8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷化合物的晶型的制作方法

專利名稱：8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷化合物的晶型的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是關(guān)于8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷化合物的結(jié)晶鹽形式，其適用作p阿片受體拮 抗劑。本發(fā)明還關(guān)于包含所述結(jié)晶化合物的醫(yī)藥組合物、使用所述化合物治療或改善由 |i阿片受體活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病況的方法，和適用于制備所述化合物的方法。
背景技術(shù)：
共同轉(zhuǎn)讓的2006年3月1日申請的美國臨時申請案第60/777,962號和2006年8月 30日申請的美國臨時申請案第60/841,028號，和美國申請案第11/711,961號揭示8-氮雜 雙環(huán)[3.2.1]辛烷化合物，其為ia阿片受體拮抗劑，預(yù)期其適用于治療或改善由n阿片受 體活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病況。具體來說，在這些申請案中特別揭示化合物3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己 基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán)[3.2.I]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽顯
示H阿片受體拮抗劑活性。
3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基i-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛
-3-基)芐酰胺(下文中的化合物l)的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下所示
為有效地將此化合物用作治療劑，將需要具有可易于制造并且具有可接受的化學(xué)和 物理穩(wěn)定性的固態(tài)鹽形式。例如，將極需具有例如在超過約175'C或約18(TC的溫度下 熱穩(wěn)定，并且既不吸濕也不易潮解的鹽形式，由此促進(jìn)這一物質(zhì)的加工和儲存。對于增 強(qiáng)制品的純度和穩(wěn)定性而言，結(jié)晶固體一般優(yōu)于非晶型。
先前未報導(dǎo)化合物1的結(jié)晶鹽形式。因此，存在對既不吸濕也不易潮解并且顯示有 利熱穩(wěn)定性的化合物1穩(wěn)定、結(jié)晶鹽形式的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物。在一方面中，本發(fā)明的結(jié)晶鹽形 式為化合物1的結(jié)晶硫酸鹽。在另一方面中，本發(fā)明的結(jié)晶鹽形式為化合物1的硫酸鹽 的結(jié)晶水合物。
令人驚訝地，已發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽顯示在約19(TC至約205'C范圍內(nèi)的熔化 溫度以下無顯著熱事件并且當(dāng)暴露于室溫下介于約2%與約90%之間某一范圍的相對濕 度時顯示小于約0.3%的重量變化。此外，當(dāng)暴露于室溫下高達(dá)約90%相對濕度時，本 發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽和其水合物均不易潮解。
除其它用途之外，預(yù)期本發(fā)明的結(jié)晶鹽形式適用于制備供治療或改善由(U阿片受體 活性介導(dǎo)的醫(yī)學(xué)病況的醫(yī)藥組合物。因此，在本發(fā)明的另一組合物方面中，本發(fā)明提供 包含醫(yī)藥上可接受的載劑和3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙 基卜8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物的醫(yī)藥組合物。
本發(fā)明也提供治療或改善通過以li阿片受體拮抗劑治療可得到改善的疾病或病況的 方法，所述疾病或病況例如為胃腸道運(yùn)動減少的病癥，所述方法包含向哺乳動物投與治 療有效量的3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物。
本發(fā)明另外提供治療阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂或術(shù)后腸梗阻的方法，所述方法包含向 哺乳動物投與治療有效量的3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙 基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物。
在另一方法方面中，本發(fā)明提供制備本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽的方法，所述方法包含使 3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基) 芐酰胺與硫酸接觸以形成反應(yīng)混合物，和從反應(yīng)混合物分離結(jié)晶硫酸鹽。
本發(fā)明提供制備本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽的另一方法，所述方法包含將3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán) 己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸 鹽的結(jié)晶水合物分散于包含甲醇的稀釋劑中以形成反應(yīng)混合物，和從反應(yīng)混合物分離結(jié) 晶硫酸鹽。
在又一方法方面中，本發(fā)明提供制備化合物1的結(jié)晶硫酸鹽的方法，所述方法包含
(a) 使經(jīng)保護(hù)的化合物1前驅(qū)體(其中羥基經(jīng)保護(hù))與硫酸接觸以形成第一反應(yīng)混合物；
(b) 從第一反應(yīng)混合物分離化合物1的中間體級固體硫酸鹽；(c)將中間體級固體硫酸 鹽分散于包含甲醇的稀釋劑中以形成第二反應(yīng)混合物；和(d)從第二反應(yīng)混合物分離 結(jié)晶硫酸鹽。
在一相關(guān)組合物方面中，本發(fā)明提供N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯亞硫酸氫鹽加合物，其適用于制備上述經(jīng)保護(hù)的化合物l前驅(qū)體。
本發(fā)明也提供如本文所述的適用于療法中或適用作藥物的本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽，以 及本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽在制造藥物中的用途，尤其用于制造治療哺乳動物與p阿片受體 活性相關(guān)的病癥的藥物。


圖1顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((5)-2,3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的x射線粉末衍射(XRPD)圖。
圖2顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的差示掃描量熱(DSC)曲線(右側(cè)縱軸) 和熱重分析(TGA)曲線(左側(cè)縱軸)。
圖3顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基腐基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的動態(tài)吸濕 (DMS)曲線。
圖4顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基l-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸鹽的結(jié)晶水合物的x射線粉末衍射(XRPD)圖。
圖5顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸鹽的結(jié)晶水合物的差示掃描量熱 (DSC)曲線(右 側(cè)縱軸)和熱重分析(TGA)曲線(左側(cè)縱軸)。
圖6顯示本發(fā)明的3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((5)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸鹽的結(jié)晶水合物的動態(tài)吸濕(DMS)曲線。
具體實施例方式
參考附圖來說明本發(fā)明的多個方面。
本發(fā)明提供3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基l-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物。 定義
當(dāng)描述本發(fā)明的化合物、組合物和方法時，除非另作說明，否則以下術(shù)語具有以下 含義。
術(shù)語"治療有效量"意指當(dāng)投與需要治療的患者時足以實現(xiàn)治療的量。 如本文中所用的術(shù)語"治療"意指治療例如哺乳動物(尤其人類)的患者的疾病、
病癥或醫(yī)學(xué)病況，其包括
(a) 預(yù)防疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況發(fā)生，即對患者的預(yù)防性治療；(b) 改善疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，即消除患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況或使其消 退，包括抵消其它治療劑的效果。
(c) 抑制疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況，即減緩或遏止患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的 發(fā)展；或
(d) 減輕患者的疾病、病癥或醫(yī)學(xué)病況的癥狀。
術(shù)語"溶劑化物"意指由一個或多個溶質(zhì)分子(即，本發(fā)明的化合物或其醫(yī)藥上可 接受的鹽)與一個或多個溶劑分子形成的絡(luò)合物或聚集體。所述溶劑化物通常是具有大 體上固定的溶質(zhì)與溶劑摩爾比的結(jié)晶固體。代表性溶劑包括(例如)水、甲醇、乙醇、 異丙醇、乙酸等。當(dāng)溶劑為水時，將形成的溶劑化物特定稱為水合物。
