專利名稱：模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法
技術領域：
本發明涉及天然藥物的分離提純方法，尤其涉及一種模擬移動床色譜法分 離制備芍藥內酯苷的方法。
背景技術：
芍藥內酯苷作為具有抗炎、抗潰瘍及免疫調節作用的白芍總苷(TGP)中的 特征組分，是從白芍中提取得到的。由于在白芍中，除了芍藥內酯苷，還含有 芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰芍藥苷和苯甲酰羥基芍藥苷等多種苷類成分和其 他雜質等多種組分，所以在芍藥內酯苷的生產過程中，最關鍵的步驟就是分離 提純。目前在藥物工業中常采用的精制手段，包括硅膠柱層析，樹脂柱層析， 凝膠柱層析等方法。以上設備簡單，成本低，但是不足之處在于分離的效率較 低，流動相和固定相的利用率較低，成本高，產量低，對于成分較復雜的物質 不適合分離。此外，產品純度和收率之間的矛盾在柱層析中得不到解決。要保 持純度，只有犧牲收率，這種低收率必將導致高成本。
20世紀70年代初期，美國UOP公司開發了模擬移動床(SMBC)原理的色譜技 術模擬移動床色譜技術及其應用，色譜，第22巻，P111 115， 2004年3月， 該技術使吸附劑顆粒裝填后不在移動，由原料進出口和產品液進出口不斷切換 的方法，形成吸附劑顆粒和流動相相對逆流運動來模擬固定相的移動。該技術 優點在于可以連續運轉，填料更加有效利用，溶劑消耗大量減少，收集到的產 品稀釋度小。SMBC技術的發展從石油化工領域幵始，其后是食品中的制糖工業， 在20世紀末進入藥物領域，并得到了快速的應用和發展。但是，對于芍藥內酯 苷的模擬移動床色譜制備工藝仍未見公開報道。
發明內容
為了解決芍藥內酯苷分離提取成本高、產量低的技術缺陷，本發明的目的 在于提供應用模擬移動床色譜分離制備芍藥內酯苷的方法，該方法連續生產， 提高了產品的純度和收率，并降低生產成本。
為了實現上述的目的，本發明采用了以下的技術方案
模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，該方法采用白芍總苷提取 物作為原料，應用模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷，模擬移動床色譜的 固定相采用C18硅膠，流動相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液， 混合溶液中按體積百分計
甲醇或乙腈 10% 50% 水 50%~90% 甲酸 0 1% 異丙醇 0 ~ 2%
上述的各組分的總和為100%。
本發明的流動相中可以加入甲酸和異丙醇，用以調整芍藥內酯苷的峰型， 減少拖尾，使它和芍藥苷在進樣濃度較大的情況下能達到較好的基線分離，從 而通過SMBC得到純度較高的芍藥內酯苷。作為優選，上述混合溶液中按體積 比例計
甲醇或乙腈 10% 50% 水 50% 90% 甲酸 0.05% 0.5%
異丙醇 1% 2%。 上述的各組分的總和為100%。上述的白芍總苷提取物可以通過提取純化手段從白芍藥材中提取得到，主
要成分為芍藥內酯苷和芍藥苷。作為優選，白芍總苷提取物的純度為40% 90%。
作為優選，上述進入模擬移動床色譜分離的白芍總苷提取物采用甲醇溶解，
溶解后白芍總苷提取物的濃度為10 200mg/mL。
作為優選，上述的模擬移動床由4 8根色譜柱組成，色譜柱分四個區域， 每區由1 2支相同的色譜柱串聯。作為優選，進樣液流速Up為2 20ml/min; 洗脫液流速UE為5 ~ 40ml/min;萃余液流速UR為2 ~ 20ml/min;萃取液流速 Ux為5 30ml/min;切換時間Ts為0.5 30min。
作為優選，上述的模擬移動床色譜系統的操作溫度為20 6(TC。再優選， 模擬移動床色譜系統的操作溫度為20 ~ 40°C 。
本發明由于采用了上述的技術方案，芍藥內酯苷產品的收率高，純度達到 90%以上。由于模擬移動床色譜過程是連續過程，可以提高生產的自動化水平和 生產效率，并使生產環境得到極大的改善，真正實現了清潔生產。
圖1為本發明模擬移動床色譜的結構示意圖。 圖2為本發明芍藥內酯苷的HPLC圖譜。
具體實施例方式
下面對本發明的具體實施方式
做一個詳細說明。模擬移動床色譜分離制備芍
藥內酯苷的方法，該方法包括以下的步驟 一、樣品溶液的制備
通過乙醇回流提取和硅膠柱層析分離，從白芍藥材中制得含芍藥苷80%的白 芍總苷提取物(TGP)。將得到的TGP樣品溶于甲醇溶液中，沉降，經0.45Wn濾 膜過濾得濃度為100mg/mL的溶液，將此作為SMBC的進樣液。此 程可以除去部分不可逆吸附的雜質，從而防止其對SMBC系統中色譜柱的污染，延長色譜柱 的使用壽命。
二、 色譜柱填裝與流動相的組成
用勻漿法填裝8根色譜柱OOmmxlOOmm)，填料為反相C18硅膠，粒徑5 10pm，孔徑100 120A。流動相中甲醇與水、甲酸、異丙醇的體積比例為30:
70: 0.1: 1.5。
當然，上述的流動相也可以采用甲醇與水的混合液，甲醇與水的體積比例
為30: 70。或者，流動相采用甲醇與水、甲酸的混合液，甲醇與水、甲酸的體
積比例為30: 70: 1。
