專利名稱：水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥制劑技術領域，涉及
血為原材料的水蛭素提取技術。
種水蛭素的提取技術，特別是以菲牛蛭水解
背景技術：
世界衛生組織統計數據表明，心腦血管疾病是當今危害人類健康的主要疾病。血 栓是導致心腦血管疾病發生的主要原因，而凝血酶是導致血栓形成的主要因素。水蛭素是 迄今發現的最強的凝血酶特異性抑制劑，能與凝血酶特異性結合使之喪失凝血活力。目前， 水蛭素主要以菲牛蛭、歐洲醫用水蛭、印度水蛭、亞馬遜巨型水蛭等為原材料提取。臨床試 驗表明，水蛭蛭素既能使血栓融化從而消除或緩解病情，也能防止血栓形成，具有極好的預 防和治療血栓性心腦血管疾病的效果。現存的水蛭素類藥物劑型主要為注射劑和口服片 劑。 目前，國內外提取水蛭素的方法有多種。例如1970年Markwardt采用的乙醇分 級沉淀、陽離子交換、凝膠過濾以及陰離子交換等步驟獲得水蛭素。中國專利〈申請號 >92107076〈發明名稱 > 醫用天然水蛭素的提取方法，是將水蛭搗碎成漿狀，加熱，用冰醋酸 調pH值，冷卻至室溫，用Na2C03溶液調pH值，離心收集濾液，沉淀用生理鹽水浸提2 3次， 離心收集液濾。合并全部液濾，透析，透析液用95%以上的乙醇沉淀，靜置，收集沉淀，低溫 干燥得到水蛭素。水蛭素可以用于生產口服片劑或口服液。這些工藝的不足之處是提取步 驟多，過程復雜，周期長。 為了提高水蛭資源的利用率，近年已有人利用水蛭水解血為原材料提取水蛭素。 水蛭水解血是讓水蛭充分吸取動物血數分鐘后，用物理或化學的方法使血液從水蛭體內流 出的橙紅色的液體。
發明內容
本發明的目的是提供一種水蛭素的生理鹽水_聚乙二醇雙水相提取法，以菲牛蛭 水解血為原材料，提高水蛭資源的利用率。 本發明包括原材料處理、水蛭素粗品提取及水蛭素粗品純化等步驟，將原材料處 理后，加入生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀用組織搗碎機搗成漿狀，加 生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀再用組織搗碎機搗成漿狀后，用生理 鹽水重復處理一次；離心，去沉淀取水相；合并3次的水相，得水蛭素粗品提取液；水蛭素 粗品提取液加入硫酸鈉使濃度為0. 04 0. 06mol L—、加入聚乙二醇6000使質量濃度為 28 30% ，攪拌，離心分離，取上相水溶液，加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀 稱重后溶解于生理鹽水中；加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀，冷凍干燥得到 水蛭素。 所述的原材料處理是，將菲牛蛭水解血邊攪拌邊加熱至全部凝固后取出，迅速冷 卻至室溫，于組織搗碎機中以10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成漿狀。
所述的水蛭素粗品提取是，將預處理過的漿狀原材料加入2 2. 5倍重量的生理 鹽水攪拌2. 5 3小時，離心取水相，沉淀用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2 分鐘搗成漿狀，按漿狀原材料的量加入1. 5 2倍生理鹽水，240 300r/min攪拌2 2. 5 小時，離心取水相，沉淀再用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成漿狀， 按漿狀原材料的量加入1 1. 5倍生理鹽水攪拌2 2. 5小時，離心去沉淀，取水相，合并 3次的水相，此即為水蛭素粗品水溶液。 所述的水蛭素純化是在水蛭素粗品水溶液中加入硫酸鈉使濃度為0. 04 0. 06mol *L—、加入聚乙二醇6000使質量濃度為28 30%，240 300r/min攪拌30分鐘， 離心分離形成上、下相，取上相水溶液，加入2. 8 3倍無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心， 取沉淀，冷凍干燥得到水蛭素。 關鍵試劑優選的使用濃度為硫酸鈉0. 05mol L—^聚乙二醇6000質量濃度為 29%。
與現有的技術相比，本發明的突出的優點和顯著的進步是 1、本發明由于沒有層析的操作步驟，所以過程簡單，生產周期明顯縮短。 2、本發明由于沒有透析的操作步驟，具有提取液體積小，水蛭素濃度高，可以提高
水蛭素的收率并使乙醇的使用量明顯減少。
具體實施方式
實施例1 : 1)將菲牛蛭水解血240 300r/min邊攪拌邊加熱，至菲牛蛭水解血全部變凝膠狀 后取出，迅速冷卻至室溫。 2)取一定量凝膠狀的菲牛蛭水解血于組織搗碎機中以10000 12000r/min處理 1.5 2分鐘搗成漿狀。 3)取一定量漿狀物按重量加入2 2. 5倍的生理鹽水240 300r/min攪拌2. 5 3小時。 4) 4000 4500r/min離心10分鐘取水相，備用，沉淀用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成槳狀。 5)按步驟2)的重量加入1. 5 2倍生理鹽水240 300r/min攪拌2 2. 5小 時。 6) 4000 4500r/min離心10分鐘取水相，備用，沉淀用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成槳狀。 7)按步驟2)的重量加入1 1. 5倍生理鹽水240 300r/min攪拌2 2. 5小 時，4000 4500r/min離心10分鐘去沉淀，取水相備用。 8)合并3次的水相，量體積。加入硫酸鈉使濃度為0. 05mol *L—、加聚乙二醇6000