如本文中所用的術(shù)語"結(jié)晶硫酸鹽"或者"結(jié)晶硫酸鹽(無水形式)"或"無水硫 酸鹽"意指在晶格中不包括大體上固定摩爾分?jǐn)?shù)的溶劑分子的結(jié)晶固體，即不為溶劑化 物或水合物的物質(zhì)。本發(fā)明的溶劑化物，或特別是水合物經(jīng)明確鑒別。
須注意除非內(nèi)容另外明確規(guī)定，否則如本說明書和隨附權(quán)利要求書中所用，單數(shù)形 式"一"和"所述"可包括復(fù)數(shù)個提及物。
活性劑
呈本發(fā)明鹽形式的活性劑，即化合物l稱為3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥 基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺。或者，如依AutoNom軟件(德 國法蘭克福市(Frankfurt)的MDL Information Systems, GmbH)實施的使用IUPAC慣 例，將化合物表示為3-((lK,3i ,5S)-8-{2-[環(huán)己基甲基-((。-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙 基}-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺。本文中所用名稱因此對應(yīng)于IUPAC符號，其中明 確表示經(jīng)取代的苯基相對于8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛垸基團(tuán)的內(nèi)定向。在其它常用命名法中， 將分子的"((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基"部分以不同方式稱為((S)-2,3-二羥基-l-氧代丙 基)氨基或((S)-2,3-二羥基丙酰氨基)。
本發(fā)明的鹽形式
在一方面中，本發(fā)明提供3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基〗 乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺結(jié)晶硫酸鹽。
在一方面中，本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽由具有兩個或兩個以上在選自以下各值的26值 處的衍射峰(包括三個或三個以上和四個或四個以上衍射峰)的x射線粉末衍射(XRPD) 圖來表征6.58土0.20、 7.52±0.20、 9,35±0.20、 14.69±0.20、 16.01 ±0.20、 17.45±0.20、 17.99±0.20、 18.62±0.20、 19.76±0.20、 21.11 ±0.20、 22.07±0.20、 23,18±0,20、 23,74 ±0,20、 24.56±0.20、 25.63±0.20、 26.45±0.20、 27.86±0.20、 28.31 ±0.20、 29.54±0,20、30.59±0.20、 31.58±0.20、 33.89±0.20和36.02±0.20。具體來說，在此方面中，所述
晶型由具有兩個或兩個以上在選自以下各值的2e值處的衍射峰(包括三個或三個以上
和四個或四個以上衍射峰)的x射線粉末衍射圖來表征14.69±0.20、 16.01±0.20、 21.11 ±0.20、 22.07±0.20和23.18±0.20。
如在粉末x射線衍射領(lǐng)域中所熟知，相比于相對峰高，XRPD光譜的峰位置對例如 試樣制備和儀器幾何尺寸的細(xì)節(jié)等實驗細(xì)節(jié)的敏感度相對較低。因此在一方面中，化合 物1的結(jié)晶硫酸鹽由峰位置大體上與圖I中所示的那些峰位置一致的x射線粉末衍射圖 來表征。
所述結(jié)晶硫酸鹽結(jié)構(gòu)己進(jìn)一步由單晶x射線衍射分析來表征，其提供以下晶格參數(shù) 單位晶胞為斜方晶，其尺寸為a=6.8239 A,b=16.2275 A, c=24.2021 A, a=e=Y=90° ; 晶胞體積(V)為2680.0 A3;計算密度為1.38g/cm3;空間群為P222(#19)。所得分 子結(jié)構(gòu)證實化學(xué)組成為硫酸根平衡離子與化合物1的摩爾比為1:1的化合物1硫酸鹽的 化學(xué)組成并且不對稱單位晶胞不含有水或其它溶劑分子。從導(dǎo)出原子位置預(yù)測的X射線 粉末衍射峰與所觀察到的XRPD圖極為一致。
在另一方面中，本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽由其在暴露于高溫時的行為來表征。如圖2中 所表明，高度結(jié)晶試樣的差示掃描量熱(DSC)曲線顯示在約19(TC至約205。C范圍內(nèi) 吸熱熱流的峰值，其鑒別為熔化轉(zhuǎn)變。熱重分析(TGA)曲線顯示在熔點以下的溫度下 無顯著重量損失。熱分解大致緊接著熔化發(fā)生。
在又一方面中，結(jié)晶硫酸鹽由其紅外吸收光譜來表征，所述光譜在以下各處顯示顯 著吸收帶約430、 590、 639、 705、 867、 1036、 1053、 1105、 1171、 1231、 1277、 1375、 1391、 1452、 1476、 1553、 1596、 1639、 1664、 2852、 2術(shù)、2928、 2967、 3168和3357
已證實化合物1的結(jié)晶硫酸鹽具有可逆吸附/解吸概況，其具有如圖3中所示的格外 低水平的吸濕性(即在室溫下在2%相對濕度至90%相對濕度的濕度范圍內(nèi)增重小于約 0.3%)。
另外，已發(fā)現(xiàn)在暴露于高溫和高濕后，化合物1的結(jié)晶硫酸鹽穩(wěn)定。在4(TC和75呢 相對濕度下儲存4周后，HPLC分析顯示無化學(xué)降解并且DSC、 TGA或XRPD結(jié)果無可 檢測變化。
在另一方面中，本發(fā)明提供化合物1的硫酸鹽的結(jié)晶水合物。
在一方面中，本發(fā)明的硫酸鹽的結(jié)晶水合物由具有兩個或兩個以上在選自以下各值 的29值處的衍射峰(包括三個或三個以上和四個或四個以上衍射峰)的x射線粉末衍射(XRPD)圖來表征9,41 ±0.20、 9.98±0.20、 15.17±0.20、 16.70±0.20、 18.59±0.20、 19.46±0.20、 19.91 ±0.20、 20.63±0.20、 21.35±0.20、 21.89±0.20、 23.00±0.20、 24.20 ±0.20、 25.40±0.20、 26.03±0.20、 27.44±0.20、 28.46±0.20、 29.45±0.20、 31.22±0.20、 31.82±0.20、 33.17±0.20、 33.56±0.20和36.89±0.20。具體來說，在此方面中，所述 晶型由具有兩個或兩個以上在選自以下各值的2e值處的衍射峰(包括三個或三個以上 和四個或四個以上衍射峰)的x射線粉末衍射圖來表征16.70±0.20、 18.59±0.20、 19.46 ±0.20、 19.91 ±0.20、 23.00±0.20禾卩24.20±0.20。
在另一方面中，化合物1的硫酸鹽的結(jié)晶水合物由峰位置大體上與圖4中所示的那 些峰位置一致的x射線粉末衍射圖來表征。
本發(fā)明的硫酸鹽的結(jié)晶水合物也由其差示掃描量熱(DSC)曲線來表征，所述曲線 顯示兩個吸熱事件當(dāng)在KTC/分鐘的加熱速率下分析時，吸熱熱流在約125。C至約133 。C范圍內(nèi)的第一峰和在約178。C至約183。C范圍內(nèi)的第二峰，如圖5中說明。熱重分析 (TGA)曲線顯示在約6(TC與約14(TC之間的第一個熱事件和在約14(TC與約1卯'C之間 的第二個熱事件。在第一個熱事件中蒸發(fā)的物質(zhì)的TGA聯(lián)用IR分析與具有約一摩爾水 /摩爾化合物1硫酸鹽的水合物組成一致。
令人驚訝地，化合物1的硫酸鹽的結(jié)晶水合物顯示較低吸濕性。如圖6中說明，結(jié) 晶水合物在室溫下在約2%至約卯％相對濕度的整個范圍內(nèi)顯示可逆吸附/解吸概況，同 時在整個相對濕度范圍內(nèi)增重小于約0.3%。
在下文實例中進(jìn)一步說明本發(fā)明的鹽形式的這些特性。
合成程序
從易于獲得的起始物料，使用下文實例中所述的程序或使用列于本申請案背景技 術(shù)部分中的共同轉(zhuǎn)讓的美國申請案中所述的程序可制備活性劑，3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基 甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺。
在一個制備方法中，通過使3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基] 乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺與約0.5至約1.5摩爾當(dāng)量(包括約l摩爾當(dāng)量) 硫酸接觸來制備本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽。此反應(yīng)一般在惰性稀釋劑中在約0'C至約65'C， 包括約6(TC至約65'C范圍內(nèi)的溫度下進(jìn)行。除包含約10%水的甲醇水組合外，合適的 惰性稀釋劑包括(例如)甲醇、甲苯、二氯甲垸和例如甲苯與乙腈、二氯甲垸與乙腈， 以及甲苯、乙腈與水的組合。使用這些稀釋劑，制備濃度在約5mg/mL與約400mg/mL 之間，包括在約50 mg/mL與約100 mg/mL之間的反應(yīng)混合物并保持約2小時至約24 小時，任選地伴以攪動。在所述保持期間可將混合物冷卻至約5'C與約2(TC之間。反應(yīng)完成后，可通過任何常規(guī)方法，例如過濾、濃縮、離心等使本發(fā)明的結(jié)晶鹽從 反應(yīng)混合物分離。
或者，通過使水合形式再結(jié)晶來制備本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽。以在約5 mg/ml與約400 mg/ml之間的濃度將結(jié)晶水合物分散于如上所述的惰性稀釋劑中。甲醇或呈約3:1至約 9:1比率的甲醇水組合是尤其適用于此反應(yīng)的稀釋劑。將反應(yīng)混合物保持在約O'C至約 65'C范圍內(nèi)的溫度下(通常伴以攪動)約1小時至約24小時，包括約1小時至約6小 時。在保持期間，通常將反應(yīng)混合物從約65'C冷卻至約5'C與約2(TC之間。為提高產(chǎn)率， 溶液體積可減少約50%，隨后將反應(yīng)混合物在約5'C與約2(TC之間的溫度下保持約1小 時與約24小時之間，包括約1小時與約6小時之間的時段。以常規(guī)方式回收所得晶體。
化合物1的結(jié)晶硫酸鹽和化合物1的硫酸鹽的結(jié)晶水合物兩者均有利地從經(jīng)保護(hù)的 化合物l前驅(qū)體制備。如下文實例中所述，為制備活性劑，使經(jīng)保護(hù)的醛2， N-環(huán)己基 甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯(從其亞硫酸氫鹽加合物3再生)與3-內(nèi)型-(8-氮雜雙 環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-節(jié)酰胺鹽酸鹽4偶合以提供經(jīng)保護(hù)的中間體5，將其脫保護(hù)以提供3-內(nèi)型-{8-[2-(環(huán)己基甲氨基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}芐酰胺6。
