專利名稱：胰高血糖素類似物的制作方法
技術領域：
本發明涉及胰高血糖素類似物及它們的醫療用途(例如在治療食物攝取過量、肥胖癥和超重中的醫療用途)。
背景技術：
前胰高血糖素原(pr印roglucagon)是158個氨基酸的前體多肽，其在組織中被差異性加工而形成多種結構上相關的胰高血糖素原(proglucagon)衍生肽，包括胰高血糖素(Glu)、胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)、胰高血糖素樣肽-2 (GLP-2)和胃泌酸調節素 (oxyntomodulin,OXM)。這些分子參與多種生理功能，包括葡萄糖體內平衡、胰島素分泌、胃排空和腸生長以及食物攝取調節。胰高血糖素是四個氨基酸的肽，其對應于前胰高血糖素原的53至81位氨基酸， 并具有如下序列:His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Se r-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr(SEQ ID NO :1)。胃泌酸調節素(OXM)是37個氨基酸的肽，其包含胰高血糖素完整的四個氨基酸序列以及八肽羧基端延伸(前胰高血糖素原的82至89位氨基酸，其序列為Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-IIe-Al a (SEQ ID NO :2)，并稱為“間插肽 l(intervening peptide 1) ” 或 IP-1 ；因此，人胃泌酸調節素的完整序列為 His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-S er-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-As n-IIe-Ala(SEQ ID NO :3))。GLP-1的主要生物活性片段作為30個氨基酸的、對應于前胰高血糖素原之98至127位氨基酸的C端酰胺化肽而產生。胰高血糖素通過結合肝細胞上的胰高血糖素受體來幫助維持血液中的葡萄糖水平，其通過糖原分解使肝釋放以糖原形式儲存的葡萄糖來實現。隨著這些儲存的耗盡，胰高血糖素刺激肝通過糖異生合成額外的葡萄糖。這些葡萄糖釋放進血流中，從而防止低血糖癥的發生。OXM響應于食物攝入而釋放到血液中，并與食物卡路里含量成比例。已顯示OXM在人中抑制食欲并抑制食物攝取(Cohen 等，Journal of Endocrinology and Metabolism, 88，4696-4701，2003 ；WO 2003/022304)。除了與GLP-I類似的那些食欲抑制作用以外，OXM 一定還通過另一種機制影響體重，這是因為用胃泌酸調節素處理的大鼠與對飼(pair-fed) 大鼠相比顯示更輕的體重(Bloom, Endocrinology 2004,145, 2687) 用OXM處理肥胖嚙齒類動物還提高了它們的葡萄糖耐受(Parlevliet等，Am J Physiol Endocrinol Metab, 294，E142-7，2008)并抑制體重增加(W02003/022304)。OXM活化胰高血糖素受體和GLP-I受體，其對胰高血糖素受體的效力比對GLP-I 受體的效力高2倍，但比天然胰高血糖素和GLP-I對它們各自受體的效力低。人胰高血糖素也能活化兩種受體，但相對于GLP-I受體來說對胰高血糖素受體有強偏好性。另一方面， GLP-I不能活化胰高血糖素受體。胃泌酸調節素的作用機制尚不完全清楚。尤其是，不了解激素作用是通過GLP-I受體和胰高血糖素受體介導，還是通過一種或多種尚未鑒定出的受體介導
