專利名稱：一種異黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙草添加劑，更具體地說，本發(fā)明涉及一種新穎的異黃 酮類化合物。同時(shí)，本發(fā)明還涉及所述化合物的制備方法及其在清除巻煙主 流煙氣中的自由基方面的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
人類自發(fā)現(xiàn)煙草至今已有五百年的歷史。作為一種特殊商品，煙草滿足 了吸煙消費(fèi)者生理和心理的需要。但是隨著社會(huì)進(jìn)步和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，有 關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示吸煙對(duì)人體健康有一定的影響，吸煙與健康的矛盾日益引起 人們的重視。
多年來，國(guó)內(nèi)外煙草企業(yè)紛紛研究、應(yīng)用各種先進(jìn)的生產(chǎn)工藝技術(shù)，逐 步降低卷煙煙氣中的有害成分，減輕吸煙對(duì)人體健康的影響。醫(yī)學(xué)和自由基
生物學(xué)研究表明自由基是對(duì)人體健康有一定危害作用，而且卷煙煙氣中也 含有一定量自由基，降低吸煙過程中產(chǎn)生的自由基是生產(chǎn)低危害香煙的有效
舉措。 .
天然植物中含有大量抗氧化活性成分，這些成分可通過提供H"減少自 由基的產(chǎn)生，并可打斷自由基氧化鏈反應(yīng)，有效的清除卷煙煙氣自由基。早 在70年代初北京卷煙廠就開始了在卷煙中添加羅布麻降低煙氣自由基的研 究，與對(duì)比卷煙相比，煙氣焦油自由基降低約27.4% ,氣相自由基降低約 30.6%。此外其它植物，如生地、當(dāng)歸、酸麥仁、靈芝、肉桂、杜仲、枸杞、 丹參、肉蓯蓉等的粗提物；以及許多中草藥的提純物，如五味子的多種成分、 甘草類黃酮、人參皂苷、蘆丁、桑前素等，均具有類似功能。但針對(duì)異黃酮 類化合物至今尚未發(fā)現(xiàn)相關(guān)報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種新的異黃酮類化合物。 本發(fā)明的另一目的是提供一種從煙用添加劑木瓜浸膏中提取出本發(fā)朋 化合物的方法。
本發(fā)明進(jìn)一步的目的是提供上述化合物在清除巻煙主流煙氣中的自由
3基方面的用途。
本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)。
*除非另有說明，本發(fā)明中所釆用的百分?jǐn)?shù)均為質(zhì)量百分?jǐn)?shù)。 A.本發(fā)明從煙用添加劑木瓜浸膏中分離出了一種新的異黃酮類化合物，
新化合物的結(jié)構(gòu)式為.
該化合物的命名為3， ， 4， ， 5，-三羥基-5, 7-二甲氧基異黃酮(3， ， 4， ， 5，
B. 本發(fā)明提供了所述新化合物的制備方法，該方法包括以下步驟
(1) 將木瓜浸膏用MCI柱脫色，分別用純丙酮和85%~95%的甲醇洗脫， 丙酮洗下部分主要為葉綠素和脂肪酸；收集90%甲醇洗下部分，用粗硅膠拌 樣，硅膠裝柱進(jìn)行硅膠柱層析；
(2) 用氯仿丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測(cè)合并相同的部分，其中，氯仿 丙酮=1:1的洗脫部分用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以30%~ 40%的甲醇為流動(dòng)相，Zorbax SB_C18 column (9.4 x 250 mm, 5 pm)半制備 柱為固定相，紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm,每次進(jìn)樣50 pL，收集27. 5 min
色譜峰，多次累加后蒸干；
(3) 再次用純甲醇溶解，再以甲醇為流動(dòng)相，用Sephadex LH-20凝膠
柱層析分離，即得到所需化合物。
C. 本發(fā)明對(duì)上述化合物進(jìn)行了清除卷煙主流煙氣中自由基的效果試驗(yàn)， 化合物顯示有確切的清除自由基效果，
本發(fā)明具有以下突出的優(yōu)點(diǎn)(l)木瓜在我國(guó)分布廣泛，原料供應(yīng)充足； 而且本發(fā)明的化合物在木瓜中含量較高，分離容易，如果要工業(yè)應(yīng)用，原料 容易獲得。(2)采用了常規(guī)柱層析和高效液相色譜結(jié)合的制備方法，化合物 制備操作流程簡(jiǎn)單，所獲得的本發(fā)明化合物純度高，隨后的工業(yè)化生產(chǎn)容易 實(shí)現(xiàn)。(3)該化合物具有良好的清除巻煙煙氣中的自由基效果，可為煙草工 業(yè)降低卷煙煙氣有害成分提供有價(jià)值的新化合物或先導(dǎo)性化合物。