中間體6與(4S)-2，2-二甲基-l，3-二氧戊環(huán)-4-甲酸鋰7的反應(yīng)提供經(jīng)保護(hù)的中間體 (S)-2，2-二甲基-[l，3]二氧戊環(huán)-4-甲酸{2-[3-(3-氨甲酰基-苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基]
乙基}環(huán)己基甲基-酰胺8。在約2(TC與約3(TC之間的溫度下，使經(jīng)保護(hù)的中間體8與約0.8至約1.3當(dāng)量，通 常約1至約1.2當(dāng)量的硫酸水溶液在例如乙酸乙酯或乙酸異丙酯等惰性稀釋劑中接觸。 反應(yīng)混合物中通常包括可與反應(yīng)混合物混溶并且產(chǎn)物溶解性較小的第二稀釋劑。乙腈適 用作第二稀釋劑。通常將反應(yīng)混合物攪拌約2小時與約72小時之間的時段，使化合物8 脫保護(hù)并形成化合物1的中間體級固體硫酸鹽，其通常主要是化合物1的硫酸鹽的結(jié)晶 水合物?？梢猿Ｒ?guī)方式(例如通過過濾)來分離中間體級產(chǎn)物。
可通過使中間體級硫酸鹽產(chǎn)物再結(jié)晶來獲得水合形式，例如通過在加熱下將中間體 級產(chǎn)物懸浮于乙腈中、添加水以促進(jìn)溶解、冷卻至環(huán)境溫度并分離再結(jié)晶的水合形式， 如下文實例2中所述。
化合物1的結(jié)晶硫酸鹽可由上述脫保護(hù)步驟的中間體級固態(tài)產(chǎn)物獲得。以約5 mg/mL與約400 mg/mL之間，包括約50 mg/mL與約200 mg/mL之間的濃度將中間體級 產(chǎn)物分散于包含甲醇的惰性稀釋劑中。令人驚訝地，已確定具有至多25%水，包括約0% 與約15%之間的水，和約5%與約15%之間的水的甲醇水組合是制備無水結(jié)晶鹽的適用 稀釋劑。具體來說，包含約10%水的甲醇水組合適用于將中間體級產(chǎn)物再結(jié)晶為本發(fā)明 的無水硫酸鹽。
在一個典型的再結(jié)晶方法中，加熱反應(yīng)混合物直至獲得完全溶解，例如將反應(yīng)混合 物加熱至約65°C，并接著歷經(jīng)約2小時與約24小時之間的時段冷卻至約5'C與約22°C 之間。任選地，當(dāng)反應(yīng)混合物在溶解溫度以下時，可添加無水硫酸鹽的晶種。以常規(guī)方 式(例如通過過濾)來回收所得晶體。
根據(jù)又一方法，水合形式可從結(jié)晶硫酸鹽(無水)形式制備。通常例如通過凍干或 快速蒸發(fā)從結(jié)晶硫酸鹽制備的溶液來將結(jié)晶硫酸鹽首先轉(zhuǎn)化為溶解性較大的非晶型。接 著將非晶固體硫酸鹽物質(zhì)分散于例如25%水與75%乙腈的水性溶劑系統(tǒng)中，并任選地在 約0。C至約65。C范圍內(nèi)的溫度下，攪動約12小時以上或約24小時以上的時段。通常首 先將溫度升高至約65'C并接著降低至約5'C與約20'C之間。以常規(guī)方式回收所得結(jié)晶水合物形式。
因此，在一方法方面中，除其它方法之外，本發(fā)明提供制備化合物1的結(jié)晶硫酸鹽 的方法，所述方法包含(a)使經(jīng)保護(hù)的化合物l前驅(qū)體(其中羥基經(jīng)保護(hù))與硫酸接 觸以形成第一反應(yīng)混合物；(b)從第一反應(yīng)混合物分離化合物1的中間體級固體硫酸鹽； (C)將中間體級固體硫酸鹽分散于包含甲醇的稀釋劑中以形成第二反應(yīng)混合物；和(d) 從第二反應(yīng)混合物分離結(jié)晶硫酸鹽。
此外，在一組合物方面中，本發(fā)明提供適用于制備化合物1的N-環(huán)己基甲基-(2-氧 代乙基)-氨基甲酸芐酯亞硫酸氫鹽加合物3。如制備1中所述，可通過使用三乙酰氧基 硼氫化鈉使環(huán)己烷甲醛經(jīng)2，2-二乙氧基乙胺還原性胺化，接著添加氨基保護(hù)基、使醛官 能團(tuán)脫保護(hù)，并通過與亞硫酸氫鈉反應(yīng)轉(zhuǎn)化成亞硫酸氫鹽加合物來制備亞硫酸氫鹽加合 物3。或者可通過催化氫化來執(zhí)行初始還原性胺化。合適的氫化催化劑包括(但不限于) 鈀、鉑和阮內(nèi)(Raney)鎳催化劑。
醫(yī)藥組合物
通常以醫(yī)藥組合物或調(diào)配物的形式向患者投與本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽形式?？赏ㄟ^任 何可接受的投藥途徑向患者投與所述醫(yī)藥組合物，可接受的投藥途徑包括(但不限于) 經(jīng)口、經(jīng)直腸、經(jīng)陰道、經(jīng)鼻、吸入、局部(包括經(jīng)皮)和不經(jīng)腸投藥方式。
因此，在本發(fā)明的一個組合物方面中，本發(fā)明是關(guān)于包含醫(yī)藥上可接受的載劑或賦 形劑和治療有效量的化合物1或其溶劑化物的結(jié)晶硫酸鹽的醫(yī)藥組合物。任選地，在需 要時，所述醫(yī)藥組合物可含有其它治療劑和/或調(diào)配劑。當(dāng)討論組合物時，應(yīng)了解術(shù)語"本 發(fā)明的鹽"包括化合物1以及其溶劑化物，尤其水合物的結(jié)晶硫酸鹽。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常含有治療有效量的本發(fā)明以鹽形式存在的活性劑。通常所 述醫(yī)藥組合物將含有約0.1重量％至約95重量％活性劑；優(yōu)選約5重量％至約70重量％; 并且更優(yōu)選約10重量％約60重量％活性劑。
任何常規(guī)載劑或賦形劑都可用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。特定載劑或賦形劑，或載 劑或賦形劑的組合的選擇將視用以治療特定患者或醫(yī)學(xué)病況或疾病病況類型的投藥方 式而定。就此而言，用于特定投藥方式的合適醫(yī)藥組合物的制備完全在制藥領(lǐng)域技術(shù)人 員的范圍內(nèi)。另外，用于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的載劑或賦形劑可以外購。通過進(jìn)一步說 明，在以下文獻(xiàn)中描述常規(guī)調(diào)配技術(shù)雷明登氏藥學(xué)的理論與實踐(/ em^gtow.' 77^ Science Pracrice o/P/iannfloO，第20版，利平科特'威廉斯*杯特出版公司(Lippincott Williams & White)，馬里蘭州巴爾的摩市(Baltimore, Maryland) (2000);和H.C.安塞 爾(H.C.Ansel)等人藥物劑型與藥物傳遞系統(tǒng)(/Vwtnnflceim'co/Z^^ge Fo t^ ""^Z)rwgZ^/!Very ^"ems)，第7版，利平科特 威廉斯 懷特出版公司，馬里蘭州巴爾的摩市 (1999)。
可充當(dāng)醫(yī)藥上可接受的載劑的物質(zhì)的代表性實例包括(但不限于)以下各者糖， 例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素，例如微晶纖維 素和其衍生物，例如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；黃蓍膠粉；麥芽；明 膠；滑石；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、 橄欖油、玉米油和大豆油；二醇，例如丙二醇；多元醇，例如丙三醇、山梨糖醇、甘露 糖醇和聚乙二醇；酯，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫 氧化鋁；褐藻酸；無熱原質(zhì)水；等滲鹽水；林格氏溶液(Ringer's solution);乙醇；磷酸 鹽緩沖液；和其它用于醫(yī)藥組合物中的無毒性相容物質(zhì)。
通常通過充分和緊密混合或摻合活性劑與醫(yī)藥上可接受的載劑和一種或多種任選 成分來制備醫(yī)藥組合物。接著可使用常規(guī)程序和設(shè)備將所得均勻摻合的混合物成形或裝 填于片劑、膠囊、丸劑等中。
本發(fā)明的醫(yī)藥組合物優(yōu)選以單位劑型包裝。術(shù)語"單位劑型"是指適用于對患者給 藥的實體離散單元，即，每一單元含有預(yù)定量的活性劑，其經(jīng)計算以單獨或與一個或多 個額外單元組合來產(chǎn)生所需治療效果。例如，所述單位劑型可為膠囊、片劑、丸劑等，
或適用于不經(jīng)腸投與的單位包裝。
在一個實施例中，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物適合于經(jīng)口投與。用于經(jīng)口投與的合適醫(yī)藥 組合物可呈膠囊、片劑、丸劑、口含劑、扁膠劑、糖衣藥丸、散劑、顆粒劑的形式；或 呈水性或非水性液體中的溶液或懸浮液的形式；或呈水中油型或油中水型液體乳液的形 式；或呈酏劑或糖漿的形式；等等；每一者含有預(yù)定量的本發(fā)明化合物作為活性成分。
當(dāng)想要以固體劑型(即以膠囊、片劑、丸劑等形式)經(jīng)口投與時，本發(fā)明的醫(yī)藥組 合物通常將包含活性劑和一種或多種醫(yī)藥上可接受的載劑，例如檸檬酸鈉或磷酸二鈣。 任選地或替代地，所述固體劑型也可包含填充劑或增量劑，例如淀粉、微晶纖維素、 乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸；粘合劑，例如羧甲基纖維素、褐藻酸鹽、明 膠、聚乙烯吡咯垸酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；保濕劑，例如甘油；崩解劑，例如瓊脂、碳 酸l 、馬鈴薯或木薯淀粉、褐藻酸、某些硅酸鹽，和/或碳酸鈉；溶液阻滯劑，例如石蠟； 吸收促進(jìn)劑，例如季銨化合物；濕潤劑，例如鯨蠟醇和/或單硬脂酸甘油酯；吸附劑，例 如高嶺土和/或膨潤土；潤滑劑，例如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂 基硫酸鈉和/或其混合物；著色劑；和緩沖劑。
脫模劑、濕潤劑、涂布劑、甜味劑、調(diào)味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑也可存在于本發(fā)明的醫(yī)藥組合物中。醫(yī)藥上可接受的抗氧化劑的實例包括水溶性抗氧化劑，例 如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等油溶性抗氧化劑， 例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基化羥基茴香醚、丁基化羥基甲苯、卵磷脂、沒食子酸丙酯、 ci-生育酚等；和金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸、山梨糖醇、酒石酸、磷酸等。 用于片劑、膠囊、丸劑等的涂布劑包括用于腸溶衣的涂布劑，例如鄰苯二甲酸乙酸纖維 素、聚乙酸乙烯酯鄰苯二甲酸酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素、甲基丙烯酸-甲基丙烯 酸酯共聚物、偏苯三酸乙酸纖維素、羧甲基乙基纖維素、琥珀酸乙酸羥丙基甲基纖維素 等。
