專利名稱：：異磷酰胺芥及其類似物的鹽的制作方法異磷酰胺芥及其類似物的鹽相關申請的交叉參考本申請請求2007年4月6日提交的美國臨時申請順序號US60/922,148，2007年5月2日提交的美國臨時申請順序號US60/927,363，2007年6月i5日提交的美國臨時申請順序號US60/934，914和2007年10月30日提交的美國臨時申請順序號US61/001，237的利益，將這些文獻完整地引入本文作為參考。
背景技術：
：第一次世界大戰中被芥子氣殺傷的士兵的尸體解剖表明硫芥對快速分裂的細胞具有不成比例的作用，并且提示疏芥化合物可能具有抗肺瘤作用。實際上，早期研究人員嘗試通過將硫芥直接注入腫瘤治療癌癥。這種研究限于硫芥化合物的極端毒性，而經研究，氮芥類似物，諸如氮芥因毒性較低而成為替代性選擇。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>因大部分氮芥類似物缺乏選擇性，所以研究了可以被存在于贅生細胞中的高濃度磷酰胺酶活化的前體藥物，諸如磷酰胺化合物。已經證實兩種磷酰胺烷化劑環磷酰胺(CPA)和異環磷酰胺(Ifos)的異構化合物特別有效。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>就圖1而言，異砩跣胺芥(isophosphoramide,tard，IPM)為CPA和Ifos的常見代謝物。認為IPM導致由CPA和Ifos表現出的至少部分抗腫瘤活性。使用IPM作為抗癌藥的嘗試，部分因為化合物的不穩定性而不成功。已經合成了IPM并且進行了該化合物的前期生物學評價，但令人遺憾的是，IPM過于不穩定而難以分離和用于人體治療。
發明內容本文披露了式(I)的結晶化合物oA+*-0-^-NHCH2CH2X^JHCH2CH2Y(I)其中A+表示脂族銨種類；且X和Y獨立地表示離去基。在某些實施方案中，本發明涉及包含式(I)的化合物和藥學可接受的稀釋劑或載體的藥物組合物。還描述了制備這類化合物和組合物的方法。本文還披露了包含異磷酰胺芥(IPM)和/或IPM類似物，一個或多個當量的堿和賦形劑的凍干物及其生產方法。在某些實施方案中，該方法包括使IPM或其類似物的結晶鹽和脂族胺諸如三(羥甲基)氨基曱烷(Tris)接觸水或者使IPM或其類似物和一種或多種脂族胺類的混合物(優選IPM或其類似物與胺或胺類之比為約l:l)接觸水，并且凍干所得混合物。在某些實施方案中，該混合物和所得凍干物包含賦形劑，諸如甘露醇，無水乳糖，蔗糖，D(+)-海藻糖，右旋糖酐4Q或聚維酮(PVPK24)，優選甘露醇。這類制劑包括凍干物，其優選包含賦形劑(諸如甘露醇，無水乳糖，蔗糖，D(+)-海藻糖，右旋糖酐40或聚維酮(PVPK24)，優選甘露醇)和下式的化合物0A+*-0一fi一NHCH2CH2X^JHCH2CH2Y其中A+表示選自脂族胺類和芳族胺類的質子化(共軛酸)或季銨形式的銨種類，所述脂族胺類和芳族胺類包括堿性氨基酸，雜環胺類，取代和未取代的吡啶類，胍類和脒類；且X和Y獨立地表示離去基。本文還披露了適合于口服給藥的藥物組合物，其包含藥學可接受的稀釋劑或賦形劑和如本文披露的化合物。在某些實施方案中，本發明涉及例如使用本文所述化合物或制劑治療過度增殖性疾病的方法。在某些這類實施方案中，本發明涉及治療過度增殖性疾病的方法，所述過度增殖性疾病選自白血病，包括急性白血病(諸如急性淋巴細胞白血病，急性粒細胞白血病，急性髓性白血病和成髓細胞白血病，前髓細胞性白血病，骨髓單核細胞白血病，單核細胞性白血病和紅白血病)，慢性白血病(諸如慢性髓細胞(粒細胞)白血病，慢性髓性白血病和慢性淋巴細胞白血病)，真性紅細胞增多癥，淋巴瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤(無痛和高級形式)，多發性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥，重鏈病，骨髓增生異常綜合征，多毛細胞白血病和脊髓發育不良。可以使用披露的化合物和組合物治療的疾病的額外實例包括實體瘤，諸如肉瘤和癌，包括纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，軟骨肉瘤，成骨性肉瘤，環磷酰胺-抗性肉瘤和其它肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結腸癌，淋巴惡性腫瘤，胰腺癌，乳腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，肝細胞癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，髓樣癌，支氣管原癌，腎細胞癌，肝細胞瘤，膽管癌，絨毛膜癌，維爾姆斯瘤，宮頸癌，睪丸瘤，膀胱癌和CNS腫瘤(諸如神經膠質瘤，星形細胞瘤，髓母細胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，血管母細胞瘤，聽神經瘤，少突神經膠質瘤，腦膜瘤，黑素瘤，成神經細胞瘤和視網膜母細胞瘤)。圖1為例證異環磷酰胺代謝，包括丙烯醛和異磷酰胺芥產生的示意圖。9圖2表示IPM.Tris的X-射線粉末衍射。圖3表示IPM.Tris的示差掃描量熱(DSC)。圖4表示IPM.Tris的熱重分析(TGA)。圖5表示結晶IPM.Tris的掃描電子顯微鏡(SEM)影像。圖6表示IPM.(LYS)2與IPM.Tris在人MX-1乳腺癌異種移植物中的比較。圖7表示IP和口服給予IPM.Tris在人MX-1乳腺癌異種移植物中的抗腫瘤活性的比較。圖8a表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)2治療時RD和RH30橫紋肌肉瘤細胞的存活率。圖8b表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)r治療時SKES1和SKPNDW尤因肉瘤細胞的存活率。圖8c表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)r治療時OS230,0S229,0S222和SaOS骨肉瘤細胞的存活率。圖8d表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)r治療時SY01和HSSYII滑膜肉瘤細胞的存活率。圖9a表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)2每天1次或每天3次治療時RH30橫紋肌肉瘤細胞的存活率。圖9b表示在使用不同濃度的IPM.(LYS)2每天1次或每天3次治療時OS229骨肉瘤細胞的存活率。圖10表示對三種劑量方案(對照組，175mg/kg每日1次，或100mg/kg每日3次)的IPM.(LYS)2的每一種而言，以最大耐受量(MTD)在才直入CB17雌性SCID7'小鼠的環磷酰胺-抗性0S31骨肉瘤細胞系中給藥，導致腫瘤生長明顯延緩。圖11a表示植入CB17雌性SCID7'小鼠的0S31骨肉瘤細胞中在相對腫瘤體積方面的環磷酰胺抗性，其中治療包括與對照組相比給予環磷酰胺。圖lib表示植入CB17雌性SCID7'小鼠的OS33骨肉瘤細胞中在相對腫瘤體積方面的環磷酰胺抗性，其中治療包括與對照組相比給予IPM.(LYS)2。圖12表示在治療植入CB17雌性SCID7'小鼠的環磷酰胺抗性0S31骨肉瘤細胞中的相對腫瘤體積方面的IPM.(LYS)2的活性(與對照組相比100mg/kg每日3次)。圖13表示SCMX-1乳腺腫瘤對使用qldx5劑量的鹽水腹膜內(IP)和口H治療的響應。圖14表示SCMX-1乳腺腫瘤對使用qldx5劑量的IPM.Tris,IPM和IPM.(LYS)2腹膜內(IP)治療的響應。圖15表示SCMX-1乳腺肺瘤對使用qldx5劑量的IPM.Tris,IPM和IPM.(LYS)2口J!l治療的響應。圖16表示SCMX-1乳腺腫瘤對使用qldx5劑量的鹽水腹膜內(IP)和口力艮治療的響應。圖17表示SCMX-1乳腺肺瘤對使用qldx5劑量的IPM.Tris,IPM和IPM.(LYS)2腹膜內(IP)治療的響應。圖18表示SCMX-1乳腺腫瘤對使用qldx5劑量的IPM.Tris,IPM和IPM.(LYS)2口J良治療的響應。圖19表示MX-l乳腺腫瘤對使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以12mg/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量治療的效果。圖20表示使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以12rag/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量對存活率的影響。圖21表示使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以24mg/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量治療對MX-1乳腺癌胂瘤的作用。圖22表示使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以24mg/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量對存活率的影響。圖23表示使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以54mg/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量治療對MX-1乳腺癌腫瘤的作用。圖24表示使用IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥，以54mg/kg/天IPM.TrisQIDx5和8mg/kg多柔比星Q4Dx3的劑量對存活率的影響。圖25表示IPM.Tris/多柔比星的聯合用藥方案的毒性。圖26表示使用IPM.Tris與多西他賽的聯合用藥，以54mg/kgIPM.TrisQIDx5腹膜內(IP)和10mg/kg多西他賽Q6Dx3靜脈內(IV)的劑量治療對MX-1乳腺癌腫瘤的作用。圖27表示使用以36mg/kg的腹膜內(IP)劑量或81mg/kg的口服(PO)劑量給予的IPM.Tris治療對MX-1乳腺癌腫瘤的作用。圖28表示以36mg/kg的腹膜內(IP)劑量或81mg/kg的口服(PO)劑量給予的IPM.Tris對存活率的影響。圖29表示在雌性Sprague-Dawley大鼠中口服和靜脈內(IV)給予IPM.Tris的藥代動力學。圖30表示使用增加劑量的PO-或IV-給予的IPM.Tris的AUC。圖31表示使用增加劑量的PO-或IV-給予的IPM.Tris的Craax。