專利名稱:一種從鉤藤中提取制備熊果酸的方法
技術領域:
本發明屬于天然藥物領域,涉及一種有重要藥用價值的天然產物的提取,尤其涉及 一種從鉤藤中提取制備熊果酸的方法。
背景技術:
熊果酸(Ursolic acid, U A )又名烏蘇酸或烏索酸,是一種弱極性的五環三萜酸, 其以游離形式或與糖結合成苷的形式分布于約7個科46個屬62種植物中,具有 鎮靜、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗潰瘍、降低血糖、抗癌抑瘤等多種生物學效應, 還具有明顯的抗氧化功能,因而被廣泛地用作醫藥和化妝品原料。鉤藤為茜草科植物鉤藤[Uncaria rhynch叩hylla(Miq.) Jacks.]的干燥帶鉤莖枝。 始載于《名醫別錄》,列為下品。甘,涼。歸肝、心包經。具清熱平肝,息風定驚的功 能。 一直以來對鉤藤的研究多集中在鉤藤生物堿的提取分離(鉤藤提取工藝研究中成 藥2000, 22(5);鉤藤堿提取工藝研究吉林林學院學報1998, (2);大孔吸附樹脂 分離提取大葉鉤藤總生物堿廣西科學2006, (2))。現有中國專利申請如 CN200310111479. 8從女貞葉中,如CN200410025770. 8從柿葉中,如CN200310122716. 0 從枇杷葉中提取有效成分熊果酸的方法。研究表明,鉤藤中除含有大量的鉤藤堿、異鉤 藤堿等吲哚類生物堿外,還含有豐富的三萜成分熊果酸(鉤藤的三萜成分云南植物研 究1995, 17(2);鉤藤化學成分的研究天然產物研究與開發2009, 21)。發明內容本發明的目的在于提供一種從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,該方法能夠得到含量 達90%以上的熊果酸,且適于工業生產,該方法所用柱吸附劑可再生循環使用,成本低 且"三廢"污染小。為實現上述目的,從鉤藤中提取制備熊果酸的方法按以下步驟進行-1. 提取以6 10倍于鉤藤原料重量的80 95機%乙醇進行熱回餾提取2 3次,每次 1 2小時,抽濾,提取液濃縮至浸膏;2. 水洗加入8 12倍浸膏重量的水,攪拌使充分分散,靜置,過濾,棄去水洗液,得 沉淀,重復此步驟一次,得二次沉淀;3. 除雜向上述二次沉淀中加入純化劑,所述的純化劑為堿性溶 ,然后加熱至沸騰,保持微沸5 15分鐘,放冷,靜置12小時,過濾,沉淀水洗至中性,抽濾,干燥, 重復此步驟一次得干燥物;4. 純化將上述干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中,加熱溶解,過濾,濾液過層析 柱,收集洗液;5. 脫色向上述洗液中加入2wt。/。的活性炭,加熱至微沸20 40分鐘,熱濾,得濾液并 濃縮至原體積的1/3 2/3時,室溫放置析晶,過濾,濾液繼續濃縮至1/3 2/3體 積,放置析晶,過濾,合并結晶得熊果酸粗品;6. 重結晶將上述熊果酸粗品溶于80 95wt。/。乙醇,室溫放置析晶,過濾干燥得熊果酸, 含量90%以上。上述制備方法中,提取步驟所用原料鉤藤經干燥處理并過10目篩;除雜步驟純化 劑為1 3wty。氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液,純化劑用量優選為固體沉淀重量的10 20 倍;純化步驟所用層析柱的吸附劑優選酸性氧化鋁,酸性氧化鋁的用量優選為沉淀干燥 物重量的10 20倍,使用后的酸性氧化鋁經50(TC90iiiin處理后能再生循環使用;重結 晶步驟優選80 95wty。乙醇的用量為熊果酸粗品重量的80 100倍。與現有技術相比,本發明的優益效果在于(1) 本技術方法提供了一種制備藥用有效成分熊果酸的新方法,按照此技術方法能夠 得到含量達90%以上的熊果酸,且穩定可行,能應用于工業生產;(2) 本技術方法所使用的柱吸附劑酸性氧化鋁可再生循環使用,大大降低了生產成本;(3) 本技術方法避免了使用大量的多種有機溶媒,"三廢"污染小。
具體實施方式
下面用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容。實施例1:稱取經干燥處理并過10目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入10倍重 量的80wty。乙醇進行熱回餾提取2次,每次1小時,趁熱抽濾,合并2次的提取液,濃 縮至浸膏;加入IO倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄去 水洗液,沉淀再加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀;加入沉淀重量20倍的lwt。/。的氫氧化鈉溶液,加熱至沸騰,保持 微沸15分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀再加其重量20倍的lwt呢的氫氧化鈉溶 液,加熱至沸騰,保持微沸15分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至中性, 抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的80機%乙醇中,加熱使分散溶解,過濾,4收集濾液;取干燥物20倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將洗液加入層析柱中,使溶液通 過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循環使 用);向洗液中加入2wt呢的活性炭,加熱至沸騰,保持微沸30分鐘,趁熱濾過,用少量 80wty。乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的1/2時,置結晶罐中室溫放 置析晶,過濾,母液繼續濃縮至l/2體積,室溫放置析晶,合并結晶得熊果酸粗品;將 熊果酸粗品溶于100倍重量的80wty。乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得192. 3g熊果酸 成品,收率0.3鄉,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600泵,996 二極 管陣列檢測器,1T色譜工作站,Lichrospher-C18柱,200X4. 6腿,5y(江蘇漢邦科技 有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢定所提供, 批號0742-9706),流動相采用乙腈-水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結果熊果酸 含量93. 23%。 實施例2:稱取經干燥處理并過IO目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入8倍重 量的95w"rt乙醇進行熱回餾提取2次,每次1.5小時,趁熱抽濾,合并2次的提取液, 濃縮至浸膏,加入8倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄去 水洗液,沉淀再加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀;加入沉淀重量10倍的3wty。的氫氧化鈉溶液,加熱至沸騰,保持 微沸5分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去;沉淀再加其重量10倍的3wty。的氫氧化鈉溶 液加熱至沸騰,保持微沸5分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至洗液呈中 性,抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的95wty。乙醇中,加熱使分散溶解,過 濾,收集濾液,取干燥物15倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將濾液加入層析柱中,使溶 液通過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循 環使用);向洗液中加入2wt。/。的活性炭,加熱至沸騰,保持微沸20分鐘,趁熱濾過,用 少量95wty。的乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的1/2時,置結晶罐中 室溫放置析晶,濾過,母液繼續濃縮至l/2體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊 果酸粗品;將熊果酸粗品溶于100倍重量的95wty。乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得 173.2g熊果酸成品,收率0.35%,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600 泵,996 二極管陣列檢測器,M"色譜工作站,Lichrospher-C18柱,200X4. 6腿,5u (江 蘇漢邦科技有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢 定所提供,批號0742-9706),流動相采用乙腈-水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結 果熊果酸含量91.65%。實施例3:稱取經干燥處理并過IO目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入6倍重量的90討%乙醇進行熱回餾提取3次,每次2小時,趁熱抽濾,合并3次的提取液,濃 縮至浸膏;加入12倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄去 水洗液,沉淀再加入IO倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀,加入沉淀重量15倍的2wty。的氫氧化鈉溶液,加熱至沸騰,保持 微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去;沉淀再加其重量15倍的2wt。/。的氫氧化鈉溶 液,加熱至沸騰,保持微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至中性, 抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的90wty。乙醇中,加熱使分散溶解,過濾, 收集濾液,取干燥物15倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將濾液加入層析柱中,使溶液通 過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90niin處理后能再生循環使 用);向洗液中加入2wt。/。的活性炭,加熱至沸騰,保持微沸40分鐘,趁熱濾過,用少量 90wt。/。的乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的1/2時,置結晶罐中室溫 放置析晶,濾過,母液繼續濃縮至l/2體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊果酸 粗品;將熊果酸粗品溶于100倍重量的90wt呢乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得182. 