已顯示另一些肽結合并活化胰高血糖素受體和GLP-I受體(Hjort等，Journal of Biological Chemistry, 269, 30121-30124,1994)以及抑制體重增加和減少食物攝取(W0 2006/134340 ；WO 2007/100535 ；WO 2008/101017)。肥胖癥被認為是日益增多的全球性健康問題，并且其與多種疾病(特別是心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)、2型糖尿病、阻塞性睡眠呼吸暫停、某些類型的癌癥和骨關節炎)相關。因此，已發現肥胖癥減少預期壽命。根據世界衛生組織所作的2005預測，全球有4億成年人(年齡> 15歲)被劃歸為肥胖。在美國，目前認為肥胖癥是僅次于吸煙的可預防性死亡之第二大原因。肥胖癥的增多導致糖尿病的增多，約90%的患2型糖尿病的人群可劃歸為肥胖。 全球有2億4千6百萬人患有糖尿病，預計到2025年將會有3億8千萬人患糖尿病。許多人還有另外的心血管風險因素，包括高/異常LDL和甘油三酯以及低HDL。與未患糖尿病的人相比，患有糖尿病的人發生心血管疾病的可能性為前者的2至 4倍，使其成為最常見的糖尿病并發癥。在患有糖尿病的人中，心血管疾病導致約50%的死亡。與未患糖尿病的年輕成年人相比，患有糖尿病的年輕成年人患冠心病(CHD)的幾率高 12 40倍并極易發生和流行肥胖癥和2型糖尿病，這些代謝疾病相關的發病率和死亡率突顯了對有效治療選擇的醫療需要。因此，非常需要通過醫療手段治療肥胖癥和提高葡萄糖耐受。發明概述本發明提供了具有式R1-X-Z-R2的化合物或其可藥用鹽，其中R1為H、CV4烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基；R2 為 OH 或 NH2;X為具有式I的肽His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-A rg-Ala-Lys-Asp-Phe-IIe-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Ala(SEQ ID NO 4)或在至多4個的以下位置處與式I不同；如果與式I不同，則第2位殘基選自D_kr、Aib ；第16 位殘基選自 Jer、Asp、Lys、Arg ；第18位殘基選自Ala ；第20 位殘基選自Gln、Arg、Glu、Asp ；第21位殘基為Glu ；第23位殘基為Val ；第24 位殘基選自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ；第27 位殘基選自Met、Cys、Lys ；第28 位殘基選自Asn、Arg、Lys、Ala、Glu、Asp ；以及第四位殘基選自Ilir、Arg ；并且Z不存在或者為具有1 20個選自Ala、Leu、Ser, Thr, Tyr, Cys, Glu、Lys、 Arg、Dbu, Dpr和Orn之氨基酸單元的序列。在一些實施方案中，X在至多4個的以下位置處與式I不同；如果與式I不同，則第2位殘基選自D_kr、Aib ；
第16 位殘基選自=Ser, Asp、Lys ；第20 位殘基選自Gln、Arg、Glu ；第27位殘基選自Met、Cys、Lys ；以及第28 位殘基選自Asn、Arg、Ala。在一些實施方案中，X可在至多3個的以下位置處與式I不同；如果與式I不同， 則第2位殘基選自D-kr、Aib ；第16位殘基選自=Ser, Asp、Lys ；以及第20 位殘基選自Gln、Arg、Glu0在一些替代性實施方案中，X可在至多4個的以下位置處與式I不同；如果與式I 不同，則第2位殘基選自D_kr、Aib ；第16 位殘基選自=Ser, Asp、Lys ；第18位殘基為Ala ；以及第20 位殘基選自Gln、Arg、Glu0在另一些替代性實施方案中，X可在至多4個的以下位置處與式I不同；如果與式 I不同，則第23位殘基為Val ；第24 位殘基選自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ；第27位殘基選自Met、Cys、Lys ；以及第28 位殘基選自Asn、Arg、Ala。在上述任一實施方案中，第16位和第20位殘基可形成鹽橋。合適的殘基對的實例包括16-Asp,20-Lys ；16-Glu,20-Lys ；16-Asp,20-Arg ；16-Glu,20-Arg ；16-Lys,20-Asp ；16-Arg, 20-Asp ；16-Lys,20-Glu ；16-Arg, 20-Glu.另外地或作為替代地，第20位和第M位殘基可形成鹽橋。合適的殘基對的實例包括20-Asp,24-Lys ；20-Glu,24-Lys ；20-Asp,24-Arg ；20-Glu,24-Arg ；20-Lys,24-Asp ；20-Arg,24—Asp ；20-Lys,24-Glu ； 20-Arg,24-Glu.