也可使用(例如)不同比例的羥丙基甲基纖維素；或其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/ 或微球體來調(diào)配本發(fā)明的醫(yī)藥組合物以提供活性劑的緩慢或受控釋放。另外，本發(fā)明的 醫(yī)藥組合物可任選地含有乳濁劑，并且可經(jīng)調(diào)配以使其僅或優(yōu)先在胃腸道的某一部分任 選地以延時方式釋放活性成分?？墒褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物質(zhì)和蠟?；钚詣?也可呈用(若適當(dāng)) 一種或多種上述賦形劑微囊封的形式。
用于經(jīng)口投與的合適液體劑型包括(例如)醫(yī)藥上可接受的乳液、微乳液、溶液、 懸浮液、糖漿和酏劑。液體劑型通常包含活性劑和惰性稀釋劑(例如水或其它溶劑)、 增溶劑和乳化劑(例如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、芐醇、苯甲酸芐酯、丙二 醇、1,3-丁二醇)、油(尤其棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻 油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯，以及其混合物。除活 性成分以外，懸浮液可含有懸浮劑，例如乙氧基化異硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脫 水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂和黃蓍膠，以及其混合物。
本發(fā)明的鹽也可不經(jīng)腸投與(例如通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或腹膜內(nèi)注射)。對 于不經(jīng)腸投與而言，活性劑通常與用于不經(jīng)腸投與的合適媒劑混合，所述合適媒劑包括 (例如)無菌水溶液、生理鹽水、例如丙二醇等低分子量醇、聚乙二醇、植物油、明膠、 例如油酸乙酯等脂肪酸酯等。不經(jīng)腸調(diào)配物也可含有一種或多種抗氧化劑、增溶劑、穩(wěn) 定劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑或分散劑?？赏ㄟ^使用無菌可注射介質(zhì)、滅菌劑、過濾、 輻射或熱來使這些調(diào)配物無菌。
或者，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物經(jīng)調(diào)配以通過吸入投與。用于通過吸入來投與的合適醫(yī) 藥組合物通常將呈氣霧劑或粉末的形式。 一般使用例如定量吸入器、干粉吸入器、噴霧 器或類似傳遞裝置等熟知傳遞裝置來投與所述組合物。
當(dāng)通過使用加壓容器吸入投藥時，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物通常將包含活性成分和合適 的推進(jìn)劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲垸、二氯四氟乙垸、二氧化碳或其它合適氣體。另外，醫(yī)藥組合物可呈膠囊或藥筒(例如由明膠制得)的形式，其包含本發(fā)明的化合物 和適于粉末吸入器中使用的粉末。合適的粉末基質(zhì)包括(例如)乳糖或淀粉。
本發(fā)明的鹽也可使用已知經(jīng)皮傳遞系統(tǒng)和賦形劑來經(jīng)皮投與。例如，活性劑可與例 如丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯、氮雜環(huán)垸-2-酮等滲透增強(qiáng)劑混合，并加入貼片或類似 傳遞系統(tǒng)中。若需要，則包括膠凝劑、乳化劑和緩沖劑在內(nèi)的其它賦形劑可用于所述經(jīng) 皮組合物中。
若需要，則本發(fā)明的鹽可與一種或多種其它治療劑組合投與。在此實施例中，本發(fā) 明的鹽與其它治療劑物理混合以形成含有兩者藥劑的組合物；或者各藥劑以獨立且不同 的組合物形式存在，所述組合物同時或依次投與患者。
例如，可使用常規(guī)程序和設(shè)備將本發(fā)明的鹽與第二治療劑組合以形成包含化合物1 和第二治療劑的組合物。另外，治療劑可與醫(yī)藥上可接受的載劑組合以形成包含本發(fā)明 的鹽、第二治療劑和醫(yī)藥上可接受的載劑的醫(yī)藥組合物。在此實施例中，通?；旌匣驌?合組合物的組分以產(chǎn)生物理混合物。接著使用本文所述的任何途徑以治療有效量投與這 一物理混合物。或者，治療劑在投與患者之前可保持獨立并且不同。在此實施例中，藥 劑在投與之前并不物理上混合在一起，而是作為獨立組合物同時或在獨立時間投與。所 述組合物可獨立包裝或可以試劑盒形式包裝在一起。試劑盒中的兩種治療劑可通過相同 投藥途徑或通過不同投藥途徑來投與。
任何與本發(fā)明活性劑相容的治療劑都可用作第二治療劑。具體來說，經(jīng)由除p阿片
受體拮抗作用以外的機(jī)制起作用的胃腸道蠕動促進(jìn)劑(prokinetic agent)可與本發(fā)明的 化合物組合使用。例如，5-HT4受體促效劑，如替加色羅(tegaserod)、倫扎必利 (腿apride)、莫沙必利(mosapride)、普卡必利(prucalopride)、 l-異丙基-lH-吲唑-3-甲酸K1S，3R,5R)-8-[2-(4-乙?；哙?1-基)乙基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺、1-異丙 基-2-氧代-l,2-二氫喹啉-3-甲酸mS,3R，5R)-8-[(R)-2-羥基-3-(甲垸磺?；?甲基-氨基)丙 基]-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}酰胺或4-(4-{[(2-異丙基-出-苯并咪唑-4-羰基)氨基]甲基}-哌啶-l-基甲基)哌啶-l-甲酸甲酯可用作第二治療劑。
其它適用的胃腸道蠕動促進(jìn)劑包括(但不限于)5-HT3受體促效劑(例如普莫司曲 (pumosetrag))、 5-HT^受體拮抗劑(例如AGI001)、 a-2-5配體(例如PD-217014)、 氯離子通道開啟劑(例如魯比前列酮(lubiprostone))、多巴胺拮抗劑(例如伊托必利 (itopride)、滅吐靈(metaclopramide)、多潘立酮(domperidone))、 GABA-B促效劑(例 如巴氯芬(baclofen)、 AGI 006)、 k阿片促效劑(例如阿西馬朵林(asimadoline))、蕈 毒堿M!和M2拮抗劑(例如阿克替胺(acotiamide))、胃動素(motilin)促效劑(例如米坦西諾(mitemcinal))、鳥苷酸環(huán)化酶活化劑(例如MD-1100)和饑餓素(ghrelin) 促效劑(例如Tzp 101、 RC 1139)。另外，本發(fā)明的鹽可與阿片治療劑組合。這些阿片劑包括(但不限于)嗎啡、哌替 啶(pethidine)、可待因(codeine)、雙氫可待因(dihydrocodeine)、奧施康定(oxycontin)、 氧可酮(oxycodone)、氫可酮(hydrocodone)、舒芬太尼(sufentanil)、芬太尼(fentanyl)、 瑞芬太尼(remifentanil)、 丁丙諾啡(b叩renorphine)、美沙酮(methadone)和海洛因 (heroin )。在此項技術(shù)中己知所述治療劑的大量其它實例并且任何這些己知治療劑都可與本 發(fā)明的化合物組合使用。第二藥劑(若包括)以治療有效量存在，即以與本發(fā)明的化合 物共投與時產(chǎn)生治療有利效果的任何量存在。與本發(fā)明的化合物組合投與的其它治療劑 的合適劑量通常在約0. 05微克/天至約100毫克/天的范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組合物任選地包括如上所述的第二治療劑。以下實例說明本發(fā)明的代表性醫(yī)藥組合物慮l激,激力，^f經(jīng)/7設(shè)與游齊欽發(fā),囊充分摻合本發(fā)明的鹽(50 g)、噴霧干燥乳糖(200 g)和硬脂酸鎂(10 g)。將所得 組合物裝填于硬明膠膠囊中(260mg組合物/膠囊)。 源^激,辨S,屑于經(jīng)0^與游^銀份i 蘼充分摻合本發(fā)明的鹽(20mg)、淀粉(89mg)、微晶纖維素(89mg)和硬脂酸鎂 (2mg)并接著使其通過第45號網(wǎng)目美國篩。將所得組合物裝填于硬明膠膠囊中(200 mg 組合物/膠囊)。源^欽貧辨C, ^f經(jīng)/7拔與游銀夢i 囊充分摻合本發(fā)明的鹽(10 mg)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯(50 mg)和淀粉 (250 mg)并接著將其裝填于明膠膠囊中(310mg組合物/膠囊)。 源衝欽實辨D:藶f經(jīng)/7嫂與游yf效將本發(fā)明的鹽(5mg)、淀粉(50mg)和微晶纖維素(35mg)通過第45號網(wǎng)目美 國篩并充分混合。將聚乙烯吡咯垸酮(10重量％在水中，4mg)溶液與所得粉末混合， 并接著使此混合物通過第14號網(wǎng)目美國篩。使如此產(chǎn)生的顆粒在50-6(TC下干燥并通過 第18號網(wǎng)目美國篩。接著添加先前已通過第60號網(wǎng)目美國篩的羧甲基淀粉鈉(4.5 mg)、 硬脂酸鎂(0.5 mg)和滑石(lmg)至顆粒中?；旌现螅趬浩瑱C(jī)上壓縮混合物得到 重100 mg的片劑。源f激實辨E, ^7經(jīng)"^與游#*充分摻合本發(fā)明的鹽(25mg)、微晶纖維素(400 mg)、氣相二氧化硅(10mg)和 硬脂酸(5mg)并接著將其壓縮形成片劑(440mg組合物/片劑)。源^激實賴F, ^f經(jīng)o^與游卓新,y廣yf淑充分摻合本發(fā)明的鹽(15mg)、玉米淀粉(50mg)、交聯(lián)羧甲纖維素鈉(25mg)、 乳糖(120mg)和硬脂酸鎂(5mg)并接著將其壓縮形成單面刻痕片劑(215mg組合物 /片劑)。源衝激實賴G;屑f經(jīng)/7^與脫著浮資充分混合以下成分以形成用于經(jīng)口投與的懸浮液，其含有100 mg活性成分/10 mL懸浮液^_1本發(fā)明的鹽 0.1 g富馬酸 0.5 g氯化鈉 2.0 g對羥基苯甲酸甲酯 0.15 g對羥基苯甲酸丙酯 0.05 g砂糖 25.5 g山梨糖醇(70%溶液) 12.85 g維格姆(Veegum) k (范德比爾特公司(Vanderbilt Co.)) 1.0 g調(diào)味劑 0.035 mL著色劑 0.5 mg蒸餾^^_適量補(bǔ)足至100 mL錄f欽實辨/f, f教資^激將微米尺寸化的本發(fā)明鹽(1 mg)與乳糖(25 mg)摻合并接著裝填于明膠吸入藥 筒中。使用粉末吸入器來投與藥筒內(nèi)容物。 源紀(jì)欽實賄/, ^"注浙豫衝笏將本發(fā)明的鹽(0.1 g)與0.1 M檸檬酸鈉緩沖溶液(15mL)摻合。