專利名稱：2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3h-嘧啶-4-酮類衍生物及其制備方法 ...的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種衍生物及其制備方法，具體涉及2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物及其制備方法和應用，屬于有機化合物合成與醫藥應用技術領域。
背景技術：
艾滋病(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV)弓l起，嚴重危害人類生命健康的重大傳染性疾病。HIV是一種逆轉錄病毒，逆轉錄酶在病毒生命周期中的重要作用使其成為抗病毒治療的重要靶點。逆轉錄酶抑制劑分為兩類核苷類逆轉錄酶抑制劑和非核苷類逆轉錄酶抑制劑。非核苷類逆轉錄酶抑制劑(NNRTIs)因具有高效、低毒、高選擇性等特點而倍受關注。但是由于耐藥毒株的蔓延使該類藥物迅速喪失臨床效價。因此新型、高效、低毒、廣譜抗耐藥的NNRTIs的研發是目前抗HIV藥物研究的重要方向之一。
迄今己報道50多類NNRTIs,其中二氫烷氧卡基嘧啶酮(Dihydro-aIkylthio-benzyl-oxopyrimidines, DABOs)衍生物是較為典型的一類。DABO類衍生物能夠提高分子構象的柔性及在耙點中的位置可適應性，有效的抑制耙點的突變，進而抑制耐藥性的產生。隨著對DABOs的結構改造，以硫取代C2側鏈，得到了系列2-硫基DABO類似物(5"-DABOs)，使抗HIV-1 RT活性有了顯著提高，成為一類具有開發前景的NNRTIs。目前為止，以S-DABOs嘧啶母環為基本骨架，對其C2.， C3.， C4.， C5.， C6JS行了一系列的結構修飾，已經發現了許多高活性的S-DABOs衍生物，并對其進行了構效關系(SAR)研究。
因此，以S-DABOs嘧啶母環為基本骨架，利用先導化合物構效關系的有效信息，對其2位側鏈進行結構改造，對發現廣譜高效抗HIV藥物具有重要意義
發明內容
本發明旨在提供2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-啼卩定-4-酮類衍生物及其
制備方法，本發明還提供上述化合物的用途。本發明的技術方案如下
1. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-噴淀-4-酮類衍生物
本發明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3W-嘧啶-4-酮類衍生物，結構通式
如下 '
<formula>formula see original document page 3</formula>
其中R!為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3， 4-二氯、4-溴、3， 4-二氟、3-氯-4-氟、3， 4-二甲氧基或4-甲基。2. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物的合成路線如下:<formula>formula see original document page 4</formula>
試齊U: (i) (a) MgCl2, Et3N, CH3CN; (b) 2，6-二氯苯乙酸，N， N-羰基二咪唑；(ii)硫脲,EtONa; (iii)取代氯乙酰苯胺，碳酸鉀(K2C03)， MW-二甲基甲酰胺(DMF)。
其中R!為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3， 4-二氯、4-溴、3， 4-二氟、3-氯-4-氟、3， 4-二甲氧基或4-甲基。
3. 中間體6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3/f-嘧啶-4-酮3的制備方法
將O.lmol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)l置于150mL無水乙腈中，依次加入0.12mol的無水MgCl2， 0.152 molEt3N，室溫攪拌2個小時；將0.048 mol的2,6-二氯苯乙酸和0.05mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應15-20 min.，然后將反應混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)、無水MgCl2和Et3N的混合液中；室溫攪拌12-24h，加熱回流2h， TLC跟蹤至反應完全；冰浴環境下滴加13%的鹽酸150mL，滴畢攪拌15-20min.，分層取有機層蒸干，加入150ml乙酸乙酯；將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸餾得p酮酸酯2的粗品，可不經純化直接用于下一步；所述百分比數均為質量百分比，下同。
在干燥的反應瓶中，將10g, 0.43mol的鈉分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后，一次性加入24g,0.315mol的硫脲，然后加入粗產品p-酮酸酯2，將混合物加熱回流，TLC跟蹤至P-酮酸酯原料點消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于300mL水中，過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調pF^4，有白色沉淀產生；過濾，濾餅用10mL冰乙醇、lOmL冰乙醚依次洗滌2次，可得白色固體3;含純品90%以上，可不經純化直接用于下一步目標化合物的合成。
4. 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物4的制備方法將上述中間體6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮3，與取代氯乙酰苯胺進行烴化反應，
