專利名稱：反式橙花叔醇對照品的制備方法及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種反式橙花叔醇對照品的制備方法，屬于藥材中指標成分的提 取分離技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
降香為豆科植物降香檀"s^er^a ooW/ers T. chen樹干和根的干燥心材， 是一種具有行氣止痛、活血止血作用的傳統(tǒng)中草藥，主要用于脘腹疼痛，肝郁 脅痛，胸痹刺痛，跌撲損傷，外傷出血。降香主要成分為揮發(fā)油、黃酮等。降 香油常被作為原料，用于制備"冠心丹參片"等，臨床上廣泛用于冠心病的治 療。現(xiàn)化藥理研究表明，降香油可提高血小板cAMP含量，具有抑制血栓形成的 作用。利用降香揮發(fā)油開發(fā)研究新劑型有很高的社會和經(jīng)濟價值。降香揮發(fā)油 含多種化合物，其中絕大多數(shù)為反式橙花叔醇及其氧化物。目前，《中國藥典》 2005版中降香項下只有醇溶性浸出物的檢查，無內(nèi)在質(zhì)量控制指標。顯然，現(xiàn) 有標準難以客觀評價降香的內(nèi)在質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種反式橙花叔醇對照品的制備方法。本發(fā)明對反 式橙花叔醇對照品的提取工藝進行了全面考察，確定了最佳的提取工藝，成功 的對反式橙花叔醇進行了分離提純。
本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的
(1) 降香藥材粉碎成粗粉，加5 10倍量水浸泡2 6小時后，水蒸氣回 流提取8 16小時，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉干燥，得到降香揮發(fā)油；
(2) 取上述降香油，硅膠柱層析分離，柱層析次數(shù)為1 5次，洗脫，收集 各段流份，硅膠薄層檢測，收集含反式橙花叔醇的流份，回收溶劑得黃色油狀 液體；(3) 將上述黃色油狀液體，凝膠柱層析，柱層析次數(shù)為1 5次，經(jīng)硅膠 薄層檢測，將具有反式橙花叔醇為單一點的柱層析流份合并，回收溶劑后，得
一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇純品；
(4) 將上述反式橙花叔醇純品置于干燥器24 36小時，高效液相色譜法或 氣相色譜法檢測，即得到純度》95%的反式橙花叔醇對照品。
步驟(1)中加水量為生藥材的5 10倍，浸泡時間為2 6小時，提取時 間為8 16小時。
步驟(2)、 (3)中柱層析的洗脫溶劑可以為石油醚、氯仿、甲醇、丙酮、 乙酸乙酯中的一種或兩種混合洗脫。 所用的柱層析硅膠為100 400目。 所用的柱層析凝膠包括S印hadex G、 S印hadex LH-20。 所用的薄層層析硅膠包括硅膠G、硅膠H、硅膠Fw，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。
反式橙花叔醇對照品的制備方法制備得到的反式橙花叔醇對照品，其分子 式為C15H260，化學結(jié)構(gòu)式為
上述制備方法所用的原料為豆科植物降香檀/fe乃ei^7's orfri/era T. chen 樹干和根的干燥心材。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過對降香藥材的提取工藝進行全面考察，確定了 反式橙花叔醇的最佳提取工藝，成功地對反式橙花叔醇對照品進行了分離和純 化。該方法工藝簡單、適于工業(yè)化生產(chǎn)。
圖1為反式橙花叔醇HPLC圖譜；
圖2為反式橙花叔醇GC圖譜。
具體實施例方式
下面是本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明不僅限于所述實施例。 實施例1
(1) 降香藥材粉碎成粗粉，加6倍量水浸泡6小時，水蒸氣蒸餾提取16 小時，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉千燥，得到降香揮發(fā)油；
(2) 取上述降香油，以l: 15比例(重量比)硅膠(100-200目)柱層析分 離，柱層析次數(shù)為2次，用石油醚 乙酸乙酯進行梯度洗脫，收集各段流份，經(jīng) 硅膠薄層(石油醚 丙酮(9:1)為展開劑)檢測，噴以IO °/。硫酸乙醇溶液顯色， 收集含反式橙花叔醇的流份，回收溶劑得黃色油狀液體；
(3) 將上述黃色油狀液體，通過S印hadex LH-20凝膠柱層析，柱層析次 數(shù)為1次，用氯仿 甲醇(1: 1)洗脫，經(jīng)硅膠薄層(石油醚 丙酮(9:1)為展 開劑)檢測，噴以IO %硫酸乙醇溶液顯色，將具有反式橙花叔醇為單一點的柱 層析流份合并，回收溶劑后，得一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇純品；
(4) 將上述反式橙花叔醇純品置于干燥器24小時，高效液相色譜法檢測， 即得到純度>95%的反式橙花叔醇對照品。
實施例2
(1) 降香藥材粉碎成粗粉，加8倍量的水浸泡5小時，水蒸氣蒸餾提取 14小時，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉干燥，得到降香揮發(fā)油；
(2) 取上述降香油，以h 15比例(重量比)硅膠(200-300目)柱層析分 離，柱層析次數(shù)為2次，用石油醚 丙酮進行梯度洗脫，收集各段流份，經(jīng)硅膠 薄層(石油醚 丙酮(9:1)為展開劑)檢測，噴以IO %硫酸乙醇溶液顯色，收集 含反式橙花叔醇的流份，回收溶劑得黃色油狀液體；
(3) 將上述黃色油狀液體，通過Sephadex LH-20凝膠柱層析，柱層析次 數(shù)為1次，用氯仿 甲醇(1: 1)洗脫，經(jīng)硅膠薄層(石油醚 丙酮(9:1)為展 開劑)檢測，噴以IO %硫酸乙醇溶液顯色，將具有反式橙花叔醇為單一點的柱層析流份合并，回收溶劑后，得一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇純品。
(4)將上述反式橙花叔醇純品置于干燥器24小時，高效液相色譜法檢測， 即得到純度》95%的反式橙花叔醇對照品。 實施例3