使用1N鹽酸 水溶液或1 N氫氧化鈉水溶液將所得溶液的pH值調(diào)節(jié)為pH 6。接著添加在檸檬酸鹽緩 沖劑中的無菌生理鹽水以提供20 mL的總體積。應(yīng)了解適用于特定投藥方式的任何形式的本發(fā)明的鹽(即結(jié)晶鹽或溶劑化物)都可 用于上文討論的醫(yī)藥組合物中。效用基-((5)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽是p阿片受體拮抗劑，并因此預(yù)期本發(fā)明的鹽適 用于治療由)i阿片受體介導(dǎo)或與|i阿片受體活性相關(guān)的醫(yī)學(xué)病況，即通過用n阿片受體 拮抗劑治療可得到改善的醫(yī)學(xué)病況。具體來說，預(yù)期本發(fā)明的鹽適用于治療與使用阿片 止痛劑相關(guān)的不良反應(yīng)，即例如便秘、胃排空減少、腹痛、氣脹、惡心和胃食道逆流等 癥狀，其統(tǒng)稱為阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂。也預(yù)期本發(fā)明的鹽形式適用于治療術(shù)后腸梗阻， 即在腹部或其它手術(shù)之后發(fā)生的胃腸道運(yùn)動減少的病癥。另外，已提出例如化合物l的 M阿片受體拮抗劑化合物可用于逆轉(zhuǎn)阿片誘導(dǎo)的惡心和嘔吐。因為已顯示在動物模型中化合物1增加胃腸(GI)道的運(yùn)動，所以預(yù)期本發(fā)明的鹽 適用于治療包括人類在內(nèi)的哺乳動物由運(yùn)動減少引起的GI道病癥。這些GI運(yùn)動病癥包 括(例如)慢性便秘、便秘主導(dǎo)型腸易激綜合征(C-IBS)、糖尿病性與特發(fā)性胃輕癱和 功能性消化不良。因此在一方面中，本發(fā)明提供增加哺乳動物胃腸道運(yùn)動的方法，所述方法包含向哺 乳動物投與治療有效量的包含醫(yī)藥上可接受的載劑和本發(fā)明的鹽的醫(yī)藥組合物。當(dāng)用以治療GI道運(yùn)動減少的病癥或由y阿片受體介導(dǎo)的其它病況時，本發(fā)明的鹽 通常將以單次日劑量或以每天多次劑量來經(jīng)口投與，但可使用其它投藥形式。例如，尤 其當(dāng)用以治療術(shù)后腸梗阻時，本發(fā)明的化合物可不經(jīng)腸投與。每劑量投與的活性劑的量 或每天投與的總量通常將由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)情況來決定，所述情況包括待治療的病況、所 選投藥途徑、實際所投與的化合物和其相對活性、個別患者的年齡、體重和反應(yīng)、患者 癥狀的嚴(yán)重程度等。用于治療GI道運(yùn)動減少病癥或由ja阿片受體介導(dǎo)的其它病癥的合適劑量將在約 0.0007毫克/公斤/天活性劑至約20毫克/公斤/天活性劑，包括約0.0007毫克/公斤/天活 性劑至約1.4毫克/公斤/天活性劑的范圍內(nèi)。對于平均70公斤的人而言，這將為約0.05 毫克/天活性劑至約100毫克/天活性劑的量。在本發(fā)明的一方面中，本發(fā)明的化合物用以治療阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂。當(dāng)用以治 療阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂時，本發(fā)明的化合物通常將以單次日劑量或以每天多次劑量來 經(jīng)口投與。用于治療阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂的劑量優(yōu)選將在約0.05毫克/天至約100毫 克/天的范圍內(nèi)。在本發(fā)明的另一方面中，本發(fā)明的化合物用以治療術(shù)后腸梗阻。當(dāng)用以治療術(shù)后腸 梗阻時，本發(fā)明的化合物通常將以單次日劑量或以每天多次劑量來經(jīng)口或靜脈內(nèi)投與。 用于治療術(shù)后腸梗阻的劑量 選將在約0.05毫克/天至約100毫克/天的范圍內(nèi)。19本發(fā)明也提供治療患有與(J阿片受體活性相關(guān)的疾病或病況的哺乳動物的方法，所 述方法包含向哺乳動物投與治療有效量的本發(fā)明化合物或包含本發(fā)明化合物的醫(yī)藥組 合物。本發(fā)明的活性劑任選地與另外一種或多種治療劑組合投與，尤其與經(jīng)由非H阿片機(jī) 制起作用的胃腸道蠕動促進(jìn)劑組合投與。因此在另一方面中，本發(fā)明的方法和組合物另 外包含治療有效量的另一種胃腸道蠕動促進(jìn)劑。如上所述，本發(fā)明的鹽是(J阿片受體拮抗劑。因此本發(fā)明另外提供拮抗哺乳動物體 內(nèi)的p阿片受體的方法，所述方法包含向哺乳動物投與本發(fā)明的鹽。除其它特性之外，已發(fā)現(xiàn)呈游離堿和硫酸鹽形式的本發(fā)明活性劑在|i受體功能分析 中顯示與ia阿片受體有效結(jié)合并且很少有或無促效作用。因此，本發(fā)明的鹽是有效的H 阿片受體拮抗劑。另外，在動物模型中，活性劑已顯示與中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性相比主要為 周邊活性。因此，可預(yù)期本發(fā)明的鹽逆轉(zhuǎn)阿片誘導(dǎo)的GI運(yùn)動減少，而不干擾止痛的有 利中樞作用。使用所屬領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種活體外和活體內(nèi)分析，可證明本發(fā)明化 合物的這些特性以及效用。在以下實例中進(jìn)一步詳細(xì)描述代表性分析。實例提供以下合成和生物實例以說明本發(fā)明，并且不應(yīng)以任何方式將其視為限制本發(fā)明 的范圍。在以下實例中，除非另作說明，否則以下縮寫具有以下含義。未在下文定義的 縮寫具有其一般接受的含義。DIPEA=W，iV-二異丙基乙胺DMF=W，AT-二甲基甲酰胺EtOAc=乙酸乙酯E認(rèn)=乙醇MeTHF=2-甲基四氫呋喃MTBE=叔丁基甲基醚Na腹DS=雙(三甲基硅烷基)氨基鈉PyBop=六氟磷酸苯并三唑-l-基氧基三吡咯烷基磷psi=磅/平方英寸Rf=滯留時間THF=四氫呋喃試劑和溶劑購自商業(yè)供應(yīng)商(奧德里奇公司(Aldrich)、佛盧卡公司(Fluka)、西格司(Sigma)等)，并且未經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。除非另外規(guī)定，否則反應(yīng)在氮氣氣氛下進(jìn)行。通過薄層色譜(TLC)、分析高效液相色譜(分析HPLC)和質(zhì)譜分析來監(jiān)測 反應(yīng)混合物的進(jìn)程。通過HPLC分析使用下述方案測定產(chǎn)物的內(nèi)型/外型比。反應(yīng)混合物 如各反應(yīng)中具體所述而處理；其一般通過萃取和其它例如溫度和溶劑依賴性結(jié)晶和沉淀 等純化法加以純化。按慣例通過質(zhì)譜和^-NMR光譜測定法進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)物的表征。對于 NMR測量，將試樣溶解于氖化溶劑(CD3OD、 CDCl3或DMSO-^)中，并且'H-NMR 光譜用Varian Gemini 2000儀器(300 MHz)在標(biāo)準(zhǔn)觀測條件下獲得。通過電噴霧電離 法(ESMS)使用美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司(Applied Biosystems)(加利福尼亞州福斯特市 (Foster City, CA))型號API 150 EX儀器或美國安捷倫公司(Agilent)(加利福尼亞州帕 洛阿爾托市(PaloAlto,CA))型號1100LC/MSD儀器進(jìn)行化合物的質(zhì)譜鑒別。 通用HPLC條件柱 Zorbax SB-Aq， 5 |im. 4.6 X 250 mm柱溫 40°C流速 l.OmL/min流動相 A-水/ACN (98:2) +0.1% TFAB二水/ACN (10:90) +0.1% TFA,注入體積 10|aL檢測器波長 214 nmHPLC方法1以約1 mg/mL將粗化合物溶解于水/ACN (50:50)中并使用以下梯度歷經(jīng)20 min加 以分析(時間(min) /%B): 0/10、 2.5/20、 9/75、 15/90、 17/90、 18/10、 20/10。 HPLC方法2以約1 mg/mL將化合物溶解于水/ACN (90:10)中并使用以下梯度歷經(jīng)30 min加以 分析(時間(min) /%B): 0/10、 13/10、 23/65、 28/90、 29/90、 30/10。 HPLC方法3以約1 mg/mL將化合物溶解于水/ACN (90:10)中并使用以下梯度歷經(jīng)55 min加以 分析(時間(min) /%B): 0/10、 10/20、 46/75、 47/90、 50/10、 55/10。制備1: N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯亞硫酸氫鹽加合物的合成 a. N-環(huán)己基甲基-(2，2-二乙氧基乙基)胺的制備向2，2-二乙氧基乙胺(209 mL， 1.43 mol)與MeTHF (1050 L)的混合物中添加環(huán) 己垸甲酸(107mL， 0.89 mol)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30 min并冷卻至0°C 。歷經(jīng) 40min添加三乙酰氧基硼氫化鈉(378 g, 1.79 mol)并將反應(yīng)混合物攪拌2h，冷卻至0鹽水(1:1, 2 X 1 L)洗滌有機(jī)層并將體積縮 減至約20%。添加MeTHF (1L)并將體積縮減至約20%。將粗標(biāo)題中間體的溶液直接 用于下一步中。b. N-環(huán)己基甲基-(2，2-二乙氧基乙基)氨基甲酸芐酯的制備向先前步驟的產(chǎn)物(約213 g，約0.9mol)中添加MeTHF(2L)禾D DIPEA(233 mL， 1.34 mol)。將反應(yīng)混合物冷卻至O'C并逐滴添加氯甲酸芐酯(140mL， 0.98 mol)。將反 應(yīng)混合物在0'C下攪拌30 min，在0'C至室溫下攪拌2 h,并接著在室溫下攪拌1 h。添 加水(1.6L)并將反應(yīng)混合物攪拌10min。分離各相并以碳酸氫鈉(1.6L)和水(1.6L) 洗滌有機(jī)層。分離各層并將有機(jī)層縮減至約20%。添加MeTHF(lL)并將體積縮減至 約20%。將粗標(biāo)題中間體的溶液直接用于下一步中。c. N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸節(jié)酯亞硫酸氫鹽加合物的合成 向先前步驟的產(chǎn)物(約302 g，約0.62mo1)和乙腈(2L)中添加1MHC1 (2L)并在3CTC下攪拌反應(yīng)混合物7h。添加乙酸乙酯(2L)并攪拌反應(yīng)混合物10min。分離 各相，以1MHC1 (1.5L)洗滌有機(jī)層，再分離各相并以0.5MHC1 (1 L)洗滌有機(jī)層。 