溶解于50ml甲醇中，滴入0.2ml濃鹽酸，加入Pd/C催化劑50毫克后攪拌通入氫氣至TLC顯示反應完成為止。過濾，真空濃縮至原體積五分之一，加入20ml乙醚得到白色固體，過濾收集后用甲醇重結晶得到晶體0.55克。質譜(FAB-MS):374(M+1);UV(MeOH)Amax=259nm;元素分析C16H25C1FN306計算值C，46.89;H，6.15;N，10.25;F，4.64;C1，8.65測定值C，46.70;H，6.17;N，10.21;F，4.66;C1，8.70實施例153'-0-仏-苯丙氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽。NH，+CI取1.5g5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU，以40mlDMF溶解，加入50毫克DMAP，2.5gN-Boc-L-苯丙氨酸羰基環內酸酐(參照美國專利US6479665制得)，反應混合慢慢升溫至5(TC，反應至氣體釋放停止并且TLC顯示反應完全。真空除去溶劑，殘留物用二氯甲烷100ml溶解，分別用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌后真空除去溶劑的油狀物。將所得油狀物溶于20mlTHF中，加入3ml2M的「CH3(CH2)3」4NF的THF溶液，反應120min，TLC顯示反應完全。反應液用二氯甲烷100ml稀釋后用水洗滌，除水，抽干溶劑。將殘留物溶解于無21水THF15ml中，冷卻至0°C，加入5ml氯化氫THF的飽和溶液，反應4小時后TLC顯示反應完全。加入乙醚40ml，有白色固體析出。過濾收集固體，用少量甲醇重結晶，過濾，真空干燥后得到白色晶體O.62克。質譜(FAB-MS):408(M+l);元素分析C19H23C1FN306計算值C，51.41;H，5.22;N，9.47;F，4.28;C1，7.99;測定值C，51.15;H，5.25;N，9.51;F，4.25;C1，7.96用實施例15相同的方法還合成了下列化合物3'_0-仏-丙氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基_P_L_阿拉伯糖尿苷3'-0-甘氨酰基-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3_L_阿拉伯糖尿苷3'-O-(L-亮氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3_L_阿拉伯糖尿苷實施例163'-0-苯甲酰基_2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷〇5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU250毫克溶解于5ml吡啶，氮氣保護下冷卻至Ot:，加入苯甲酰氯0.15ml，緩慢升至室溫繼續攪拌反應直至TLC顯示反應完成。真空除去吡啶，殘留物用二氯甲烷20ml溶解后用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥后除去二氯甲烷，加入5ml1M的「CH3(CH》丄NF的THF溶液，反應用TLC監控。反應完全后除去溶劑，用硅膠柱(5%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離得到標題化合物。質譜(FAB-MS):365(M+1)。實施例173'-0-反油酰基_2'-脫氧-2'-氟_5_甲基-|3阿拉伯糖尿苷5'-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU250毫克溶解于5ml妣啶，氮氣保護下冷卻至0°C，加入反油酰氯0.2ml，緩慢升至室溫繼續攪拌反應直至TLC顯示反應完成。真空除去吡啶，殘留物用二氯甲烷20ml溶解后用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥后除去二氯甲烷，加入2ml1M的[CH3(CH》山NF的THF溶液，反應用TLC監控。反應完全后除去溶22劑，用硅膠柱(2%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離得到標題化合物。質譜(FAB-MS):525(M+1)。實施例183'-0-正丁氧甲酰基-2'-脫氧-2'-氟-5_甲基-e-L-阿拉伯糖尿苷o5，-0-叔丁基二苯基硅烷基-L-FMAU250毫克和DMAP30毫克溶解于5mlDMF。氮氣保護下冷卻至0t:，加入三乙胺0.20ml，隨后加入氯甲酸正丁酯0.12ml，緩慢升至室溫繼續攪拌反應直至TLC顯示反應完成。真空除去DMF，殘留物用二氯甲烷20ml溶解后用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥后除去二氯甲烷，加入3ml1M的「CH3(CH2)3」4NF的THF溶液，反應用TLC監控。反應完全后除去溶劑，用硅膠柱(5%甲醇的二氯甲烷洗脫)分離得到標題化合物。質譜(FAB-MS):361(M+1)。實施例195'-3'-0-二(L-纈氨酰基)_2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13_L_阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽，L-FMAU1.3g溶于20ml無水DMF中，然后加入50毫克DMAP，2ml妣啶。反應混合物在氮氣保護下冷卻至0°C，加入N-Boc-L-纈氨酸羰基環內酸酐2.5克，反應3小時后氣體釋放停止，TLC顯示反應還未完全。