專利名稱：：一種氨基糖衍生物,其制備方法及其醫藥用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及藥物化學領域，具體涉及化合物AHl,3，4,6-四-(9-乙酰基-2-脫氧^D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺、其制備方法、以及對雞胚尿囊膜新生血管形成的抑制作用。
背景技術：
：腫瘤血管生成抑制劑(TumorAngiogenesisInhibitor,TAI)能夠破壞或抑制血管生成，有效阻止腫瘤的生長、轉移和復發，與傳統抗腫瘤藥物比較顯示出了巨大的優勢。目前已知的TAI基于其作用機理可分為作用于單一信號通路的特異性作用機制藥物和多靶點藥物。特異性機制藥物包括，如VEGF/VEGFR信號通路抑制劑貝伐單抗(Bevacizumab)等。多靶點藥物包括多靶點酪氨酸激酶抑制劑索拉非尼(Sorafenib)，沙利度胺(Thailidomide)等。由于僅抑制單一信號傳導通路的作用會促使大量其他類型促血管生成因子的釋放并最終導致耐藥性的產生。如在臨床治療中發現，貝伐單抗的使用可提高PIGF的體內水平，從而引起耐藥性。人們逐漸認識到腫瘤血管生成涉及多重信號傳導通路，阻斷單一信號傳導通路不能起到持續的臨床治療效果。鑒于此多靶點藥物是目前的研究熱點。而目前在臨床研究和應用的多耙點TAI大多是結構復雜的分子，藥物的制備比較困難，病人的治療花費大。因此尋找多靶點、結構簡單、易于制備、成本低、毒副作用小的TAI是目前該類藥物的研究趨勢。肝素是一種內源性多靶點大分子化合物，能調節VEGF以及FGF的活性。其中，VEGF是促血管生成活性最強的生長因子并在腫瘤血管生成中起重要作用。而FGF可誘導內皮細胞的增殖和遷移。FGF與VEGF對促血管生成具有協同效應，后者可使內皮細胞FGF生成增多，VEGF體外促血管生成的作用及誘導纖溶酶原激活物(PA)的能力也有賴于內皮細胞產生的FGF。有報道稱，抗VEGFR2抗體治療可引起FGF-2分泌上調。肝素是一種內源性多靶點大分子化合物，能調節FGF以及VFGF的活性。PI-88是一種肝素的類似物，大約含有90%的磷酸甘露戊糖硫酸酯(Phosphomannopentaosesulfate,1,R=S03Na或H,約占2/3~3/5)和磷酸甘露四糖硫酸酯(Phosphomannotetraosesulfate,2，R=S03Na或H，約占1/3~2/5)。目前正在進行III期臨床研究[KhachigianL.M.etal.CardiovascularDrugReviews.2004，22(l):l-6]。PI-88作為硫酸乙酰肝素的競爭劑與VEGF和FGF-2相互作用，并作為乙酰肝素酶的抑制劑阻止其水解細胞外基質(ExtracellularMatrix,ECM)中的硫酸乙酰肝素，從而抑制腫瘤的生長和轉移。也有報道二糖或三糖可模擬肝素的生物活性。但是這些糖類化合物結構復雜，較難分析和制備，難以進行工業化生產。
發明內容本發明公開了AKl,3,4,6-四-0-乙酰基-2-脫氧-y9-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,4-二氯苯基)-丙烯酰胺及其水合物，經藥理實驗顯示，本發明的該化合物對雞胚尿囊膜新生血管形成具有較強的抑制作用。因此，本發明的該化合物及其含結晶水的化合物可以用于治療各種與血管生成相關的疾病，這些疾病包括各種癌癥和慢性炎癥，以及其它血管原性的疾病。本發明的化合物結構式如下I化學名為iV-(l，3,4，6-四-0-乙酰基-2-脫氧-(3-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺(1)。發明化合物的水合物也具有與化合物同樣的療效，其中的水合物以結晶水的形式存在，結晶水的摩爾當量從0.5到10。本發明化合物的制備方法如下其中ae代表反應條件a:反應物為苯甲醛；溶劑為氫氧化鈉和水。b:反應物為醋酐；溶劑為吡啶。c:反應物為HC1;溶劑為丙酮。d:反應物為碳酸鈉；溶劑為水。e:反應物為草酰氯，或二氯亞砜，或EDCI/H0Bt;溶劑為二氯甲烷或DMF。下面是本發明化合物I的藥理試驗及結果。