添加亞硫酸氫鈉(71.4 g, 0.69 mol)并將反應(yīng)混合物攪拌過夜，接著過濾。以乙酸乙酯 (1L)洗滌反應(yīng)器和濾餅。將所得溶液在空氣中干燥2 h并在真空下干燥過夜以得到呈 白色固體狀的標(biāo)題化合物(199 g，根據(jù)HPLC純度大于997。面積)。由相同程序處理濾 液得到第二批標(biāo)題化合物(30 g)。制備2: 3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1辛-3-基)-芐酰胺的合成a. 8-節(jié)基-3-外型-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-醇的制備 向3L燒瓶中添加氯化鈰粉(194 g， 0.79mol)。以氮氣吹拂燒瓶并添加THF (800mL)。在25t下攪拌反應(yīng)混合物1 h。向混合物中逐滴添加約1M在THF中的3-甲氧基 苯基溴化鎂(800 mL， 0.87 mol)。在3'C下攪拌所得漿料1.5小時。接著逐滴添加8-芐 基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-酮(120.4g， 0.56 mol)于THF(200mL)中的溶液，同時保 持內(nèi)部溫度在-5'C。攪拌所得溶液15min。將反應(yīng)混合物添加至含有6 N HC1 (800 mL) 并且溫度保持在l(TC的燒瓶中。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑之后，將反應(yīng)混合物在室溫下攪 拌過夜。過濾分離固體，以6NHCL (70mL)和乙腈(3 X 70 mL)洗漆，并干燥以 得到呈奶白色固體狀的標(biāo)題中間體的鹽酸鹽(161 g)。b. 8-節(jié)基-3-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯的制備向3 L燒瓶中添加8-芐基-3-外型-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-醇鹽酸鹽 (383.9 g， 1.06 mol)、 6 M HC1 (800 mL)和MeTHF (200 mL)。將所得漿料在氮氣下在70'C加熱2.5h。將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至12L反應(yīng)器中并冷卻至1(TC。將反應(yīng)燒瓶以MeTHF (1L)洗滌并將其添加至12L反應(yīng)器中。添加NaOH (50重量％在水中，200 mL)并且 逐份添加另外NaOH (50重量％， 150 mL)直至達(dá)到pH值約13。分離各相，以MeTHF (1 L)萃取水層，并以鹽水(1 L)洗漆合并的MeTHF層。通過在3CTC至40°C下旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)來減少溶劑，產(chǎn)生呈稠厚油狀的標(biāo)題中間體(360 g)。添加EtOH (1.5 L)并將體 積縮減至約500 mL，接著調(diào)整為1.8L。c. 3-內(nèi)型-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛垸的制備向先前步驟中制備的8-芐基-3-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯(在95% EtOH中，400 mL， 0.20 mol)中添加6MHC1 (45 mL)并接著添加MeTHF (50mL)。 反應(yīng)混合物以氮氣凈化，加熱至40'C并添加鈀/碳(10重量％， 8g)。將反應(yīng)器以氫氣(3 X 20psi)加壓并接著在20psi下在40'C氫化18 h。反應(yīng)混合物經(jīng)由硅藻土過濾、濃縮、 以MeTHF (2 X 100 mL)洗滌、經(jīng)由粗糙玻璃過濾器過濾、以MeTHF (10mL)洗滌 并在過濾器上干燥以得到呈白色固體狀的標(biāo)題中間體的鹽酸鹽(31 g，單一異構(gòu)體， (HPLC檢測不到外型異構(gòu)體))。從母液中回收另外5.2g產(chǎn)物。d. 3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-苯酚的制備向500mL燒瓶中添加3-內(nèi)型-(3-甲氧基苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛烷鹽酸鹽(115 g, 0.45 mol)和氫溴酸(48重量％在水中，100 mL， 0.88 mol)。將混合物加熱至12(TC并 在攪拌下保持于這一溫度24 h。添加另外氫溴酸溶液(25 mL)并將反應(yīng)混合物在攪拌 下加熱6小時，接著冷卻至70'C。添加乙腈(200 mL)并將所得漿料冷卻至l(TC ，接 著過濾，并以乙腈(50 mL)洗滌濾餅以產(chǎn)生呈白色顆粒固體狀的標(biāo)題中間體的氫溴酸 鹽(99 g，純度大于99%)。e. 2，2，2-三氟-1-[3-內(nèi)型-(3-羥苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基]乙酮的制備歷經(jīng)20min向3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-苯酚氫溴酸鹽(54.4g, 0.19 mol)、 甲苯(210mL)和三乙胺(40 mL, 0.29 mol)的溶液中添加三氟乙酸酐(54 mL， 0.38 mol)。 在4(TC下攪拌反應(yīng)混合物2 h。添加乙酸乙酯(370mL)和于水中的鹽水(1:1， 265 mL)。 攪拌反應(yīng)混合物15min,分離各相。向有機(jī)層中添加飽和碳酸氫鈉(300mL)并將混合 物劇烈攪拌過夜。分離各相并將有機(jī)層以于水中的鹽水(1:1, 265 mL)洗滌，經(jīng)硫酸 鈉干燥并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除大部分溶劑。添加甲苯(100 mL)并通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑 以得到粗標(biāo)題中間體。f. 三氟甲烷磺酸3-內(nèi)型-[8-(2,2，2-三氟-乙酰基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]苯酯的制備向500 mL燒瓶中添加先前步驟的中間體(32.8 g， 0.11 mol)與三乙胺(23 mL， 0.17 mol)的乙酸乙酯溶液(220 mL)。將溶液冷卻至5°C并逐滴添加三氟甲烷磺酰氯(14 mL， 0.13 mol)。將混合物溫至25'C并在這一溫度下攪拌1 h。添加飽和碳酸氫鈉(200mL)， 分離各層，添加鹽水(150mL)至有機(jī)層，再分離各層，并從有機(jī)層中去除溶劑以得到 粗標(biāo)題中間體。g. 3-內(nèi)型-[8-(2，2，2-三氟乙?；?-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-苯甲腈的制備向100 mL燒瓶中添加三氟甲垸磺酸3-內(nèi)型-[8-(2，2,2-三氟-乙?；?-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1] 辛-3-基]苯酯(25.3 g， 58.7mmo1)、三(二亞節(jié)基丙酮)二鈀(0) (0.81g， 0.9mmo1)、 雙(二苯膦基)二茂鐵(1.01 g, 1.8mmo1)和氰化鋅(4.2 g， 35.8mmo1)。三次以氮氣凈 化燒瓶5min并接著將其置于室內(nèi)真空下持續(xù)5min。向燒瓶中添加DMF (150mL)禾口 蒸餾水(2.5 mL)。將溶液在攪拌下以氮氣凈化10min，加熱至12(TC并在120°C下在氮 氣下攪拌4h。當(dāng)反應(yīng)完成時，添加20g來自通過相同程序制備的先前批次的產(chǎn)物，并 攪拌20 min。通過蒸餾去除大部分溶劑并將溶液冷卻至22。C。向溶液中添加乙酸乙酯(445 mL) 并將所得溶液經(jīng)由硅藻土過濾。添加碳酸氫鈉(450 mL)并攪拌溶液15min。分離各層 并以稀鹽水(2 X 95mL)洗滌有機(jī)層，并經(jīng)由硫酸鈉過濾。通過去除乙酸乙酯將體積 縮減至約50mL。添加異丙醇(150mL)并在22°C下攪動溶液1 h。過濾分離固體并以 異丙醇(2 X 25mL)洗滌以得到呈奶白色/淺褐色固體狀的標(biāo)題中間體(33.5 g，根據(jù) HPLC純度為100%)。從濾液中分離第二批產(chǎn)物(6.3 g，根據(jù)HPLC純度大于98呢)。h. 3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-芐酰胺的合成在攪拌下將3-內(nèi)型-[8-(2,2,2-三氟乙酰基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基]-苯甲腈(10g， 32mmo1)在硫酸(96%, 12 mL)中的溶液加熱至50°C并且在攪拌下保持于這一溫度2 h。將反應(yīng)混合物冷卻至22'C并將其緩慢添加至含有5 N NaOH(90 mL)和甲醇(100 mL) 并冷卻至IO'C的500 mL燒瓶中。過濾鹽沉淀物并在22'C下攪拌濾液1 h。在減壓下濃 縮反應(yīng)混合物。向殘余物中添加MeTHF (150mL)并在22°C下攪拌反應(yīng)混合物5 min。 分離各層并添加MeTHF (100 mL)至水層中。分離各層并添加鹽水(150 mL)至合并 的有機(jī)層中。分離各層并且將有機(jī)層以碳酸鉀干燥并過濾，并去除溶劑。在攪拌下添加 EtOH (25 mL)與濃鹽酸(2.6 mL)的混合物至殘余物中，接著添加MTBE (25 mL) 并在22'C下攪拌溶液。將沉淀的固體過濾并風(fēng)干以得到呈白色固體狀的標(biāo)題化合物的鹽 酸鹽(8g，根據(jù)HPLC純度為97%)。制備3: 3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-節(jié)酰胺的合成3.三氟-甲烷磺酸8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯-3-基酯的制備向500mL燒瓶中添加8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-酮鹽酸鹽(50.4g， 200mmo1)、 EtOAc (160mL)和4 N NaOH (50mL)。將反應(yīng)混合物加熱至30°C并在這一溫度下攪 拌1 h。分離各層并棄去水層。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)將有機(jī)層的體積縮減至約40 mL并添加THF (270 mL)。將所得溶液添加至1 L燒瓶中并冷卻至-20°C 。歷經(jīng)15 min添加NaHMDS溶液(1 M 在THF中，230 mL， 230 mmol)至燒瓶中。在-20土5。C下攪拌反應(yīng)混合物1 h。