一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物及其制備方法、用途的制作方法

專利名稱：一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物及其制備方法、用途的制作方法
技術領域：
本發明屬于一類娃兒藤堿類似物，特別是一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物 及其制備方法、用途。
背景技術：
惡性腫瘤是危害人類健康與生命的重大疾病，我國為肝癌、胃癌、食管癌、乳腺癌、 肺癌等癌癥的高發區，因癌癥而死亡的人數逐年上升。癌癥的治療一直是醫學界的難題，各 國政府、研究機構及制藥公司長期以來一直對抗腫瘤藥物予以高度重視，然而現有的抗癌 化療藥均有不同程度的副作用。近年來，從中草藥提取的抗腫瘤有效成分日益得到人們的 重視，長春堿類、喜樹堿類、紫杉堿等數十種抗癌藥物已在臨床治療中廣泛應用。越來越多 的研究成果證明，從中草藥領域尋求抗腫瘤物質是抗癌藥物研究的重要途徑之一。卵葉娃兒藤(Tylophora ovata(Lindl. )Hook, ex Steud.)是我國傳統的有毒藥用 植物，在我國醫學中很早就已經臨床使用。現代醫學研究證明卵葉娃兒藤富含菲駢吲哚里 西啶類生物堿化合物，該類化合物具有較強的抗腫瘤活性。近年來的研究也證實，娃兒藤堿 對多種人腫瘤細胞，如KB、!fepG2、HeLa、DLD-l、K562、NUGC-3等都有顯著的抑制作用。據早 前報道顯示密花娃兒藤堿能抑制癌細胞核酸和蛋白質的合成，對腺癌755、淋巴肉瘤、淋巴 白血病P388和L1210、人體鼻咽癌KB均有顯著的活性。早期國內對卵葉娃兒藤(T. ovata) 植物研究也發現從該植物中分離得到的娃兒藤定堿對S180有抑制作用。2000年，甄月英 等從卵葉娃兒藤(Tylophora ovata (Lindl. ) Hook, ex Steud.)中分離純化得到四個菲并吲 哚里西啶類生物堿類化合物，經過MTT法檢測，結果顯示，四個化合物均具有抗癌活性。然而此類生物堿植物資源少、生物堿含量低，且存在穩定性差及毒副作用等問題， 導致未能得到更好的開發與應用，藥物學家和合成化學家致力于解決該類化合物的穩定 性、同時不喪失活性或者提高活性、降低毒性的研究，許多全合成工作得以完成。

發明內容
本發明的目的在于提供一類具有高效低毒的抗癌物質的娃兒藤堿類似物及其制 備方法、用途。實現本發明目的的技術解決方案為一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，作
為制備治療惡性腫瘤、白血病、癌癥藥物的應用，其化合物結構式如下
其中Rl、R2、R3 或 R4 為 CH3O, R1R2, R3R4 為 OCH2O,且 Rl、R2、R3、R4 不同時為 CH3O0本發明與現有技術相比，其顯著優點(1)本發明所提供的娃兒藤堿類似物具有 高效低毒且對腫瘤細胞有顯著抑制作用的特點，可以應用在抗癌新藥中。(2)采用一鍋法合 成，過程不分離，終產物分離。(3)加入PIDA合成，合成路線簡單，效率高，成本低。下面結合附圖對本發明作進一步詳細描述。


圖1是本發明具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物的制備方法的合成路線圖。
具體實施例方式本發明一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，其化合物具有如下結構式
即化合物見下表。
當R1R2 = R4R5 = OCH2O 時，該化合物為 2，3 :6，7_ 二亞甲二氧基-菲-[9，10-b] - 口引 哚里西啶(BMPI)。當R1R2 = OCH2O, R4, R5 = CH3O時，該化合物為2，3_亞甲二氧基_6，7-二甲氧 基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶(DMPI)。當R1 = R2 = CH3O, R4R5 = OCH2O時，該化合物為2，3_ 二甲氧基_6，7-亞甲二氧 基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶(MDPI)。上述具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物的制備方法，其合成路線如下