然后經重結晶純化得到2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3iZ-嘧啶-4-酮類衍生物4,所述的取代氯乙酰苯胺選自2-氯-iV-(4-硝基苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-氯苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-甲氧基苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(4-溴苯基)乙酰胺，2-氯-AK4-甲基苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(3,4-二氯苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺，2-氯-W-(3,4-二甲氧基苯基)乙酰胺或2-氯-JV-(3，4-二氟苯基)乙酰胺，所得目標化合物4a-4q，結構見表l。以下提供優選的操作步驟
將2mmo1的6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮3和211:111101的K2C03置于反應瓶中，加入無水iV，,二甲基甲酰胺(DMF)15mL，于室溫攪拌20min后，加入取代氯乙酰苯胺2.2mmo1,室溫攪拌，TLC跟蹤至原料點消失，停止反應；加入冰水100mL，有白色沉淀產生；過濾，用乙醇(EtOH)或乙醇-W,A^二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶劑重結晶得目標化合物4a-4q。表l、目標化合物4a-4q的結構式
編結構編 號結構編 號結構
4ao 1眾 OCH34b0 。A Cl4c0 1 朋A^S 、N、 Br
4d0 CH34eo 。，、4fO 入入、 OCH3
4g0 F4h0 ° ，、 Cl4iO Q ，、 入入、 F
4j0 OCH34ko C1^^^C1 Cl41O A々、 Br
4m0 I A N024n0 OCH34o0 F5.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮類衍生物藥物組合物-種抗HIV-1藥物組合物，含有上述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物與藥用輔料，制成不同齊II型的藥物。
6. 2-[(取代苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-噴^$-4-酮類衍生物應用本發明的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物可作為HIV-l非核苷類抑制劑應用。具體地說，作為HIV-1抑制劑用于制備抗艾滋病藥物。
本發明在分子模擬的基礎上，Ce-采用活性基團2,6-二氯芐基，在C2—側鏈引入合適的取代苯氨基羰基甲硫基，以增加抑制劑分子與周圍氨基酸殘基的疏水和氫鍵作用，合成了一系列的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生物。該系列化合物具有較高的抗HIV活性，且細胞毒性較低，具有進一步藥用開發價值。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明做進一步說明，所有目標化合物的編號與表l相同。所述百分比數
均為質量百分比。
實施例1:中間體6-(2，6-二氯苯甲基):2-巰基-3樂嘧啶-4-酮的制備方法
將O.lmol的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)l置于150mL無水乙腈中，依次加入0.12mo1的無水MgCl2， 0.152 mol Et3N，室溫攪拌2個小時。將0.048 mol的2，6-二氯苯乙酸和0.05 mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應15-20 min，然后將反應混合液加入丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)，無水MgCl2, Et3N的混合液中。室溫攪拌12-24h，加熱回流2h， TLC跟蹤至反應完全。冰浴環境下滴加13%的鹽酸150mL,滴畢攪拌15min-20min，分層取有機層蒸干，加入150ml乙酸乙酯。將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次，每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml,最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸餾得|3酮酸酯2的粗品，可不經純化直接用于下一步。
在干燥的反應瓶中，將鈉(10g,0.43mol)分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后， 一次性加入硫脲(24g，0.315mo1)，然后加入粗產品卩-酮酸酯2 (可累計獲得)，將混合物加熱回流，TLC跟蹤至p-酮酸酯原料點消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于水中(300mL),過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調PI^4,育白色沉淀產生。過濾，濾餅用10mL冰乙醇、10mL冰乙醚依次洗滌2次，可得白色固體3，含純品95%。可不經純化直接用于下一步反應。6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-嘧啶-4-酮白色固物，產率64.2%。6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮白色固物，產率21 %。實施例2: 2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮4a的制備將6-(2，6-二氯苯甲基)-2-巰基-3//-噴啶-4-酮3 (2mmo1, 0.574g)禾Q K2C03 (2mmo1， 0.276g)置于反應瓶中，加入無水7V，W-二甲基甲酰胺(DMF) 15mL,于室溫攪拌20min后，加入2-氯-N-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(0.439g,2.2mmo1)，室溫攪拌，TLC跟蹤至原料點消失，停止反應。加入冰水100mL，有白色沉淀產生。過濾，用乙醇-M W-二甲基甲酰胺(EtOH-DMF)混合溶劑重結晶得H標化合物4a。白色晶體，產率25.4%， mp:238-24(TC (dec).產物光譜分析數據-.
