專利名稱：：腫瘤選擇和可生物降解的環三磷腈-鉑(Ⅱ)共軛物抗癌劑及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種腫瘤選擇和可生物降解的環三磷腈-鉑(II)(cyclotriphosphazene-plati皿m(II))共軛物抗癌劑及其制備方法。
背景技術：
：鉑(II)抗癌劑諸如在目前臨床使用的順鉑(cisplatin)、卡鉑(carboplatin)和奧沙利鉑(oxaliplatin)是世界上最廣泛使用的抗癌劑。特別是，已經知道這些鉑藥物對于生殖腫瘤諸如睪丸、卵巢和膀胱腫瘤以及結腸直腸腫瘤顯示了較高的抗腫瘤活性。但是，與其他低分子量抗癌劑諸如紫杉醇(paclitaxel)、阿霉素(doxorubicin)等相同，全身給藥的鉑抗癌劑不僅攻擊腫瘤細胞和組織，而且沒有腫瘤選擇性地還同等地攻擊正常細胞和組織，引起嚴重毒性諸如腎臟毒性、神經毒性等。此外，它們的交叉抗性和低水溶性獲得極大地限制了它們在癌癥治療中的用途(D.Lebwohl，R.Canetta，Eur.J.Cancer.，34，1522(1998))。因此，近年來在世界范圍內已經付出了極大的努力來發展具有僅僅對腫瘤細胞或組織有選擇性毒性的腫瘤靶向抗癌劑，從而徹底地降低由毒性導致的不良效果并克服抗藥性。克服目前臨床使用的低分子量抗癌劑有關的固有的非選擇性和抗藥性的最合理的方法之一是使用聚合物藥物輸送系統，在過去十年已經對所述藥物輸送系統進行了深入研究。作為代表性的例子，有兩種不同的方法使低分子量抗癌劑具有腫瘤選擇性。一種方法是將常規抗癌劑與對在腫瘤細胞或者組織中優勢表達的受體或者抗原具有強親和力的靶向基團直接偶聯，或者將靶向基團和常規抗癌劑兩者都與水溶性聚合物(主動靶標，ActiveTargeting)偶聯，使抗癌劑腫瘤具有選擇性的另一種方法是將小分子抗癌劑直接與聚合物粒子結合，所述聚合物粒子沒有任何靶標基團，但在腫瘤組織中顯示增強的滲透性和滯留(EPR)效果(被動耙向，PassiveTargeting)。特別是，由于具有適當分子量的聚合物顯示在實體瘤組織中優勢增強的滲透性和滯留效果的發現(H.Meada和Y.Mats咖ura，CRCCrit，Rev.Ther.DrugCarrierSys6，193(1989))，在世界范圍內已經進行了大量研究來發展顯示高腫瘤選擇性的新聚合物材料。為什么具有適當分子量的聚合物顯示對腫瘤組織的高選擇性的兩種可能原因如下第一個原因在于雖然大的聚合物分子、納米粒子或者類似物在有規則并緊密排列的細胞構成的正常組織中幾乎不能透過血管壁，但由于腫瘤組織的粗維管結構(coarsevasculature)、流到腫瘤組織中的大量血液以及腫瘤組織中的更高血管壓力，它們可經過血管孔滲透到腫瘤組織中。第二個原因在于在腫瘤組織中沒有作為排泄途徑的淋巴管。因此，在腫瘤組織中，與正常細胞不同的是，對于滲透到其中的聚合物粒子來說難以被排出(R.Duncan,Pharm.Sci.Technol.Today,2，441(1999))。結果，經由血管孔滲透的聚合物粒子在腫瘤組織中選擇性積累(H.Maeda，J.Fang，T.I皿tsuka，InterImmun.，3，319(2003))，產生對腫瘤組織更高的聚合物選擇性。因此，在世界范圍內已經進行了大量研究使用特定生物-關聯性聚合物材料來發展新的藥物輸送系統(A.S.Lundberg和R.A.Weinberg,Eur，J，Cancer,35，531-539(1999))。這些嘗試的一個成功的例子是與苯乙烯_馬來酸酐共聚物結合的新制癌菌素(neocarzinostatin)(SMANCS)，其在日本較早得到發展并商業化(K.Tsuchia，H.Maeda，Urology,55，495(2000))。此外，各種類型的聚合物_藥物共軛物，包括N_(2_羥基丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)和阿霉素的結合體(P.A.Vasey，C.Twelves,Clin.CancerRes.，5,83(1999))已經被開發并且進來已經進入臨床試驗(R..Haag，F.Kratz，Angew.Chem.Int.Ed.，2006，45，1198-1215)。因此，可以看出，在該領域的研究已經在世界范圍內活躍進行。