(1) 降香藥材粉碎成粗粉，加10倍量的水浸泡4小時，水蒸氣蒸餾提取 IO小時，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉十燥，得到降香揮發(fā)油；
(2) 取上述降香油，以l: 15比例(重量比)硅膠(300-400目)柱層析分 離，柱層析次數(shù)為2次，用氯仿 丙酮進行梯度洗脫，經(jīng)硅膠薄層(石油醚 丙 酮(9:1)為展開劑)檢測，噴以IO %硫酸乙醇溶液顯色，收集含反式橙花叔醇的 流份，回收溶劑得黃色油狀液體；
(3) 將上述黃色油狀液體，經(jīng)過S印hadex LH-20凝膠柱層析，柱層析次 數(shù)為1次，用氯仿 甲醇(1: 1)洗脫，經(jīng)硅膠薄層(石油醚 丙酮(9:1)為展 開劑)檢測，噴以IO %硫酸乙醇溶液顯色，將具有反式橙花叔醇為單一點的柱 層析流份合并，回收溶劑后，得一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇純品。
(4) 將上述反式橙花叔醇純品置于干燥器36小時，氣相色譜法檢測，即得 到純度》95%的反式橙花叔醇對照品。
實施例4
反式橙花叔醇純品的檢測(高效液相色譜法)
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱為迪馬DiamonsiLTM(鉆石)Cw (5pm， 250X4. 6mra)色譜柱；流動相為甲醇一水(15 : 85);檢測波長213 nm;流速為 1. 0 mlVmin。
供試品溶液的制備 取上述反式橙花叔醇適量，加甲醇制成濃度為1.0 mg/mL的溶液，過濾，取續(xù)濾液，即得。
測定法照高效液相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VID)測定， 即得。結(jié)果通過峰面積歸一法計算，制備的反式橙花叔醇對照品純度>95%。
實施例5
反式橙花叔醇純品的檢測(氣相色譜法)
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱為石英毛細管柱DB-Wax (30.0mX250 umXO. 25um)，進樣口溫度為230°C，恒流，1. OmL/min，分流比20: 1，檢測 口溫度25(TC，程序升溫初始溫度12(TC，以2°C/min的速率，升至17(TC。
供試品溶液的制備 取上述反式橙花叔醇適量，加乙酸乙酯制成濃度為 0.25 mg/mL的溶液，過濾，取續(xù)濾液，即得。
測定法照氣相色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VIE)測定，即得。
結(jié)果通過峰面積歸一法計算，制備的反式橙花叔醇對照品純度》95%。
權(quán)利要求
1、反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于(1)降香藥材粉碎成粗粉，加水浸泡后，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，用無水硫酸鈉干燥，得到降香揮發(fā)油；(2)取上述降香油，硅膠柱層析分離，柱層析次數(shù)為1～5次，洗脫，收集各段流份，經(jīng)硅膠薄層檢測，收集含反式橙花叔醇的流份，回收溶劑得黃色油狀液體；(3)將上述黃色油狀液體，凝膠柱層析，柱層析次數(shù)為1～5次，經(jīng)硅膠薄層檢測，將具有反式橙花叔醇為單一點的柱層析流份合并，回收溶劑后，得一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇純品；(4)將上述反式橙花叔醇純品置于干燥器干燥24～36小時，高效液相色譜法或氣相色譜法檢測，即得到純度≥95％的反式橙花叔醇對照品。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于 步驟(l)中加水量為生藥材的5 10倍，浸泡時間為2 6小時，提取時間為8 16小時。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于 步驟(2)、 (3)中柱層析的洗脫溶劑可以為石油醚、氯仿、甲醇、丙酮、乙酸 乙酯中的 一種或兩種混合洗脫。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于 所用的柱層析硅膠為100 400目。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于 所用的柱層析凝膠包括S印hadex G、 S印hadex LH-20。
6、根據(jù)權(quán)利要求l所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法，其特征在于所用的薄層層析硅膠包括硅膠G、硅膠H、硅膠F254，顯色劑為10%硫酸乙醇溶液。
7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的反式橙花叔醇對照品的制備方法制備得到的反 式橙花叔醇對照品，其分子式為C15H260，化學結(jié)構(gòu)式為<formula>formula see original document page 3</formula>
全文摘要
本發(fā)明涉及一種反式橙花叔醇對照品的制備方法，步驟為將降香藥材粉碎成粗粉，水蒸氣蒸餾提取揮發(fā)油，收集降香油；降香油經(jīng)過硅膠柱層析分離，收集含反式橙花叔醇的流份，回收溶劑后得黃色油狀液體，凝膠柱層析分離，得一種淡黃色油狀液體，即反式橙花叔醇對照品。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明確定了反式橙花叔醇的最佳提取工藝。該制備方法操作簡便、得率高、適于工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07C33/02GK101624331SQ20091011596
公開日2010年1月13日 申請日期2009年8月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月14日
發(fā)明者馮育林, 劉海燕, 楊世林, 王躍生, 暉 簡, 范玫玫 申請人:江西本草天工科技有限責任公司