圖32表示在25X:下和pH7.0緩沖液中的IPM的溶出穩定性(solutionstability)具體實施例方式/.//Wj及,類似參本文披露的組合物包括結晶IPM鹽或其類似物。在某些實施方案中，披露的鹽包括一種或多種陽離子。在某些實施方案中，所述陽離子可以為胺堿的共軛酸或可以為季銨陽離子。在某些實施方案中，披露的結晶化合物包括IPM或其類似物的鹽。這類化合物包括式(I)的結晶化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>說明書第7/44頁其中A+表示選自羥基化脂族胺類的質子化(共軛酸)或季銨形式的銨種類；且X和Y獨立地表示離去基。在某些實施方案中，X和Y獨立地為卣素。優選X和Y相同。在某些這類實施方案中，X和Y均為Cl。胺堿的合適的共輒酸的具體實例包括，但不限于一-，二-或三-(2-羥乙基)胺，2-羥基-叔丁胺，N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)胺和三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)的共軛酸。在某些這類實施方案中，A+為Tris的共軛酸。在某些實施方案中，本發明涉及包含IPM或其類似物的結晶鹽的化合物，其中IPM或其類似物與抗衡離子(優選Tris)以2:1-1:2,優選l:l的比例存在。在某些實施方案中，結晶組合物包含一種以上結晶的多晶型，諸如2，3，4乃至5種結晶的多晶型。在某些可選擇的這類實施方案中，結晶組合物包含單一的結晶多晶型。在某些實施方案中，這類鹽比作為游離酸的IPM和IPM類似物更穩定。在某些這類實施方案中，化合物為1:1比例的IPM和Tris的結晶鹽。在某些這類實施方案中，結晶固體的熔點在約100-約IIO'C，約102-約108°C，約103-約106。C乃至105—106匸。在某些實施方案中，化合物，例如1:1比例的IPM和Tris的結晶鹽至少約為80%純，至少約85%純，至少90%純，至少95%純，至少97%純，至少98%純乃至至少99%純。在某些這類實施方案中，無單一雜質超過1°/。重量。在某些實施方案中，測定相對于組合物中所有其它成分的純度，而在其它實施方案中(例如其中化合物為藥物組合物或凍千混合物的組成部分)，可以測定相對于化合物的降解產物(例如化合物的含磷的降解產物)或制備化合物時的副產物(例如化合物的含磷的降解產物)的純度，由此排除有目的的添加到組合物中的其它成分。在某些實施方案中，化合物為IPM鹽或其類似物，其中所述鹽在室溫(例如約23°C)和有水存在下的半衰期大于在相同條件下有水存在下IPM(即作為游離酸)的半衰期。在某些這類實施方案中，IPM鹽在水存在下的半衰期等于或大于2倍長的有水存在下IPM自身的半衰期，更優選等于或大于5倍的IPM的半衰期。在某些實施方案中，化合物為IPM鹽及其類似物，其中所述鹽在室溫和有水存在下穩定至少1天，2天，3天，4天，5天，6天乃至1周。本文所用的術語"穩定"意旨在一定時間期間(例如1個月，2個月，3個月，6個月，1年等)后IPM鹽或其類似物的純度為起始純度的至少90%，至少95%,至少97%乃至至少99%，例如，可以通過HPLC，使用蒸發光散射檢測(ELSD)測定。例如，可以使用C18柱和具有包含在水中的0.005M六氟丁酸和0.r/。三氟乙酸的流動相的等度系統進行這類測定。在某些實施方案中，本發明涉及包含下式化合物的凍千物oA+"0-g-NHCH2CH2X^IHCH2CH2Y其中A+表示選自包括堿性氨基酸，雜環胺類，取代和未取代的吡啶類，胍類和脒類的脂族胺類和芳族胺類的質子化(共軛酸)或季銨形式的銨種類，且X和Y獨立地表示離去基。用于本發明化合物的合適的胺堿(及其相應的銨離子)的具體實例包括，但不限于吡啶，N,N-二甲氨基吡啶，二氮雜雙環壬烷，二氮雜雙環十一碳烯，N-曱基-N-乙胺，二乙胺，三乙胺，二異丙基乙胺，一-,二-或三-(2-羥乙基)胺，2-羥基-叔丁胺，三(羥甲基)氨基甲烷，N，N-二曱基-N-(2-羥乙基)胺，三-(2-羥乙基)胺和N-甲基-D-葡糖胺。在某些實施方案中，本發明涉及包含下式化合物的凍干物OHO—-NHCH2CH2XnI^HCH2CH2Y就該式而言，B在每個n的情況下均可以獨立地選自堿性分子。在該式的一個實施方案中，B可以選自堿性氨基酸，無環脂族胺類，二-和三烷基胺類，雜環脂族胺類，芳族胺類，取代和未取代的吡啶類，環狀和非環狀(無環)胍類、和環狀和非環狀脒類。一般而言，n為l-約3，使得該式可以包括不同的堿性分子。繼續就該式而言，X和Y為離去基。本領域技術人員可以理解，舉例的異磷酰胺芥結構包括酸性質子，因此在生理pH和有堿(諸如B)存在下主要作為其共軛堿存在。同樣，堿性基團B在生理pH和有異磷酰胺芥和異磷酰胺芥類似物存在下主要作為其共軛酸存在。披露的化合物的典型實施方案如表1中所示。表19[B]HO-NHCH2CH2Xnf^HCH2CH2YBnXY賴氨酸2CICINH32CICI環己胺2CICI薩曱基-D-葡糖胺2CICI^滬二曱氨基吡。定1CICI精氨酸2CICI賴氨酸2CI-S02CH3賴氨酸2Br-S02CH3三(羥曱基)氨基甲烷1CICI〃.逸會凝和才法在某些實施方案中，本發明涉及包含IPM鹽或其類似物和藥用稀釋劑或賦形劑的藥物組合物。在某些這類實施方案中，該藥物組合物為溶液，優選包含IPM或IPM類似物的鹽水溶液。在某些這類實施方案中，IPM鹽或IPM類似物鹽在溶液中的濃度在約3rag/mL-約30mg/raL乃至更高。例如，可以通過將本文披露的式(I)的結晶化合物、或者IPM或IPM類似物的凍干物溶于鹽水溶液，例如同時在室溫下攪拌來制備這類鹽水溶液。在某些這類實施方案中，制備該鹽水溶液，使得氯化鈉的濃度約為0.5%,0.9%，2.5%,2.7%,3.0%，4.0%乃至5.0°/。。在某些實施方案中，可以由式(I)的結晶化合物、或者IPM或IPM類似物的凍干物制備水溶液。這類水溶液(例如在水中或在等滲鹽水溶液中)在室溫下穩定至少約60分鐘，80分鐘，100分鐘，120分鐘，140分鐘乃至在室溫下穩定約160分鐘。在某些實施方案中，式(I)的結晶化合物，諸如IPM和Tris的鹽在水中具有至少約30mg/mL，40mg/mL，50mg/mL，60mg/mL，70mg/mL乃至80mg/mL的溶解度。在某些實施方案中，式(I)的結晶化合物，諸如IPM和Tris的鹽在水中具有至少約200mg/mL，至少約500mg/mL，至少約800mg/mL，至少約1000mg/mL，至少約1200mg/mL乃至至少1400mg/mL的溶解度。在某些實施方案中，所述結晶化合物在水中的溶液的pH在約4.5-約10,諸如約5.0-8.5,優選約5.0-約7.0。在某些實施方案中，這類溶液的pH約為5.0。在某些實施方案中，本發明涉及包舍式I的結晶化合物和鹽溶液的試劑盒。本文披露的凍干物包括使用一個或多個當量的堿配制的IPM和IPM類似物。因為IPM及其類似物對酸不穩定并且為酸性的，所以目前披露的凍干物提供了更大的穩定性和其它優點。披露的制劑在合成，穩定性和生物利用度方面的優點在本領域技術人員考慮到本說明書披露的內容時顯而易見。使用一個或多個當量的堿配制的IPM和IPM類似物的額外優點可以包括在水或體液中的溶解度增加。在某些實施方案中，披露的凍干物為包括一個或多個陽離子的異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物的鹽。某些實施方案中，所述陽離子可以為胺堿的共軛酸或可以為季銨陽離子。異磷酰胺芥及其類似物的合適的抗衡離子包括堿的共軛酸(除非上下文中明確表示指定游離胺類，否則作為本文所用的術語意旨應將胺類理解為包括其共軛酸)，所述堿包括堿性氨基酸，脂族胺類，雜環胺類，芳族胺類，吡啶類，胍類和脒類。在脂族胺類中，無環脂族胺類和環狀和無環二-和三-烷基胺類特別適用于本發明的化合物。此外，季銨抗衡離子為可以使用的適當抗衡離子的實例。在某些實施方案中，這類凍干物可以還包含賦形劑。合適的賦形劑包括，但不限于甘露醇，無水乳糖，蔗糖，D(+)-海藻糖，右旋糖酐40和聚維酮(PVPK24)。在某些實施方案中，本文披露的化合物和組合物，諸如凍干物在16室溫下穩定至少2周，至少3周，至少1個月，至少2個月，至少3個月乃至至少6個月。在某些實施方案中，所述鹽在較低溫度下(例如OIC，2'C，4'C，6'C等)穩定至少2周，至少3周，至少1個月，至少2個月，至少3個月乃至至少6個月。在某些這類實施方案中，所述化合物和組合物，諸如凍干物在較低溫度(例如約O'C-約20r，約0'c-約iox:乃至約2'c-約rc)穩定至少i個月，至少2個月，至少4個月乃至至少6個月。在某些實施方案中，所述凍干物包括IPM鹽或其類似物。在某些實施方案中，所述凍干物包括IPM.Tris或IPM(LYS)2，優選IPM.Tris，且在特別優選的實施方案中，這類組合物還包含填充劑，諸如甘露醇。在另一個實施方案中，上述鹽可以包括仲胺或銨基。在一個實施方案中，本文披露的凍干物包括每當量異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物中l個以上當量的胺。這類實施方案包括具有非整數比的胺與異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物的凍干物。在某些實施方案中，所迷凍干物具有2:l或3:1比例的胺與異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物的凍干物。在制備實施方案中，生產每當量異磷酰胺芥中包含2個當量的胺堿的鹽。在某些實施方案中，用于形成異砩酰胺芥或異磷酰胺芥類似物的鹽的胺堿包括一個以上氨基；這類堿可以稱作"多元的"。更具體地說，可以使用的多元堿的某些實例具有兩個氨基；這類化合物可以稱作"二元的"。例如，一種合適的二元分子為M^"二曱氨基吡啶，它包括兩個堿性氨基。本文披露的凍干物的某些實施方案包括異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物和一個當量的二元胺。本文披露的某些異磷酰胺芥或異磷酰胺芥類似物凍干物包括兩個離去基。不受理論約束，認為兩個離去基在體內被生物分子親核體，諸如核酸和蛋白質取代，由此交聯生物分子。術語"離去基"意旨可以被親核體取代的基團。就目前披露的化合物而言，離去基意旨可以被取代而形成吖丙啶錯中間體或可以直接被生物親核體，諸如核酸親核體取代而形成例如7-烷基化胍鈸種類的基團。合適的離去基的實例包括卣素和磺酸酯類(-S02R)。在披露的異磷酰胺類似物鹽的一個實施方案中，化合物為"混合"的離去基化合物，包括兩種類型的離去基，例如卣素和磺酸酯或兩種不同的卣素，諸如溴化物和氯化物。Struck的美國專利US6,197,760中教導了制備這類混合離去基化合物的方法。在某些實施方案中，披露的鹽的凍干物與異磷酰胺芥自身的凍干制品相比改善了再溶解穩定性。