3g 熊果酸成品,收率0.36%,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600泵,996 二極管陣列檢測器,M"色譜工作站,Lichrospher-C18柱,200X4.6mm, 5 u (江蘇漢邦 科技有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢定所提 供,批號0742-9706),流動相采用乙腈_水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結果熊 果酸含量92. 38%。 實施例4:稱取經干燥處理并過IO目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入8倍重 量的95wty。乙醇進行熱回餾提取2次,每次1.5小時,趁熱抽濾,合并2次的提取液, 濃縮至浸膏;加入IO倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄 去水洗液,沉淀再加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀;加入沉淀重量15倍的2wty。的氫氧化鉀溶液,加熱至沸騰,保持 微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去;沉淀再加其重量15倍的2wt。/。的氫氧化鉀溶 液,加熱至沸騰,保持微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至中性, 抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中,加熱使分散溶解,過濾, 收集濾液;取干燥物10倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將濾液加入層析柱中,使溶液通 過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循環使加熱至沸騰,保持微沸30分鐘,趁熱濾過,用少量 95wty。的乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的1/3時,置結晶罐中室溫 放置析晶,濾過,母液繼續濃縮至1/3體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊果酸 粗品;將熊果酸粗品溶于80倍重量的95wt。/。乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得202.6g 熊果酸成品,收率0.41%,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600泵,996 二極管陣列檢測器,M"色譜工作站,Lichrospher-C18柱,200X4.6mm, 5 u (江蘇漢邦 科技有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢定所提 供,批號0742-9706),流動相采用乙腈-水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結果熊 果酸含量90%以上。 實施例5:稱取經干燥處理并過IO目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入8倍重 量的95wty。乙醇進行熱回餾提取2次,每次1.5小時,趁熱抽濾,合并2次的提取液, 濃縮至浸膏;加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄 去水洗液,沉淀再加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀;加入沉淀重量15倍的2wt。/。的氫氧化鈉溶液,加熱至沸騰,保持 微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去;沉淀再加其重量15倍的2wty。的氫氧化鈉溶 液,加熱至沸騰,保持微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至中性, 抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的95wt。/。乙醇中,加熱使分散溶解,過濾, 收集濾液;取干燥物15倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將濾液加入層析柱中,使溶液通 過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循環使 用);向洗液中加入2wty。的活性炭,加熱至沸騰,保持微沸30分鐘,趁熱濾過,用少量 95wt。/。的乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的2/3時,置結晶罐中室溫 放置析晶,濾過,母液繼續濃縮至2/3體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊果酸 粗品;將熊果酸粗品溶于90倍重量的95wt。/。乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得198.4g 熊果酸成品,收率0.40%,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600泵,996 二極管陣列檢測器,M:i2色譜工作站,Lichrospher-C18柱,200X4. 6mm, 5 u (江蘇漢邦 科技有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢定所提 供,批號0742-9706),流動相采用乙腈-水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結果熊 果酸含量90%以上。 