本發明部分化合物對雞胚尿囊膜新生血管作用測試方法如下材料種蛋受精4天，100只，購自浙江光大種禽業有限公司。TPT凍干粉黃石飛云制藥有限公司。DMSO:Sigma公司。稀釋方法化合物I先用DMSO配成母液，給藥前用新鮮培養基稀釋使用。操作流程將種蛋用溫水清洗2次，于1:1000新潔爾滅中浸泡3min后放入37'C孵化箱相對濕度65%，種蛋氣室向上，翻轉種蛋l次/h，至孵蛋第6天，在照蛋燈下觀察種蛋生長情況，剔除未受精卵。用解剖針在氣室頂端扎1小洞，可使雞胚的尿囊絨毛膜(ChorioMantiocMembrane,CAM)與雞蛋的內殼膜分開。照蛋燈下尋找胚頭，在受精卵距胎頭前lcm兩條前卵黃靜脈之間的卵殼投影部位標記l.OcmXl.Ocm的正方形區域，用砂輪沿這個區域磨切透卵殼至蛋殼表面劃刻出凹痕，輕揭凹陷處蛋皮，輕輕撕掉內殼膜，此時可見該處CAM連同雞胚下陷，假氣室形成(區別于自身的氣室)。用透明膠帶紙封貼假氣室，形成透明觀察窗，繼續放入37"C孵化箱孵化1天。于第二天取出雞蛋，剔除變質雞蛋。將剩余雞蛋分成模型組，DMSO組，TPT組(10pg/個)，和化合物，每組各3只，輕輕撕掉透明膠帶紙，取直徑約0.5cm的混合纖維素微孔濾膜片(預先高壓滅菌)作為載體，置于正對觀察窗的CAM表面，避開大血管，用無菌加樣器吸取各組相應的藥液滴于載體表面中央。加藥2d后，去除透明膠帶紙，將甲醇與丙酮各半的固定液滴入觀察窗，將CAM固定，去除雞胚，分離觀察窗周圍CAM。用Image-ProPlus5.0圖像分析軟件，對化合物I抗新生血管形成能力進行半定量分析。結果如下表l.化合物I抗新生血管形成能力<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與對照組比*:p<0.05，**:p<0.01***:P<0.001表l中，control為空白對照，DMSO為溶劑對照，TPT為陽性對照(陽性對照藥為喜樹堿)。藥理測試結果表明，本發明的化合物(10ng，p<0.05)能抑制雞胚尿囊膜新生血管形成。本發明還提供了一種治療與血管生成相關的疾病的藥物組合物，其中含有治療有效量的本發明化合物I和藥學上可接受的載體。所述藥物組合物可以是普通片劑或膠囊、緩釋片劑或膠囊、控釋片劑或膠囊、口服液、注射劑等制劑學上常規的制劑形式。一般地，本發明的^-(1,3,4,6-四-0-乙酰基-2-脫氧^0-吡喃半乳糖基)-3-(2,4-二氯苯基)-丙烯酰胺用于治療時，人用劑量范圍為lmg5000mg/天。也可根據劑型的不同和疾病嚴重程度，使用劑量超出該范圍。具體實施例方式實施例1AK2，3,4，6-四-0-乙酰基-l-脫氧-,D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-2-丙烯酰胺(I)的制備2-亞芐基-l,3,4,6-四羥基-2-脫氧-戶-D-吡喃氨基半乳糖(4)0'C下將1,3，4,6-四羥基-2-脫氧-D-吡喃氨基半乳糖鹽酸鹽10g(46mmol)加入到含有NaOH2.2g(55mmol)的47mL水溶液中，機械攪拌下緩緩加入苯甲醛5.4mL(53mmo1)，很快析出白色固體，繼續攪拌lh后停止反應，0'C下放置12h，過濾，依次用水、V(乙醚)V(乙醇)-4:1的混合溶劑洗滌，紅外燈下干燥得白色固體混合物10g，未經純化直接投下步反應。2-亞芐基-l，3,4，6-四-0-乙酰基-2-脫氧^-D-吡喃氨基半乳糖(5)將含有中間體4的混合物10g加入到60mL吡啶中，冰水浴中攪拌下加入醋酸酐42mL(0.46mo1)，升溫至35°C~40°C，保溫6h，30。C下減壓蒸出部分溶劑，將剩余反應液倒入100ml冰水中，有白色固體析出，攪拌lh，過濾，依次用水、石油醚洗滌，紅外燈下干燥得白色固體11.5g，未經純化直接投下步反應。1，3,4，6-四-0-乙酰基-2-脫氧-々-D-吡喃氨基半乳糖鹽酸鹽(6)將含有中間體5的混合物4.4g加入到200mL丙酮中，濾出少量不溶物，濾液室溫攪拌下緩慢加入含濃HC14.4g的5mL甲醇溶液，很快析出白色固體，反應lh后加入乙醚停止反應，冷卻，0'C下保溫lh，過濾，濾餅用乙醚洗滌，紅外燈下干燥得白色固體3.8g,產率100%，m.p.200204。