_trihydroxy-5， 7—dimethoxyflavone)。
圖1是本發(fā)明化合物高分辨質(zhì)譜(HRESIMS); 圖2是本發(fā)明化合物的核磁共振氫譜(H麗R); 圖3是本發(fā)明化合物的核磁共振炭譜(nC腿R); 圖4是本發(fā)明化合物的主要HBMC相關(guān)(—)。
具體實(shí)施方法
通過下面給出的具體實(shí)施例和典型應(yīng)用實(shí)施例，可以進(jìn)一步清楚地了解 本發(fā)明。但它們并不是對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。 實(shí)施例1
所用的木瓜浸膏由云南玉溪萬(wàn)方天然產(chǎn)物有限公司提供。木瓜浸膏500 g用MCI柱脫色，分別用純丙酮和90%的甲醇洗脫，丙酮洗下部分主要為葉 綠素和脂肪酸。收集90%甲醇洗下部分100 g,用粗硅膠200 g (80~100 目)拌樣，2.0 kg硅膠(160 - 200目)裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，氯仿丙酮 (1: 0 — 0: l)梯度洗脫，TLC監(jiān)測(cè)合并相同的部分，得到8個(gè)部分(純氯 仿、氯仿-丙酮20:1、氯仿-丙酮9:1、氯仿-丙酮8:2、氯仿-丙酮3:2、 氯仿-丙酮1:1、氯仿-丙酮20:1、純丙酮)，其中氯仿-丙酮(l: l)洗脫部分 11.8 g用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以35%的甲醇為流動(dòng)相， Zorbax SB-C18 column (9.4 x 250 mm, 5 —半制備柱為固定相，紫外檢 測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm,每次進(jìn)樣50 pL,收集27. 5 min色譜峰，多次累 加后蒸干，再次用純甲醇溶解，再以以35%的甲醇為流動(dòng)相甲醇為流動(dòng)相， 用S印hadex LH-20凝膠柱層析分離，即得到本發(fā)明所須的化合物。
實(shí)施例2
該實(shí)施例的過程與實(shí)施例l相同，只是釆用85%的甲醇洗脫，以30%的 甲醇為流動(dòng)相。 實(shí)施例3
該實(shí)施例的過程與實(shí)施例l相同，只是釆用95%的甲醇洗脫，以40%的 甲醇為流動(dòng)相。 實(shí)施例4 一一化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
所述的化合物為黃色無定形粉末；紫外光譜(溶劑為甲醇)，(log￡■) 310 (3.67), 246 (4.18), 210 (5. 79);紅外光譜(溴化鉀壓片)v, 3384， 1658， 1615, 1548， 1508, 1426, 1125, 1047, 956, 863 cnT'; HRESIMS (附 圖-l)顯示其準(zhǔn)分子離子峰m/z 353.0640 [M+Na] + (calcd 353.0637 ),結(jié) 合麗R譜確定其分子式為C17H1407,不飽和度為10。 'H和"C NMR譜(附圖-2 和附圖-3，數(shù)據(jù)歸屬見表-1)顯示分子中有2個(gè)苯環(huán)(苯環(huán)上有4個(gè)次甲基 雙鍵炭)，2個(gè)甲氧基(5c56. 7、 56.0), 1個(gè)羰基(&181. 7 ), 1個(gè)次甲基 雙鍵(&154.1), l個(gè)雙鍵季炭(Sel23. 1);結(jié)合對(duì)比文獻(xiàn)數(shù)據(jù)可證實(shí)該化 合物為異環(huán)酮類化合物；進(jìn)一步經(jīng)腹BC相關(guān)(附圖-4)證實(shí)C-5、 C-7位取 代為甲氧基，C-3'、 C-4'、 C-5，位取代為羥基，化合物的結(jié)構(gòu)最終得到 確認(rèn)。通過SCIFINDER數(shù)據(jù)庫(kù)檢索和文獻(xiàn)查詢證實(shí)該化合物為新化合物。
表-l化合物的1H和13C NMR數(shù)據(jù)No.(mult.)A (mult, Hz)
2154.1 d7.94 s
23.1 s
4181.7s
160.1 s
697.5 d6.58 d，J-2.2 HZ
7162.0s
896.0 d6.49 d,J= 2.2 HZ
9158.2s
10106.2 s
r122.7 s
2',6'105.3 d7.02， s
3',5'146.8 s
4,137.5 s
OMe-556.7 q3.70 s
OMe-756.0 q3.69 s
實(shí)施例5
一一用該化合物的清除卷煙煙氣中的自由基