在某些這類實施方案中，由披露的IPM或其類似物的鹽和賦形劑，諸如IPM或其類似物和Tris、任選包括賦形劑(例如填充劑，諸如甘露醇)制備的在鹽水溶液(優選5%氯化鈉)中再溶解的凍干物維持>90%效能至少約30分鐘，60分鐘，90分鐘，120分鐘，140分鐘乃至至少約160分鐘。在某些這類實施方案中，將IPM或其類似物的鹽，諸如IPM.Tris，或由IPM或其類似物的鹽制備的凍干物，諸如IPM.Tris和任選的賦形劑，例如填充劑，諸如甘露醇溶于鹽水溶液，在室溫下維持至少96%,至少97°/。，至少98%乃至至少99%純度至少約30分鐘，60分鐘，90分鐘，3小時乃至4.5小時或4.5小時以上。在某些實施方案中，這類再溶解的溶液比在相同條件下再溶解的IPM.(LYS)2溶液更穩定。在某些這類實施方案中，再溶解的IPM.(LYS)2的降解速度是IPM或其類似物的鹽的至少1.25倍，至少1.5倍，至少2倍乃至至少3或4倍。在某些實施方案中，凍干物包含IPM或其類似物的鹽和賦形劑，諸如包含IPM或其類似物，T"s和甘露醇的凍干物，該混合物在水中具有至少約30mgM，40mg/mL,50mg/mL，60rag/mL，70mg/mL乃至80rag/mL的溶解度。在某些實施方案中，披露的IPM或其類似物的鹽的凍干物比作為游離酸的異磷酰胺芥自身的凍干制品更穩定。在某些優選的這類實施方案中，披露的鹽的凍干物具有比異磷酰胺芥自身的凍干制品更長的貯存期間，優選至少2倍長，更優選至少5倍長。在某些實施方案中，凍干物由可以在溶出前結晶或不在溶出前結晶的IPM的Tris鹽構成。如上所述，在某些實施方案中，這類凍干物還包含賦形劑，例如填充劑，優選甘露醇。在某些實施方案中，凍干物包含填充劑，其選18自甘露醇，無水乳糖，蔗糖，D(+)-海藻糖，右旋糖酐40和聚維酮(PVPK24),優選甘露醇。在某些實施方案中，添加這類填充劑與沒有填充劑存在的凍干制品相比改善了凍干物的穩定性。在某些這類實施方案中，這類凍干物在約-70。C,約-20'C乃至5'C下在例如1個月，2個月，3個月，6個月，9個月，l年乃至2年或2年以上期間內穩定。在某些這類實施方案中，其中凍干物包含填充劑，諸如甘露醇，凍干物包含約1°/。-約10%,或約1%-約5%(w/v)的填充劑，例如甘露醇。在凍干前或再溶解時，這類組合物可以包含約15mg/mL-約25rag/mL的IPM和/或胺，諸如濃度約0.5-約1.5M的Tris,優選與IPM相比近似等摩爾量。在某些實施方案中，當在凍干前制備溶液時，將它們一起以如本文披露的結晶IPM.Tris鹽的形式加入，而不作為單獨的成分添加匿和胺，諸如Tris。在某些實施方案中，本發明涉及包括如本文披露的凍干物和鹽水溶液的試劑盒。可以通過口月良，局部，透皮，非腸道，通過吸入或噴霧給予本文披露的化合物，并且可以以包含常用無毒性藥學可接受的載體，佐劑和媒介物的單位制劑的形式給予它們。在某些實施方案中，優選通過注射經非腸道給予披露的IPM鹽及其類似物。在某些實施方案中，優選口服給予披露的IPM鹽及其類似物。某些實施方案中，口服(PO)給予的IPM鹽及其類似物表現出與使用靜脈內(IV)給藥觀察到的類似的藥代動力學(PK)參數。正如本領域技術人員公認的，可以根據具體疾病，患者病情，化合物毒性和其它因素的不同將活性劑制成單次劑量或長期劑量。給予的化合物或多種化合物的治療有效量可以根據期望的效果和上述因素的不同而改變。對受試者給藥的藥物組合物可以包括載體，增稠劑，稀釋劑，緩沖劑，防腐劑，表面活性劑等以及選擇的分子。藥物組合物還可以包括一種或多種額外的活性組分，諸如抗微生物劑，抗炎劑，麻醉劑等。藥物組合物可以包括額外的成分，諸如栽體。用于這些制劑的藥學可接受的載體為常規的。E.W.Martin,MackPublishingCo.，Easton，PA，第21版(2006)的Remington，sPharmaceuticalSciences中描述了適合于本文披露的化合物的藥物遞送的組合物和制劑。一般而言，載體的性質取決于所用的特定給藥方式。例如，非腸道用制劑通常包含可注射流體，其包括作為媒介物的藥學上和生理學上可接受的流體，諸如水，生理鹽水，平衡鹽溶液，葡萄糖水溶液，甘油等。就固體組合物(例如，粉末，丸劑，片劑或膠嚢劑型)而言，常用的無毒性固體載體可以包括，例如藥用級甘露醇，乳糖，淀粉或硬脂酸鎂。除生物學中性載體外，給予的藥物組合物還可以包含少量無毒性輔助物質，諸如濕潤劑或乳化劑，防腐劑和pH緩沖劑等，例如乙酸鈉或月桂山梨坦。在某些實施方案中，將披露的化合物配制成口服劑型，諸如丸劑，片劑或膠嚢。在某些實施方案中，所述口服劑型為膠嚢。在某些實施方案中，這類口服劑型包含至少一種賦形劑，助流劑，稀釋劑，潤滑劑和/或崩解劑。在某些這類實施方案中，合適的賦形劑，助流劑，稀釋劑，潤滑劑和/或崩解劑包括，但不限于滑石粉，蒸氣沉積二氧化硅，淀粉，硅酸鈣，碳酸鎂，氧化鎂，十二烷基硫酸鎂，十二烷基疏酸鈉，乳糖，」徵晶纖維素，羥丙曱基纖維素，右旋糖，葡萄糖，蔗糖，淀粉，淀粉衍生物，碳酸鈣，磷酸氫鈣，碳酸鎂，硬脂酸鎂，硬脂酸鈣，硬脂酰富馬酸鈉，聚乙二醇4000,聚乙二醇6000，苯曱酸鈉，輕礦物油，氬化植物油，硬脂酸，山崳酸甘油酯，不溶性離子交換樹脂，羥基乙酸淀粉鈉，羧曱基纖維素鈉(交聯羧甲基纖維素鈉)，樹膠(例如瓊脂，瓜爾豆膠、黃原膠)，藻酸，藻酸鈉和交聚維酮。在某些這類實施方案中，口服劑型包含如本文披露的化合物和至少一種適合于使用吸濕性活性劑一起配制的賦形劑，助流劑，稀釋劑，潤滑劑和/或崩解劑。在某些這類實施方案中，口服劑型包含至少一種賦形劑，助流劑，稀釋劑，潤滑劑和/或崩解劑，其選自微晶纖維素，乳糖，羧甲基纖維素鈉，硬脂酸鎂，磷酸二鈣，羥丙基曱基纖維素和甘露醇。在某些實施方案中，將披露的化合物配制成可對人體受試者給藥。在該實施方案的方面中，藥物組合物包括約0.lmg/mL-約250mg/mL，諸如約20-約100mg/mLIPM鹽或其類似物的化合物。在一個方面中，將藥物組合物的某些實施方案配制成單位劑型。例如，這類單位劑型可以包含約lmg-約100mg或100mg-約1500mg，諸如約5rag-約200mg或200mg-約1500mg的披露的IPM鹽或其類似物/劑量單位。在某些實施方案中，劑量單位可以包含約15mg，約30mg，約45mg，約60mg，約75rag乃至約77mg的纟皮露的IPM鹽或其類似物。在某些實施方案中特別關注通過注射的和/或植入的藥物儲庫(例如包含多泡脂質體，諸如在DepoFoam中)來遞送本發明的化合物(SkyePharma，Inc，SanDiego，CA)(例如，參見Chamberlain等，Arch.Neuro.1993，50,261-264;Katri等，J,Pharm.Sci.1998，87，1341-1346;Ye等，J.ControlRelease2000，64，155-166;和Howell，CancerJ.2001，7，219-227)。本文披露的用于治療特征在于異常或病理性增殖活性或瘤形成的疾病的方法通過對受試者給予披露的化合物和組合物中的一種或多種來進行。可以按照披露的方法治療的疾病包括特征在于異常細胞生長和/或分化，諸如癌癥和其它瘤形成疾病的那些。可以使用披露的化合物和組合物治療的增殖性疾病的典型實例如下所列。可以使用本文披露的化合物和組合物治療的血液腫瘤的實例包括白血病，包括急性白血病(諸如急性淋巴細胞白血病，急性粒細胞性白血病，急性髓性白血病和成髓細胞白血病，前髄細胞性白血病，骨髓單核細胞白血病，單核細胞性白血病和紅白血病)，慢性白血病(諸如慢性髓細胞(粒細胞)白血病，慢性髓性白血病和慢性淋巴細胞性白血病)，真性紅細胞增多癥，淋巴瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤(無痛和高級形式)，多發性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥，重鏈病，骨髓增生異常綜合征，多毛細胞白血病和脊髓發育不良。可以使用本文披露的化合物和組合物治療的疾病的額外實例包括實體瘤，諸如肉瘤和癌，包括纖維肉瘤，粘液肉瘤，脂肪肉瘤，軟骨肉瘤，成骨性肉瘤，環磷酰胺(CPA)-抗性肉瘤和其它肉瘤，滑膜瘤，間皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結腸癌，淋巴惡性腫瘤，胰腺癌，乳腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，肝細胞癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，髓樣癌，支氣管原癌，腎細胞癌，肝細胞瘤，膽管癌，絨毛膜癌，維爾姆斯瘤，宮頸癌，睪丸瘤，膀胱癌和CNS腫瘤(諸如神經膠質瘤，星形細胞瘤，髓母細胞瘤，顱咽管瘤，室管膜瘤，松果體瘤，血管母細胞瘤，聽神經瘤，少突神經膠質瘤，腦膜瘤，黑素瘤，神經母細胞瘤和^L網膜母細胞瘤)。在某些實施方案中，本文披露的化合物對CPA和/或Ifos抗性腫瘤生長的作用優于單獨的CPA或Ifos。因此，本文披露的方法的一個方面包括用本文披露的IPM鹽或其類似物治療具有CPA和/或Ifos抗性瘤形成情況的受試者。在某些實施方案中，本文披露的化合物表現出比CPA和/或Ifos減小的毒性。例如，高劑量的CPA和/或Ifos因存在某些代謝物，諸如氯乙醛和丙烯醛而可能導致腎，膀胱和/或中樞神經系統毒性增加。在某些實施方案中，本發明的化合物在保持功效的同時減少或避免了這些或其它毒性代謝物的產生。本發明的化合物由此能夠提供治療性的治療作用，同時減少了可能與CPA和/或Ifos的代謝物相關的有害的副作用，諸如正常腎、膀胱或中樞神經系統細胞中的死亡。因此，本發明的化合物可用作CPA和/或Ifos的替代物。例如，本發明的化合物用于為患者制備血細胞和骨髓移植物。CPA和Ifos通常用于血細胞和骨髓移植物，并且本發明的化合物代表了有利的替代選擇，這是例如因為本發明的化合物降低了毒性和/或增加了功效。另外，本發明的化合物還可以用于那些不適于使用CPA和Ifos的血細胞和骨髓移植物，例如證實其中高劑量的CPA和Ifos毒性過大。可以在植入前幾分鐘，幾小時，數天，數周或數個月，特別是在植入前數天或數周給予本發明的化合物。此外，可以以單獨，多個和/或重22復劑型的形式和/或與在制備血細胞或骨髓移植物中的其它活性劑結合給予本發明的化合物。在某些實施方案中，本發明的化合物用于血細胞和骨髄移植物，例如，作為CPA和/或Ifos替代物的條件方案。此外，可以不使用保護措施(諸如在與CPA和Ifos聯合用藥中通常使用美司鈉和/或靜脈內水化)給予本發明的化合物。在另一個實施方案中，可以將本發明的化合物與CPA和/或Ifos聯用，例如在為患者制備血細胞和骨髓移植物、以及血細胞和骨髓移植物的條件方案中。包含本發明化合物中的一種或多種與CPA和/或Ifos的組合物提供了超過了單獨使用CPA和/或Ifos的額外的有益性，諸如毒性降低和/或功效增加。在所述方法的某些實施方案中，對受試者給予約0.2mg/kg/天-約20rag/kg/天的纟皮露的IPM鹽或其類似物。例如，可以對受試者給予約0.5-約10mg/kg/天，諸如約1-約7.5mg/kg/天的披露的化合物。