專利名稱：：抗腫瘤藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及藥物化合物及藥物學(xué)領(lǐng)域，具體地，涉及化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5,20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)為活性成分的藥物組合物，及其在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：血管生成被認(rèn)為是超過12mm的腫瘤生長的絕對必備條件。在小于該限度的腫瘤中，氧和營養(yǎng)物可通過擴(kuò)散給細(xì)胞。然而，當(dāng)達(dá)到一定尺寸時(shí)，每個(gè)腫瘤為了繼續(xù)生長都要依賴血管生成。在低氧區(qū)域內(nèi)的腫瘤發(fā)生細(xì)胞通過剌激VEGF生成而起反應(yīng)，這引起靜息內(nèi)皮細(xì)胞的激活來刺激新的血管形成。此外，在沒有任何血管生成的腫瘤區(qū)域中的VEGF可通過ras信號傳導(dǎo)途徑來進(jìn)行。原位雜交實(shí)驗(yàn)已證實(shí)了在多種人腫瘤中VEGFm脂A被嚴(yán)重上調(diào)，這些腫瘤包括肺癌、乳腺癌、胃腸道癌、卵巢癌、以及血管肉瘤和幾種顱內(nèi)腫瘤。'血管生成的特征是血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的活性過強(qiáng)。VRGF結(jié)合高親和性跨膜酪氨酸激酶受體啟動(dòng)信號傳導(dǎo)，從而啟動(dòng)新生血管生成的調(diào)控環(huán)節(jié)。已顯示腫瘤生長對VEGF受體拮抗劑的抗血管生成作用敏感。因此，實(shí)體瘤可以通過酪氨酸激酶抑制劑進(jìn)行有效干預(yù)，因?yàn)檫@些腫瘤的發(fā)生都依賴于血管生成，以形成支持其生長所必需的血管。這些實(shí)體瘤包括組織性淋巴瘤、腦、生殖泌尿道、淋巴系統(tǒng)、胃、喉和肺部的癌癥，包括肺腺癌和小細(xì)胞肺癌。實(shí)體腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移均有賴于血管生成。而最近的研究表明，血管生成及其調(diào)控因子與白血病的發(fā)生、演變、預(yù)后密切相關(guān)，以血管生成為靶部位的抗血管生成療法同樣適用于白血病的治療。所以，通過抑制腫瘤血管生長而"餓死腫瘤"的治療策略不僅適用于實(shí)體瘤，還可應(yīng)用于白血病，該治療方法與現(xiàn)有的化療藥物相比，具有副作用小、對人體正常細(xì)胞無損害、不會(huì)引起化療綜合癥、能顯著抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移和擴(kuò)散等顯著特點(diǎn)。迄今，現(xiàn)有技術(shù)中未有化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)具有抗腫瘤的藥效報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供化合物1(5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)為活性成分的藥物組合物，及其在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案抗腫瘤藥物組合物，含有下述結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物1或2和可藥用載體或賦形劑，R二0Ac時(shí)為化合物1即5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯；R=H時(shí)為化合物2即5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯。結(jié)構(gòu)式(I)所示化合物1或2在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。上述藥物組合物在制備治療或預(yù)防腫腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及的術(shù)語中，"腫瘤"意指瘤性增殖性病癥，例如實(shí)體瘤疾病、液體瘤疾病；"實(shí)體瘤疾病"尤其指乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、結(jié)腸癌和通常的胃腸道癌、肺癌，例如小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、皮膚癌如黑色素瘤、頭頸癌或腦瘤；"實(shí)體瘤疾病"尤其指白血病。本發(fā)明涉及到的化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)可由從天然產(chǎn)物中提取得到，如從大戟科植物中提取分離得到；也可以來源于化工合成的產(chǎn)品。本發(fā)明涉及的化合物1或2能夠通過抑制腫瘤新生血管的生成而達(dá)到抗腫瘤目的，可制備成任何類型的藥用制劑。本發(fā)明化合物涉及的對腫瘤的抑制作用由一系列的試驗(yàn)提供證據(jù)。本發(fā)明的藥物組合物，可由化合物1或2按照重量百分比，占到藥物總重量的10%~99%。