在與上述定義保持-
項文的同時，可期望X包含以下的一個或多個殘基組
20-Lys,24-Glu ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu,20-Lys,24-Glu ； 16-Glu,20-Lys ； 16-Glu，20-Lys，29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile，24-Glu ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile，24-Glu,29-Ala 16-Glu,20-Lys,24-Glu,29-Ala ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu,29-Ala ； 27-Leu,28-Ser,29-Ala ； 29-Ala16-Ser ；
20-Gln ；
23-Val ；
24-Gln ；
16-Ser,20-Gln ；
16-Asp,20-Arg,24-Asp ；
16-Lys,20-Glu ；
24-Arg ；或
28-Arg.
例如，X可具有以下序列
HSQGTFTSDYSKYLDERRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO5)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFVEffLLSA(SEQIDNO6)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIQffLLSA(SEQIDNO7)
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFIEffLLSA (SEQIDNO8)
HSQGTFTSDYSKYLDDRRARDFIDffLLSA(SEQIDNO9)
HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFIKffLLSA(SEQIDNO10)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIRffLLSA(SEQIDNO11)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLRA(SEQIDNO12)
HSQGTFTSDYSKYLDSRRAKDFIEffLLSA (SEQIDNO13)
HSQGTFTSDYSKYLDERAAKDFIEffLLSA(SEQIDNO14)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIDffLLSA(SEQIDNO15)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLAA(SEQIDNO16)
HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLSA(SEQIDNO17)
或
本發明還提供了編碼本發明化合物的核酸(其可為DNA或RNA)、包含該核酸的表達載體以及包含該核酸或表達載體的宿主細胞。
在另一方面中，本發明提供了一種組合物，其包含與載體混合的本文定義之胰高血糖素肽類似物或者其鹽或衍生物、編碼該胰高血糖素肽類似物的核酸、包含該核酸的表達載體或包含該核酸或表達載體的宿主細胞。在一些優選的實施方案中，所述組合物為可藥用組合物并且所述載體為可藥用載體。胰高血糖素肽類似物可以是胰高血糖素類似物的可藥用酸加成鹽。所述化合物用于防止體重增加或促進體重減輕。“防止”是指與不進行治療相比抑制或減少體重增加，而不必然指體重增加的完全停止。所述肽可引起食物攝取的減少和 /或能量消耗的增加，從而導致對體重的可見作用。不依賴于其對體重的作用，本發明化合物可對葡萄糖耐受和循環膽固醇水平具有有益作用(能降低循環LDL水平并提高HDL/LDL 比值)。因此，本發明化合物可用于直接或間接治療由體重超重引起或以其為特征的任何病癥，例如治療和/或預防肥胖癥、病態肥胖、肥胖相關炎癥、肥胖相關膽囊疾病、肥胖引起的睡眠呼吸暫停。