在某些實施方案中，對受試者給予IPM，其類似物或它們的鹽，劑量(例如每日劑量)大于約1.0g，大于約1.5g，大于約2.0g乃至大于約2.5g。在某些實施方案中，所述IPM鹽為IPM.Tr",例如至多約2.0g，2.5g乃至3.0g。在某些實施方案中，對受試者給予作為鹽的IPM或其類似物，使得IPM或其類似物的劑量(例如每日劑量)(即僅考慮鹽的IPM陰離子，但不計組合物中抗衡離子或其它成分的重量)大于約0.4g,大于約0.6g,大于約0.8g乃至大于約1.0g。在某些實施方案中，將IPM作為如本文披露的組合物形式給予，其劑量大于約O.4g，大于約O.6g,大于約0.8g乃至大于約1.0g，例如至多約2.0g，2.5g乃至3.0g。在某些實施方案中，IPM鹽或其類似物的療程可以包括IPM或其類似物的總量(即僅考慮鹽的IPM陰離子，但不計組合物中抗衡離子或其它成分的重量)大于約0.8g，大于約1.0g,大于約1.5g乃至大于約2.0g。在某些實施方案中，可以將IPM鹽或其類似物的劑量每周一次，每周三次，每周五次，每天一次乃至每天兩次，優選每天一次給予。在某些這類實施方案中，可以給予一定療程的IPM鹽或其類似物，該療程為兩次或多次連續劑量。在某些實施方案中，治療過程可以包括每天一次給予IPM鹽或其類似物的劑量，持續2，3，4乃至5天，優選3天。這些劑量可以在連續或不連續的天時進行。在某些實施方案中，單劑量(例如每日劑量)可以包括一種以上劑型，例如單劑量可以包括兩種或多種膠嚢，片劑或丸劑。在某些實施方案中，均可以即刻給予包含多劑型的每日劑量，或可以在全天內間隔給予所述劑型的亞組。在所述方法的另一個實施方案中，對受試者給予的劑量(例如每曰劑量)約為1-約1500mg/m2,諸如約1-約700mg/m2，約5-約1000mg/m2，約5-約700mg/m2，約5-約500mg/m2，約600-約1200mg/ra2,約IOO-約1500mg/m2，約30-約600mg/m2，約10-約600mg/m2或約IO-約100mg/m2的如本文4皮露的IPM鹽或其類似物。例如，約10mg/m2,約12乃至14mg/m2。在治療本文披露的過度增殖性疾病的某些實施方案中，基于每曰多次給藥方案對受試者給予披露的化合物。在這類實施方案中，在至少兩天和多至不同的5天給予該化合物。在每日多次給藥方案的一個方面中，在連續天，諸如連續2-5天給予該化合物。可選擇地，在不連續天，諸如每隔一天對受試者給予該化合物。在所述方法某些實施方案中，對受試者給予一種或多種額外的治療劑與目前披露的化合物和組合物。例如，可以使用的額外治療劑包括微管結合劑，DNA嵌入劑或交聯劑，DNA合成抑制劑，DNA和/或RNA轉錄抑制劑，抗體，酶，酶抑制劑，基因調節劑和/或血管生成抑制劑。微管結合劑意旨與微管蛋白發生相互作用以便穩定微管形成或使其不穩定，由此抑制細胞分裂的活性劑。可以與IPM、其類似物或它們的鹽聯用的微管結合劑的實例包括，但不限于紫杉醇，多西他賽，長春堿，長春地辛，長春瑞濱(諾維本)，埃坡霉素，秋水仙堿，多拉司他汀15,諾考達唑，鬼臼毒素和根霉素。還可以使用這類化合物的類似物和衍生物并且它們為本領域技術人員眾所周知的。例如，摻入本發明化合物的合適的埃坡霉素和埃坡霉素類似物描述在國際公開號W02004/018478中，將該文獻引入本文作為參考。目前認為紫杉烷，諸如紫杉醇和多西他賽特別用作目前披露的化合物中的治療劑。額外有用的紫杉烷的實例，包括紫杉醇的類似物，由Holton的美國專利US6，610，860，Gurram等的US5，530，020和Wittman等的US5，912，264教導，將這些文獻各自完整地引入本文作為參考。合適的DNA和/或RNA轉錄調節劑，包括，但不限于放線菌素D，柔紅霉素，多柔比星及其衍生物和類似物，適用于與目前披露的化合物聯用。可以摻入披露的化合物的DNA嵌入劑和交聯劑包括，但不限于順鉑，卡鉑，奧沙利鉑，絲裂霉素類，諸如絲裂霉素C，博來霉素，苯丁酸氮芥，環磷酰胺及其衍生物和類似物。適合于用作治療劑的DNA合成抑制劑包括，但不限于曱氨蝶呤，5-氟-5'-脫氧尿苷，5-氟尿嘧啶及其類似物。適用于與目前披露的化合物聯用的合適的酶抑制劑的實例包括，但不限于喜樹堿，依托泊苦，福美坦，曲古抑菌素及其衍生物和類似物。適用于與目前披露的影響基因調節的化合物聯用的合適的治療劑包括導致一種或多種基因的表達增加或減少的活性劑，諸如，但不限于雷洛昔芬，5-氮胞苷，5-氮雜-2'-脫氧胞苷，他莫昔芬，4-羥基他莫昔芬，米非司酮及其衍生物和類似物。血管生成抑制劑為本領域公知的并且合適的血管生成抑制劑的實例包括，但不限于血管生成抑制因子K1-3，星狀孢子素，染料木黃酮，夫馬潔林，甲羥孕酮，舒拉明，干擾素-a，金屬蛋白酶抑制劑，血小板因子4，生長抑素，血小板反應蛋白，內皮他丁，沙利度胺及其衍生物和類似物。屬于或不屬于上述類別的一種或多種的其它治療劑，特別是抗腫瘤藥也適合于與目前披露的化合物聯合給藥。作為實例，這類活性劑25包括阿霉素，芽菜配基，雷帕霉素，2-嗜啶肌苷(zebularine)，西咪替丁及其衍生物和類似物。在某些實施方案中，將IPM鹽或其類似物與DNA和/或RNA轉錄調節劑，諸如多柔比星聯合給藥。在某些可替代的實施方案中，將IPM鹽或其類似物與微管結合劑，諸如多西他賽或紫杉醇聯合給藥。在某些實施方案中，本文所述聯合用藥實際上可以起協同作用，即IPM鹽或其類似物和其它治療劑的聯合用藥的治療作用大于以相同量分別給予兩種或多種活性劑時的各個作用的總和。在某些這類實施方案中，這類協同作用可以允許給予亞治療劑量的IPM鹽或其類似物。在某些這類實施方案中，給予亞治療劑量可以減少或避免與高劑量IPM鹽或其類似物相關的副作用，例如本發明的方法的優勢因允許常規的抗癌藥以較低劑量發揮更大的作用而超過了現存的聯合療法。在某些實施方案中，當與IPM鹽或其類似物聯合給藥時，額外的活性劑的功效得到改善。在某些這類實施方案中，額外的活性劑為化療劑，包括，但不限于微管結合劑，DNA嵌入劑或交聯劑，DNA合成抑制劑，DNA和/或RNA轉錄抑制劑，抗體，酶，酶抑制劑，基因調節劑和/或血管生成抑制劑。在某些這類實施方案中，當與IPM鹽或其類似物聯合給藥時，微管結合劑，諸如多西他賽或紫杉醇的功效得到改善。在某些可選擇的這類實施方案中，當與IPM鹽或其類似物聯合給藥時，DNA和/或RM轉錄抑制劑，諸如多柔比星的功效得到改善。在某些實施方案中，所述IPM鹽或其類似物為IPM.Tris。本文所用的術語"次治療劑量"包括可以穩定或減小腫瘤體積，但在該劑量乃至不能單獨提供可測量得到的治療效果的劑量下可以不被視為有效治療的劑量。在某些實施方案中，以約100mg-約500nig，約150mg-約400mg乃至約175mg-約300mg的劑量給予IPM鹽或其類似物。在某些實施方案中，以約150mg,約175mg，約185mg,約190mg，約200mg，約225mg，約250mg，約275mg,約285mg,約290乃至約300mg的劑量給予IPM鹽或其類似物。在某些這類實施方案中，口服給予上述劑量的IPM鹽或其類似物。在某些這類實施方案中，可以與多西他賽聯合給藥的IPM鹽或其類似物的劑量在約100mg-約200mg，約llOmg-約180mg乃至約115-約150mg。在某些這類實施方案中，可以與多西他賽聯合給藥的IPM鹽或其類似物的劑量在約100mg，約110mg,約115mg，約125mg，約135mg，約140mg,約145mg，約155mg，約165mg，約175mg,約185mg乃至約200mg。在某些這類實施方案中，可以與多西他賽聯合給藥的IPM鹽或其類似物的劑量在約50mg-約200g，約75mg-約195mg乃至約80-約190mg。在某些這類實施方案中，可以與多西他賽聯合給藥的IPM鹽或其類似物的劑量在約50mg，約70mg,約80mg，約90mg，約95mg，約100mg,約110mg，約120mg,約130mg，約140mg，約150rag,約160mg，約170mg,約180mg,約190mg乃至約200mg。///.定乂物，組合物和方法和對本領域技術人員提供實施本發明披露內容的指導。還可以理解本說明書中披露的術語的目的僅在于描述具體的實施方案和實施例，但不起限定作用。范圍在本文中可以表示為從"約"一個具體值和/或到"約"另一個具體值。當表示這類范圍時，另一個實施方案包括從一個具體值和/或到另一個具體值。類似地，當用前綴"約"將值表示為近似值時，可以理解該具體值構成另一個實施方案。進一步可以理解所述范圍的各端點相對于另一個端點而言是有意義的并且與另一個端點彼此獨立。術語"無環脂族胺"意旨如上所述脂族胺，其中脂族基團中的至少一個為無環的。本文所用的"脂族胺"意旨式NRH3的化合物，其中R1—3中的至少一個為脂族基團。本文所用的術語"血管生成抑制劑"意旨分子，包括，但不限于生物分子，諸如肽類，蛋白質類，酶，多糖類，寡核苷酸，DNA,RNA，重組載體和起抑制血管生長的作用的小分子。血管發生涉及某些病理學過程，例如為涉及疾病諸如糖尿病性視網膜病，慢性炎性疾病，類風濕性關節炎，皮炎，銀屑病，胃潰瘍和大部分類型的人體實體瘤的病理學過程。術語"雜環胺"意旨式NR'R^的化合物，其中RH中的至少一個為雜環基、或R1、112和/或113與它們共有的氮原子一起形成環。術語"離去基"意旨可以被親核體取代的基團。就目前披露的化合物而言，離去基意旨可以被取代而形成吖丙啶錯中間體或可以被生物分子親核體，諸如核酸親核體直接取代而形成例如7-烷基化胍錯鹽種類的基團。合適的離去基的實例包括鹵素和磺酸酯類(-S02R)。在披露的異磷酰胺類似物鹽的某些實施方案中，化合物為"混合"的離去基的化合物，包括兩種不同乘型的離去基，例如鹵素和磺酸酯或兩種不同的卣素，諸如溴化物和氯化物。Struck的美國專利US6，197，760中教導了制備這類混合離去基化合物的方法。"瘤形成"意旨異常和不受控制的細胞生長的過程。瘤形成為增殖性疾病的一個實例。瘤形成產物為贅生物(一種腫瘤)，其是因過度細胞分裂導致的組織異常生長。未轉移的腫瘤稱作"良性的"。侵害周圍組織和/或可以轉移的腫瘤稱作"惡性的"。"任選"或"任選地，，意旨隨后所述事件或情況不一定發生，該描述包括所述事件或情況發生的情況和不發生的情況。本文所用的術語"穩定"意旨化合物在至少5天內或在指定時間期間內的降解不超過5%，優選不超過2%乃至1%。可以通過^NMR，HPLC或其它合適的方式監測這類降解。本文所用的和如本領域中充分理解的"治療，，為用于獲得有益的或期望的效果，包括臨床效果的手段。有益的或期望的臨床效果可以包括，但不限于減輕或改善一種或多種癥狀或病情，減輕疾病程度，穩定疾病狀態(即不惡化)，防止疾病擴散，延緩或減緩疾病進展，改善或緩解疾病狀態，使其消退(無論是部分還是全部)，無論是對于可檢測到的還是不能檢測到的疾病。"治療"還可以意旨比如果不接受治療預計的存活期延長的存活。-滋辨通過下列非限制性實施例進一步解釋上述披露的內容。-滋辨J向反應器中添加Tris(103.3mg)和MeCN(3mL),隨后添加在MeCN(3mL)中的IPM(200.5mg)。