但是，多少這種結合藥物最終被允許用于臨床使用還存在質疑，因為絕大多數用作藥物載體的常規有機聚合物是不能生物降解的，并且不具有高度的腫瘤選擇性。本發明的發明人發現，環三磷腈衍生物與等摩爾量的聚(乙二醇)(PEG)分別作為親水基團和疏水基團氨基酸接枝(grafted)顯示熱敏特性(YounSooSohn等人，J.Am.Chem.Soc.，2000，122，8315)，并通過將抗腫瘤(二胺)鉑半分子與環狀三聚體的氨基酸結合，成功地由其制備了用于局部輸送的熱敏鉑抗癌劑(YounSooSohn等人，J.Control-Release,90，303(2003);YounSooSohn等人，美國專利號6，333，422(2001))。但是，所得到的環三磷腈-鉑結合藥物在生物分布試驗中不顯示腫瘤選擇性，可能是因為由于用作疏水基團的氨基酸的低疏水性，共軛物分子不能凝集形成微團或者納米粒子。
發明內容因此，本發明的目的在于提供一種納米微粒環三磷腈-鉑共軛物抗癌劑，其中疏水(二胺)鉑(II)復合物被引入到在水溶液中形成微團的兩性環三磷腈中，由于其在腫瘤組織中增強的滲透性和滯留效果而能夠具有對腫瘤組織更高的選擇性，并且具有更高的抗腫瘤活性，本發明還提供了其制備方法。通過本發明的下列詳細描述，本發明的前述和其他目的、特征、方面和優點將變得更加顯而易見。圖1和圖2示出了分別在本發明的實施例1和實施例3中在水溶液中制備的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑的粒子尺寸分布。具體實施例方式本發明的發明人發現，引入比簡單氨基酸具有更高疏水性的寡肽的環三磷腈作為疏水基團與具有分子量為350或者更大的親水基團一道在水溶液中通過自組裝形成與常規線性團塊共聚物微團相比更強和熱動力學更穩定的微團(YounSooSohn等人，Angew.Chen.Int.Edit.2006，45，6173-6176)。本發明的發明人通過發現穩定的具有100-200nm直徑的納米微粒環三磷腈-鉑(II)共軛抗癌劑顯示了更高的腫瘤選擇性和抗癌活性而實現本發明的目的，所述抗癌劑通過如下方法制備水解前述能夠在水溶液中形成強而穩定的微團的環三磷腈以便使寡肽側鏈官能化，接著將疏水(二胺)鉑(II)復合物與得到的寡肽側鏈的官能團鰲合。根據本發明的環三磷腈-鉑(II)復共軛物體具有生物可降解性，因為(二胺)鉑(II)復合物通過容易由細胞內的溶酶體中存在的肽酶降解的寡肽連接(H.Soyez等人，Adv.DrugDeliv.Rev.21(1996)，81-106)。根據本發明，聚(乙二醇)的親水性與作為藥物輸送材料將被引入到環三磷腈的寡肽的疏水性的比值以及由寡肽側鏈鰲合的(二胺)鉑(II)復合物的疏水性的程度受到控制，并且寡肽的乙酯被水解以便使用(二胺)鉑(II)復合物抗癌劑官能化鉑酸鹽(platination)，從而提供顯示在腫瘤組織中增強的滲透性和滯留效果以及更高的抗腫瘤活性的新的納米微粒環三磷腈-鉑(II)共軛物，以及其制備方法。因此，本發明涉及具有對腫瘤組織更高選擇性和更高抗癌活性的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑，其由下列化學分子式1表示化學分子式l:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>o其中n為7、12或者16;m為0、1或者2;x為1;并且y和z分別為0或者1;R、R'和R"分別選自下組，該組由(CH3)2CH_，(CH3)2CHCH2_，(C2H5)(CH3)CH-和(C6H5)CH廠所組成；并且A和A'表示彼此相同或不同的兩個單配位(monodentate)胺配體，或者A和A'連接在一起形成雙配位鰲合二胺配體。如果A和A'是兩個單配位胺配體，則它們中的至少一個可以是環己胺、環戊胺或者芐胺，并且雙配位鰲合二胺配體可以是諸如反式-1，2-二氨基環己烷(dach)。本發明還涉及用于治療癌癥的藥物組合物，包括由化學分子式l表示的環三磷腈-鉑(II)復共軛物作為有效成分。本發明還涉及制備由化學分子式l表示的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑的方法。制備本發明的環三磷腈_鉑(II)復共軛物的全部反應過程應當在惰性環境下進行以便防止濕氣對反應系統的影響，并且用于反應的所有溶劑還在使用之前完全干燥以消除任何痕量的濕氣。