可由化合物1或2與20%聚氧乙烯醚蓖麻油混合，溶解到含磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、尼泊金酯和羧甲基纖維素鈉的水中，制成的混懸型注射劑。本發(fā)明的藥物組合物可以是與藥劑學(xué)意義上的填充劑、崩解劑組成的常規(guī)片劑或膠囊劑；或者是與填充劑和羥丙甲基纖維素組成的緩釋片劑或膠囊劑；其中填充劑可選乳糖、微晶纖維素，糊精，淀粉，磷酸鈣；崩解劑可選用羥丙纖維素，羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮，交聯(lián)羧甲基纖維素鈉；亦可選加粘合劑、潤滑劑或濕潤劑。所述藥物組合物按照重量比，化合物1或21份乳糖或微晶纖維素0.050.2:羥丙纖維素或羧甲基淀粉鈉0.050.2;或者，5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯1份乳糖或微晶纖維素0.030.08:羥丙甲基纖維素K4M0,150.4。所述藥物組合物更為理想的配方為按照重量比，化合物1或21份乳糖或微晶纖維素0.08~0.12:羥丙纖維素或羧甲基淀粉鈉0.080.12;或者，化合物1或21份:乳糖或微晶纖維素0.05~0.07:羥丙甲基纖維素K4M0.20.3。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔黏膜、皮膚、腹膜或直腸等。本發(fā)明化合物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內(nèi)注射和穴位注射等。6本發(fā)明化合物或藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動(dòng)物的性別、年齡、體重、個(gè)體反應(yīng)，給藥途徑給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明的治療劑量可以有較大范圍的變化，可以根據(jù)本發(fā)明化合物組合物中的單位制劑劑量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療腫瘤疾病的目的。本發(fā)明化合物的每天合適劑量范圍優(yōu)選為0.廣50mg/kg體重，更優(yōu)選為50mg1000mg/天/人。上述劑量可以單一劑量形式或分成幾個(gè)，例如二、三、四個(gè)劑量形式給藥，這受限于給藥醫(yī)生臨床經(jīng)驗(yàn)及包括同時(shí)運(yùn)用其他治療手段的給藥方案。圖1為化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)抑制斑馬魚新生血管生成照片即斑馬魚72h仔魚體節(jié)間血管照片；圖中A:正常仔魚軀干部熒光照片(X200)，紅色箭頭示節(jié)間血管；B:5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯加藥組100.0Ug/ml仔魚軀干部熒光照片(X200)圖2為化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)抑制斑馬魚新生血管生成照片即斑馬魚72h仔魚體節(jié)間血管照片；圖中A:正常仔魚軀干部熒光照片(X200)，紅色箭頭示節(jié)間血管；B:5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯加藥組100.0ug/ml仔魚軀干部熒光照片(X200)。具體實(shí)施方法下面結(jié)合附圖，用本發(fā)明的實(shí)施例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此來限定本發(fā)明。實(shí)施例1:1、化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)的制備取大戟科大戟屬植物霸王鞭地上部分10Kg(干重)，粉碎后用70%丙酮水浸提(20LX3)，減壓濃縮至總體積為2L，用乙酸乙酯萃取(2LX3)后，乙酸乙酯部分經(jīng)MCI柱脫色后得到浸膏120g。經(jīng)硅膠柱層析洗脫(petroleumether-Me2C01:(Tl:l)分成A-E共5個(gè)部分；A部分進(jìn)一步用硅膠柱層析分離(petroleumether-Me2C0=100:1)得到a-d共4個(gè)部分；繼續(xù)用HPLC(Agilent1200HPLCsystem;ZorbaxSB-C18，250X9.4)純化，c部分用76%的甲醇水分離得到5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯(3mg)。取大戟科大戟屬植物霸王鞭地上部分10Kg(干重)，粉碎后用70%丙酮水浸提(20LX3),減壓濃縮至總體積為2L，用乙酸乙酯萃取(2LX3)后，乙酸乙酯部分經(jīng)MCI柱脫色后得到浸膏120g。經(jīng)硅膠柱層析洗脫(petroleumether-Me2C0二l:0l:l)分成A-E共5個(gè)部分；A部分進(jìn)一步用硅膠柱層析分離(petroleumether-Me2C0二100:l)得到a-d共4個(gè)部分；繼續(xù)用HPLC(Agilent1200HPLCsystem;ZorbaxSB-C18,250X9.4)純化，c部分用76%的甲醇水分離得到5，17-二乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯(2mg)。