將該反應混合物攪拌過夜。然后通過過濾收集固體并且用MeCN洗滌濾餅。在真空中干燥濾餅至恒重而得到終產物(296mg)。使終產物進行X-射線粉末衍射以證實結晶度(圖2)。通過DSC進一步支持該結晶度，其中尖銳峰出現在105.77處(圖3)。另外，通過TGA發現IPM.Tris鹽在125'C左右表現出0.7692%的重量損失(圖4)。最后，SEM表現出IPM.Tris具有板狀結晶形狀。通過'HNMR監測結晶IPM.Tris的穩定性并且發現在室溫下保持穩定至多6天。通過DSC監測晶體結構的穩定性，DSC顯示IPM.Tris結晶在室溫下的10天過程中不吸收水或結構改變。向反應器中添加Tris(8.563g)和DMF(40mL)并且加熱至形成澄清溶液。在將該溶液冷卻至室溫后，加入IPM。攪拌該混合物以便形成澄清溶液。然后向該溶液中加入乙腈(40raL)和少量晶種，隨后緩慢添加MTBE(240mL)而得到漿液。將該漿液再攪拌1小時，此時通過過濾收集沉淀并且用MTBE(80mL)洗滌濾餅。在室溫下和真空中干燥濾餅至恒重而得到終產物(23.2g)。將30-40mg來自體內通道的MX-1人乳腺腫瘤碎片經皮下植入棵小鼠的乳腺脂肪墊并且在開始治療前使其重量達到75-200mg。在植入腫瘤后第IO天時開始治療；經腹膜內每天一次給藥，持續5天。當對IPM歸一化劑量時，IPM.(LYS)2(43%IPM和57%Lys)和IPM.Tris對MX-1腫瘤表現出類似的活性(參見圖6)。將30-40mg來自體內通道的MX-1人乳腺肺瘤碎片經皮下(sc)植入棵小鼠的乳腺脂肪墊并且在開始治療前使其重量達到75-200mg。在植入腫瘤后第IO天時開始治療；經腹膜內或口服每天一次給藥，持續5天。在通過口服或全身給藥時，可以如實施例1中所述制備的IPM.Tris在對每次給藥而言的最大耐受劑量下對MX-1腫瘤的活性相等(參見圖7)。《滋^J勿應增應縱通過微量培養四氮唑法測定生長抑制。簡言之，將細胞以500個細胞/孔的密度接種在96-孔平底微量滴定板上的10QiuL培養基中。在過夜孵育后，加入包含IPM.(LYS)2的100^L培養基以便得到特定的終濃度和200pL/孔的終體積。數據點代表平均存活率和誤差棒形圖(一式三份進行的每次實驗的標準偏差)。在120小時時，通過將3-[4，5-二甲基瘞唑-2-基]-2，5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT，Sigma，St.Louis，MO)線粒體轉化成甲臢(formazine)來測定治療和未治療細胞的相對代謝活性。在藥物治療完成時，向每個孔中加入250網MTT并且在37°C，5%C02下孵育6小時。將曱賸結晶溶于DMSO并且使用飄SAmax分光光度計(MolecularDevices,Sunnyvale,CA)測定595nm處的光密度。將存活率定義為治療樣品在595nm處的吸光度除以對照組樣品在570nm處的吸光度。將ICs。定義為在治療細胞的存活率為對照組存活率的50°/。時的濃度(治療/對照=0.5)。處^神移控樹模f將CB17雌性SCID7'小鼠(TaconicFarras，Germantown，NY)植入腫瘤皮下的側腹腫痛。在St.JudesChUdren'sCancerResearchHospital建立0S31腫瘤品系并且如上所述(20)。為了使用0S1腫瘤植入，使用4%異氟烷對小鼠實施麻醉。在小鼠側腹做小切口，然后皮下植入4mmx4mm的腫瘤切片。每天使用IPM.(LYS)r治療CB17雌性SCID7'小鼠(TaconicFarms,Germantown，NY),從第1天開始通過尾靜脈注射持續1或3天，每隔21天一次，持續2個循環。將不帶有腫瘤的5只小鼠指定為每個治療組。使用75mg/kg/天，100mg/kg/天，150mg/kg/天或200mg/kg/天的IPM.(LYS)2治療小鼠。在隨機化或死亡時將毒性結果定義為大于或等于20%動物體重的重量損失將MTD定義為無毒性發生時的最高劑量。當腫瘤的直徑接近0.20-0.7cm時，將帶有腫瘤的小鼠隨機分入5-8只小鼠的組，其中1個治療組和1個對照組。對治療小鼠每天腹膜內注射90mg/kg/天劑量的他西多丁，從第1和21天開始持續5天。假如為球形肺瘤，那么通過如下z^式確定體積mm3='/6(D)d2，其中D為最大直徑且d為與D垂直的直徑。將體積表示為相對腫瘤體積(RTV),其為任意指定時間點的腫瘤體積除以起始腫瘤體積。每周最少1次測定治療和對照組小鼠的RTV。小薦/^，膚禱^和鍵#夢為、浙申斧使用上述Houghton等定義的標準將進行性疾病定義為從全部研究期間的原始腫瘤體積消退小于50%(RTV>0.5)和在本研究期間結束時腫瘤體積增加大于25%(RTV>1.25)。在全部研究期間的自始至終穩定的疾病腫瘤減少不超過原始腫瘤體積的50%(RTV>0.5)且在本研究期間結束時胂瘤體積增加小于25%(RTV<1.25)。將部分響應定義為腫瘤體積的減少大于50%(RTV<0.5)，而可測定的腫瘤塊大于0.10cm3。將在治療期(6周)過程中的任意時間點的可測定的腫瘤塊損失(<0.10cm3)定義為完全響應(CR)。將"持續的CR"定義為在6周研究期過程中起始療法后的任意點可測定的腫瘤塊減小(<0.10cm"而不再生長。排除在第9周前或腫瘤達到起始體積4倍前死亡的小鼠。統計學分析基于無事件生存率(EFS)。將事件定義為4x(即起始腫瘤大小的4倍)的相對腫瘤體積或死亡。將EFS定義為從研究開始到事件發生的時間。就那些截至到6周、即本研究結束時未發生事件的腫瘤而言，此時排除EFS時間。將確切的時序檢驗用于比較治療組與對照組之間的無事件生存分布。另夕卜，使用Wilcoxian-Mann-Whitney31檢驗比較第22天對照組小鼠與治療組小鼠的RTV。這就允許比較一個循環的他西多丁治療后和未治療小鼠發生事件時或接近發生事件時的肺瘤體積。所用的腫瘤細胞系包括RD和RH30橫紋肌肉瘤品系(美國模式培養物保藏中心，Manassas，VA)，Saos-2骨肉瘤品系，SKPNDW和SKES1尤因肉瘤品系，和HSSYII和SYOI滑膜肉瘤品系。使細胞生長在37'C,5%(:02的MEM培養基單層(Saos-2，SY0-1，HSSY-II)，DME(SK-PN-DW,RD)或固I(RH30)中，所述培養基補充了1(^胎牛血清(Invitrogen，Carlsbad，CA)，0.5%青霉素/鏈霉素(Invitrogen，Carlsbad,CA)和1%葡糖胺(Invitrogen，Carlsbad,CA)。結果如下所示(圖8和9)。<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>對環磷酰胺(CPA)和異環磷酰胺(IFOS)的耐受性是癌癥治療中需要克服的主要障礙。具有CPA-抗性人肉瘤細胞的異種移植物的小鼠在使用IPM.(LYS)2治療時肉瘤生長減少了5-倍以上；CPA療法無作用(圖10-12)。入傳銀^試驗安全性和劑量范圍I期研究使用每日給予IPM.(LYSh，連續3天，每4周進行一次(l個循環)，結果證實了在肉瘤(2/11受試者，包括IFOS療法失敗者的至少l位)和間皮瘤(具有長期的穩定疾病的l位受試者)中的臨床活性證據。使用該方案的IPM.(LYS)2的最大耐受劑量(MTD)為400mg/m7d。幾乎沒有骨髓毒性且無出血性膀胱炎(膀胱毒性)或CNS毒性。劑量限制性毒性的特征在于電解質失衡。這一MTD與大于25g/W的IF0S劑量相差無幾并且該劑量達到了高于殺傷50%人肉瘤細胞系的25倍劑量的血清水平。辨f和才法動物管理5至6周齡雄性CD2F1小鼠，購自FrederickCancerResearch和DevelopmentCenter(Frederick,MD)。腫瘤模型使用23-標準規格針頭給小鼠腹膜內(ip)植入P388鼠白血病的100萬個細胞。將P388腫瘤品系作為體內通道維持。將腫瘤植入的當天命名為第0天，其中治療從腫瘤植入后的第l天開始。給足夠數量的小鼠植入，從中選擇體重在盡可能窄范圍的動物用于本試驗。藥物配制在治療的第一天(第l天)在鹽水中配制70mg/mL濃度的提供在預先稱重的100mg小瓶中的IPM.(LYS)2。然后將部分該溶液稀釋至46.65，23.35，14,9.35,4.65和2.8mg/mL的較低給藥濃度。在隨后的治療天數時，配制14mg/mL的IPM.(LYS)2，然后將部分該溶液稀釋至較低給藥濃度。基于實際體重給予全部注射，其中注射體積為0.2mL/10g體重。藥物治療本研究由每組8只小鼠的8個治療組和具有IO只小鼠的2個媒介物治療對照組組成，則在治療的第一天總計有84只小鼠。在第1天作為單次注射給予IPM.(LYS)2(qldx1)，以po給予1400、933和467mg/kg的劑量和以ip給予280mg/kg的劑量。每天還給予IPM.(LYS)2,在po給予的280，187和93mg/kg/劑量的劑量下和在ip給予的56mg/kg/劑量的劑量下連續5天(qldx5)。在第1天時使用po給予的鹽水作為單次注射治療l個對照組。使用qldx5治療方案用po給予的鹽水治療第二個對照組。研究期間在腫瘤植入后61天終止本研究。在研究終止前對瀕臨死亡的任J可動物實施安樂死。參數評價基于平均死亡天數的非特異性死亡的數量，平均死亡天數和壽命增加并且表示為百分比WILS);平均存活時間和基于平均存活時間計算的。/JLS。統計學分析各動物的存活時間用作壽命表分析的終點(分層Kaplan-Meier評估，隨后是Mantel-Haenszel時序檢驗)，以便對各組之間的存活數據進行統計學比較。壽命表分析能夠使用未達到終點而排除它們的動物來比較各組之間的存活數據。潛果媒介物治療的對照組中的平均死亡天數為11.0，其中在10-14天之間出現死亡。在所有動物中均存在腹水。在第1天時給予的作為單次治療的po給予的IPM.(LYS)2在1400和933mg/kg劑量下對小鼠而言具有毒性。在接受使用1400mg/kg劑量治療的組中，l只動物死亡，4只動物因瀕臨死亡而在第5天實施安樂死，2只動物在第6天實施安樂死，最后1只在笫10天時動物死亡。在接受使用933mg/kg劑量治療的組中，6只動物因瀕臨死亡而在笫5天實施安樂死，本組中剩余的2只動物在第9天時死亡。在這兩個治療組中尸檢未顯示存在腫瘤。在動物死亡或安樂死前，在分別接受1400和933mg/kg劑量的IPM.(LYS)2組中觀察到24%和22%的顯著體重損失。作為單次po治療的467mg/kg劑量給予的IPM.(LYS)2得到更好地耐受；然而，在第8天時因瀕臨死亡而對2只動物實施安樂死。該組的平均最大體重損失為8%。該組中剩余的6只動物在第11-15天之間死亡并且在尸檢時確定存在腹水。該治療組中的ILS為9%,無論何種計算均基于平均死亡天數或平均存活時間。該組中的存活數據與媒介物治療的對照組(第1組，治療qldxl)的存活數據的統計學比較顯示無顯著性差異。34作為單次注射ip給予的280mg/kg劑量的IPM.(LYS)2得以耐受而無死亡并且最小平均體重損失(4%，1g)。