'H國NMR (DMSO-4, ppm) S: 12.80 (s, lk, NH), 10.08 (s, 1H, NH)， 7.45-7.29 (m， 7H)， 5.41 (s， 1H,CH=C=0), 4.05 (s， 2H, S-CH2), 3.99 (s, 2H, CH2), 3.69 (s, OCH3,3H); IR (KBr， cm.1): 3276 (頓)，3075 Onh), 1661 (Doo)， 1247 (uc—N). ESI-MS: w/z 450.6 (M+l), 472.7 (M+Na). C20H17Cl2N3O3S(449.04).
實施例3. 2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧使-4-酮4b,制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-氯苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4b為白色晶體，產率23.6%, mp:223-225。C(dec).
產物光譜分析數據
iH國NMR (DMSO-t/6, ppm) S: 12.77 (s, 1H, NH ), 10.37 (s, 1H， NH ), 7.57-7.24 (m, 7H ), 5.44 (s，1H, C-5 H pyrimidine ring), 4.00 (4H, CH2'S-CH2). IR (KBr, cm-1): 3317 (dnh), 3052 (uNH), 1657(uco). ESI-MS:油456.3(M+1), 478.3 (M+Na). C19H14C13N2S20 (454.96).
實施例4. 2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧咬-4-酮4c制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(4-溴苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮4c為白色晶體，產率23.1%，mp:232-233°C(dee).產物光譜分析數據
'H陽NMR (DMSO-漆,ppm) 5: 12.82 (s, 1H， NH)， 10.34 (s, 1H， NH), 7.54 (d, M0Hz, 2H)， 7.49 (d，■7=9.0Hz, 2H), 7.44 (d, J= 8.4Hz, 2H)， 7.26 (d,聲8.4Hz, H)， 5.44 (s, 1H, CH=C=0), 4.03 (s, 2H,S-CH2)， 3.97 (s, 2H, CH2); IR (KBr, cm.1): 3320 CuNH)， 3051 (uNH), 1656 (uc=0), 1239 (uc.N), 1206(uc.N). ESI-MS: w/z 498.3 (M十l)， 520.2 (M+Na). C19HwBrCl2N302S (496.94).
實施例5. 2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4d制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-yv-(4-甲基苯基)乙酰胺。
所得產品2-[(4-甲基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3界嘧啶-4-酮4d為白色晶體，產率26.7%, mp: 235-237。C (dec).
產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-漆，ppm) & 12.84 (s, 1H, NH), 10.11 (s, 1H， NH), 7.45-7.12 (m, 7H), 5.45 (s, 1H,CH-C，O), 4.05 (s， 2H, S-CH2)， 3.95 (s， 2H， CH2), 2.25 (S， 3H， CH3); IR (KBr，cm"): 3287 ("冊)，3034(v冊)，1663 (uc=0)，1241 (uc.N).ESI-MS:w/2434.7(M+l)，456.5(M+Na).C20H17Cl2N3O2S (433.34).實施例6. 2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯節基)-3界嘧啶-4-酮4e制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-AK4-硝基苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4e為白色晶體，產率29.6%, mp: 227陽229。C (dec).產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-4 ppm) S: 12.78 (s, 1H, NH), 10.82 (s， 1H， NH)， 7.56 (dd, J產9.6Hz,■72=2.4Hz, 2H), 7.8 (dd， J尸9.6Hz，力=2.4Hz, 2H),7.36 (d, /=7.8Hz, 2H), 7.23 (d, ^7.8Hz, H), 5.52 (s:1H， CH=C=0)， 4.08 (s， 2H， S-CH2), 4.02 (s, 2H, CH2). IR (KBr， cm") 3323 (UnH)， 3077 (vNH), 1655(uc=0)， 1241 (uC-N) , 1205 (uC-N). ESI-MS: w/z 465.5 (M+l). C19H14CI2N404S (464.01).實施例7. 2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮4f制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺。所得產品2-[(3,4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4f為白色晶體，產率22.6%， mp:221-223。C (dec).產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-^， ppm) S: 12.80 (s, 1H, NH)， 10.03 (s,H, NH), 7.51-6.86 (m, 6H), 5.47 (s, 1H，CH=O0)， 4.08 (s, 2H, S- CH2)， 4.02 (s, 2H， CH2)， 3.72 (2xOCH3, 6H); IR (KBr， cm") 32923136 (uNH)， 1664(uo0)， 1231.65 (uc.N)， 1218 (uc.N). ESI-MS:附/z 482.4 (M+3). C21H19C12N304S(479.05).