l.卷煙的葉組為云南某品牌巻煙的葉組(上部煙葉為20%,中部煙葉為 40%，下部煙葉為30%，膨脹梗絲5%,煙草薄片5%)。采用醋酸纖維嘴棒, 嘴棒成型紙透氣度為"00 CU;卷煙紙克重為50 g/m2、透氣度為80 CU的， 水松紙透氣度為200 CU。成品卷煙煙支的重量為0.93+0. 02 g,圓周為24. 5
6隱，長(zhǎng)度為84 mm (其中嘴棒長(zhǎng)度為25 mm)。
2.試驗(yàn)化合物用添加到巻煙過濾嘴絲束中，每支巻煙添加量為G. 5 ~5. 0 mg,并以未添加試驗(yàn)化合物的巻煙為對(duì)照。
卷煙用RM200型20孔道自動(dòng)吸煙機(jī)在標(biāo)準(zhǔn)條件下吸煙，主流煙氣粒相物 用44 mm劍橋?yàn)V片捕集，氣相部分用采樣管捕集；粒相自由基用含0. 05 mol/L N-特丁基_ cx -苯基氮硐的苯溶液為萃取劑從劍橋?yàn)V片溶出，并洗滌劍橋?yàn)V 片，定容得粒相自由基測(cè)試液。氣相自由基用自由基采樣管，以O(shè). 05mol/L N-特丁基-a-苯基氮硐的苯溶液為吸收劑釆集，卷煙抽吸完后取出氣相自由 基采樣管，同時(shí)用少量吸收劑分3次沖洗通氣內(nèi)管外部和釆樣管內(nèi)壁，合并 吸收液和洗滌液，得氣相自由基樣品液。
用順磁共振儀測(cè)定自由基，ESR分析實(shí)驗(yàn)條件中心磁場(chǎng)=3.385 T, 掃寬=0. 500 T,微波頻率=1. 5 GHz,掃描時(shí)間=2 min,掃描次數(shù)=5, 放大倍數(shù)=103 ~105 (根據(jù)峰高進(jìn)行調(diào)整)，樣品用量20 pL;根據(jù)ESR圖 譜中峰面積計(jì)算氣相及粒相自由基數(shù)量的變化。
3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明進(jìn)行5次實(shí)驗(yàn)，和對(duì)照樣相比，添加該化合物的卷煙 氣相自由基降低率為22 - 28 %,粒相自由基降低率在18. 5-26. 7%之間， 該化合物對(duì)卷煙主流煙氣中的自由基具有確切的清除效果。
權(quán)利要求
1.一種具有下述結(jié)構(gòu)式的異黃酮類化合物
2. —種權(quán)利要求l所述化合物的制備方法，其特征在于該方法采用以 下步驟(1) 將木瓜浸膏用MCI柱脫色，分別用純丙酮和85%~95%的甲醇洗脫， 丙酮洗下部分主要為葉綠素和脂肪酸；收集90%甲醇洗下部分，用粗硅膠拌 樣，硅膠裝柱進(jìn)行硅膠柱層析；(2) 用氯仿丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測(cè)合并相同的部分，其中，氯仿 丙酮-l:l的洗脫部分用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以30%~ 40%的甲醇為流動(dòng)相,Zorbax SB-CiS column (9.4 x 250 mm, 5 )Lim)半制備 柱為固定相，紫外檢測(cè)器檢測(cè)波長(zhǎng)為360薩，每次進(jìn)樣50pL,收集27. 5min 色譜峰，多次累加后蒸干； (3)再次用純甲醇溶解，再以甲醇為流動(dòng)相，用S印hadex LH-20凝膠 柱層析分離，即得到所需化合物。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于所述的木瓜浸膏由云 南玉溪萬(wàn)方天然產(chǎn)物有限公司提供。
4. 權(quán)利要求1所述的異黃酮類化合物在清除巻煙煙氣中的自由基中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種具有新穎結(jié)構(gòu)的異黃酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用。該化合物具有以右結(jié)構(gòu)，本發(fā)明是將木瓜浸膏用MCI柱脫色，用硅膠柱層析初步分離，然后采用高效液相半制備色譜進(jìn)一步分離，即可獲得到該新化合物，命名為3’，4’，5’-三羥基-5，7-二甲氧基異黃酮。對(duì)該化合物進(jìn)行了清除卷煙主流煙氣中自由基的效果試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示化合物具有良好的清除自由基效果。
文檔編號(hào)C07D311/00GK101538260SQ200910094408
公開日2009年9月23日 申請(qǐng)日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者徐祎然, 施紅林, 李雪梅, 楊光宇, 鵬 范, 黃海濤 申請(qǐng)人:云南煙草科學(xué)研究院