本發明化合物還可用于治療代謝綜合征、胰島素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血壓、致動脈粥樣化血脂異常(atherogenic dyslipidimia)、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠心病或中風。它們在這些病癥中的作用可由它們對體重的作用引起或與其有關，或者可不依賴于其對體重的作用。因此，本發明提供了本發明化合物治療有此需要之個體中上述病癥的用途。本發明還提供了用于醫學治療方法中的本發明化合物，特別是用于治療上述病癥的方法中的本發明化合物。本發明還提供了本發明化合物在制備用于治療上述病癥之藥物中的用途。如所述地，本發明還包括含有上述核酸序列(任選地與指導其表達的序列相組合)的表達載體以及包含所述表達載體的宿主細胞。優選地，所述宿主細胞能表達并分泌本發明化合物。在又一方面中，本發明提供了產生所述化合物的方法，該方法包括在適于所述化合物表達的條件下培養所述宿主細胞并純化由此產生的化合物。本發明還提供了用于醫學治療方法中的本發明之核酸、本發明之表達載體或能表達和分泌本發明化合物的宿主細胞。應理解，所述核酸、表達載體和宿主細胞可用于治療上述可使用所述化合物本身治療的任何疾病。因此，除非上下文中另外指出，涉及包含本發明化合物的治療組合物、本發明化合物的施用或其任何治療用途的內容應解釋為涵蓋本發明核酸、表達載體或宿主細胞的等同用途。
圖1.圖1. ZP2663對db/db小鼠口服葡萄糖耐受的作用。db/db小鼠被禁食過夜并在即將要施用(腹膜內)運載體(vehicle)或 ZP2663 (45nmol/kg)之前采集初始血樣(禁食血液葡萄糖水平)。15分鐘后給與口服劑量的葡萄糖(5ml/kg中的lg/kg)，并在t = 30分鐘、t = 60分鐘、t = 120分鐘和t = 240 分鐘時測量BG水平。針對每個時間點計算與基線(t = 0)的差異，并測定AUCch24c1M值。 ZP2663顯著提高糖尿病db/db小鼠的葡萄糖耐受。圖2. ZP2663對小鼠食物攝取的作用。多個經分類小鼠組(按照體重分類)被禁食過夜，并用PYY3_36(30nmol/kg)(內部陽性對照)、胰高血糖素(500nmol/kg)、ZP2663 (500nmol/kg)或運載體處理。1小時后，將預先稱重的食物施與小鼠，通過在1小時后稱量剩余食物來測量食物攝取并相對于體重進行表示(mg食物/g體重)。與根據先前發現所預期的一致，PYY (3-36)顯示出食欲抑制作用。ZP^63(500nmOl/kg)在注射肽后第1小時內顯著降低了食物攝取。胰高血糖素對食物攝取無影響。圖3.用ZP^63處理28天對飲食誘導肥胖(diet induced obese, DI0)小鼠的體重增加的作用。用高脂飲食(high fat diet，HFD)飼喂C57B1/6雄性小鼠并用 ZP2663(500nmol/kg) (ZP2663)或運載體處理(每日兩次；皮下)。按照與DIO組相同的治療方案用運載體(鼠食)處理飼喂常規鼠食的非肥胖對照組。每天記錄體重，并利用其在整個研究中施用經體重修正之劑量的肽。ZP2663將所增加體重降低至與用鼠食飼喂組中所觀察到的相似水平圖4.用Glu-GLP-I雙效激動劑處理DIO小鼠4周(每日兩次)對LDL膽固醇濃度的作用。OXM (P = 0. 002)和ZP^63(P = 0. 0001)的作用與運載體組具有統計學顯著差
已圖5.用GlU-GLP-I雙效激動劑處理DIO小鼠4周(每日兩次)對HDL/LDL比值的作用。用于OXM和exendin-4的運載體為PBS (pH 7. 4)，用于ZP^63的運載體為醋酸鹽 (pH 5. 0)。OXM(p = 0. 002)和ZP2663 (p = 0. 0003)的作用與運載體組具有統計學顯著差已升。發明詳述在本說明書通篇中，采用常規的單字母和三字母編碼天然氨基酸，并采用通常接受的三字母編碼其它氨基酸(如Aib ( α -氨基異丁酸)、0rn (鳥氨酸),Dbu (2,4- 二氨基丁酸)和Dpr (2，3-二氨基丙酸))。