該組的死亡平均天數為34.5，ILS為214y。。平均存活時間為38.0天，ILS為245。/。。另外，2只動物直到第61天的研究終止時仍然存活。尸檢未顯示存在腫瘤。對治療組和媒介物治療的對照組(第1組，治療qldxl)的存活數據的統計學分析顯示存在顯著性差異。使用qldx5治療方案以280,187和93mg/kg/劑量的劑量po給予的IPM.(LYS)2得以耐受而無與治療相關的死亡。在接受280mg/kg/劑量的劑量的IPM.(LYS)2的組中觀察到平均體重最小損失(4X，1g)。對兩個較低劑量組未觀察到體重損失。平均死亡天數和平均存活時間分別為17.0,17.0和15.0天，而280，187和93mg/kg/劑量的劑量的ILS值分別為55。/。，55%和36%。這三組各自中的存活數據與媒介物治療的對照組(笫6組，治療qldx5)的存活數據的統計學比較顯示每組的壽命提高具有統計學意義。使用qldx5注射方案以56mg/kg/劑量的劑量ip給予的IPM.(LYS)2對P388/0白血病十分有效，其中平均死亡天數為28.5。第一次死亡出現在第24天，最后一次死亡出現在第33天，其中該組中8只動物中的4只存活至第61天的本研究終止時為止。基于平均死亡天數計算的ILS值為159%。該治療組的平均存活時間〉47.0天，而計算的ILS值為327%。該治療方案得到充分耐受，無與治療相關的死亡，并且平均體重損失為4%(1g)。當將該組的存活數據與媒介物治療的對照組(第6組，治療qldx5)的存活數據進行統計學比較時，發現顯著性差異。鍵V"夢為、^f凝迷組對p值1與40.192l與50.0004.與50.0006與70.000<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>潛論當作為單次治療以1400和933mg/kg的劑量po給藥時，IPM.(LYS)2對小鼠有毒性。使用po給予的467mg/kg劑量的單次治療得以耐受，而僅引起極少的壽命增加，無統計學意義。作為單次ip注射以280mg/kg的劑量給予的IPM.(LYS)2十分有效并且產生2只61天時的存活者且在壽命上顯著提高。使用qldx5方案以280，187和93的劑量po給予的IPM.(LYS)2非常良好地得到耐受并且對P388/0白血病比對使用較高劑量的單次治療更有效。使用poqldx5給予的所有三種劑量的治療在壽命上產生了具有統計學意義的增加。當使用qldx5治療方案以56mg/kg/劑量的劑量ip給藥時，IPM.(LYS)2引起了壽命的顯著提高，其中該組的8只動物中的4只存活至第61天的研究終止為止。《滋辨7動物管理5周齡雌性NCr棵小鼠，購自TaconicFarms(Germantown,NY)。腫瘤模型使用12-標準規格套針給小鼠乳腺脂肪墊皮下(sc)植入30-40mg在體內通道中維持的MX-1人乳腺腫瘤碎片并且使其生長。將腫瘤植入的當天命名為第0天。使腫瘤達到138-245mg重量(138-245mW大小)，然后開始治療。植入足夠數量的小鼠，以便選擇盡可能窄范圍重量的腫瘤在治療開始的當天用于試驗(腫瘤植入后第10天)。將具有所選擇的適當大小范圍的腫瘤的動物分入不同的治療組，以便在治療的第一天的平均腫瘤重量彼此盡可能接近(172-197mg)。藥物配制在治療的第一天(第10天)在鹽水中配制可以如實施例1中所述制備的濃度為6.Omg/mL的匿.Tris(205mgIPM/小瓶)和IPM，然后用鹽水稀釋至4.05，1.8和1.2mg/mL的較低給藥濃度。在治療的第一天在鹽水中配制濃度為14mg/mL的IPM.(LYS)2(lOOmgIPM-賴氨酸/小瓶)，然后用鹽水稀釋至9.35，4.2和2.8mg/mL的較低給藥濃度。然后等分每一濃度用于每日應用，冷凍，儲存在-20。C下并且解凍以便每日應用。基于確切體重給予所有注射液，注射體積為0.2raL/10g體重。藥物治療本實驗在治療的第一天由每組8只小鼠的12個治療組和每組IO只小鼠的2個媒介物治療的對照組總計116只小鼠組成。每日給予所有藥物(和々某介物)，連續5天(qldx5)。以36和24mg/kg/劑量的劑量ip、和以120和81mg/kg/劑量的劑量po給予IPM.Tris和IPM。以84和56mg/kg/劑量的劑量ip、和以280和187mg/kg/劑量的劑量po給予IPM.(LYS)2。使用媒介物(鹽水)ip或po治療對照組。腫瘤測量和體重測量皮下(sc)腫瘤并且從治療第一天開始每周兩次對動物稱重。通過測徑器測量(mm)和使用橢圓體公式確定腫瘤體積LxW2/2=mm3,其中L和W意旨每次測量時采集的較大和較小正交尺寸。該公式還用于計算腫瘤重量、推定單位密度(lmm3=lmg)。研究期間本研究在腫瘤植入后50天終止。在研究終止前對變瀕臨死亡的或其腫瘤變成潰瘍或達到4，Q00mg的任何動物實施安樂死。評價的參數確定非特異性死亡數量，部分和完全腫瘤消退數量，無腫瘤存活者的數量和各動物達到兩倍腫瘤塊的時間。治療組(T)和對照組(C)中達到兩倍腫瘤塊的平均時間用于計算平均腫瘤生長的總延遲值(T-C)。統計學分析將各動物達到兩倍腫瘤塊的時間用作學生t-檢驗/MannWhitney秩和檢驗或壽命表分析中的終點以便對各組之間的生長數據進行統計學比較。壽命表分析(分層Kaplan-Meier評估，隨后是Mantel-Haenszel時序檢驗)能夠使用未達到終點而排除它們的動物比較各組之間的生長數據。潛^媒介物治療的對照組中的腫瘤在全部10只小鼠中生長良好。對ip-治療和po-治療組而言，平均腫瘤在7.4和7.2天內分別達到兩倍腫瘤塊。'在本研究過程中這兩組在平均體重方面無減輕。腹膜內給予36和24mg/kg/劑量的劑量的IPM.Tris分別引起10.2和7.7天的肺瘤生長延遲(T-C)。較高劑量具有1只無腫瘤存活者。兩種劑量均得以耐受，其中平均最大體重損失就36和24rng/kg/劑量的劑量而言分別為10%(2g)和0°/。腹膜內給予36和24mg/kg/劑量的劑量的IPM分別引起5.2和2.6天的腫瘤生長延遲。較高劑量具有1只無腫瘤存活者。兩種劑量均得以耐受，其中平均最大體重損失就36和24mg/kg/劑量的劑量而言分別為0%和5%(1g)。就IPM而言達到兩倍腫瘤塊的時間在統計學上少于相應劑量的IPM.Tris(就36mg/kg/劑量的劑量而言p=0.000;就24mg/kg/劑量的劑量而言p=0.021)。腹膜內給予相當于36和24mg/kg/劑量的IPM劑量的84和56mg/kg/劑量的劑量的IPM.(LYS)2分別引起24.3和9.0天的腫瘤生長延遲。較高劑量的IPM.(LYS)2具有毒性，2只小鼠在第20天時死亡，因瀕臨死亡或體重過度減輕而對2只小鼠實施安樂死。較低劑量的IPM.(LYS)2得以耐受，其中平均最大體重損失為15%(3g)。耐受的IPM.(LYS)2劑量表現出與24mg/kg/劑量的相應劑量的IPM.Tris相差無幾的活性(p=0.766)和優于24mg/kg/劑量的相應劑量的IPM的活性(p-O.0047)。口服給予120和81mg/kg/劑量的劑量的IPM'Tris分別引起8.7和9.0天的腫瘤生長延遲。較高劑量的IPM.Tris引起最大平均體重損失為15%(3g)，其中1只小鼠因體重低于14g而被實施安樂死。較低劑量得以耐受，其中平均最大體重損失為10%(2g)。口服給予120和81mg/kg/劑量的劑量的IPM分別引起4.6和4.0天的腫瘤生長延遲。兩種劑量均得以耐受，其中最大平均體重損失為5%(1g)。就相應劑量的IPM.Tris而言達到兩倍腫瘤塊的時間不具有統計學差異(就38120mg/kg/劑量的劑量而言p=0.1174;就81mg/kg/劑量的劑量而言p-0.1152)。口服給予相當于120和81mg/kg/劑量的IPM劑量的280和187mg/kg/劑量的劑量的IPM.(LYS)2分別引起5.0和3.5天的腫瘤生長延遲。兩種劑量均得以耐受，其中最大平均體重損失為5%(1g)和0%。較高劑量的IPM.(LYS)2表現出與120mg/kg/劑量的相應劑量下的IPM.Tris和IPM相差無幾的活性(分別為p-0.1000和p=0.9143)。較低劑量的IPM.(LYS)2表現出低于81mg/kg/劑量的相應劑量的IPM.Tris的活性(p=0:0290)和與81mg/kg/劑量的相應劑量的IPM相差無幾的活性(p=0.3073)。統計學分析的概述表組對p值2與40.OOO13與50.02113與70.76615與70.004729與110.117439與130.1000311與130.9143J10與120.1152310與140.0290312與140.307331壽命表分析2Mann-Whitney秩和檢驗3學生t-檢驗MX-1人乳腺腫瘤異種移植物對使用(1)媒介物-ip和po，(2)ipIPM.Tris,IPM和IPM.(LYS)2和(3)poIPM.Tris，IPM和■(LYS)2治療的響應分別如圖13，14和15中所示。潛論就ip給予當量的IPM劑量而言，IPM.Tris的抗腫瘤活性優于IPM(兩種劑量下)并且與IPM.(LYS)2相差無幾(兩種劑量)。就po給予當量的IPM劑量而言，IPM.Tris的抗腫瘤活性與IPM相差無幾(兩種劑量)，在較高劑量下與IPM.(LYS)2相差無幾且在較低劑量下優于IPM.(LYS)2。《〃#存和才法動物管理5-周齡雌性無胸腺NCr棵小鼠，購自Harlan(Prattville，AU。腫瘤模型使用12-標準規格套針給小鼠乳腺脂肪墊皮下(sc)植入30-40mg維持在體內通道中的MX-1人乳腺腫瘤碎片并且使其生長。將腫瘤植入的當天命名為第0天。使腫瘤達到113-245mg重量(113-245mm'大小)，然后開始治療。植入足夠數量的小鼠，以便選擇盡可能窄范圍重量的腫瘤在治療開始的當天用于試驗(腫瘤植入后第6天)。將具有所選適當大小范圍的腫瘤的動物分入不同的治療組，以便在治療的第一天的平均腫瘤重量彼此盡可能接近(144-162mg)。藥物配制在治療的每一天在鹽水中配制可以如實施例1中所述制備的濃度為13.5mg/mL的IPM.Tris(205mgIPM/小瓶，CardinalHealth),然后用鹽水稀釋至9，6，4.05，2.7，1.8和1.2mg/mL的較低給藥濃度。在治療的每一天在鹽水中配制濃度為6.Omg/mL的IPM(Eagle-PicherPharmaceuticalService)，然后用鹽水稀釋至4.05，1.8和1.2mg/mL的較低給藥濃度。在治療的每一天在鹽水中配制濃度為14mg/mL的IPM.(LYS)2(lOOmgIPM-賴氨酸/小瓶，UniversityofIowa),然后用鹽水稀釋至9.35,4.2和2.8mg/mL的較低給藥濃度。在配制后將全部給藥溶液保持在冰上并且在30min內給藥。基于確切體重與0.2mL/10g體重的注射體積給予所有注射液。藥物治療本實驗在治療的第一天由每組8只小鼠的16個治療組和每組10只小鼠的2個媒介物治療的對照組總計148只小鼠組成。每日給予所有藥物(和々某介物)，連續5天(qldx5)。