實施例8. 2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4g制備方法同實施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(3，4-二氟苯萄乙酰胺。所得產品2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮4g為白色晶體，產率24,2%, mp:228-230。C (dec).
產物光譜分析數據 '
'H-麗R (DMSO-漆，ppm) S: 12.78(s, 1H, NH)， 10.45 (s, 1H, NH), 7.74-7.28 (m, 6H), 5.52 (s, 1H,CH=C=0), 4.05 (s, 2H' S-CH2)， 3.93 (s, 2H， CH2); IR (KBr， cm") :3297 (uNH) , 3085 (dnh),16590o0)， 1241 (o)c.m), 1210 (uC-N). ESI-MS: m/z 456.5 (M+l)， 478.5 (M+Na). Cl9Hi3Cl2F2N302S(455.01).
實施例9. 2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3iZ-嘧啶-4-酮4h制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3,4-二氯苯基)乙酰胺。所得產品2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節基)-3//-嘧啶-4-酮4h為白色晶體，產率26.8%, mp: 236-238°C (dec)
產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-^， ppm) S: 12.87 (s, 1H， NH), 10.50 (s， 1H， NH), 7.95 (d， /=2.4Hz， H), 7.58 (d, /=8.4Hz, H)， 7.45 (dd, J尸8.4Hz, Jf2.4Hz, H), 7.42 (d, J=7.8Hz, 2H)， 7.25 (d, J=7.8Hz ， 1H), 5.44 (s,1H， CH=C=0), 4.04 (s, 2H, S-CH2)， 3.95 (s, 2H， CH2); IR (KBr， cm-1): 3291 (uNH), 3091 (uNH), 1660(uc-o), 1234 (uC-N), 1206 (uC-N). ESI-MS: m/z 488.3 (M+l), 510.1 (M+Na). C19H13C14N302S (486.95).實施例10. 2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3界嘧徒-4-酮4i制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺。所得產品2-[(3-氯-4-氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3/f-噴啶-4-酮4i為白色晶體，產率21.8%, mp: 237-239°C (dec).
產物光譜分析數據
'H-觀R ( DMSO-c/6, ppm) S: 12.75 (s, LH, NH), 10.41 ( s, 1H， NH)， 7.87-7.25 (m， 6H), 5.50 (s, 1H，CHK>0), 4.02 (s, 2H， S-CH2), 3.93 (s， 2H， CH2); IR (KBr， cm"):3290 (uNH)， 3042 (unh)， 1658(DC=0), 1221 (Dc曙n). ESI-MS: m/z 472.6 (M+l), 494.6 (M+Na). C19H13C13FN302S (470.98).
實施例11. 2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4j
制備方法同實施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(4-甲氧基苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮4j為白色晶體，產率54.0%, mp: 248-251°C (dec).
產物光譜分析數據
'H-麗R (DMSO-c/6，卯m ) S: 12.71 (s， 1H， NH ), 9.72 (s, 1H， NH)， 7.40-6.68 (m， 7H)， 4.05 (s， 2H，CH2), 3.99 (s， 2H， CH2)， 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr， cm-1): 3323(vNH)， 3041(dnh)， 1654(uc=。)， 1248("C-N). ESI-MS: w/z 464.5 (M十l)， 502.6 (M+K). C2iH19Cl2N303S (463.05).
實施例12. 2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4k制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-7V-(4-氯苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4k為白色晶體，產率27.6%， mp: 256-258°C (dec).
產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-漆，ppm) S: 12.71 (s, 1H， NH)， 10.00 (s, 1H, NH)， 7.53 (d, 〉8.4Hz, 2H)， 7.37 (d,^8.4Hz, 2H), 7.24 (d， ^7.8Hz, 2H ), 7.04 (d, J-7.8Hz， H), 4.11 (s， 2H, S-CH2), 3.72 (s, 2H， CH2),2.04 (s, CH3, 3H); IR ( KBr, cm.1) 3327 (unh)， 3053 (dnh), 1660 (uc=0), 1260 (uC-N), 1243 (uC-N).EST-MS: w/z 468.5 (M+1). C20H16Cl3N3O2S (467).