C(炭化)(文獻值m.p.204~206°C[EuropeanJournalofOrganicChemistry,2006,61,657-671])W-(l，3，4，6-四-0-乙酰基-2-脫氧-(3-D-吡喃半乳糖基)-3-(2,4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I)將2，4-二氯肉桂酸(0.38g,1.73mmol)懸浮于lml二氯亞砜中，加熱至回流，2h后停止反應，減壓除去溶劑得白色油狀物，無需純化直接投入下一步反應。化合物60.5g(1.44mmol)溶于7mLCH2Cl2中，攪拌下加入碳酸鈉(0.15g，1.4mmol)的水(7mL)溶液。將新鮮制得的酰氯溶于4mlCH2Cl2中，緩慢滴入到以上的兩相溶液中，于室溫下攪拌24h。將反應液移入分液漏斗中，分出有機層，水層用CH2Cl2(10mLxl)萃取，有機相合并后依次用飽和NaHC03溶液(10mlx2))，飽和NaCl溶液洗滌，無水Na2S04干燥過夜。過濾，濾液減壓蒸去溶劑。剩余物硅膠柱層析(石油醚乙酸乙酯=3:2)，得白色固體即化合物10.52g，收率66.3%，m.p.95~97°C;[a〗166D=-3.06(c0.085，CHC13);^-NMR(300MHz，CDC13)S(ppm):7.96(1H,d,J=15.6Hz，-CH=),7.52~7,26(3H,m,ArH),6.50(1H,d,J=8.4Hz,NH),6'32(1H,d,J=15.6Hz,-CH-)，5.47(1H，d,J=1.5Hz,H隱4),5.37(1H,t,J=9.0Hz,H-l)，5.19-5.17(2H,m,J=9.6Hz,H-2，H-3)，4.12-4.10(3H，m，H-5，H-6a，H-6b)，2.16，2.07,2.05，2.01(each3H，eachs,4xOAc);13C-NMR(300MHz,CDC13)S(ppm):171.60，170.34,169.97,169.69(4C，esterC=0),165.07(1C，amideC=0),136.32,135.59,131,28，130.64,128.40，127.55(6C，ArC),137.85，122.68(2C,CH-CH)，78.90，72.48,70.82,68.53,67.26,6U7(6C，carbohydrateringcarbons),20.77，20.64,20.56,20.50(4C，4xCH3);IRCcm-1):3369(NH),2961，2935(CH)，1751(ester，C=0),1688(amide,C=0),1632(OC)，1584,1537,1370,1225,1123，1084,1051，789;MS(ESI(+)70V,m/z):546.0[M+H〗+;Anal.CalcdforC23H25C|2NOi0:C,50.56,H,4.61,N,2.56.Found:C，50.27H，4.61,N,2.48.實施例2片劑取實施例1中所得化合物I500mg，淀粉2g，糊精lg混合,用適量30%乙醇作濕潤劑,制成軟材，常規方法制粒，加入適量硬脂酸鎂，制成片劑。權利要求1、下列結構式I的化合物或其水合物2、權利要求l中的化合物或其水合物，其中的水合物以結晶水的形式存在，結晶水的摩爾當量從0.5到10。3、一種藥物組合物，其中含有權利要求1的化合物或其水合物和藥學上可接受的載體。4、權利要求l的化合物或其水合物在制備治療血管生成性疾病的藥物中的用途。5、權利要求4的用途，其中血管生成性疾病是腫瘤或慢性炎癥。全文摘要本發明涉及藥物化學領域，涉及一種氨基糖衍生物、其制備方法及其醫藥用途，具體涉及化合物N-(1，3，4，6-四-O-乙酰基-2-脫氧-β-D-吡喃半乳糖基)-3-(2，4-二氯苯基)-丙烯酰胺(I)。藥理試驗證明，本發明的化合物I對雞胚尿囊膜新生血管形成具有抑制作用，可用于臨床治療腫瘤或慢性炎癥。文檔編號C07H13/00GK101613380SQ20091002790公開日2009年12月30日申請日期2009年5月13日優先權日2009年5月13日發明者何俏軍,巧宋,莊毅超,宇張,徐云根,波楊,琳王,縉董,鑫薛,陳王露,娜靳申請人:中國藥科大學