其中 Rl、R2、R3 或 R4 為 CH3O, R1R2, R3R4 為 OCH2O,且 Rl、R2、R3、R4 不同時為 CH3O。 對于2，3-亞甲二氧基-6，7- 二甲氧基-菲-[9，10-b]-吲哚里西啶和2，3- 二甲氧基-6， 7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶的合成采用一鍋法合成，最后用柱分離而分別得到。上述化合物具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物屬于菲駢吲哚里西啶堿類，具有顯 著的抗腫瘤活性。將其作為制備治療惡性腫瘤、白血病、癌癥藥物的應用，如所能作用的惡 性腫瘤有肺癌、宮頸癌、胃癌、肝癌等；還對白血病、骨肉瘤、淋巴瘤、卵巢癌、皮膚癌、睪丸 癌、胰腺癌、腎癌、乳腺癌、前列腺癌、頭頸部癌、腦癌、食管癌、膀胱癌、腎上腺癌、支氣管癌、 子宮內膜癌、鼻咽癌等有明顯的抑制作用。實施例1TDH對人宮頸癌細胞株Hela增殖的抑制取對數生長期的人宮頸癌細胞株Hela，胰酶消化，1000r/min離心5min，臺盼藍染 色計數(活細胞百分率> 95% )，以5X 104/ml的細胞密度接種于96孔培養板中，180 μ 1/ 孔，培養24h，加入不同濃度的2，3- 二甲氧基-6，7-亞甲二氧基-菲-[9，10_b]_吲哚里西 啶(TDH)(藥物溶解于DMS0，且DMSO在體系中的終濃度< 0. 1 %，此濃度對細胞生長無影 響)，使其終質量濃度分別為0. 5、1. O、2. 5、5. O、10. O μ g/ml。每組設5個復孔。實驗同時設 置溶劑對照組即陰性對照組(含有溶解最大濃度藥物所需的DMS0)，調零組(含有等體積的 培養基)。共同培養48h后，每孔加20 μ 1 MTT (5mg/ml)，繼續培養4h，離心終止培養，小心 吸去上清液。每孔加入DMSO 150 μ 1，低速震蕩lOmin，使結晶物甲瓚完全溶解，MULTISKAN MK3型酶聯免疫檢測儀于570nm測吸光度(OD)值，實驗重復3次。結果表明，TDH在一定濃 度下對人宮頸癌細胞Hela的生長有一定程度的抑制作用，對Hela作用48小時的IC5tl值為
4.05 士 0. 22，僅為娃兒藤堿的50%。實施例2BMPI對人肺腺癌細胞株A549增殖的抑制取對數生長期的人肺腺癌細胞株A549，胰酶消化，1000r/min離心5min，臺盼藍染 色計數(活細胞百分率> 95% )，以5X 104/ml的細胞密度接種于96孔培養板中，180 μ 1/ 孔，培養24h，加入不同濃度的2,3,6,7- 二亞甲二氧基-菲-[9，10_b]-吲哚里西啶(BMPI) (藥物溶解于DMS0，且DMSO在體系中的終濃度< 0.1%，此濃度對細胞生長無影響)，使其 終質量濃度分別為0.25、0.5、1.0、2.5、5.(^8/!111。每組設5個復孔。實驗同時設置溶劑 對照組即陰性對照組(含有溶解最大濃度藥物所需的DMS0)，調零組(含有等體積的培養 基)。共同培養48h后，每孔加20 μ 1 MTT (5mg/ml)，繼續培養4h，離心終止培養，小心吸去 上清液。每孔加入DMSO 150μ 1，低速震蕩lOmin，使結晶物甲瓚完全溶解，MULTISKAN MK3 型酶聯免疫檢測儀于570nm測吸光度(OD)值，實驗重復3次，結果顯示，BMPI對A549的增 殖具有抑制作用，BMPI實驗組各濃度的OD值與陰性對照組相比差異顯著，且細胞生長抑制 率隨濃度升高而增高。實施例3BMPI對A549細胞分裂和集落形成能力的影響取對數生長期的A549細胞，用0. 5 %胰酶消化并吹打成單個細胞，把細胞懸浮于 含10%胎牛血清的RPMI-1640培養液中，計數，用培養液稀釋細胞濃度至IXlO3個/ml，接 種于六孔板中，每孔1 X IO3個細胞，孔內總體積2ml，搖勻置CO2孵箱中，37°C孵育24h，去掉 培養液，加入BMPI (用DMSO溶解，DMSO的終濃度小于0. 1%)，終濃度為0. 25,0. 5,1. 0,2. 5、