實施例13. 2-[(4-溴苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮41制備方法同實施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-溴苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-溴苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮41為白色晶體，產率29.2%, mp:259-261。C (dec).
產物光譜分析數據
H-NMR (DMSO-4 ppm) 5: 12.70 (s, 1H， NH)， 9.99 (s， 1H, NH)， 7.49-7.04 (m， 7H), 4.11 (s， 2H，S-CH2)， 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr, cm"):3307 (uNH), 3051 (uNH), 1656 (\)C=0)，1256 (uc扁n), 1242 (uc—N). ESI-MS: w/z 514.5 (M+3). C20H16BrCl2N3O2S (510.95)..
實施例14.2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4m制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-W-(4-硝基苯基)乙酰胺。所得產品2-[(4-硝基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4m為白色晶體，產率24.8%, mp: 250-252°C (dec).產物光譜分析數據
'H-NMR (DMS0-4， ppm) 5: 12.76 (s， 1H， NH), 10.47 (s， 1H, NH)， 8.25-6.97 (m, 7H)， 4.10 (s,2H, S-CH2), 3.79 (s， 2H， CH2), 2.03 (s， CH3,3H); IR(KBr， cm—4:3412 (uNH)， 3085 ("NH)， 1649 (vc=0)，1620 (vc=0), 1331 (dc.n)， 1307 (uc.N). ESl-MS: w/z 479.2 (M+1), 501.2 (M+Na). C20H16Cl2N4O4S(478.03).
實施例15.2-[(3，4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4n制備方法同實施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3，4-二甲氧基苯基)乙酰胺。所得產品2-[(3,4-二甲氧基苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4n為白色晶體，產率52.3%, mp: 246-249°C (dec).
產物光譜分析數據
'H-NMR (DMSO-t4, ppm) S: 12.68 (s, 1H， NH), 9.75 (s, 1H， NH)， 7.29-6.89 (m， 6H)， 4.13 (s, 2H，3.73-3.72 (2xOCH3, 6H), 3.67 (s, 2H， CH2), 2.04 (s, CH3, 3H); IR (KBr， cm"):3272 (\)NH),3050 (uNH), 1671 (uc=0), 1651 (uc=0), 1262 (dC-N), 1234(dc.n). ESI-MS: m/z 494.3 (M+1), 516.3(M+Na). C22H21C12N304S (493.06).
實施例16. 2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4o制備
方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-JV-(3,4-二氟苯基)乙酰胺
所得產品2-[(3,4-二氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4o為白色
晶體，產率29.6%, mp: 247-250°C (dec).
產物光譜分析數據
'H-雨R (DMSO-^， ppm) S: 12.71 (s， 1H, NH)， 10.10 (s， 1H， NH), 7.68-7.03 (m, 6H), 4.11 (s, 2H,S-CH2), 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3'3H); IR (KBr, cm-1): 3313 (uNH)， 3060 (uNH), 1675 (uc=0),