術語“本源(native)胰高血糖素”是指具有如下序列的人本源胰高血糖素H-His -Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-OH(SEQ ID NO :1)。術語“胃泌酸調節素”和“0ΧΜ”是指具有如下序列的人本源胃泌酸調節素=H-His -Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-IIe-Ala-OH(SEQ ID NO 3)。本發明提供了上述化合物。為了避免疑義，在本文提供的定義中，X的序列通常僅在所示允許變化的位置處與式I有差異。可認為序列X中的氨基酸以常規的N端到C端方向從1至四位連續編號。因此，應對X中的“位置”作相應的解釋，如同應對人本源胰高血糖素和其它分子中的位置作相應解釋一樣。本發明化合物可在肽序列X中具有一個或多個分子內橋。每個這樣的橋在X的兩個氨基酸殘基的側鏈之間形成，所述兩個氨基酸殘基通常被χ線性序列中三個氨基酸所間隔(即，在氨基酸A和氨基酸A+4之間形成)。更特別地，所述橋可在殘基對12和16、16和20、17和21,20和24或者24和28 的側鏈之間形成。兩個側鏈可通過離子相互作用或通過共價鍵彼此連接。因此，這些殘基對可包含帶相反電荷的側鏈從而通過離子相互作用形成鹽橋。例如，一個殘基可以是Glu 或Asp，另一殘基可以是Lys或Arg。Lys與Glu配對以及Lys與Asp配對還能夠反應形成內酰胺環。同樣地，Tyr與Glu或者Tyr與Asp能形成內酯環。特別地，第16和20位和/或第20和M位殘基可以允許形成分子內橋。在這些位置合適的殘基對的實例包括16-Asp,20-Lys ；16-Glu,20-Lys ；16-Asp,20-Arg ；16-Glu,20-Arg ；16-Lys,20-Asp ；16-Arg，20-Asp ；16-Lys,20-Glu ；16-Arg, 20—Glu ；禾Π / 或20-Asp, 24-Lys ；20-Glu,24-Lys ；20-Asp, 24-Arg ；20-Glu, 24-Arg ；20-Lys,24-Asp ；20-Arg，24-Asp ;20-Lys,24-Glu ；20-Arg，24-Glu.不希望受到任何特定理論的約束，認為這種分子內橋穩定了分子的α螺旋結構并因而提高了針對GLP-I受體以及可能的胰高血糖素受體的效力和/或選擇性。不希望受任何特定理論的約束，本源胰高血糖素的第17和18位精氨酸殘基似乎提供了針對胰高血糖素受體的顯著選擇性。第18位疏水性殘基(例如Ala)可提高針對 GLP-I受體和胰高血糖素受體兩者的效力在第23位替換(例如，替換為lie)可提高針對GLP-I受體的效力和/或選擇性
在第M位替換(例如，替換為Glu)也可提高針對GLP-I受體的效力和/或選擇性。不希望受任何特定理論的約束，本源胰高血糖素的第27J8和四位殘基似乎提供了針對胰高血糖素受體的顯著選擇性。在本源胰高血糖素這些位置中的1個、2個或所有這3個位置進行替換可提高針對GLP-I受體的效力和/或選擇性，并可能不顯著降低針對胰高血糖素受體的效力。特別的實例包括第27位的Leu、第觀位的Ser和第四位的Ala。對第27位天然存在的Met進行替換(例如用Leu或Lys、尤其用Leu進行替換) 還降低氧化的潛力，從而提高化合物的化學穩定性。對第28位天然存在的Asn進行替換(例如用kr、Arg或Ala)進行替換)還降低在酸溶液中脫酰胺基的潛力，從而提高化合物的化學穩定性還可通過引入可能形成兩親性螺旋結構并且可能不會顯著降低針對胰高血糖素受體之效力的殘基來提高針對GLP-I受體的效力和/或選擇性。這可通過在第16、20、24 和觀位中的一個或多個位置引入帶電荷殘基來實現。因此，第16和20位殘基可全部帶電荷，第16、20和對位殘基可全部帶電荷，或者第16、20、對和洲位殘基可全部帶電荷。例