5.O μ g/ml 0同時設陰性對照組。搖勻后置于二氧化碳孵箱中孵育24h，去掉藥液，換以新鮮培養液，繼續培養10天。棄去培養液，用磷酸緩沖液(0. 01mol/L, pH 7. 4)清洗2次，加甲 醇5ml固定lOmin，棄去固定液，加Giemsa液染色20min，自來水沖洗，在倒置顯微鏡(XlO) 下計數含50個細胞以上的集落(大小在0. 3mm Imm之間)，以陰性對照為100%計算各 藥物作用組集落形成抑制率。結果顯示BMPI能明顯抑制A549細胞分裂和集落的形成，半 數抑制濃度為1.48yg/ml。實施例4BMPI對腫瘤細胞形態的影響取對數生長期的A549細胞，調節密度至1 X IO5個/ml，接種于50ml細胞培養瓶中， 孵育24小時，加入BMPI使其終濃度為0,2. 5μ g/mL·繼續培養12，24h小時。收集A549細 胞1 X IO6個，以預冷的PBS洗滌，2000r/min離心10分鐘，加2. 5%戊二醛溶液于4°C固定過 夜，棄去固定液，PBS洗滌三次，每次IOmin ；用俄酸溶液固定1 2小時；棄去固定液， 用PBS洗滌三次，每次15min ；依次用50 %，70 %，80 %，90 %和95 %五種濃度乙醇溶液對樣 品進行梯度脫水處理，每種濃度處理15min，再用100%的乙醇處理20min ；最后以丙酮處理 20min。Epon 812環氧樹脂包埋，LKB-III型超薄切片機半薄切片定位后做超薄切片，用醋 酸雙氧鈾及檸檬酸鉛雙重染色，透射電鏡下觀察形態改變，并拍攝照片。結果顯示隨著藥物 作用時間的延長，細胞出現典型的凋亡超微結構變化。實施例52，3 :6，7-二亞甲二氧基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶的合成5. 1⑶-N-(三氟乙酰)-L-脯氨酰氯的制備稱取4. 60g(40mmol)L-脯氨酸加入到三頸瓶中，加入CH2Cl2 (25mL)，冰浴冷卻至 0°C，慢慢滴入三氟乙酸酐的CH2Cl2溶液(12mL三氟乙酸酐溶解于15mL CH2Cl2中)，控制滴 加速度(滴入的時間在45分鐘左右)，0°C下反應2小時(或者更長時間，影響不大)，加入 濃鹽酸攪拌半小時，少量水洗，水層用CH2Cl2萃取3次，有機層再水洗，飽和食鹽水洗，無水 硫酸鈉干燥，45-50°C下減壓蒸去溶劑，殘留物再加入20mL 二氯甲烷溶解，減壓蒸去溶劑， 得半固體物N-三氟乙酰-L-脯氨酸。在冰浴條件下，向N-三氟乙酰-L-脯氨酸中分批加入 20mL亞硫酰氯，CaC12管干燥保護下室溫反應15min，減壓除去亞硫酰氯(溫度45_50°C )。 加20mL 二氯甲烷溶解，再減壓蒸去溶劑，向殘留物中加入16ml亞硫酰氯，在CaC12管干燥 保護下室溫反應lhr，減壓除去亞硫酰氯(溫度45-50°C )。加20mL 二氯甲烷溶解，再減壓 蒸去溶劑，以除去過量的亞硫酰氯，得到琥珀色透明油狀液體。5. 2 (S) N-(三氟乙酰基)-2，3 6，7- 二亞甲二氧基-9_L_脯氨酰基菲的制備于250ml三口瓶中加入25mL⑶N-(三氟乙酰)-L-脯氨酰氯的二氯甲烷溶液 (IOmmol)，在0°C、N2氣保護、干燥和攪拌條件下，加入40mL含1. 2g新升華無水AlCl3的 CH2Cl2懸濁液，向其中加入1.5g 2，3，6，7-二亞甲二氧基菲，攪拌30min后，撤去冰水浴， 換油浴，加熱回流48hr。反應過程中用HPLC和TLC跟蹤反應進程，至二亞甲二氧基菲相 對含量最低時冷卻至室溫，加15mL lmol/LHCl攪拌10分鐘，終止反應；分出有機層，水相 用CH2Cl2(30mLX3)提取，合并有機相，水洗有機相至中性，無水MgSO4干燥。過濾后，減壓 濃縮，少量CH2Cl2溶解殘留物，過柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，HPLC、TLC跟蹤，收集分出 的各組分，產物顯強熒光。濃縮目標物洗脫液，得亮黃色結晶粉末0.65g，收率25. 1%, mp 187-189°C。