向反應液中再加N-Boc-L-纈氨酸羰基環內酸酐2.5克并加熱到55t:，反應5小時后，真空除去溶劑，殘留物用二氯甲烷100ml溶解，分別用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌后真空除去溶劑的油狀物。將油狀物溶解于無水THF10ml中，冷卻至Ot:，加入10ml氯化氫在THF中的飽和溶液，反應4小時后TLC顯示反應完全。加入乙醚40ml，有白色固體析出。過濾收集固體，用少量甲醇重結晶，過濾，真空干燥后得到白色晶體1.42克。質譜(FAB-MS):459(M+1);UV(MeOH)Amax=264nm;元素分析C20H33C12FN407計算值:C，45.20;H，6.26;N，10.54;F，3.58;Cl，13.34;測定值C，45.42;H，6.22;N，10.49;F，3.60;Cl，13.29;用實施例19相同的方法還合成了下列化合物5'-3'-O-二(L-異亮氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-!3-L-阿拉伯糖尿苷，235'-3'-O-二(L-苯丙氨酰基)-2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-!3-L-阿拉伯糖尿苷，實施例205'-3'-0-二乙酰基_2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷L-FMAU0.13g溶于2ml吡啶中，在氮氣保護下冷卻至0t:，加入乙酸酐200微升后緩慢升至室溫反應5小時。真空除去吡啶，殘留物用二氯甲烷20ml溶解后用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥后除去二氯甲烷，用硅膠柱(2%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離得到標題化合物O.15g。質譜(FAB-MS):345(M+1)。實施例215'-3'-0-二正丁基氧甲酰基_2'-脫氧_2'-氟-5_甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷L-FMAU0.13g溶于2ml吡啶中，在氮氣保護下冷卻至0"C，加入DMAP20毫克然后滴加氯甲酸正丁酯0.42ml。加畢反應液緩慢升至室溫繼續反應16小時。真空除去吡啶，殘留物用二氯甲烷20ml溶解后用1M的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌。干燥后除去二氯甲烷，用硅膠柱(1%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離得到標題化合物O.18g。質譜(FAB-MS):461(M+l)。用實施例21相同的方法還合成了下列化合物5'-3'-0-二異丁基氧甲酰基-2'-脫氧-2'-氟_5_甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷，5'-3'-0-二正戊基氧甲酰基-2'-脫氧-2'-氟_5_甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷，5'-3'-0-二正己基氧甲酰基-2'-脫氧-2'-氟_5_甲基-|3阿拉伯糖尿苷。實施例225'-仏-纈氨酰基)-3'-0-正丁基氧甲酰基-2'-脫氧-2'-氟-5_甲基-13-L-阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽3'-0-正丁氧甲酰基_2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L-阿拉伯糖尿苷180毫克溶解于以2mlDMF溶解，加入IO毫克DMAP，O.5gN-Cbz-L-纈氨酸羰基環內酸酐(參照美國專利US6479665制得)，反應混合物慢慢升溫至50°C，反應至氣體釋放停止并且TLC顯示反應完全為止。真空除去溶劑，殘留物用二氯甲烷10ml溶解，分別用IM的鹽酸和碳酸氫鈉水溶液洗滌后真空除去溶劑的油狀物。將油狀物溶解于10ml含1%HC1的甲醇中，加入Pd/C催化劑5毫克，攪拌通入氫氣至TLC顯示反應完成為止。過濾，真空濃縮至原體積五分之一，加入10ml乙醚得到白色固體，過濾收集后得到晶體O.15克。質譜(FAB-MS):460(M+l)。實施例23含3'-0-(L-纈氨酰基)_2'-脫氧_2'-氟_5_甲基-P_L_阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽的片劑處方(按1000片計)3'-0-(卜纈氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷鹽酸鹽50g，乳糖300g，，羧甲淀粉鈉2g，聚維酮(K30)20g，硬脂酸鎂0.8g，滑石粉1.2g。制法將3'-0-(L-纈氨酰基)-L-FMAU鹽酸鹽，乳糖，羧甲淀粉鈉，聚維酮(K30)，硬脂酸鎂，滑石粉，分別過80目篩，備用。然后將處方全量的3'-0-(L-纈氨酰基)-L-FMAU鹽酸鹽，乳糖，羧甲淀粉鈉，聚維酮(K30)，處方量50X的硬脂酸鎂，滑石粉以等量地加法充分混合均勻，用干式造粒機過18目篩制粒；加入剩余的硬脂酸鎂，滑石粉，充分混合均勻，壓片，即得每片含50毫克3'-O-(L-纈氨酰基)-L-FMAU鹽酸鹽的片劑。實施例24L-FMAU的前體藥物的體外抗HBV活性實驗取2.2.15細胞(自H印G2細胞轉染而來，分泌HBsAg，HBeAg和HBVDNA)，用DMEM培養液(GIBCO)，培養液加10X胎牛血清，100mg/L青霉素，100mg/L鏈霉素，G418380mg/L(GIBCO)，O.3g/L谷氨酰氨，用2.38g/LH印es調pH至6.8.