1647 Oc=0), 1257 (dc.n), 1206 (uc.N). ESI-MS: /w/z 470.3 (M+l)， 492.1 (M+Na). C20H15Cl2F2N3O2S(469.02).
實施例17. 2-[(3,4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4p制備方法同實施例2,所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-AH3，4-二氯苯基)乙酰胺。所得產品2-[(3，4-二氯苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3界嘧啶-4-酮4p為白色晶體，產率25.7°/。， mp:256-258。C (dec)
產物光譜分析數據
!H-NMR (DMSO-漆,ppm) S: 12.74 (s， 1H, NH)， 10.14 (s, 1H, NH), 7.87 (d, ^7.8Hz, 1H)， 7.58(d, J=9Hz, 1H), 7.38 (dd, J尸9Hz,力-1.8Hz, 1H)， 7.21 (d, J-7.8Hz, 2H), 7.02 (d, J-7.8Hz, 1H), 4.11(s, 2H, S隱CH2)， 3.73 (s, 2H， CH2), 2.04 (s, CH3,3H); IR (KBr, cm-1): 3283 (uNH), 3040 (\)NH), 1673(uc=0), 1646 (uc=0), 1257 (uc.N), 1236 (uc.N). ESI-MS: w/z 504.3 (M+3). C20H15Cl4N3O2S (500.96).實施例18. 2-[(3-氯斗氟苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3//-嘧啶-4-酮4q制備方法同實施例2，所不同的是取代氯乙酰苯胺選用2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯萄乙酰胺。所得產品2-[(3-氯-4-氟苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-5-甲基-3/f-噴啶-4-酮4q為白色晶體，產率26.6%, mp:259-261。C (dec).產物光譜分析數據
!H-NMR (DMS0-4,卯m) S: 12.68 (s， ip， NH), 10.06 (s, 1H， NH)， 7.96-7.02 (m， 6H)， 4.11 (s， 2H,S-CH2), 3.72 (s, 2H, CH2), 2.04 (s, CH3, 3H); IR (KBr, cm"): 3294 (uNH)， 3052 (uNH)， 1673 (uc=0),
1648 (doo)， 1260 ("c.n)， 1221 (dc.n). ESI-MS:附/z 488.2 (M+3). C20HI5Cl3FN3O2S (484.99).實施例19:抗HIV細胞活性篩選試驗
術語說明
MTT法噻唑藍法；MT-4:人急性淋巴母細胞；CCID50:細胞培養半數感染量；DMSO: 二甲基亞砜；
EC5Q:保護50°/。感染HIV-1的MT-4細胞免于細胞病變的化合物濃度；CC5Q:使50。/。未感染HRM的細胞發生病變的化合物濃度；SI:選擇性系數，即CC50/EC5o(HIV-l IIIb)的比値；HIV-1 (IIIB) : HIV-1病毒株IIIB亞型;HIV-2 (ROD) : HIV-2病毒株ROD亞型。
化合物抗HIV活性試驗，采用噻唑藍法(MTT法)在96孔細胞培養板上，加入50uL含l"(^MT-4細胞(人急性淋巴母細胞)培養液，再分別加入20uL感染HIV-1 (IIIB)或HIV-2(ROD)的MT-4細胞混懸液(每毫升含100倍細胞培養半數感染量CCID50)，然后加入不同濃度的待測化合物溶液，每個濃度3個孔，經過在37'C—定時間(5天)的培養后，向每個孔中加入20uL (5mg/ml) MTT溶液，繼續培養2小時，然后加入溶解液二甲基亞砜(DMSO)，與酶標儀上，在540nm測定吸收度，計算化合物不同濃度下的細胞增值率P%。同時設空白組，由此計算化合物保護50%的細胞免于HIV誘導的細胞病變所需濃度(EC50)。
化合物毒性測定在未感染的MT-4細胞中，與化合物抗HIV活性試驗平行操作，用MTT法測定化合物使50°/。未感染細胞發生細胞病變的濃度，即毒性濃度(CC50)。
選擇指數的計算SI=CC5。/EC50。
對上述合成的17個化合物4a-4q進行了抗HIV-l (mB)及HIV-2 (ROD)活性篩選，它們的活性和毒性數據列于表2中，其中臨床應用的核苷類逆轉錄酶抑制劑奈韋拉平(NVP)、地拉韋啶(DLV)、依法韋侖(EFV)和齊多夫定(AZT)作為陽性對照。由表可以看出，該類化合物對HIV-2 (ROD)無抑制作用，但對HIV-1 (IIIB)表現出了一定的抑制活性，其中活性最好的兩個化合物4k (EC50=0.32±0.11^M, CC50>266.65nM, SI〉836)和41 (EC50=0.18±0.06|aM，CCM>243.56pM， SI 〉1326)。可作為抗HIV的先導化合物加以利用。
表2化合物4a-q的抗HIV-1 (IIIB)及HIV-2 (ROD)的活性和毒性(MT-4細胞)
編號 EC50(HM)CC鄰OiM)SI(IIIb)
HIV隱l IIIBHIV-2 ROD430.92±0.16>25.2125.52±2.7528
4b0.95±0.11>24.8024.80±2.3523
4c0.74±0.08>22.8422.84±1.9631
4d0.88±0.28>47.43>or=47.43>or=54
4e2.07±1.29>268.64>268.64>130
4f4.48±1.62>165.67165.67±11.2228
4g>273.95>273.95>273.95ND ,
4h>or=84.63>19.5819.59±1.23ND
4i>264.41>264.41>264.41<1
4j2.74土3.00>10.8410.84±7.004
4k032±0.11>266.65>266.65>836
410.18±0.06>243.56>243.56>1326
4m0.99±0.27245.80>261.49>264
4n1.45±1.13>252.84>252.84>175
4o0.69土0.02>265,78>265.78>387
4p22.82>248.40>248.40ND
4q241.09>256.79>256.79ND
NVP0.21> 15.02>72
DLV0.32>3.83>12 .