實施例6:稱取經干燥處理并過10目篩后的鉤藤原料粗粉50kg,投入提取罐內,加入8倍重量的95wty。乙醇進行熱回餾提取2次,每次1.5小時,趁熱抽濾,合并2次的提取液, 濃縮至浸膏;加入IO倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾,棄 去水洗液,沉淀再加入10倍浸膏重量的水,攪拌均勻,使浸膏充分分散,靜置,過濾, 棄去水洗液,得沉淀;加入沉淀重量15倍的2wt。/。的氫氧化鈉溶液,加熱至沸騰,保持 微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去;沉淀再加其重量15倍的2wty。的氫氧化鈉溶 液,加熱至沸騰,保持微沸10分鐘,靜置放冷,過濾,濾液棄去,沉淀用水洗至中性, 抽凈水分,干燥;將此干燥物加入10倍重量的95wty。乙醇中,加熱使分散溶解,過濾, 收集濾液;取干燥物15倍重量的酸性氧化鋁,裝柱,將濾液液加入層析柱中,使溶液 通過層析柱,收集洗液(用后的柱吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循環 使用);向洗液中加入2wt。/。的活性炭,加熱至沸騰,保持微沸30分鐘,趁熱濾過,用少 量95wt。/。的乙醇洗滌活性炭,合并濾液及洗液并濃縮至原體積的1/2時,置結晶罐中室 溫放置析晶,濾過,母液繼續濃縮至1/2體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊果 酸粗品;將熊果酸粗品溶于100倍重量的95"%乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得 216.7g熊果酸成品,收率0.43%,含量測定采用Waters高效液相色譜系統Water600 泵,996 二極管陣列檢測器,M"色譜工作站,Lichrospher-Cw柱,200X4. 6mm, 5u (江 蘇漢邦科技有限公司產品),乙腈為色譜純級,熊果酸標準品采用中國藥品生物制品檢 定所提供,批號0742-9706),流動相采用乙腈-水=85: 15 (V/V),檢測波長210nm,結 果熊果酸含量90%以上。
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權利要求
1.一種從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是該方法包括下列步驟(1)提取以6~10倍重量于鉤藤原料的80~95wt%乙醇進行熱回餾提取2~3次,每次1~2小時,抽濾,提取液濃縮至浸膏;(2)水洗加入8~12倍于浸膏重量的水,攪拌使充分分散,靜置,過濾,棄去水洗液,得沉淀,重復此步驟一次,得二次沉淀;(3)除雜向上述二次沉淀中加入純化劑,所述的純化劑為堿性溶液,然后加熱至沸騰,保持微沸5~15分鐘,靜置放冷,過濾,沉淀水洗至中性,抽濾,干燥,重復此步驟一次,得干燥物;(4)純化將上述干燥物加入10倍重量的80~95wt%乙醇中,加熱溶解過濾,濾液過層析柱,收集洗液;(5)脫色向上述洗液中加入2wt%的活性炭,加熱至微沸20~40分鐘,熱濾,得濾液并濃縮至原體積的1/3~2/3時,室溫放置析晶,過濾,濾液繼續濃縮至1/3~2/3體積,室溫放置析晶,過濾,合并結晶得熊果酸粗品;(6)重結晶將上述熊果酸粗品溶于80~95wt%的乙醇中,室溫放置析晶,過濾干燥得熊果酸。
2. 根據權利要求1所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是提取之前 鉤藤原料經干燥處理并過10目篩。
3. 根據權利要求1所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述純化 劑為1 3wt。/。的氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液。
4. 根據權利要求3所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述l 3wt。/。的氫氧化鈉溶液或氫氧化鉀溶液的用量為固體沉淀重量的10 20倍。
5. 根據權利要求1所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述層析 柱的吸附劑為酸性氧化鋁。
6. 根據權利要求5所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述層析 柱的吸附劑酸性氧化鋁經50(TC90min處理后能再生循環使用。
7. 根據權利要求5所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述層析 柱的吸附劑酸性氧化鋁的用量為沉淀干燥物重量的10 20倍。
8. 根據權利要求1所述的從鉤藤中提取制備熊果酸的方法,其特征是所述重結 晶的80 95wt。/。乙醇用量為熊果酸粗品重量的80 100倍。
全文摘要
本發明提供一種從鉤藤中提取制備熊果酸的方法。取鉤藤粗粉加入乙醇回流提取,濃縮提取液至浸膏,水洗后加入純化劑煮沸除雜,過濾,干燥沉淀,再用乙醇溶解過柱,活性炭脫色后靜置析晶得熊果酸粗品,再用乙醇重結晶即得到熊果酸成品。本發明所得熊果酸成品含量達90%以上,穩定可行;所用層析柱的吸附劑經再生處理可循環使用,降低了生產成本;所用有機溶媒種類少,“三廢”污染小,適宜工業生產應用。
文檔編號C07J63/00GK101643492SQ200910017739
公開日2010年2月10日 申請日期2009年8月21日 優先權日2009年8月21日
發明者于宗淵, 青 劉, 朱建偉, 巖 李, 閆雪生 申請人:山東省中醫藥研究院