以81,54，36和24mg/kg/劑量的劑量ip、和以270，180，120和81mg/kg/劑量的劑量po給予IPM.Tris。以36和24mg/kg/劑量的劑量ip、和以120和以81mg/kg/劑量的劑量po給予IPM。以84和56mg/kg/劑量的劑量ip、和以280和187mg/kg/劑量的劑量po給予IPM.(LYS)2。使用媒介物(鹽氷)ip(l號組)或po(10號組)治療對照組。腫瘤測量和體重測量皮下(sc)腫瘤并且從治療第一天開始每周兩次對動物稱重。通過測徑器測量(mm)和使用橢圓體公式確定腫瘤體積LxW2/2=mm3，其中L和W意旨每次測量時采集的較大和較小正交尺寸。該公式還用于計算腫瘤重量、推定單位密度(lmm3=lmg)。研究期間本研究在腫瘤植入后52天終止。在研究終止前對變瀕臨死亡的或其肺瘤變成潰瘍或達到4，OOOmg的任何動物實施安樂死。評價的參數確定非特異性死亡數量，部分和完全腫瘤消退數量，無腫瘤存活者的數量和各動物達到兩倍腫瘤塊的時間。治療組(T)和對照組(C)中達到兩倍腫瘤塊的平均時間用于計算平均腫瘤生長的總延遲值(T-C)。統計學分析將各動物達到兩倍腫瘤塊的時間用作學生t-檢驗/MannWhitney秩和檢驗的終點以Y更對各組之間的生長數據進行統計學比較。潛^媒介物治療的對照組中的腫瘤在全部10只小鼠中生長良好。對ip-治療和po-治療組而言，平均腫瘤在9.2和8.9天內分別達到兩倍腫瘤塊。在本研究過程中這兩組在平均體重方面無損失。腹膜內給予81mg/kg/劑量的劑量的IPM.Tris對小鼠有毒性，引起3只死亡且1只因瀕臨死亡且最大平均體重損失為20%(4.5g)而實施安樂死。54,36和24mg/kg/劑量的較低劑量得以耐受，其中最大平均體重損失分別為5%(1.2g),6%(1.3g)和l外(0.2g)。54，35和24mg/kg/劑量的劑量分別引起4.4，3.3和0.9天的腫瘤生長延遲(T-C)。腹膜內給予36和24mg/kg/劑量的劑量的IPM分別引起1.1和410.3天的腫瘤生長延遲。兩種劑量均得以耐受，其中最大平均體重損失就36和24mg/kg/劑量的劑量而言分別為8%(1.8g)和2。/。(0.4g)。就IPM而言達到兩倍肺瘤塊的時間在統計學上低于最高耐受劑量的IPM.Tris,但在統計學上與相應劑量的IPM.Tris相同(就54mg/kg/劑量的劑量而言p=0.0148;就36mg/kg/劑量的劑量而言p=0.1879)。相當于36和24mg/kg/劑量的劑量下的IPM的84和56mg/kg/劑量的劑量的IPM.(LYS)2的腹膜內給藥分別引起0.5和0.3天的腫瘤生長延遲。兩種劑量均得以耐受，其中最大平均體重損失就36和24mg/kg/劑量的劑量而言分別為1%(0.3g)和0°/。。就IPM.(LYS)2而言達到兩倍腫瘤塊的時間在統計學上低于最高耐受劑量的IPM.Tris，但在統計學上與相應劑量的IPM.Tris相同(就54mg/kg/劑量的劑量而言p=0.0104;就36mg/kg/劑量的劑量而言p=0.1578)。口服給予270，180和120mg/kg/劑量的劑量的IPM.Tris對小鼠有毒性，分別引起8只死亡/因瀕臨死亡實施安樂死，7只死亡和3只死亡。180和120mg/kg/劑量的劑量分別引起23%(5.3g)和20。/。(4.7g)的最大平均體重損失。81mg/kg/劑量的最低劑量得以耐受，其中最大平均體重損失為10%(2.2g)。81mg/kg/劑量的劑量引起2.6天的腫瘤生長延遲。口服給予120mg/kg/劑量的劑量的IPM對小鼠有毒性，引起2只死亡且最大平均體重損失為18%(3.8g)。81mg/kg/劑量的較低劑量得以耐受，其中最大平均體重損失為9%(2g)并且引起2.3天的腫瘤生長延遲。達到2倍腫瘤塊的時間就相應劑量的IPM.Tris而言無統計學差異(就81mg/kg/劑量的劑量而言為p=0.2932)。口服給予相當于120和81mg/kg/劑量的劑量下的IPM的280和187mg/kg/劑量的劑量下的IPM.(LYS)2分別引起3.9和4.7天的腫瘤生長延遲。兩種劑量均得以耐受，其中最大平均體重損失為14%(3g)和7。/i(1.6g)。較低劑量的IPM.(LYS)2表現出與81mg/kg/劑量的相應劑量下的IPM.Tris類似的活性(p-0.8785)。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>1Mann-Whitney秩和檢驗2學生t-檢驗MX-1人乳腺腫瘤異種移植物對使用(1)媒介物-ip和po,(2)ipIPM.Tris，IPM和IPM.(LYS)2和(3)poIPM.Tris，IPM和IPM.(LYS)2治療的響應分別如圖16，17和18中所示。潛論就ip給予當量IPM劑量而言，IPM.Tris的抗腫瘤活性與IPM和IPM.(LYS)2(較高劑量)相差無幾。在本研究中較低劑量對MX-1肺瘤無活性。最高耐受劑量的IPM.Tris優于IPM或IPM，(LYS)2的最高測試劑量。就po給予當量IPM劑量而言，IPM.Tris的抗腫瘤活性與較低劑量的IPM和IPM.(LYS)2相差無幾。就IPM，Tris和IPM而言120mg/kg/劑量的劑量對小鼠有毒性。在上述對MX-1(實施例7)ip給予當量IPM劑量的研究中，IPM.Tris的抗胖瘤活性優于IPM(兩種劑量)并且與IPM.(LYS)2(兩種劑量)相差無幾和。就po給予當量IPM劑量而言，IPM.Tris的抗腫瘤活性與IPM(兩種劑量)相差無幾，與較高劑量的IPM.(LYS)2相差無幾并且優于較低劑量的IPM.(LYS)2。在比較兩種研究的過程中，當ip給藥時，在本研究中三種藥物的活性較低(例如就36mg/kg/劑量的劑量下的IPM.Tris而言，T-C值為10.2天與3.3天；就36mg/kg/劑量的劑量下的IPM而言，T-C值為5/2天與l.l天；就56mg/kg/劑量的劑量下的IPM.(LYS)2而言，T-C值為9.0天與0.3天)。在po給藥時，在本研究中IPM.Tris的活性也較低(與IPM和IPM.(LYS)2相差無幾)(例如就81mg/kg/劑量的劑量下的IPM.Tris而言，T-C值為9.0天與2.6天；就81mg/kg/劑量的劑量下的IPM而言，T-C值為4.0天與2.3天；且就280mg/kg/劑量的劑量下的IPM.(LYS)2而言，T-C值為5.0天與3.9天)。活性降低的原因并不顯而易見地產生使用這類生物系統的研究與研究之間的差異。就本研究的肺瘤成分而言，媒介物治療的對照組腫瘤在兩種研究中以相差無幾的速率生長。在治療第l天時的平均腫瘤重量在實施例7(172-197mg)中稍高于本實施例(144-162mg);然而，這種小的差異不應對抗腫瘤活性產生顯著影響。#辨和才法用可以如實施例1中所述制備的IPM.Tris治療8只小鼠的3組，用多柔比星治療8只小鼠的3組，用媒介物治療IO只小鼠的l組并且用IPM.Tris/多柔比星聯合用藥治療8中小鼠的18組。將MX-1腫瘤碎片(30-40mg,來自體內通道)經皮下植入雌性無胸腺棵鼠的乳腺脂肪墊。在三種劑量(12,24和54mg/kg/劑量)下將IPM.Tris(或其媒介物)每日經腹膜內連續給予5天(Qldx5)，其中IPM.Tris制劑包含258.9mgIPM(MW221.02)、141.9mgTris堿(MW121.14，摩爾比IPM:Tris堿1:l)和3%甘露醇。將多柔比星(或其媒介物)在每個第4天在8mg/kg/劑量下注射3次(Q4dx3)。在治療的當天制備給藥溶液并且將IPM.Tris給藥溶液保持在一次準備的水上。在腫瘤大小接近175mg(100-250mg范圍)時開始治療。用測徑器在平面上測量每個腫瘤并且使用延長的橢圓體公式(axb72)轉化成腫瘤質量，其中a為較長的尺寸且b為較小的尺寸，推定單位密度(lmm3=lmg)。每周記錄兩次腫瘤測量值并且根據治療組與媒介物治療的對照組相比的腫瘤生長的延遲，部分和完全消退和無腫瘤存活者來評價抗腫瘤活性。注意當聯合給予54mg/kg/天的IPM.Tris與8mg/kg/天的多柔比星時，聯合用藥組中的2只動物因毒性而在早期死亡。結果可以在圖19-25中觀察到。IPM.Tris與多柔比星的聯合用藥產生了明顯的抗腫瘤活性，其中由該聯合用藥產生的對腫瘤生長的抑制超過了使用單獨藥物給藥觀察到的結果，并且聯合用藥比單獨藥物給藥顯著增加了存活率。事實上，聯合用藥的作用證實了協同效果，即，與在類似劑量下各自給予藥物相比，附加效果大，甚至其中單獨IPM.Tris的劑量如此之低以至于與媒介物治療的對照組動物相比時幾乎沒有提供或完全沒有提供改善。盡管在聯合用藥組中的動物重量在治療過程中降低(平均動物重量在第22天給藥結束時下降了20%),但是它們在給藥結束時快速恢復(截至到第38天時觀察到完全恢復)，從而提示毒性可逆轉。這一數據提示使用IPM.Tris和多柔比星的聯合療法可以用于治療對多柔比星或IPM.Tris作為單獨藥物或其聯合用藥起響應的任何癌癥，包括，但不限于乳腺癌，卵巢癌和肉瘤。將來自體內通道的MX-1人乳腺腫瘤碎片(各30-40mg)經皮下植入乳腺脂肪墊并且使其在開始治療前重量達到75-198mg。在腫瘤植入后開始IO天分別給予可以如實施例1中所述制備的IPM.Tris(54mg/kg)和多西他賽(10mg/kg)QlDx5IP和Q6Dx3IV。兩種藥物的聯合用藥如圖26中觀察到的，顯示出與作為單獨藥物給予的任一藥物相比增加了抗腫瘤效果。實滋辦〃將來自體內通道的MX-1人乳腺腫瘤碎片(各30-4Omg)經皮下植入乳腺脂肪墊并且在治療前使其重量達到為75-198mg。如圖27中所示發現，IP給予的可以如實施例1中所述制備的IPM.Tris(36mg/kg)對腫瘤生長的抑制程度幾乎與PO給予的IPM.Tris(81mg/kg)相同。另外，口服或全身給予IPM.Tris產生具有MX-1異種移植物的小鼠存活率類似地增加。正如在圖28中觀察到的，IP組的存活率中值為39天，PO組的存活率中值為37.5天，媒介物對照組的存活率中值為30天。這些PO和IP劑量的等效抗腫瘤活性在根據口服和全身給予IPM.Tris的PK(藥代動力學)所預計的范圍內。《滋辨W通過管祠法(PO)或IV快速濃注每天一次對Sprague-Dawley大鼠給予可以如實施例1中所述制備的IPM.Tris。以20，30或40mg/kg的劑量給予IPM.Tris并且獲得來自后眶竇的前劑量和在0.5，1,2，4,6,8，12和24小時時的后劑量的血樣用于PK評價。在每一時間點對每組3只動物采樣。前劑量，0.5，1,2和4小時的PK結果如圖29中所示，其中T^表現出約為0.5小時。末端1:1/2的估值在0.25-0.64小時。就每一劑量而言，AUC值用于評價作為(AUC后-P0劑量)/(AUC后-IV劑量)之比的口服給藥的IPM.Tris的絕對生物等效性。每一劑量的AUC值如圖30中所示且每一劑量的C隨值如圖31中所示。AUC和CU值隨PO-或IV-給予的IPM.Tris的劑量增加呈線性增加。