11如，第16位殘基可以是Glu、Lys或Asp。第20位殘基可以是Lys、Arg或Glu。第M位殘基可以是Glu、Asp、Lys或Arg。第28位殘基可以是Arg。在第20和M位中的1個或2個位置用天然存在的殘基Gln替換還降低在酸溶液中脫酰胺基的潛力，從而提高化合物的化學穩定性。第對位殘基可以是61114印、1^8、八印或 Ala。所述化合物可包含1 20個氨基酸的C端肽序列Z，例如用以穩定胰高血糖素肽類似物的構型和/或二級結構，和/或用以使胰高血糖素肽類似物對酶水解更具抗性，例如，W099/46283中所述。當存在時，Z代表1 20個氨基酸殘基(例如，1 15個氨基酸殘基，更優選地 1 10個氨基酸殘基，特別地1 7個氨基酸殘基(例如1、2、3、4、5、6或7個氨基酸殘基， 例如6個氨基酸殘基))的肽序列。肽序列Z中的每個氨基酸殘基可獨立地選自Ala、Leu、 Ser、Thr、Tyr、Cys、Glu、Lys、Arg、Dbu (2,4 二氨基丁酸)、Dpr (2，3- 二氨基丙酸)和 Orn (鳥氨酸)。優選地，所述氨基酸殘基選自kr、Thr, Tyr, Glu、Lys、Arg、Dbu, Dpr和Orn，更優選地可僅選自Glu、Lys和Cys。上述氨基酸可具有D或L構型，但優選具有L構型。特別優選的序列Z為4、5、6或7個連續的賴氨酸殘基(即Lys3、Lys4, Lys5, Lys6或Lys7)，特別是5或6個連續的賴氨酸殘基。Z序列的另一些實例示于WO 01/04156中。或者，序列Z的 C端殘基可以是Cys殘基。這可有助于化合物的修飾(例如PEG化)。在這些實施方案中， 序列Z的長度可例如僅為1個氨基酸(即Z = Cys)或者可為2、3、4、5、6或更多個氨基酸。 因此，其它氨基酸作為肽X和末端Cys殘基之間的間隔物。肽序列Z與人OXM IP-I部分的對應序列(其具有序列 Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala)具有不高于 25% 的序列同一性。相對于另一多肽序列(例如，IP-1)，給定肽或多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”計算為當將兩者彼此比對時(適當時可引入空位以進行最佳比對)，給定肽序列中與另一多肽對應序列中相應氨基酸殘基一致的氨基酸殘基的百分比。同一性百分比的值可通過 WU-BLAST-2 確定(Altschul 等，Methods in Enzymology，266 :460-480 (1996))。 WU-BLAST-2采用若干檢索參數，其中大部分設置為缺省值。可調整參數設置為如下值 重疊跨度(overlap span) = 1,重疊分數(overlap fraction) = 0. 125,字閾值(word threshold) (T) =11。氨基酸序列同一性百分比的值通過將由WU-BLAST-2確定的匹配的一致殘基數除以參照序列的殘基總數(忽略由WU-BLAST-2引入參照序列以使比對值最大化的空位)再乘以100而確定。因此，當將Z與IP-I的8個氨基酸進行最佳比對時，其具有不超過2個與IP-I之
對應氨基酸一致的氨基酸。本發明化合物中的一個或多個氨基酸側鏈可與親脂取代基綴合。所述親脂取代基可共價鍵合至氨基酸側鏈的原子，或者可通過間隔物綴合至氨基酸側鏈。所述氨基酸可以是肽X的一部分，或肽Z的一部分。不希望受理論的約束，認為親脂取代基結合血流中的白蛋白，從而保護本發明化合物免受酶降解，這可增強化合物的半衰期。所述間隔物(當存在時)用于在所述化合物和所述親脂取代基之間提供間隔。親脂取代基可通過酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺與氨基酸側鏈或間隔物連接。因此，應理解，優選的親脂取代基包括酰基，磺酰基，形成酯、磺酰酯、硫代酯、酰胺或磺酰胺之一部分的N原子、0原子或S原子。優選地，親脂取代基中的酰基與氨基酸側鏈或間隔物形成酰胺或酯的一部分。親脂取代基可包含具有4至30個碳原子的烴鏈。優選地，它具有至少8或12個 C原子，優選地它具有M個或更少的C原子，或者20個或更少的C原子。烴鏈可以是線性的或分支的，并且可以是飽和的或不飽和的。應理解，烴鏈優選地被這樣的部分所取代，所述部分形成與氨基酸側鏈或間隔物的連接，例如酰基、磺酰基、N原子、0原子或S原子。最優選地，所述烴鏈被酰基取代，因而烴鏈可以是烷酰基(例如棕櫚酰基、己酰基、月桂酰基、 肉豆蔻酰基或硬酯酰基)的一部分。因此，所述親脂取代基可具有下式
權利要求