用0.6g/L胰蛋白酶將2.2.15細胞分散成3X107L，每孔0.lml于96孔板，2天后換用含藥培養液，所有待測化合物分別稀釋成11，3.7，1.2，0.4，0.137和0.045yM，每個濃度加6孔，同時設不含藥物對照組；每3天換新鮮含藥培養液共4次，與細胞作用12天后，換出細胞上清液，用上海醫科大學預防醫學研究所HBVDNA試劑盒檢測細胞上清液中HBVDNA濃度，計算抑制率，求出化合物對HBVDNA的半抑制濃度。藥物的細胞毒性用MTT法測定。結果列于表一中表一25<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>說明EC5。_抑制HBV-DNA的半有效濃度IC5。_細胞毒性指標，細胞生長的半抑制濃度實施例25L-FMAU的前體藥物的生物利用度L-FMAU以及L-FMAU的前體藥物的生物利用度用AUC對比法測定。大鼠10只，隨機分成兩組，每組5只，分別灌胃給藥或靜脈注射給予50mg/kg的L-FMAU或L-FMAU的前體藥物，在給藥后的0.083，0.25，0.5，0.75，1，2，4，6，8h分別取血樣0.3ml使用反相HPLC技術檢測得到L-FMAU的血藥濃度，繪出L-FMAU的血藥濃度_時間曲線并求得曲線下面積AUC。藥物口服后L-FMAU的血藥濃度-時間曲線下面積(AUCp。)和靜脈注射后L-FMAU的血藥濃度-時間曲線下面積(AUCiv)的比值即為該藥物的口服生物利用度。L-FMAU以及L-FMAU的前體藥物在血液中的濃度可用HPLC測定，測定方法如下血樣0.3ml與50ul內標(D4T20mg/ml)混合后加入到預冷至4。C的1.8ml的乙月青(2M)中，振蕩搖勻30s，再超速離心(4500g)30min。取出上清液，用氮氣吹干。殘留物用75ul蒸餾水溶解，取50ulHPLC進樣。HPLC固定相采用C18反相柱，流動相用含有乙腈的磷酸二氫鈉緩沖液，在260nm處用紫外檢測。根據HPLC圖譜上L-FMAU，L-FMAU的前體藥物和內標的峰面積計算藥物/內標的峰面積比，在藥物濃度標準曲線上求得藥物濃度。所有待測藥物的0.5-50ug/ml的濃度標準曲線是在空白的大鼠血漿中用標準加入法獲得的。所有的前體藥物在靜脈注射5min后就無法在血液中檢出表明所有的前體藥物都能在血液中迅速的被代謝為L-FMAU，所有上述藥物在口服后0.75h后就無法在血液中檢出，表二列出了L-FMAU和其前體藥物的生物利用度。表二<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>權利要求一種式VI所示的化合物或其鹽其中，R1，R2為不同的基團，R1，R2各自分別為氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基或烷基。F2009102587673C00011.tif2.權利要求1所述的化合物選自下列化合物5'-0-反油酰基-3'-O-(L-纈氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L_阿拉伯糖尿苷，5'-0-反油酰基-3'-O-(L-異亮氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L_阿拉伯糖尿苷，5'-0-反油酰基-3'-O-(L-苯丙氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-|3-L_阿拉伯糖尿苷，5'-O-正丁基氧甲酰基-3'-0-(L-纈氨酰基)-2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-P-L-阿拉伯糖尿苷5'-0-正丁基氧甲酰基-3'-0-(L-異亮氨酰基)_2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13_L_阿拉伯糖尿苷5'-0-正丁基氧甲酰基-3'-0-(L-苯丙氨酰基)_2'-脫氧-2'-氟-5-甲基-13_L_阿拉伯糖尿苷。3.如下式所示的用于合成權利要求1所述的化合物的中間體化合物，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>其中，保護基P選自三烷基硅烷基或取代的或非取代的三苯基甲基。4.權利要求3所述的中間體化合物，所述的保護基P選自三甲基硅烷基，叔丁基二甲基硅烷基，叔丁基二苯基硅烷基，三異丙基硅烷基，三苯基甲基，4，4'-雙甲氧基三苯甲基或4-單甲氧基三苯甲基。5.—種權利要求1或2所述化合物的制備方法，其采用下列反應路線6.權利要求1或2所述的化合物或其鹽在制備抗病毒藥物中的應用，所述的抗病毒藥物為抗乙型肝炎病毒(HBV)藥物，抗非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)藥物和抗丁型肝炎病毒(HDV)藥物。7.—種藥物組合物，含有有效量的任意一種權利要求1或2中所述的化合物或其鹽。全文摘要本發明涉及式VI所示的化合物或其鹽，式中R1，R2為不同的基團，R1，R2各自分別為氨基酸殘基，烷氧甲酰基，有機羧酸酰基，磷酰基或烷基。該化合物具有抗乙型肝炎病毒(HBV)、抗非洲淋巴細胞瘤病毒(EBV)和抗丁型肝炎病毒(HDV)的作用。本發明還涉及所述化合物的制備方法及其在制備抗病毒藥物中的應用。文檔編號C07H19/073GK101735294SQ20091025876公開日2010年6月16日申請日期2005年7月1日優先權日2005年7月1日發明者葉新建,張凱,袁建棟申請人:博瑞生物醫藥技術(蘇州)有限公司;江蘇正大天晴藥業股份有限公司