歷經(jīng)5 min 逐份添加N-苯基-雙(三氟甲垸磺酰亞胺)(82.2 g， 230 mmol)至反應(yīng)混合物中并在-20 。C至-10'C下攪拌混合物1 h。向反應(yīng)混合物中添加1 N NaOH (200 mL)并使混合物在 攪拌下溫至22'C。通過在3(TC下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)部分去除溶劑至450mL的體積。向剩余反應(yīng) 混合物中添加EtOAc (300 mL)和庚烷(150 mL)。在22。C下攪拌混合物5 min。分離 各層并棄去水層。以1NNaOH (3 X 450 mL)洗滌有機(jī)層。棄去水層。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā) 濃縮有機(jī)層以得到標(biāo)題中間體(77 g,根據(jù)HPLC方法1純度大于96%)。& NMR (A陽DMSO， 400 MHz): S (ppm) 7.25-7.35 (m, 5H), 6.05 (d， /=5.2, 1H)， 3.64 (q, /=13.2， 2H), 3.40-3,44 (m， 2H), 2.77 (d, /=16.4， 1H), 1.79-2.09 (m, 5H)' 1.52-1.59 (m， 1H)。b. 3-(8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯-3-基)芐酰胺的制備向先前步驟的粗產(chǎn)物中添加THF (420 mL)并以氮氣凈化溶液5 min。向2 L燒瓶 中添加3-氨甲?；交鹚?98%， 33.0 g， 200mmo1)、乙酸鈀(II) (98%, 0,46 g， 2 mmol)、 l，l'-雙(二苯膦基)二茂鐵(97%， 1.1 g, 2mmo1)和氟化鉀(34.9 g， 600mmo1)， 接著添加三氟-甲烷磺酸8-節(jié)基-8-氮雜-\雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯-3-基酯的THF溶液。將所得 混合物以氮氣凈化5min，在氮氣下加熱至回流(67'C)并攪拌2 h。將反應(yīng)混合物冷卻 至30°C，接著添加EtOAc (500 mL)禾n 1 N NaOH (500 mL)并在22。C下攪拌混合物 10min。分離各層并棄去水層。將有機(jī)層以鹽水(250 mL)與水(250 mL)的混合物洗 滌并攪拌5min。分離各層并棄去水層。有機(jī)層簡短經(jīng)Na2S04干燥、過濾并部分去除溶 劑。在溶劑去除期間，產(chǎn)物沉淀為淺黃色固體。過濾所得漿料(約200mL)并將固體以 冷EtOAc ((TC， 100 mL)洗滌，并且在高真空下在25'C干燥以得到呈淺黃色固體狀的 標(biāo)題中間體(42.5 g)。合并母液和上文洗滌液，濃縮，并且在5。C下攪拌所得漿料(約100 mL) 30min并 過濾。經(jīng)過濾的固體以冷EtOAc ((TC， 30mL)洗滌并在高真空下干燥以得到第二批標(biāo) 題中間體(7g，組合產(chǎn)率為78%,根據(jù)HPLC方法1純度大于98.5%)。(m/z): [M+H]+ C21H22N20的計算值，319.18;實驗值319.4。 畫R (CDC13， 400 MHz): S (ppm) 7.9 (s, 1H), 7.63 (d， /=6.4， 1H)， 7.57 (d， /=6.4， 1H)， 7.21-7.42 (m， 6H)， 6.38 (d, /=4.4， 1H)， 6.13 (s， br， 1H)， 5.83 (s, br, 1H)， 3,68-3.76 (m, 2H), 3.46-3.51 (m, 2H), 2.92 (d, /=17.2, 1H), 2,18-2.26 (m， 1H), 2.04-2.12 (m, 2H), 1.86-1.92 (m， 1H), 1.58-1.65 (m, 1H)。c. 3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-芐酰胺的合成向1 L氫化容器中添加3-(8-芐基-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-2-烯-3-基)芐酰胺(40 g， 125 mmol)、 EtOH (800 mL)、 6 M HC1 (42mL)和水(80mL)，并在22°C下攪拌混合物直 至觀察到完全溶解。以氮氣凈化反應(yīng)混合物5 min同時歷經(jīng)5 min將其加熱至30°C 。向 混合物中添加10重量呢Pd/C (50%在水中，4g)。在加熱的同時，在大氣壓下以氫氣凈 化混合物5-10min。在50'C下，在低于5 psi (低于0.34個大氣壓)的氫氣流下攪拌混 合物5 h，使得反應(yīng)物轉(zhuǎn)化率大于99% (根據(jù)HPLC分析)。將溶液冷卻至30。C并經(jīng)由硅 藻土過濾以得到標(biāo)題化合物的粗鹽酸鹽的溶液，根據(jù)HPLC方法2，內(nèi)型:外型比為約 93:7，內(nèi)型Rf-10.97，外型Rr=12.67。 (m/z): [M+H]+ C14H18N20的計算值，231.15;實 驗值231.2。通過在30。C下在EtOH (約80 mL)中共沸蒸餾而從粗產(chǎn)物中去除水以得到漿料， 將漿料加熱至6(TC直至完全溶解。將溶液冷卻至35'C并添加產(chǎn)物的晶種(0.05 g)。(根 據(jù)制備2中所述的方法制備晶種。)在22'C下攪拌所得漿料30min，緩慢添加MTBE( 120 mL)，并將漿料在22'C下攪拌4h，接著在0'C下攪拌1 h。將所得固體過濾，以冷EtOH 洗滌并在高真空下干燥以得到呈白色粉末狀的標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(24.5 g) (75%產(chǎn)率， 根據(jù)HPLC方法3純度大于98.5%，外型異構(gòu)體小于0.4%,內(nèi)型Rf=8.67,外型Rt9.43)。(m/z): [M+H]+C14H18N20的計算值，231.15;實驗值231.2。 & NMR (^陽DMSO, 400 MHz): S (ppm) 9.13 (s， br， 1H), 9.03 (s， br, 1H)， 8.05 (s， 1H)， 7.93 (s, 1H)， 7.73 (d， /=7.6, 1H)， 7.58 (d, /=7.6， 1H), 7,40 (t， 7=7.6， 2H)， 3.97 (s， 2H), 3,17-3.23 (m， 1H), 2.39-2.46 (m, 2H)， 2.19-2.24 (m， 2H), 1,86-1.89 (m, 2H)， 1.59-1.63 (m， 2H)。實例1A: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺結(jié)晶硫酸鹽的合成a. N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯的制備向100 mL燒瓶中添加N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯亞硫酸氫鹽加合物 (3.94 g， 1 mmol)和MeTHF (35 mL)，接著添加水(25 mL)。在室溫下攪拌所得漿料 5分鐘并添加1 MNaOH (8 mL 室溫下攪拌反應(yīng)混合物45 min。分離各層并將有機(jī)標(biāo)題中間體。b. 2-[3-內(nèi)型-(3-氨甲?；交?-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基]-乙基}環(huán)己基甲基-氨基甲 酸芐酯的制備向先前步驟的產(chǎn)物中添加DMF (15mL)，接著添加3-內(nèi)型-(8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-芐酰胺鹽酸鹽(2.67 g， lmmol)并接著添加DMF U0mL)。將混合物在室溫下攪 拌30min，冷卻至IO'C并接著添加三乙酰氧基硼氫化鈉(4.25 g， 2 mmol)。將反應(yīng)混 合物在室溫下攪拌90分鐘并接著冷卻至l(TC。添加乙酸異丙酯(100mL)，接著添加1 MNaOH(50mL)。攪拌混合物15min，并分離各相。以于水中的鹽水O:l， 2 X 50mL) 洗滌有機(jī)層，并將有機(jī)層的體積縮減至約lOmL以得到粗標(biāo)題中間體。c. 3-內(nèi)型-{8-[2-(環(huán)己基甲氨基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}芐酰胺的制備 向先前步驟的產(chǎn)物中添加EtOH (30 mL)和濃HC1 (1.5 mL)。以氮氣凈化溶液，添加10%鈀/碳(470 mg)并以氮氣凈化混合物5分鐘，接著在30psi下氫化過夜。以氮 氣凈化2min之后，經(jīng)由硅藻土過濾溶液并去除溶劑至約10 mL。添加乙酸異丙酯(40 mL)禾Q 1MNaOH (20mL)。分離各層并以鹽水(20mL)洗滌有機(jī)層，分離各相并去 除有機(jī)溶劑至5-10mL。添加乙酸異丙酯(20mL)并將體積縮減至約8 mL，向其中添 加乙酸異丙酯(20mL)。在室溫下攪拌所得漿料2h。過濾分離產(chǎn)物，以乙酸異丙酯(10 mL)洗滌反應(yīng)燒瓶和濾餅以產(chǎn)生呈奶白色固體狀的標(biāo)題中間體(2.4 g， 98%純度)。d. 3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1] 辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽(水合形式)的制備向500 mL燒瓶中添加3-內(nèi)型-{8-[2-(環(huán)己基甲氨基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3,2.1]辛-3-基} 芐酰胺(31 g， 83.9mmo1)和DMF (150 mL)。攪拌混合物10分鐘，接著添加六氟磷 酸苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷基)-磷(56.8 g, 109 mmol)和(4S)-2,2-二甲基-l，3-二氧 戊環(huán)—4-甲酸鋰(15.6g， 92.3mmo1)，并且在室溫下攪拌混合物2 h。添加乙酸乙酯(600 mL)禾卩0.5 M NaOH (300 mL)并分離各相。有機(jī)層含有粗(S)-2,2-二甲基-[l，3]二氧戊 環(huán)—4墨甲酸{2-[3-(3陽氨甲?；?苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基]乙基}環(huán)己基甲基-酰胺(約 84mmo1)，未將其分離。以于水中的鹽水(1:1， 2 X 300mL)洗滌有機(jī)層并分離各相。向有機(jī)層中添加2M H2S04 (42 mL)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。添加乙腈(300 mL)并攪拌所得 漿料2h。