2、化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)對小鼠S180抑瘤作用的觀察無菌抽取荷Sw小鼠腹水，將細(xì)胞懸液置顯微鏡下計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞數(shù)為2.5X107ml和2.0X107ml，于小鼠右前肢腋部皮下接種瘤液0.2ral/只。次日隨機(jī)分組，化合物1(5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)為200、100和50mg/kg三個(gè)劑量組，陽性對照組(FT207110mg/kg)和生理鹽水對照組。均連續(xù)灌胃給藥9天，每鼠每天灌胃體積均為0.5ml。生理鹽水對照組灌胃給同體積生理鹽水。末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，解剖瘤塊稱瘤重及體重，計(jì)算抑瘤率。結(jié)果見表1陽性對照組抑制率為52.3%(P<0.001)，5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯對小鼠S180均有較強(qiáng)的抑瘤作用。表l本發(fā)明化合物對小鼠Sis。肉瘤生成的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例2:化合物l(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)對小鼠Lewis肺癌自發(fā)性轉(zhuǎn)移的影響Lewis肺癌細(xì)胞株制成瘤細(xì)胞混懸液，臺(tái)盼藍(lán)計(jì)數(shù)約為1X107AiL瘤細(xì)胞。消毒小鼠右前腋，取0.2mL(約1X106_2X106個(gè)瘤細(xì)胞)接種于皮下。傳代3次。在無菌條件下剝離Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤塊，選取生長良好的瘤組織，剪碎、稱質(zhì)量，用細(xì)胞勻漿器制成勻漿，按體積比1:3加生理鹽水制成瘤細(xì)胞混懸液，接種于C57BL/6J小鼠右前肢腋窩皮下，每只0.2mL(約1X1062X106個(gè)瘤細(xì)胞)。次日隨機(jī)分組，化合物l(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)為200、100禾卩50mg/kg三個(gè)劑量組，陽性對照組(FT2。7110mg/kg)和生理鹽水對照組。均連續(xù)灌胃給藥9天，每鼠每天灌胃體積均為0.5ml。生理鹽水對照組灌胃給同體積生理鹽水。末次給藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，解剖瘤塊稱瘤重及體拿。計(jì)算抑瘤率及病灶轉(zhuǎn)移率。在小鼠Lewis肺癌自發(fā)性轉(zhuǎn)移模型上腹腔注射給予化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，結(jié)果化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)能夠明顯抑制Lewis肺癌腫瘤的重量增長(P<0.05)，并降低了出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移的小鼠數(shù)(轉(zhuǎn)移率)，同時(shí)肺轉(zhuǎn)移的數(shù)目也明顯降低。結(jié)果見表2。表2本發(fā)明化合物對小鼠Lewis肺癌轉(zhuǎn)移的抑制作用組別齊U量mg/kg平均瘤重g抑瘤率％病灶轉(zhuǎn)移率/%空白對照2.30±0.83080FT2。7陽性對照組110.01.08±0.4853.0**505,17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯501002002,00±0.391.45±0.751.39±0.3513.136.9承39.5*8060*45氺氺502.05土0.6310.8755,20-雙乙?；?巨大戟二砲-3-當(dāng)歸酸酯1001.85±0.4419.5732001.33±0.2142.1*61**p〈0.05，,與對照相比實(shí)施例3:化合物l(5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)對新生血管生成的抑制作用TG(VEGFR2:GFP)系血管熒光轉(zhuǎn)基因斑馬魚受精卵發(fā)育24h時(shí)，在體視顯位鏡下挑選正常的斑馬魚胚胎，移入96孔培養(yǎng)板中，每孔1枚。樣孔中預(yù)先加入一定體積藥物，每濃度32孔，然后用營養(yǎng)用水補(bǔ)充體積至300ul，對照為胚胎營養(yǎng)用水。在受精卵發(fā)育72h時(shí)，熒光顯微鏡觀察斑馬魚體節(jié)間血管的生長情況，計(jì)算抑制率，并觀察胚胎或仔魚死亡情況。斑馬魚胚胎的血管發(fā)育過程與人類極其相似，其背部主干血管的分支部分呈欄狀排列，易觀察，是觀察藥物對新生血管生長影響的最佳模型。腫瘤初期的生長或者病灶轉(zhuǎn)移時(shí)出現(xiàn)的新生血管可以用斑馬ii魚模型進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二砲-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)均能夠明顯抑制斑馬魚新生血管的生成(見表3及圖1)，而且該作用與抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)有關(guān)，為本發(fā)明化合物抗腫瘤作用提供了有利證據(jù)。