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1HNMR (300MHz, CDC13+TMS) δ :1· 85-2. 52 (br m, 4Η, -CH2CH2-), 3. 60-3. 96 (brt, 2Η, NCH2)，5. 68 (br. s, 1Η, COCHN) ,6. 21 (s,4H, OCH2O)，7· 21 (s，1H, arom. H)，7· 71 (s，1Η, arom. H)，7. 76 (s，1H, arom. H)，8. 22 (s, 1H, arom. H)，8. 27 (s, 1H, arom. H)。MS (EI, m/z) :459 (M+)，293 (100)，265，166。5. 3(S)-N_(三氟乙酰基)-2-[(2，3，6，7_ 二亞甲二氧基菲-9-基)甲基]吡咯的 制備于50ml單口瓶中加入0. 50g (S) N-(三氟乙酰基)_2，3，6，7_ 二亞甲二氧 基-9-L-脯氨酰基菲、新蒸的BF3 · Et2O 2ml，溶解后在N2保護和攪拌條件下加入0. SmL Et3SiH, 15°C攪拌反應48hr，TLC跟蹤反應進程，至原料消失。加40mL飽和的NaCl水溶液， 攪拌lOmin，用CH2Cl2 (50mLX 3)萃取，合并CH2Cl2，無水MgSO4干燥；減壓濃縮至干，得淡黃 色固體；用三氯甲烷-無水乙醇(1 1，v/v)重結晶，干燥后得淺黃色結晶0.26g，TLC顯 單點，收率 52%。mp :134-137°Co1Hnmr(CDCVtms) 1HNMr (CDCI3+tms) δ :1. 65-2. 46 (br. m,4H, -ch2ch2-), 2· 71 (d，J = 6Ηζ,2Η, ArCH2)，3. 72-3. 89 (br t, 2Η, NCH2)，5. 60 (br. s, 1Η, C0CHN)，6. 29 (s,4H, OCH2O)，7. 23 (s，1H, arom. H)，7. 61 (s，1H, arom. H)，7. 72 (s, 1H, arom. H)，8. 25 (s, 1H, arom. H) ,8. 33 (s，1H, arom. H)。MS (ESI，m/z) 446 (M+1)5.4(S)-2_[(2，3:6，7-二亞甲二氧基菲-9-基)甲基]吡咯的制備于250ml單口瓶中加入0. 25g (S) _N_ (三氟乙酰基)_2_[ (2，3，6，7_ 二亞甲二氧基 菲-9-基)甲基]吡咯，加入20ml飽和NH3氣的甲醇溶液，室溫攪拌反應36hr，HPLC和TLC 跟蹤反應進程，至原料消失，終止反應。減壓濃縮，得棕紅色半固體殘留物，加30mL 2mol/L H2SO4溶解，酸層用CH2Cl2 (30mL X 2)提取，再用30mL 2mol/L H2SO4反萃CH2Cl2層一次，合并 酸層。用10mol/L NaOH堿化，堿化液用CHCl3 (30mLX 3)萃取，合并CHCl3相，水洗至中性， 無水MgSO4干燥，過濾后，減壓濃縮，得0. 16g亮黃色油狀物，產率76%。5. 52，3:6，7-二亞甲二氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定的制備于50ml單口瓶中加入0. 15g(S)-2-[(2，3，6，7-二亞甲二氧基菲-9-基)甲基] 吡咯、lmLHCH0、2mL乙醇和0. IOmL濃鹽酸，攪拌避光回流反應6hr，HPLC跟蹤反應，至原料 消失。減壓除去溶劑，加60mL10%鹽酸溶解，用CHCl3(30mLX2)提取，有機相再用10%鹽 酸(30mLX2)反萃二次，合并酸層。用濃氨水堿化，堿化液用CHCl3(60mLX3)萃取次，合并 CHCl3相，水洗至中性，無水MgSO4干燥，過濾后，減壓濃縮，得淡黃色粉末固體，用DMF/MeOH 重結晶得淡黃色粉末固體0. 086g，得率55. 4%。 mp 289-292 0C，HPLC 檢測其相對含量為 98.0%。IR(KBr)VcnT1 :2917，1618，1534，1463，1253，1190，1037。1HNMR (CDC13+TMS) δ 1. 78-2. 26 (br. m, 6H, -CH2CH2CH2-)，2. 95-3. 74 (4H, ArCH2)，