1.具有式R1-X-Z-R2的化合物或其可藥用鹽，其中R1為H、C1^4烷基、乙酰基、甲酰基、苯甲酰基或三氟乙酰基； R2 為 OH 或 Ml2 ； X為具有式I的肽His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Glu-Arg-Arg-A Ia-Lys-Asp-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Leu-Ser-Ala(SEQ ID NO 4) 或在至多4個的以下位置處與式I不同；如果與式I不同，則 第2位殘基選自=D-Ser, Aib ； 第 16 位殘基選自=Ser, Asp、Lys、Arg ； 第18位殘基為Ala ； 第 20 位殘基選自Gln、Arg、Glu、Asp ； 第21位殘基為Glu ； 第23位殘基為Val ；第 24 位殘基選自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ； 第27位殘基選自Met、Cys、Lys ； 第 28 位殘基選自Asn、Arg、Lys、Ala、Glu、Asp ；以及第四位殘基選自Thr、Arg;并且Z不存在或者為具有1 20個選自Ala、Leu、Ser, Thr, Tyr, Cys, Glu、Lys、Arg、 Dbu, Dpr和Orn之氨基酸單元的序列。
2.權利要求1的化合物，其中X在至多4個的以下位置處與式I不同； 如果與式I不同，則第2位殘基選自=D-Ser, Aib ； 第16位殘基選自Jer、Asp、Lys ； 第20位殘基選自Gln、Arg、Glu ； 第27位殘基選自Met、Cys, Lys ；以及第觀位殘基選自Asn、Arg、Ala。
3.權利要求2的化合物，其中X在至多3個的以下位置處與式I不同； 如果與式I不同，則第2位殘基選自=D-Ser, Aib ； 第16位殘基選自=Ser, Asp、Lys ；以及第20位殘基選自Gln、Arg、Glu。
4.權利要求1的化合物，其中X在至多4個的以下位置處與式I不同； 如果與式I不同，則第2位殘基選自=D-Ser, Aib ； 第16位殘基選自Jer、Asp、Lys ； 第18位殘基為Ala;以及第20位殘基選自Gln、Arg、Glu。
5.權利要求1的化合物，其中肽X在至多4個的以下位置處與式I不同； 如果與式I不同，則第23位殘基為Val ；第 24 位殘基選自Gln、Asp、Lys、Arg、Ala ； 第27位殘基選自Met、Cys, Lys ；以及第觀位殘基選自Asn、Arg、Ala。
6.前述權利要求中任一項的化合物，其中第16和20位和/或第20和M位的殘基能形成鹽橋。
7.前述權利要求中任一項的化合物，其中X包含以下的一個或多個殘基組 20-Lys,24-Glu ；20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu，20-Lys，24-Glu ； 16-Glu,20-Lys ； 16-Glu，20-Lys，29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,23-Ile,24-Glu ； 16-Glu, 20-Lys,23-Ile，24-Glu,29-Ala ； 16-Glu,20-Lys,24-Glu,29-Ala ； 20-Lys,23-Ile,24-Glu,29-Ala ；27-Leu,28-Ser,29-Ala； 29-Ala ；16-Ser ； 20-Gln ；23-Val；24-Gln； 16-Ser,20-Gln ； 16-Asp,20-Arg,24-Asp ； 16-Lys,20-Glu ； 24-Arg ；或28-Arg0