E'FV0.0044>6.34>1434
AZT0.015>93.55>619權利要求
1.2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物結構通式如下其中R1為H或甲基；R2為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。
2. 如權利要求1所述的2-[(取代苯氨萄羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3/f-嘧啶-4-酮類衍生 物的制備方法，步驟如下將2mmo1的6-(2,6-二氯苯甲基>2-巰基-3樂嘧啶-4-酮(3)和2纖o1的K2C03置于反應 瓶中，加入無水W，7V-二甲基甲酰胺(DMF) 15 mL，于室溫攪拌20min后，加入取代氯乙酰 苯胺2.2mmd，室溫攪拌，TLC跟蹤至原料點消失，停止反應；加入冰水100 mL，有白色沉 淀產生；過濾，用乙醇或乙醇-iV, W-二甲基甲酰胺混合溶劑重結晶得目標化合物4a-4q;其中取代氯乙酰苯胺為2-氯-iV-(4-硝基苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(4-氯苯基)乙酰胺，2-氯-^-(4-甲氧基苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(4-溴苯基)乙酰胺，2-氯-7V-(4-甲基苯基)乙酰胺，2-氯-AA-(3,4-二氯 苯基)乙酰胺，2-氯-iV-(3-氯-4-氟苯基)乙酰胺，2-氯-AH3,4-二甲氧基苯基)乙酰胺或2-氯-從(3,4-二氟苯基)乙酰胺。
3. 如權利要求2所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯節基)-3//-嘧啶-4-酮類衍 生物的制備方法，其中中間體6-(2,6-二氯苯甲基)-2-巰基-3界嘧啶-4-酮(3)的制備步驟如下將O.lmd的丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)(1)置于150mL無水乙腈中，依次加 入0.12mo1的無水MgCl2, 0.152 molEt3N，室溫攪拌2個小時；將0.048 mol的2,6-二氯苯乙 酸和0.05 mol的N,N-羰基二咪唑置于150mL乙腈中反應15-20 min.，然后將反應混合液加入 丙二酸二乙酯(甲基丙二酸二乙酯)、無水MgCl2和Et3N的混合液中；室溫攪拌12-24h，力口 熱回流2h, TLC跟蹤至反應完全；冰浴環境下滴加13%的鹽酸150mL，滴畢攪拌15-20min.， 分層取有機層蒸干，加入150ml乙酸乙酯；將乙酸乙酯的混合液先用NaHC03溶液洗3次， 每次用量200mL，再用NaCl溶液洗3次，每次用量200ml，最后用無水Na2S04干燥，減壓蒸 餾得卩酮酸酯(2)的粗品，可不經純化直接用于下一步；在千燥的反應瓶中，將10g, 0.43mol的鈉分批加入300mL無水乙醇中，待鈉溶解冷卻后， 一次性加入24g,0.315mol的硫脲，然后加入粗產品p-酮酸酯(2)，將混合物加熱回流，TLC 跟蹤至P-酮酸酯原料點消失后停止加熱，冷卻后減壓蒸出溶劑，將殘余物溶解于300mL水中， 過濾，用10%的鹽酸，冰醋酸調pl^4，有白色沉淀產生；過濾，濾餅用lOmL冰乙醇、10 mL 冰乙醚依次洗滌2次，得白色固體(3)。
4. 如權利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯芐基)-3//-嘧啶-4-酮類衍生 物在制備HIV-1抑制劑的藥物中的應用。
5. —種抗HIV藥物組合物，用權利要求1所述的2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯 芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物與藥用輔料制成不同劑型的藥物制劑。
全文摘要
本發明提供了一種2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2，6-二氯芐基)-3H-嘧啶-4-酮類衍生物，結構通式如右，其中R<sub>1</sub>為H或甲基；R<sub>2</sub>為4-氯、4-甲氧基、4-硝基、3，4-二氯、4-溴、3，4-二氟、3-氯-4-氟、3，4-二甲氧基或4-甲基。本發明還涉及該類化合物的制備方法及其作為HIV抑制劑的應用。
文檔編號C07D239/00GK101638391SQ20091001772
公開日2010年2月3日 申請日期2009年8月21日 優先權日2009年8月21日
發明者于明艷, 劉新泳 申請人:山東大學