4.60 (1H, NCHC), 6. 08(s，4H，OCH2O)，7. 20 (s, 1H, arom. H)，7. 35 (s，1H, arom. H)，7. 82(s，2H， arom. H)；MS(EI, m/z) :361 (M+) (25)，292 (100，逆 Diels-Adler 反應)；[a J 220 = +65. 4(c :0. 70，CHCl3) ；C22H19NO4 元素分析測量值(計算值)/%:C 73. 20(73. 1163), H
5.25(5. 2992)，N 3. 82(3. 8758)。
實施例62，3-亞甲二氧基-6，7-二甲氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定和2，3_二甲氧基_6， 7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定的合成6. 13，4-亞甲二氧基-α-(3，，4，- 二甲氧基苯基)-肉桂酸于干燥的250ml 三口瓶中加入 18. 0g(12(kimol)胡椒醛，23. 5g(120mmol) 3，4-二甲 氧基苯乙酸，50ml新蒸餾的乙酸酐和30ml干燥過的三乙胺，在干燥、N2氣保護下，于110°C 油浴中攪拌回流反應22hr，TLC或HPLC檢測反應進程，至產物不再增加，停止反應。冷卻反 應混合物，在攪拌下倒入至400ml 2mol/LNa0H溶液中，補加NaOH溶液，最終使其pH = 10 11 ；用氯仿萃取三次，每次200ml。合并氯仿層，用400ml 2mol/LNa0H反萃一次，合并水相， 水相再用鹽酸酸化至PH = 3，放置過夜，抽濾，得到淡黃色固體，在50°C下真空干燥，再用 DMF和無水乙醇混合溶劑重結晶，得到淡黃色結晶性粉末29. 6g，收率75. 2%。取5g產物， 過硅膠柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，得順式結構產物1. 6g，mp 205 207V, 1HNMR(400MHz,DMS0+TMS) δ :3· 78(s，3H， OCH3)，3. 81 (s，3H，OCH3)，6. 05 (s，2H，OCH2O)，6. 92—7. 06 (m，6H，arom H)，7. 11 (s，1H，= CH)；ESI-MS-:m/z = 655(2M-1)，327(M-I) ；ESI-MS+:m/z = 657(2M+1)，329(M+1)。反式結構產物2. 5g, mp 216 218 °C，IR(KBr)V :3425，3052，2970，2845，1668， 1598，，1516，1423，1346，1239，925，819，635 ；1HNMR(400MHz，DMS0+TMS) δ :3· 68(s，3H， OCH3), 3. 79(s，3H，0CH3)，5· 96 (s，2Η，OCH2O)，6· 41 (s, 1H, = CH), 6. 68 (d, 1Η, J = 8. l,arom. H)，6. 74 (s，1Η, arom. H)，6. 83 (s, 2H, arom. H)，6. 97 (d, 1H，J = 8. 2，arom. H)，7. 64 (s, 1H, arom. H)。ESI-MS- :m/z = 655 (2M-1)，327 (M-I) ；，ESI-MS+ :m/z = 657 (2M+1)，329 (M+1)。6. 22，3-亞甲二氧基-6，7_ 二甲氧基_9_羧基菲于500mL三口瓶中，加入3. 3g 3，4_亞甲二氧基-α - (3，，4，-二甲氧基苯基)-肉 桂酸，300ml CH2Cl2,攪拌，冷卻到0°C，加入4mL三氟化硼乙醚，攪拌10分鐘。另取3. OgPIDA, 加120ml CH2C12攪拌溶解，在攪拌、常壓、0°C下緩緩滴入到反應瓶中。加畢，維持0°C反應 4hr，再升至室溫繼續反應2hr，TLC或HPLC檢測反應進程，至產物不再增加。加入200mL 2mol/L檸檬酸溶液，攪拌30min以終止反應。分出有機相，水相用CH2C12 (50mLX2)萃取； 合并有機相。