與鉑復合物的偶聯反應優選在阻斷光線的狀態下在任意時刻進行。本發明的環三磷腈_鉑(II)復共軛物可根據如下描述的事例型過程來制備。第一步，根據已知方法(YounSooSohn等人，Angew.Chem.Int.Edit.2006,45,6173-6176)，具有化學分子式2中顯示的結構的六氯環三磷腈(hexachlorocyclotriphosphazene)[(N=PC12)3]的氯原子逐步被分子量為350或者更高的親水聚(乙二醇)和疏水寡肽例如三肽、四肽或者五肽乙酯取代，以得到由化學分子式3表示的兩性環三磷腈，其中3摩爾的聚(乙二醇)和3摩爾的寡肽被用于1摩爾的六氯環三磷腈。化學分子式2:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>化學分子式3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中n、m、x、y、z、R'、R"和R的定義與化學分子式1中相同。接著，化學分子式3的兩性三聚體被堿水解以得到由下列分子式4表示的堿性或者堿土性金屬鹽。化學分子式4:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>其中n、m、x、y、z、R、R'和R"的定義與化學分子式1中相同；M為兩個堿性金屬離子，優選2K+或者2Na+，或者堿土性金屬離子，優選Ba2+。制備化學分子式4的金屬鹽的反應可在極性溶劑諸如水或者甲醇中進行，并且堿可基于在下一步驟中與鉑(II)復合物的待進行反應的溶劑而選擇。如果化學分子式4的堿性金屬鹽與鉑(II)復合物的反應在醇溶劑中進行，例如甲醇，優選使用經氧化鉀或者氫氧化鈉作為堿。如果化學分子式4的堿性金屬鹽與鉑(II)復合物之間的反應在水溶液中進行，則優選氫氧化鋇作為堿。這里，合適的是對于一摩爾由化學分子式3表示的環三磷腈連接的寡肽，使用相當于它的2.4到3.0倍量的堿。最后，由化學分子式4表示的環三磷腈的堿性金屬鹽或者堿土金屬鹽與由下列化學分子式5表示的(二胺)鉑(II)復合物反應以得到由化學分子式1表示的環三磷腈_鉑(II)復共軛物。化學分子式5:其中A和A'的定義與化學分子式1中相同；并且L為二價陰離子配體或者兩個單價陰離子配體，優選地，分別選自硫酸離子(S042—)和硝酸離子(N03—)。化學分子式5的(二胺)鉑(II)復合物非常重要，因為抗腫瘤活性以及主要物理性質諸如水溶性和凝集成化學分子式1的納米粒子取決與化學分子式5的(二胺)鉑(II)復合物的性質。在本發明中，充分考慮決定鉑復合物的抗腫瘤活性、疏水性、溶解性以及類似性質的載體胺配體的分子結構并且為了同時提供共軛物的更好的抗腫瘤活性和強疏水性，A和A'中的至少一種選自具有強疏水性的胺，例如環己胺、環戊胺和芐胺，或者選擇A和A'在其中連接在一起形成鰲合胺的胺，例如反式-l，2-二氨基環己烷(dach)。陰離子L選自硝酸離子或者硫酸離子，這取決與化學分子式4的鹽的類型和反應溶劑。在具有強疏水性的(二環己胺)鉑(II)復合物的情況下，其硫酸鹽不容易溶解在有機溶劑中，但其硝酸鹽容易溶解在甲醇中。因此，如果(二環己胺)鉑(II)硝酸鹽與相等當量的化學分子式4的環三磷腈的堿金屬鹽在甲醇中反應大約6到12小時，能夠得到化學分子式1的純凈化合物。但是，(二環己胺)鉑(II)硫酸鹽復合物不容易溶解在有機溶劑中但容易溶解在水中。因此，如果(二環己胺)鉑(II)硫酸鹽與相等當量的化學分子式4的鋇鹽在水中反應，不溶性的硫酸鋇被沉淀。因此，在通過過濾除去沉淀以后，化學分子式1的純化合物可很容易得到。上面描述的環三磷腈-鉑(II)復共軛物的制備方法在下列反應方案(1)中示出。反應方案1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中n，m，x，y，z，R，R'，R"，A和A'與在化學分子式1中定義的相同；并且M和L分別與化學分子式(4)和(5)中定義的相同。實施例下面，將參照下列實施例和實施方式詳細描述本發明，但其僅僅是示例性的，而不限制于本發明。在下列實施例中，用于本發明的化合物的碳、氫和氮的元素分析使用Perkin-ElmerC，H，N分析儀進行。氫核磁共振光譜使用BrukerDPX-250NMR分光計測定，并且磷核磁共振光譜使用VarianGemini-400NMR分光計測定。