20,30和40mg/kgPO劑量的IPM.Tris的生物利用度分別為48%，65%和73%。總平均生物利用度在雌性中為62%。在大鼠中觀察到了類似的PK;然而，在雄性中的平均生物利用度估計為41%。疾施辦WIPM.Tris/甘露醇和IPM.(LYS)2的溶出穩定性(Solutionstability)評價IPM.Tris制劑在5%氯化鈉注射液中的再溶解穩定性。發現IPM的濃度維持〉90。/。效能至多2.0小時。評價IPM.(LYS)2制劑在0.9%氯化鈉注射液中的再溶解穩定性。發現IPM的濃度維持〉90。/。效能至多1.O小時。IPM.Tris/甘露醇的溶出穩定性表1提供了在25mL5%氯化鈉注射液存在下IPM.Tris/甘露醇的再溶解穩定性數據。在~1h，1.5h,2.5h，3.5h，4.Qh和5.0h的目標時間取等分部分。分析樣品的IPM效能。表1.在5°/氯化鈉溶液存在下IPM.Tris/甘露醇的再溶解穩定性再溶解時間(小時)基于原始ipm小瓶含量的效能y。0100194290386481674IPM*(LYS)2的溶出穩定性表2提供了在25mL0.9%氯化鈉注射液存在下IPM.(LYS)2的再溶出穩定性數據。在~1h，2h，2.5h，3.5h,4.0h和5.0h的目標時間取等分部分。分析樣品的IPM.(LYS)2效能。表2.在0.9%氯化鈉溶液存在下IPM.(LYS)2的再溶出穩定性再溶解時間(小時)基于原始ipm.(lys)2小瓶含量的效能y。01001902792.5713.564457551結論IPM/氨丁三醇/甘露醇制劑在接觸5%氯化鈉溶液時維持了90%效能2.0小時。IPM.(LYS)2制劑在0.9%氯化鈉存在下維持了90%效能1.0小時。兩種制劑之間的再溶出穩定性(>90%效能)的差為1.0小時，為2倍。穩定性時間的增加可以有助于制備和給予藥物產品過程中的臨床醫師。《滋辨WIPM的溶出穩定性在約25。C下和3.5小時內評價IPM制劑在pH7的緩沖液中的再溶出穩定性，如表3和圖32所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>IPM.Tris/甘露醇的溶出穩定性表4提供了在25mL5%氯化鈉注射液存在下IPM.Tris/甘露醇的再溶出穩定性數據。在1.5，3.0和4.5小時(h)的目標時間取等分部<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>IPM.(LYS)2的溶出穩定性表5提供了在25mL0.9%氯化鈉注射液存在下IPM.(LYS)2的再溶出穩定性數據。在1.5，3.0和4.5h的目標時間取等分部分。<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>固體IPM.Tris/甘露醇凍千物的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>固體IPM.(LYS)2凍干物的穩定性<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>等效方案本領域技術人員認為或能夠使用不過度的常規實驗確定與本文所述化合物和方法或其應用等效的大量方案。認為這類等效方案屬于本發明的范圍并且被權利要求覆蓋。將所有上述引述的參考文獻和公開出版物引入本文作為參考。權利要求1.包含IPM或其類似物的結晶化合物，具有式(I)的結構其中A+為羥基化脂族胺；且X和Y獨立地表示離去基。2.權利要求1的結晶化合物，其中A+選自一-，二-或三-(2-羥乙基)胺，2-羥基-叔丁胺，N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)胺和三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)。3.權利要求2的結晶化合物，其中所述銨種類為Tris的共軛酸。4.權利要求l-3任一項的結晶化合物，其中X和Y獨立地為鹵素。5.權利要求4的結晶化合物，其中X和Y相同。6.權利要求5的結晶化合物，其中X和Y均為C1。7.權利要求1-6任一項的結晶化合物，其中IPM或其類似物和銨種類以2:1~1:2的比例存在。8.權利要求7的結晶化合物，其中IPM或其類似物和銨種類以1:1的比例存在。9.權利要求8的結晶化合物，其中該結晶化合物的熔點為約103。C-約106°C。10.權利要求9的結晶化合物，其中該結晶化合物的熔點為105-106。C。11.權利要求l-10任一項的結晶化合物，其中該結晶化合物包括單一的結晶多晶型。12.權利要求1-11任一項的結晶化合物，其中該化合物在室溫和有水存在下穩定至少1天。13.權利要求12的結晶化合物，其中該化合物在室溫和有水存在下穩定至少3天。14.權利要求13的結晶化合物，其中該化合物在室溫和有水存在下穩定至少6天。15.制備藥物組合物的方法，包括將權利要求1-14任一項的結晶化合物溶于鹽水溶液。16.權利要求15的方法，其中所述溶液在室溫下穩定至少約120分鐘。17.權利要求17的方法，其中所述結晶化合物的溶解度至少約為50mg/mL。18.權利要求14-17任一項的方法，其中將所述藥物組合物配制成適合于口服，局部，透皮或非腸道給藥的形式。19.權利要求18的方法，其中將所述藥物組合物配制成用于非腸道給藥的形式。20.治療過度增殖性疾病的方法，包括給予權利要求1的結晶化合物。21.權利要求20的方法，其中所述過度增殖性疾病選自急性白血病，慢性白血病，真性紅細胞增多癥，淋巴瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，多發性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥，重鏈病，骨髓增生異常綜合征，多毛細胞白血病，脊髓發育不良，肉瘤和癌，滑膜瘤，間皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結腸癌，淋巴惡性腫瘤，胰腺癌，乳腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，肝細胞癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，髓樣癌，支氣管原癌，腎細胞癌，肝細胞瘤，膽管癌，絨毛膜癌，維爾姆斯瘤，宮頸癌，睪丸瘤，膀胱癌和CNS腫瘤。22.權利要求1的化合物在制備用于治療過度增殖性疾病的藥物中的應用。23.權利要求20的應用，其中所述過度增殖性疾病選自急性白血病，慢性白血病，真性紅細胞增多癥，淋巴瘤，何杰金病，非何杰金淋巴瘤，多發性骨髓瘤，瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥，重鏈病，骨髓增生異常綜合征，多毛細胞白血病，脊髓發育不良，肉瘤和癌，滑膜瘤，間皮瘤，尤因瘤，平滑肌肉瘤，橫紋肌肉瘤，結腸癌，淋巴惡性腫瘤，胰腺癌，乳腺癌，肺癌，卵巢癌，前列腺癌，肝細胞癌，鱗狀細胞癌，基底細胞癌，腺癌，汗腺癌，皮脂腺癌，乳頭狀癌，乳頭狀腺癌，髓樣癌，支氣管原癌，腎細胞癌，肝細胞瘤，膽管癌，絨毛膜癌，維爾姆斯瘤，宮頸癌，睪丸瘤，膀胱癌和CNS腫瘤。24.權利要求1的化合物在制備用于治療CPA抗性疾患的藥物中的應用。25.包含IPM或其類似物的凍干物，具有式(I)的結構<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中A+為羥基化脂族銨抗衡離子；且X和Y獨立地表示離去基。26.權利要求25的凍干物，其中A+表示選自一-，二-或三-(2-羥乙基)胺，2-羥基-叔丁胺，N，N-二曱基-N-(2-羥乙基)胺和三(羥甲基)氨基曱烷(Tris)的質子化胺。27.權利要求26的凍干物，其中所述銨抗衡離子為Tris的共軛酸。28.權利要求25的凍干物，其中X和Y獨立地為鹵素。29.權利要求28的凍干物，其中X和Y相同。30.權利要求29的凍干物，其中X和Y均為C1。31.權利要求25的凍干物，其中該凍干物還包含甘露醇。32.包含下式化合物的凍干物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中A+表示選自包括堿性氨基酸、雜環胺類、取代和未取代的吡咬類、胍類和脒類的脂族胺類和芳族胺類的質子化(共軛酸)或季銨形式的銨種類；且X和Y獨立地表示離去基；且該凍干物在鹽水溶液中再溶解時在室溫下維持>90%的效能至少約30分鐘。33.權利要求32的凍千物，其中該凍干物在鹽水溶液中再溶解時在室溫下維持>90%的效能至少約160分鐘。34.權利要求32的凍千物，還包含賦形劑。35.權利要求34的凍干物，其中所述賦形劑為甘露醇。36.適合于口服給藥的藥物組合物，包含藥學可接受的稀釋劑或賦形劑和下式的化合物OA、-0-g-NHCH2CH2X"HCH2CH2Y其中A+表示選自包括堿性氨基酸、雜環胺類、取代和未取代的吡咬類、胍類和脒類的脂族胺類和芳族胺類的質子化(共軛酸)或季銨形式的銨種類；且X和Y獨立地表示離去基。37.包含IPM或其類似物的凍干物，其中該凍干物在室溫下穩定至少1個月。38.權利要求37的凍干物，其中該凍干物在室溫下穩定至少2個月。39.權利要求37的凍千物，其中IPM或其類似物具有式(I)的結構oA+*-O-NHCH2CH2XI^HCH2CH2Y(I)其中A+為羥基化脂族銨抗衡離子；且X和Y獨立地表示離去基。40.權利要求39的凍干物，其中A+表示選自一-，二-或三-(2-羥乙基)胺，2-羥基-7f又丁胺，N，N-二甲基-N-(2-羥乙基)胺和三(羥曱基)氨基甲烷(Tris)的質子化胺。41.權利要求40的凍干物，其中所述抗衡離子為Tris的共軛酸。42.權利要求39的凍干物，其中X和Y獨立地為鹵素。43.權利要求42的凍干物，其中X和Y相同。44.權利要求43的凍干物，其中X和Y均為C1。45.權利要求39的凍干物，其中該凍干物還包含甘露醇。46.權利要求39的凍干物，其中正如在室溫下1個月后通過HPLC,使用蒸發光散射檢測測定的，IPM或其類似物的純度至少為起始純度的97%。47.權利要求18的方法，其中將所述藥物組合物配制成用于口服給藥的形式。48.改善化療劑功效的方法，包括聯合權利要求1的化合物給予該4匕療劑49.50.51.抑制劑。52.53.的應用。權利要求48的方法，其中所述化療劑為微管結合劑。權利要求49的方法，其中所述化療劑為多西他賽。權利要求48的方法，其中所述化療劑為DNA和/或RNA轉錄權利要求51的方法，其中所述化療劑為多柔比星。權利要求1的化合物在制備用于與化療劑聯合給藥的藥物中全文摘要本發明披露了式(I)的結晶化合物其中A<sup>+</sup>表示羥基化脂族銨種類；X和Y獨立地表示離去基。文檔編號C07C279/14GK101679265SQ200880018371公開日2010年3月24日申請日期2008年4月4日優先權日2007年4月6日發明者B·P·沃爾納,J·C·阿梅迪奧,P·B·科馬尼特斯基申請人:Zio醫藥腫瘤學公司