有機相用1 3的NH40H溶液(200mLX4)萃取，合并NH40H相，用鹽醋酸調 PH為2-3，靜置2h，抽濾，水洗(200mLX 3)，真空干燥，得淡黃色粉末3，4-亞甲二氧基-6， 7- 二甲氧基-9-羧基菲，再用DMF和無水乙醇混合溶劑重結晶，得到淡黃色粉末2. 5g，收率 76. 0%, mp > 300°C。IRv :3438(br),2916,1677，1503，1462，1238，1143，1035。.1HwrGOOMHz, DMS0+TMS) δ :3.89(s，3H，0CH3) ,4. 02(s,3H, 0CH3)，6· 21 (s，2H， OCH2O)，7. 54 (s，1H, arom. H)，8. 03 (s, 1H, arom. H)，8. 31 (s，1H, arom. H)，8. 37 (s, 1H, arom. H) ,8. 50 (s，1H, arom. H)。6. 32，3-亞甲二氧基-6，7-二甲氧基菲在干燥的250mL三口燒瓶中加入2. 95g 2，3_亞甲二氧基_6，7_ 二甲氧基_9_羧 基菲，3. Ig無水0^04和120mL新蒸的喹啉；安裝好冷凝回流管，在N2保護下升溫至230°C， 攪拌反應Ihr后，冷卻；將反應液倒入400mL4mol/LHCl中，攪拌，轉入分液漏斗，用苯(400mLX4)萃取，合并苯相；用4mol/L HCl(200mLX3)洗滌，然后水洗至中性，苯相用無水 MgSO4干燥，抽濾，減壓濃縮至干，剩余物用氯仿-無水乙醇(1 3)重結晶，干燥后得淺黃 色針狀晶體 1.82g。收率 71.3%，mp :197_199°C。1HNMR(300MHz, DMS0+TMS) δ :3.90(s，3H，OCH3) ,3. 99(s,3H, OCH3) ,6. 12((s，2H， OCH2O)，7. 36 (s，2H, arom. H)，7· 56 7· 62 (t, 2Η, arom. H)，7. 99 (s, 1Η, arom. H)，8. 26 (s, 1H,
arom. H)。6. 4 (S) N-(三氟乙酰基)-2，3-亞甲二氧基_6，7_ 二甲氧基-9_L_脯氨酰基菲和 (S) N-(三氟乙酰基)-2，3- 二甲氧基-6，7-亞甲二氧基-9-L-脯氨酰基菲的制備 于250ml三口瓶中加入50mL⑶N-(三氟乙酰)_L_脯氨酰氯的二氯甲烷溶液 (40mmol)，在0°C、N2氣保護、干燥和攪拌條件下，加入40mL含1. 5g新升華無水AlCl3的 CH2Cl2懸濁液，向其中加入3. 44g 2，3-亞甲二氧基-6，7- 二甲氧基菲，攪拌30min后，撤去 冰水浴，換油浴，加熱回流48hr，反應過程中用HPLC和TLC跟蹤反應進程，至3，4-亞甲二氧 基-6，7-二甲氧基菲相對含量最低時冷卻至室溫，加20mL lmol/L HCl終止反應；分出有機 層，水相用CH2Cl2 (30mLX3)提取，合并有機相，水洗至中性，無水MgSO4干燥。過濾后，減壓 濃縮，少量CH2Cl2溶解殘留物，過柱，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，TLC跟蹤，收集分出的各組 分，其中，Rf(展開劑石油醚乙酸乙酯=1 l，v/v)為0.4左右的物質為目標產物，顯 強熒光。濃縮目標物洗脫液，得黃色結晶粉末1.52g，收率30.3%。6. 5⑶-N-(三氟乙酰基)-2-[(2，3_亞甲二氧基-6，7_ 二甲氧基菲-9-基)甲基] 吡咯和(S)-N-(三氟乙酰基)-2-[(2，3_ 二甲氧基菲-6，7-亞甲二氧基-9-基)甲基]吡 咯的制備于50ml單口瓶中加入0.80g上步反應的混合物((S)_N_(三氟乙酰基)_2，3_亞甲 二氧基-6，7- 二甲氧基-9-L-脯氨酰基菲)、新蒸的BF3. Et20 4ml，溶解后在N2保護和攪 拌條件下加入1. 5mL Et3SiH，室溫攪拌反應48hr，TLC跟蹤反應進程，至原料消失。加40mL 飽和的NaCl水溶液，攪拌lOmin，用CH2C12 (50mLX3)萃取，合并CH2C12，無水MgS04干燥； 減壓濃縮至干，得淡黃色固體；用三氯甲烷-無水乙醇(1 1，ν/ν)重結晶，干燥后得淺黃 色結晶0. 39g，收率50.3%。6. 