8.權利要求1的化合物，其中X具有以下序列HSQGTFTSDYSKYLDSRRAKDFIEffLLSA (SEQIDNO13)HSQGTFTSDYSKYLDERRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO5)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFVEffLLSA(SEQIDNO6)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIQffLLSA(SEQIDNO7)HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFIEffLLSA(SEQIDNO8)HSQGTFTSDYSKYLDDRRARDFIDffLLSA(SEQIDNO9)HSQGTFTSDYSKYLDKRRAEDFIKffLLSA(SEQIDNO10)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIRffLLSA(SEQIDNO11)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLRA(SEQIDNO12)HSQGTFTSDYSKYLDERAAKDFIEffLLSA(SEQIDNO14)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIDffLLSA(SEQIDNO15)HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLAAor(SEQ ID NO 16)；HSQGTFTSDYSKYLDERRAKDFIEffLLSA(SEQ ID NO: 17)。
9.前述權利要求中任一項的化合物，其中R1為H。
10.前述權利要求中任一項的化合物，其中R2為NH2。
11.前述權利要求中任一項的化合物，其中Z與具有序列 Lys-Arg-Asn-Arg-Asn-Asn-Ile-Ala的人胃泌酸調節素IP-I序列的對應部分具有不高于 25%的序列同一性。
12.前述權利要求中任一項的化合物，其中Z的C端殘基為Cys。
13.權利要求1至10中任一項的化合物，其中Z不存在。
14.前述權利要求中任一項的化合物，其中所述化合物如肽X中一個或多個氨基酸側鏈與親脂取代基或聚合物部分綴合。
15.編碼前述權利要求中任一項之化合物的核酸。
16.包含權利要求15之核酸的表達載體。
17.包含權利要求15之核酸或權利要求16之表達載體的宿主細胞。
18.藥物組合物，其包含與可藥用載體混合的前述權利要求中任一項的化合物、核酸、 表達載體或宿主細胞。
19.權利要求1至17中任一項之化合物、核酸、表達載體或宿主細胞在制備藥物中的用途，所述藥物用于防止體重增加、促進體重減輕或者用于治療由體重超重引起或與其相關的病癥或肥胖癥，包括病態肥胖、肥胖相關炎癥、肥胖相關膽囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停，或者用于治療胰島素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血壓、致動脈粥樣化血脂異常、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠心病或中風。
20.權利要求1至17中任一項的化合物、核酸、表達載體或宿主細胞，其用于醫學治療的方法中。
21.權利要求1至16中任一項的化合物、核酸、表達載體或宿主細胞，其用于以下方法中防止體重增加、促進體重減輕或者用于治療由體重超重引起或與其相關的病癥或肥胖癥，包括病態肥胖、肥胖相關炎癥、肥胖相關膽囊疾病和肥胖引起的睡眠呼吸暫停，或者用于治療胰島素抗性、葡萄糖不耐受、2型糖尿病、高血壓、致動脈粥樣化血脂異常、動脈粥樣硬化、動脈硬化、冠心病或中風。
全文摘要
本發明提供了用于促進體重減輕或防止體重增加以及用于糖尿病、代謝綜合征和相關疾病治療中的材料和方法。特別地，本發明提供了在這些方法中有效的新型胰高血糖素肽類似物。所述肽可通過具有與人胰高血糖素相比提高的針對GLP-1受體之選擇性來介導其作用。
文檔編號C07K14/605GK102292348SQ200880132702
公開日2011年12月21日 申請日期2008年12月15日 優先權日2008年12月15日
發明者埃迪·邁爾, 延斯·羅森格倫·道高, 比亞內·杜·拉森, 特里內·斯科夫隆德·呂厄·尼魯普, 迪特·里貝爾, 馬里耶·斯科夫高 申請人:西蘭制藥公司