使質量濃度為29% ， 240 300r/min攪拌30分鐘。9)4000 4500r/min離心20分鐘，分離上、下相。 10)取上相水溶液加入2. 8 3倍無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，4000 4500r/
min離心IO分鐘取沉淀。 11)沉淀冷凍干燥得水蛭素。
實施例2 : 根據實施例1，加入硫酸鈉使濃度為0. 04mol *L—、加聚乙二醇6000使質量濃度為 30%，其余同實施例1。
實施例3 : 根據實施例l，加入硫酸鈉使濃度為0. 06mol *L—、加聚乙二醇6000使質量濃度為 28%，其余同實施例1。
權利要求
一種水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法，其特征是包括原材料處理、水蛭素粗品提取及水蛭素粗品純化步驟，將原材料處理后，加入生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀用組織搗碎機搗成漿狀，加生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀；取水相備用，沉淀再用組織搗碎機搗成漿狀后，用生理鹽水重復處理一次；離心，去沉淀取水相；合并3次的水相，得水蛭素粗品提取液；水蛭素粗品提取液加入硫酸鈉使濃度為0.04～0.06mol·L-1，加入聚乙二醇6000使質量濃度為28～30％，攪拌，離心分離，取上相水溶液，加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀稱重后溶解于生理鹽水中；加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀，冷凍干燥得到水蛭素。
2. 據權利要求1所述的水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法，其特征是所述的 原材料處理是將菲牛蛭水解血邊攪拌邊加熱至全部凝固后取出，迅速冷卻至室溫，于組織 搗碎機中以10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成槳狀。
3. 據權利要求1所述的水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法，其特征是所述的 水蛭素粗品提取是將預處理過的漿狀原材料加入2 2. 5倍重量的生理鹽水攪拌2. 5 3 小時，離心取水相，沉淀用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成漿狀，按 漿狀原材料的量加入1. 5 2倍生理鹽水，240 300r/min攪拌2 2. 5小時，離心取水 相，沉淀再用組織搗碎機10000 12000r/min處理1. 5 2分鐘搗成漿狀，按漿狀原材料 的量加入1 1. 5倍生理鹽水攪拌2 2. 5小時，離心去沉淀，取水相，合并3次的水相，此 即為水蛭素粗品水溶液。
4. 據權利要求1所述的水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法，其特征是所述的 水蛭素純化是在水蛭素粗品水溶液中加入硫酸鈉使濃度為0. 04 0. 06mol L—、加入聚乙 二醇6000使質量濃度為28 30%，240 300r/min攪拌30分鐘，離心分離形成上、下相， 取上相水溶液，加入2. 8 3倍無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心，取沉淀，冷凍干燥得到 水蛭素。
5. 權利要求4所述的水蛭素的生理鹽水_聚乙二醇雙水相提取法，其特征是關鍵試劑 優選的使用濃度為硫酸鈉0. 05mol L—^聚乙二醇6000質量濃度為29%。
全文摘要
一種水蛭素的生理鹽水-聚乙二醇雙水相提取法，包括了原材料菲牛蛭水解血的處理、水蛭素粗品提取及水蛭素粗品純化等步驟，將原材料處理后，加入生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀。取水相備用，沉淀用組織搗碎機搗成漿狀，加生理鹽水攪拌，離心得水相和沉淀。取水相備用，沉淀再用組織搗碎機搗成漿狀后，用生理鹽水重復處理一次。離心，去沉淀取水相。合并3次的水相，加入硫酸鈉使濃度為0.04～0.06mol·L-1，加入聚乙二醇6000使質量濃度為28～30％，攪拌，離心分離，取上相水溶液，加入無水乙醇攪拌均勻，冷藏過夜，離心取沉淀，冷凍干燥得到水蛭素。本發明工藝過程簡單，生產周期短，乙醇使用量少，水蛭素提取率高。
文檔編號C07K1/14GK101759803SQ20091019432
公開日2010年6月30日 申請日期2009年11月27日 優先權日2009年11月27日
發明者宋文東, 方富永, 王宏波, 苗艷麗 申請人:廣東海洋大學