6 (S)-2-[(2，3-亞甲二氧基_6，7_二甲氧基菲-9-基)甲基]吡咯和 (S)-2-[(2，3-二甲氧基菲-6，7-亞甲二氧基-9-基)甲基]吡咯的制備于250ml單口瓶中加入0. 38g(S)-N-(三氟乙酰基)_2_[ (2，3_亞甲二氧基_6， 7-二甲氧基菲-9-基)甲基]吡咯，加入30ml飽和NH3氣的甲醇溶液，室溫攪拌反應36hr， HPLC和TLC跟蹤反應進程，至原料消失。減壓濃縮，得棕紅色半固體殘留物，加30mL2mol/L H2SO4溶解，酸層用CH2Cl2 (30mL X 2)提取，再用30mL 2mol/L H2SO4反萃CH2Cl2層一次，合并 酸層。用10mol/L NaOH堿化，堿化液用CHCl3 (30mLX 3)萃取，合并CHCl3相，水洗至中性， 無水MgSO4干燥，過濾后，減壓濃縮，得0. 26g亮黃色油狀物，產率78%。6. 72，3-亞甲二氧基-6，7-二甲氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定和2，3_ 二甲氧 基-6，7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定的制備于50ml單口瓶中加入0. 25g上步產物、1. 5mLHCH0、3mL乙醇和0. 20mL濃鹽酸，攪 拌避光回流反應6hr，HPLC跟蹤反應，至原料消失。減壓除去溶劑，加60mL10%鹽酸溶解， 用CHCl3(30mLX2)提取，有機相再用10%鹽酸(30mLX2)反萃二次，合并酸層。用濃氨水堿化，堿化液用CHCl3 (60mLX3)萃取次，合并CHCl3相，水洗至中性，無水MgSO4干燥，過 濾后，減壓濃縮，得淡黃色粉末固體，用CHCl3/MeOH重結晶得淡黃色粉末固體0. 13g，得率 50.4%。此產物為2，3-亞甲二氧基-6，7-二甲氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定和2，3-二 甲氧基-6，7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定的混合物，再經過HPLC制備分離得到 2，3-亞甲二氧基-6，7- 二甲氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定40mg mp 287-290 V，IR(KBr)v -.2920,1619，1506，1467，，1430，1259，1233，1163，1108， 1037,937,837,787ο1HNMR δ 1. 65-2. 30 (br m, 4H, -CH2CH2-)，2. 30-2. 52 (br m, 2H, ArCH2)，2. 94 (br s, 1H), 3. 34 (d, J = 14Hz, 1H) 3. 51-3. 72 (br t，2H)，4· 07(s，3H，OCH3), 4. 12(s，3H，OCH3)， 4. 64 (d, J = 14Hz, 1H)，6. 12 (d, J = 3Hz，2H，OCH2O)，7. 15 (1H, arom. H)，7. 40 (1H, arom. H)， 7. 81 (s，1H, arom. H)，7. 91 (s，1H, arom. H)；MS (EI, m/z) :377 (M+)，309 (100)。[a ]21D = +54. 6 (c :1. 00, CHCl3)；C23H237NO4 元素分析測量值(計算值)/% =C 73. 03 (73. 1908)，H 6. 05 (6. 1422)， N3. 63(3. 7111)。2，3-二甲氧基-6，7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]吲哚里西定38mg mp 285-288 V，IR(KBr) ν :2922，1619，1505，1466，1260，1234，1162，1108，1035， 938,837,790ο1HNMRS 1. 67-2. 28 (br m, 4H, -CH2CH2-), 2. 21-2. 63 (br m, 2H, ArCH2), 2. 94 (br s, 1H), 3. . 37 (d, J = 16Hz, 1H) 3. 50-3. 68 (br t，2H，)，4· 06(s，3H，OCH3), 4. 10(s，3H，OCH3)， 4. 60 (d, J = 14Hz, 1H)，6· 08(s，2H，OCH2O), 7. 23 (1H, arom. H)，7· 29 (1Η, arom. H)，7· 79 (s, 1H, arom. H)，7. 89 (s, 1H, arom. H)；