水溶液中納米粒子的粒子尺寸分布使用MalvernZetasizer(Nano-ZS)測定。實施例1:三[甲氧基-聚(乙二醇)550]三[順式-二環己胺鉑(II)甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰天冬氨酸(glycylphenylalanylleusylaspartate)]環三磷腈，{NP(MPEG550)[GlyPheLeuAspPtcis-(C6H5NH2)2]}3的制備根據已知方法(YounSooSohn等人，Angew.Chem.Int.Edit.2006，45，6173-6176)通過以3摩爾分子量為550的甲氧基-聚(乙二醇)(MPEG550)和3摩爾=0甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰天冬氨酸乙酯取代六氯環三磷腈的氯原子得到的[NP(MPEG550)(GlyPheLeuAspEt2)]3(0.5g，0.15mol)在甲醇(20ml)中以氫氧化鉀(0.11g，2.0mmo1)水解12到24小時。將過量乙酯或者n-己烷加入到水解產物中使[NP(MPEG550)(GlyPheLeuAspK2)]3的鉀鹽沉淀。將沉淀過濾并干燥，然后與(二環己胺)鉑(II)硝酸鹽，順式_(C6H5NH2)2Pt(NO)3)2(0.31g，0.59mmol)在甲醇(20ml)中在黑暗條件下反應12到20小時。將得到的反應混合物在真空下濃縮至10ml。使用透析膜(分子量截止，molecularweightcutoff:500)將濃縮物在純甲醇中透析24小時并在蒸餾水中透析24小時，然后冰凍干燥以得到63%產量的環三磷腈-鉑(II)復共軛物{NP(MPEG550)[GlyPheLeuAsp*Pt*cis-(C6H5NH2)2]}3。化合物C174H312N2106。P3Pt3分子量4，336.65元素分析發現C，48.00;H，6.85;N，7.09，計算C，48.19;H，7.25;N，6.78力NMR光譜(CD30D)(S，ppm):0.87(d，6H，Leu-(CH3)2)，1.12(t，3H，Gly_0CH2￡H》，1.43-1.46(m，2H，環己胺C_4質子)，1.53-1.78(m，2H，環己胺C_6質子)，1.39-1.49(m，4H，環己胺C-3，C-5質子)，2.57(m，lH，環己胺，1_C質子)，1.2-1.3(m，3H，Leu-CHCH二)，2.95(dd，2H，Phe_￡H2)，3.2(s，3H，PEG350-0￡Ha，3.25-3.6(b，30H，PEG350，00^￡22)，3.65(d，2H，Gly-迅)，4.1(dd，1H，leu-辺)，4.42(t，1H，Phe-邁)，7.14(m，Phe-芳香族)。31P-NMR光譜(D20)(S，卯m):22.4。實施例2:三[甲氧基-聚(乙二醇)550]三[(順式-二環己胺鉑(II)甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰谷氨酸)]環_三磷腈，{NP(MPEG550)[GlyPheLeuGluPtcis-(C6H5NH2)2]}3的制備在如實施例1中描述的相同方法，使用環三磷腈[NP(MPEG550)(GlyPheLeuGluEt2)]3(0.5g，0.15mol)和順式-(C6H5NH2)2Pt(N03)2(0.31g，0.59,1)以61%的產量得到(NP(MPEG550)[GlyPheLeuGluPtcis-(C6H5NH2)2]}3。化合物C177H318N2106。P3Pt3分子量4，378.73元素分析發現C，48.12;H，7.01;N，7.09，計算C，48.55;H，7.32;N，6.92NMR光譜(CD30D)(S，卯m):0.87(d，6H，Leu-(CH3)2)，1.12(t，3H，Gly_0CH2￡H》，1.43-1.46(m，2H，環己胺C-4質子)，1.53-1.78(m，2H，環己胺C-6質子)，1.39-1.49(m，4H，環己胺C-3，C-5質子)，2.57(m，lH，環己胺，1-C質子)，1.2-1.3(m，3H，Leu-CHCHj，2.17(dd，2H，Glu-逃)，5.06(dd，1H，Glu-CH)，2.95(dd，2H，Phe-逃)，3.2(s，3H，PEG350-0￡Ha)，3.25-3.6(b，30H，PEG350，0￡H^H》，3.65(d，2H，Gly-逃)，4.1(dd，1H，Leu-辺)，4.42(t，1H，Phe-邁)，7.14(m，Phe-芳香族)。