表3不同濃度藥物對斑馬魚胚胎節(jié)間血管的抑制作用濃度(Wg/ml)胚胎數(shù)血管數(shù)X土SD抑制率(%)對照—1027.38±1.1305，17，20-三乙?；?巨大戟二砲-3-當(dāng)歸酸酯1.010.0100,010101020.56±2.1213.35±3.05**o氺本25.951.81005，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯1.01022.19±4,8618.5910.01015.65±2.31*44.44100.010o林100注*與對照組相比有顯著性差異(P〈0.05);林與對照組相比有極其顯著性差異(P〈0.00U從上述的實(shí)施例中得出結(jié)論，經(jīng)藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明化合物l或2能夠明顯抑制小鼠S180腫瘤的生長，能夠明顯抑制小鼠Lewis肺癌的生長，并有效抑制肺癌病灶的轉(zhuǎn)移，在斑馬魚的試驗(yàn)中進(jìn)一步證明，它們的抗腫瘤作用是通過抑制血管內(nèi)皮生長因子而抑制腫瘤新生血管的生成來實(shí)現(xiàn)的。實(shí)施例4:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二砲-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各用少量的DMSO溶解后，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。實(shí)施例5:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二結(jié)-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各用少量的DMSO溶解后，將其溶于無菌注射用水中，攪拌使溶解，用無菌抽濾漏斗過濾，'再無菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無菌熔封得粉針劑。實(shí)施例6:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各按其與賦形劑重量比為9:1的比例加入賦形劑，制成粉劑。實(shí)施例7:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5,17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制粒壓片。實(shí)施例8:按實(shí)施例l的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各按常規(guī)口服液制法制成口服液。實(shí)施例9:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各按其與賦形劑重量比為5:1的比例加入賦形劑，制成膠實(shí)施例10:按實(shí)施例1的方法先制得化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)，各按其與賦形劑重量比為3:1的比例加入賦形劑，制成膠囊。權(quán)利要求1、抗腫瘤藥物組合物，含有下述結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物1或2及可藥用載體或賦形劑，R＝OAc時(shí)為化合物1即5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯；R＝H時(shí)為化合物2即5，20-雙乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯。2、結(jié)構(gòu)式(I)所示化合物1或2在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。3、權(quán)利要求1藥物組合物在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。全文摘要提供結(jié)構(gòu)式(I)所示的化合物1(5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)和化合物2(5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯)為活性成分的藥物組合物，及其在制備治療或預(yù)防腫瘤疾病藥物中應(yīng)用。R＝OAc時(shí)為化合物1即5，17，20-三乙?；?巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯；R＝H時(shí)為化合物2即5，20-雙乙酰基-巨大戟二萜-3-當(dāng)歸酸酯。文檔編號C07C69/00GK101530408SQ20091009405公開日2009年9月16日申請日期2009年1月23日優(yōu)先權(quán)日2009年1月23日發(fā)明者劉可春,陽李,李曉莉,楊永平,王思鋒,韓利文申請人:中國科學(xué)院昆明植物研究所;山東省科學(xué)院生物研究所