MS (EI, m/z) 377 (M+) ,309(100) [α ]21D =+56. 0(c :1· 00，CHCl3)；
C23H237NO4 元素分析測量值(計算值)/% =C 73. 01 (73. 1908)，H 6. 08(6. 1422)，
Ν3. 65(3. 7111)。
權利要求
一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，其特征在于其化合物結構式如下其中R1、R2、R3或R4為CH3O，R1R2、R3R4為OCH2O，且R1、R2、R3、R4不同時為CH3O。F2009100272876C0000011.tif
2.根據權利要求1所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，其特征在于當R1R2= R3R4 = OCH2O時，該化合物為2，3 :6，7-二亞甲二氧基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶。
3.根據權利要求1所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，其特征在于當R1R2= OCH2O, R4 = R5 = CH3O時，該化合物為2，3-亞甲二氧基-6，7-二甲氧基-菲-[9，10_b]_吲 哚里西啶。
4.根據權利要求1所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物，其特征在于當R1= R2 = CH3O, R4R5 = OCH2O時，該化合物為2，3-二甲氧基-6，7-亞甲二氧基-菲-[9，10-b]_吲哚 里西啶。
5.一種制備權利要求1至4中任意一項所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物的方 法，其特征在于合成路線如下 其中 Rl、R2、R3 或 R4 為 CH3O, R1R2, R3R4 為 OCH2O,且 Rl、R2、R3、R4 不同時為 CH3O0
6.根據權利要求5所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物的制備方法，其特征在于 2，3-亞甲二氧基-6，7- 二甲氧基-菲-[9，10-b]-吲哚里西啶和2，3- 二甲氧基_6，7-亞甲 二氧基-菲-[9，10-b]_吲哚里西啶的合成采用一鍋法合成，最后用柱分離而分別得到。
7.—種如權利要求1至4中任意一項所述的具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物的應 用，其特征在于將化合物具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物作為制備治療惡性腫瘤、白血 病、癌癥藥物的應用。
全文摘要
本發明公開了一類具有抗腫瘤活性的娃兒藤堿類似物及其制備方法、用途。該娃兒藤堿類似物，作為制備治療惡性腫瘤、白血病、癌癥藥物的應用，其化合物結構式如下其中R1、R2、R3或R4為CH3O，R1R2、R3R4為OCH2O，且R1、R2、R3、R4不同時為CH3O。本發明所提供的娃兒藤堿類似物具有高效低毒且對腫瘤細胞有顯著抑制作用的特點，可以應用在抗癌新藥中；采用一鍋法合成，過程不分離，終產物分離；加入PIDA合成，合成路線簡單，效率高，成本低。
文檔編號C07D471/04GK101899043SQ20091002728
公開日2010年12月1日 申請日期2009年5月27日 優先權日2009年5月27日
發明者方志杰, 王遠興 申請人:南京理工大學