31P-NMR光譜(D20)(S，卯m):22.4。實施例3:三[甲氧基-聚(乙二醇)350]三[(順式-氨基環己胺鉑(II)甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰丙二酸)]環—三磷腈，{NP(MPEG350)[GlyPheLeuMalPtcis_(NH3)(C6H5NH2)2]}3的制備根據已知方法(YounSooSohn等人，Angew.Chem.Int.Edit.2006，45，6173-6176)通過以3摩爾分子量為350的甲氧基-聚(乙二醇)(MPEG350)和3摩爾甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰丙二酸乙酯取代六氯環三磷腈的氯原子得到的[NP(MPEG350)(GlyPheLeuMalEt2)]3(0.5g，0.19mol)被氫氧化鋇(0.22g，0.63,1)在甲醇(20ml)中水解12到24小時。將反應液濃縮，加入過量乙酯使環三磷腈的鋇鹽[NP(MPEG350)(GlyPheLeuMal^3)]3沉淀。將鋇鹽從相同溶劑系統中再結晶，并溶解在蒸餾水(10ml)中，在此緩慢加入溶解在蒸餾水(10ml)中的順式-(氨基環己胺)鉑硫酸鹽(cis_(NH3)(C6H5NH2)PtS04)(0.23g，0.64mmol)。將反應液進一步在室溫下攪拌大約12小時，然后通過過濾除去硫酸鋇。將濾液在蒸餾水中使用透析膜(分子量截止500)透析24小時，然后冰凍干燥以63%的產量得到環三磷腈-鉑(II)復共軛物{NP(MPEG350)[GlyPheLeuMalPtcis_(NH3)(C6H5NH2)]}3。化合物C123H216N21045P3Pt34H20分子量3，387.34元素分析(％)發現:C，37.72;H，6.85;N，8.06，計算(%):C，38.68;H，6.97;N，7.70。力NMR光譜(CD30D)(S，卯m):0.87(d，6H，Leu-線"，1.12(t，3H，Gly_0CH2￡H》，1.43-1.46(m，2H，環己胺C_4質子)，1.53-1.78(m，2H，環己胺C_6質子)，1.39-1.49(m，4H，環己胺C-3，C-5質子)，2.57(m，1H，環己胺，1_C質子)，1.2-1.3(m，3H，Leu-CHCHj，2.95(dd，2H，Phe-迅)，3.2(s，3H，PEG350_0￡Ha)，3.25—3.6(b，30H，PEG350，0￡^迅)，3.65(d，2H，Gly-迅)，4.1(dd，1H，Leu-邁)，4.42(t，1H，Phe-邁)，7.14(m，Phe-芳香族)。31P-NMR光譜(D20)(S，卯m):22.3。實施例4:三[甲氧基-聚(乙二醇)350]三[(反式-二氨基環己胺鉑(II)甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰天冬氨酸)]環_三磷腈，{NP(MPEG350)[GlyPheLeuAspPt(dach)]}3的制備環三憐月青[NP(MPEG350)(GlyPheLeuAspEt2)]3(0.5g，0.15mol)禾口(dach)PtS04以上述實施例3中描述的相同方法得到58%產量的{NP(MPEG350)[GlyPheLeuAspPt(dach)]}3。化合物C126H21。N21045P3Pt3分子量3，423.33元素分析(％):發現:C，43.75;H，6.65;N，8.34，計算(%):C，44.21;H，6.36;N，8.59。力NMR光譜(D20)(S，卯m):0.87(d，6H，Leu_(CH3)2)，1.12(t，3H，Gly_0CH2CH3)，1.1-1.3(b，4H，dachC_4，C_5質子)，1.5(b，2H，dachC_3質子)，2.1(b，2H，dachC_6質子)，2.3(b，2H，dachC_l，C_2質子)，1.2-1.3(m，3H，Leu_CHCH2)，2.95(dd，2H，Phe_CH2)，3.2(s，3H，PEG350-0CH3)，3.25—3.6(b，30H，PEG350,0CH2CH2)，3.65(d，2H，Gly_CH2)，4.1(dd，1H，Leu-CH)，丄42(t，1H，Phe-CH)，Ll4(m，Phe-芳香族)31p-NMR光譜(D20)(S，卯m):22.4。