三、 模擬移動床色譜系統(SMBC)
SMBC系統包括進樣泵、洗脫液泵、萃取泵、萃余泵和循環泵、旋轉閥和 色譜柱。如圖1所示，阿拉伯數字為色譜柱編號，樣品溶液和洗脫液分別從樣 品液入口與洗脫液入口注入色譜系統(如圖1實線箭頭所指位置)。每隔一定時 間，樣品液和洗脫液入口、萃取液和萃余液出口同時沿流動相方向切換至下一 根色譜柱出口 (如圖1虛線箭頭所指位置)。經過SMBC的分離，從萃取液出 口可獲得高純度的芍藥內酯苷，從萃余液出口則可獲得較高純度的芍藥苷。
四、 模擬移動床色譜參數
本發明方法中的模擬移動床由8支色譜柱組成4個區域，經電磁閥切換改 變進料口、出料口位置。進樣液流速Up=4 10ml/min;洗脫液流速UE= 10 20ml/min;萃余液流速UR= 5 ~ 10ml/min;萃取液流速Ux= 10 20ml/min; 切換時間Ts=l 5min。操作溫度范圍為20 40°C 。
五、 濃縮
將萃取液和萃余液分別用薄膜旋轉蒸發器濃縮至無醇味，用乙醇洗出后在真空干燥箱烘干至恒重。 7V、 成品檢驗
Agilent 1100高效液相色譜系統，二極管陣列檢測器，Hypersil-C18柱 (250mmX4.6mm i.d, 5(mi)，流動相為乙腈和水(體積比為30: 70)，流速 l.Oml'mU1，柱溫40°C，檢測波長230腿，檢測圖譜如圖2所示。通過外標法 測定成品中芍藥內酯苷的純度為90%以上。
權利要求
1.模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特征在于該方法采用白芍總苷提取物作為原料，應用模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷，模擬移動床色譜的固定相采用C18硅膠，流動相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液，混合溶液中按體積百分計甲醇或乙腈 10％～50％水 50％～90％甲酸 0～1％異丙醇 0～2％上述的各組分的總和為100％。
2. 根據權利要求l所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特 征在于混合溶液中按體積比例計甲醇或乙腈 10%~50%水 50%~90%甲酸 0.05% ~ 0.5%異丙醇 1%~2%。上述的各組分的總和為100%。
3. 根據權利要求1或2所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特征在于白芍總苷提取物為通過提取純化手段從白芍藥材中提取得到，純度為40% ~ 90%。
4. 根據權利要求1或2所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特征在于進入模擬移動床色譜分離的白芍總苷提取物采用甲醇溶解，溶解后白芍總苷提取物的濃度為10~100mg/mL。
5. 根據權利要求1或2所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法， 其特征在于模擬移動床由4 8根色譜柱組成，色譜柱分四個區域，每區由1 2支相同的色譜柱串聯。
6. 根據權利要求5所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特 征在于進樣液流速Up為2 20ml/min;洗脫液流速UE為5 40ml/min; 萃余液流速UR為2 20ml/min;萃取液流速Ux為5 30ml/min;切換時間 Ts為0,5 30min。
7. 根據權利要求5所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特 征在于模擬移動床色譜系統的操作溫度為20 ~ 60°C 。
8. 根據權利要求7所述的模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，其特 征在于模擬移動床色譜系統的操作溫度為20 40°C 。
全文摘要
本發明涉及天然藥物的分離提純方法，尤其涉及一種模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法。模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷的方法，該方法采用白芍總苷提取物作為原料，應用模擬移動床色譜法分離制備芍藥內酯苷，模擬移動床色譜的固定相采用C18硅膠，流動相采用甲醇或乙腈與水、甲酸、異丙醇的混合溶液，混合溶液中按體積百分計甲醇或乙腈10％～50％、水50％～90％、甲酸0～1％、異丙醇0～2％，上述的各組分的總和為100％。本發明芍藥內酯苷產品的收率高，純度達到90％以上。由于模擬移動床色譜過程是連續過程，可以提高生產的自動化水平和生產效率，并使生產環境得到極大的改善，真正實現了清潔生產。
文檔編號C07H1/06GK101607975SQ200910100680
公開日2009年12月23日 申請日期2009年7月16日 優先權日2009年7月16日
發明者代冬梅, 孫振蛟, 莊培生, 邵敏明 申請人:寧波立華植物提取技術有限公司