實施例5:由實施例1和3得到的化合物的粒子尺寸分布測定根據下面描述的過程，用動態光散射(DLS)法檢查本發明的環三磷腈-鉑(II)復共軛物是否在水溶液中由于疏水基團的相互作用而凝集形成穩定的納米粒子，并測定其平均粒子尺寸。由實施例1和3得到的環三磷腈_鉑(II)復共軛物以0.1%到0.5%的濃度溶解在蒸餾水中，將得到的溶液進行DLS測定。觀察到納米粒子比在水溶液中形成的微團更大更穩定。如圖1所示，發現實施例1的化合物顯示具有大約200nm的更大的平均直徑，可能是因為具有強疏水性的兩個環己胺配體與鉑(II)陽離子配位。但是，注意到實施例3的化合物顯示相對較低的疏水性，于是形成具有105nm的更小的平均直徑，因為僅僅一個環己胺配體與鉑(II)陽離子配位。實施例6:環三磷腈_鉑(II)復共軛物的增強的滲透性和滯留效果的體內生物分布領lj定通過環三磷腈_鉑(II)復共軛物的增強的滲透性和滯留效果的腫瘤選擇性測定按照如下方法進行Sprague-Dawley小鼠(8-9周大，250_280g)被飼養(adopt)4天然后在背部區域中皮下接種IX106個Sarcoma-180細胞。兩周后，當腫瘤生長到直徑為10mm時，將動物分成兩組。將由實施例1中制備的環三磷腈-鉑復共軛物溶解在生理鹽水中然后注射到小鼠的尾靜脈中。給藥后2小時和24小時將動物殺死。從動物中收集腫瘤組織、正常肌肉、肺、肝臟、腎臟和血液。表1顯示了實施例1的化合物給藥后2小時和24小時每種組織和器官中鉑濃度分布的分析結果。腫瘤組織與正常組織(TTR)的鉑濃度比代表基于EPR效果的腫瘤選擇性。如同從表l中看到的那樣，根據本發明的環三磷腈-鉑(II)復共軛物顯示了對腫瘤組織的突出的選擇性。表1:每種組織和器官中的鉑濃度(mg/kg)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實施例7:環三磷腈_鉑(II)復共軛物對選擇的人腫瘤細胞系的體外抗癌活性測定在實施例1和3中制備的納米微粒環三磷腈_鉑(II)復共軛物針對四種主要人腫瘤細胞系的體外抗腫瘤活性根據已知方法被測定(RitaSong等人J.Control.Release105(2005)142-150)。表2顯示了在實施例1和3中制備的納米微粒鉑(II)復共軛物的體外抗癌活性。從表2中可以看出，結構上包含類似構造的天冬氨酸或丙二酸與鉑陽離子鰲合的實施例1和3的共軛物，其體外細胞毒性與被用作標準的具有低分子量的卡鉑相似。考慮到根據本發明的藥物前體的疏水性以及寡肽的酶降解性時，可以預期基于藥物前體的持續釋放和極好的藥物代謝的本發明的優越的體內抗腫瘤活性。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>根據本發明，提供了對腫瘤組織具有高度選擇性以及高度抗癌活性的納米微粒環三磷腈-鉑(II)復共軛物。根據本發明的納米微粒環三磷腈-鉑(II)復共軛物由于其增強的滲透性和滯留效果而顯示了高度腫瘤選擇性，其可有效地治療癌癥并具有極小的不良反應，因此，這種新的抗癌劑被預期將被廣泛使用。由于本發明可以多種形式體現都不偏離本發明的精神和本質特征，還應當理解的是，除非特別指明，上面描述的實施方式不被限制為前述描述的任何細節，而是應當在如所附的權利要求書中限定的精神和范圍內被廣義理解，因此落入權利要求書的邊界和界限或所述邊界和界限的等同物之內的所有變化和修改因而都包含在所付的權利要求書內。權利要求一種由化學分子式1表示的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑，其化學分子式1其中n為7、12或者16，m為0、1或者2；x為1；并且y和z分別為0或者1；R、R’和R”分別選自下組，該組由(CH3)2CH-，(CH3)2CHCH2-，(C2H5)(CH3)CH-和(C6H5)CH2-所組成；并且A和A’表示彼此相同或不同的兩個單配位胺配體，或者A和A’連接在一起形成雙配位鰲合二胺配體。F2008800126892C00011.tif2.根據權利要求l的環三磷腈-鉑(II)復共軛物，其特征在于，所述A和A'是兩個單配位胺配體，它們彼此相同或不同并分別選自下組，該組由環己胺、環戊胺和芐胺所組成。3.根據權利要求l的環三磷腈-鉑(II)復共軛物，其特征在于，所述A和A'的至少一個是環己胺。4.根據權利要求l的環三磷腈-鉑(II)復共軛物，其特征在于，所述A和A'連接在一起形成反式1，2-二氨基環己烷。5.根據權利要求1的環三磷腈_鉑(II)復共軛物，其特征在于，直徑為100到200nm的納米粒子在水溶液中形成。6.根據權利要求1的環三磷腈-鉑(II)復共軛物，其特征在于，所述甲氧基-聚(乙二醇)的分子量為350、550或750。7.—種包括權利要求l所述的任意一種環三磷腈-鉑(II)復共軛物的治療癌癥的藥物組合物。8.—種根據權利要求1的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑的制備方法，包括(1)使用堿水解由化學分子式3表示的環三磷腈以得到由化學分子式4表示的堿金屬鹽或者堿土金屬鹽；及(2)由化學分子式4表示的堿金屬鹽或者堿土金屬鹽與由化學分子式5表示的(二胺)鉑(II)復合物偶聯以得到化學分子式1的環三磷腈-鉑(II)復共軛物，化學分子式1:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>化學分子式3:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>化學分子式4:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>化學分子式5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中n為7、12或者16，m為0、1或者2;x為1;并且y和z分別為0或者1;R、R'和R"分別選自下組，該組由(CH3)2CH-，(CH3)2CHCH2-，(C2H5)(CH3)CH-and(C6H5)CH2-所組成；A和A'表示彼此相同或不同的兩個單配位胺配體，或者A和A'連接在一起形成雙配位鰲合二胺配體；M表示選自鉀離子和鈉離子或者Ba2+的兩個堿金屬離子；并且L是選自硫酸離子和硝酸離子的一個或兩個陰離子配體。9.根據權利要求8的制備方法，其特征在于，所述堿選自下組，該組由氫氧化鈉、氫氧化鉀和氫氧化鋇所組成。10.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，醇被用作步驟(2)的溶劑。11.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，水被用作步驟(2)的溶劑。12.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，甲氧基-聚(乙二醇)的分子量為350、550或750。13.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，所述寡肽選自下組，該組由甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰谷氨酸、甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰天冬氨酸和甘氨酰苯丙氨酰亮氨酰丙二酸所組成。14.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，所述A和A'是兩個單配位胺配體，它們彼此相同或不同并分別選自下組，該組由環己胺、環戊胺和芐胺所組成。15.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，所述A和A'的至少一個是環己胺。16.根據權利要求8的抗癌劑的制備方法，其特征在于，所述A和A'連接在一起形成反式1，2-二氨基環己烷。全文摘要本發明涉及一種新的環三磷腈-鉑(II)復共軛物抗癌劑，其由于在腫瘤組織中增強的滲透性和滯留效果而顯示了對腫瘤組織的高度選擇性，本發明還涉及一種其制備方法。文檔編號C07F17/02GK101715454SQ200880012689公開日2010年5月26日申請日期2008年4月11日優先權日2007年4月18日發明者全英珠,孫然秀,柳志英申請人:株式會社納諾喜博萊德