過濾分離產(chǎn)物，濾餅以乙腈(200 mL)洗滌，在空氣中干燥2 h并接著在真 空下在室溫干燥20 h以得到呈白色粉末狀的標(biāo)題化合物(40 g,根據(jù)HPLC純度為97%)。e. 3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]向100 mL燒瓶中添加3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙酰基)氨基]乙 基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽水合形式(2g)和MeOH (40 mL)。將所 得漿料在氮氣下加熱至65'C持續(xù)20min，使其完全溶解。在攪拌下將溶液冷卻至室溫。 在輕微減壓下去除約20mL溶劑并將所得漿料在室溫下攪拌過夜。過濾分離產(chǎn)物，并以 乙腈(2 X 5 mL)洗滌燒瓶和濾餅。將濾餅在空氣中干燥2 h并接著在真空下在室溫 干燥過夜以得到呈白色粉末狀的標(biāo)題化合物(1.71 g,根據(jù)HPLC純度大于99免，約85% 產(chǎn)率)。根據(jù)上文程序制備的試樣由H NMR(400 MHz， DMSO A)表征5 (ppm) 9.08 & 8.94 (兩組brs， IH)， 7.99-8.04 (m， 2H), 7.74-7.76 (m, 1H)， 7.68-7.70 (m, 1H), 7.41-7.45 (m, 2H), 4.81， 5.00和5.30 (三組brs， 2H)， 4.34 (變形m, 1H), 4.00和4.05 (變形m, 2H), 3.01-3.25 和3.47-3.55和3.75-3.82 (三組m， IOH)， 2.50-2.55 (m， 2H)， 1.99 (變形m, 2H)， 1.56-1.70(m, 8H)， 1.15-1.19 (m, 3H), 0.89-0.99 (m, 2H)。實例1B: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)芐酰胺結(jié)晶硫酸鹽的合成a. 3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1] 辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽的制備將3-內(nèi)型-{8-[2-(環(huán)己基甲氨基)乙基]-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基}芐酰胺(100 g， 270.6 mmol)與DMF (480 mL)的混合物攪拌10分鐘并接著冷卻至0°C 。在O'C下整份 添加六氟磷酸苯并三唑-l-基氧基三(吡咯烷基)磷(183g， 352 mmo1)和(4S)-2，2-二甲基 -1,3-二氧戊環(huán)-4-甲酸鋰(49.3 g， 324 mmo1)。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物6 h。添加乙酸 異丙酯(2.0L)和lMNaOH (1.0 L)，攪拌反應(yīng)混合物15 min并分離各相。以于水中 的鹽水(1:1, 2 X l.OL)洗滌有機(jī)層并分離各相。將有機(jī)層縮減至四分之一體積(約 500 mL)，添加乙腈(500 mL)并攪拌反應(yīng)混合物直至均質(zhì)以得到中間體(S)-2，2-二甲基 -1,3-二氧戊環(huán)-4-甲酸2-[3-內(nèi)型-(3-氨甲?；?苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基卜乙基-環(huán)己 基甲基酰胺于乙酸異丙酯和乙腈中的溶液。使上文中間體(3.03 g， 6.09mmo1)于乙酸異丙酯/乙腈(22.5 mL)中的溶液的等 分試樣與2.0 M硫酸水溶液(3.68 mL)組合并保持在25'C持續(xù)20 h，接著在攪拌下保 持在10。C持續(xù)5 h。過濾反應(yīng)溶液，并且以乙腈(25 mL)洗滌濾餅并干燥以產(chǎn)生呈白 色固體狀、主要呈結(jié)晶水合物形式的標(biāo)題化合物的中間體級硫酸鹽(2.91 g，根據(jù)HPLC 純度為99.4%)。b. 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1] 辛-3-基)芐酰胺結(jié)晶硫酸鹽的合成在攪拌下歷經(jīng)45 min將如在先前步驟中制備的3-內(nèi)型-(8-2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二 羥基-丙?；?-氮基]-乙基-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)-節(jié)酰胺中間體級硫酸鹽(154.0 g， 277.1 mmol)與甲醇/10%水(616 mL)的混合物加熱至65'C。將反應(yīng)混合物冷卻至55 'C，添加標(biāo)題產(chǎn)物的晶種(120 mg)，在55'C下攪拌反應(yīng)混合物1 h，并以10°C/h的速 率將溫度降至2(TC，接著保持8h。將反應(yīng)混合物冷卻至5'C，保持30min，并過濾。 以甲醇(2 X 25 mL)洗滌濾餅并在高真空下干燥過夜以產(chǎn)生標(biāo)題化合物(126.3 g， 99.9% 純度)。實例2: 3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((8)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺硫酸鹽(水合形式)的再結(jié)晶將化合物l硫酸鹽(水合形式)(920 mg)懸浮于乙腈(5mL)中并加熱至65。C。 接著逐滴添加水(2.4 mL)直至達(dá)成完全溶解。歷經(jīng)20 min將所得溶液冷卻至環(huán)境溫度。 在約35'C觀察到晶核生成。真空過濾分離固體，以乙腈(5mL)洗滌并干燥以得到標(biāo)題 化合物。實例3: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1誶-3-基)節(jié)酰胺硫酸鹽的結(jié)晶將化合物l硫酸鹽(水合形式)(50 mg)分散于水(10%)與甲醇(90%)的溶劑 混合物(0.83 mL)中并在攪拌下加熱至6(TC。歷經(jīng)2 h使所得溶液冷卻至環(huán)境溫度。 真空過濾分離所得固體以得到標(biāo)題化合物(8mg)。實例4: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙酰基)氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺硫酸鹽的結(jié)晶將化合物l硫酸鹽(水合形式)(42 mg)分散于水(25%)與甲醇(75%)的溶劑 混合物(0.42 mL)中并在攪拌下加熱至60'C。使所得溶液冷卻至環(huán)境溫度。通過旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)將體積縮減至50%并將溶液保持在環(huán)境溫度下過夜。真空過濾分離所得固體以得到 標(biāo)題化合物(8mg)。實例5: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基)-8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽的結(jié)晶將化合物1 (llmg)溶解于甲苯(22%)與乙腈(78%)的溶劑混合物(0.2 mL) 中。添加乙腈(0.15 mL)，接著添加在乙腈中的0.04M硫酸(0.59 mL)。添加酸后即形 成固體沉淀物。將反應(yīng)混合物保持在環(huán)境溫度12h。過濾分離所得固體以得到標(biāo)題化合物。實例6: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺硫酸鹽的結(jié)晶將化合物1 (38mg)溶解于二氯甲烷(0.5 mL)中。向溶液中添加在乙腈中的0.04 M硫酸(1.91 mL)。添加酸后即形成固體沉淀物。將反應(yīng)混合物保持在環(huán)境溫度12h。 過濾分離所得固體以得到標(biāo)題化合物。實例7: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽的結(jié)晶將化合物1 (22mg)溶解于甲苯(23%)與乙腈(77%)的溶劑混合物(0.41 mL) 中。向溶液中添加在乙腈中的0.04M硫酸(1.20 mL)。添加酸后即形成固體沉淀物。添 加水(0.16 mL)至反應(yīng)混合物中以溶解沉淀物。2h之后觀察到晶核生成。真空過濾分 離所得固體以得到標(biāo)題化合物。實例8: 3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基皿((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)芐酰胺硫酸鹽(水合形式)的結(jié)晶將結(jié)晶化合物l硫酸鹽(7.1 g)溶解于水(42mL)與乙腈(25mL)的溶劑混合物 中。將溶液凍干以產(chǎn)生非晶硫酸鹽。將非晶鹽(6.6 g)分散于乙腈(75%)與水(25%) 的溶劑混合物(34.6mL)中，并在攪拌下加熱至65'C持續(xù)10min并使其在攪拌下冷卻， 直至達(dá)到環(huán)境溫度。12h之后，真空過濾分離所得固體以得到標(biāo)題化合物(5.4 g)。實例9-17:本發(fā)明的鹽形式的特性通過x射線粉末衍射(XRPD)、差示掃描量熱(DSC)、熱重分析(TGA)、紅外光 譜法(IR)和離子色譜來分析如實例1A中制備的3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二 羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺(化合物l)的結(jié)晶硫酸鹽的 試樣和如實例2中制備的化合物1硫酸鹽的結(jié)晶水合物的試樣。實例10: X射線粉末衍射以理學(xué)(Rigaku)衍射計使用CuKa (30.0kV， 15.0 mA)輻射獲得圖1和圖4的 X射線粉末衍射圖。使用以3° /分鐘，0.03°步長，在2°至40°范圍內(nèi)的連續(xù)掃描模 式運(yùn)作的測角器進(jìn)行分析。在石英樣品支持器上將試樣制備為薄層粉狀物。以硅標(biāo)準(zhǔn)物 校正儀器。實例lh熱分析使用TA儀器型號Q-100模組進(jìn)行差示掃描量熱(DSC)。使用Q Series 軟件的TA Instruments Thermal Advantage收集和分析數(shù)據(jù)。將約1-10 mg的試樣精確稱量至有蓋鋁盤中。使用1(TC/min的線性加熱勻變，從5。C至(通常)265'C評估試樣。在使用期間 用干氮氣凈化DSC單元。圖2和圖5中分別顯示化合物1的結(jié)晶硫酸鹽試樣和化合物1 的硫酸鹽的結(jié)晶水合物試樣的代表性DSC曲線。使用TA儀器型號Q-500模組進(jìn)行熱重分析(TGA)。使用Q Series 軟件的TA Instruments Thermal Advantage收集和分析數(shù)據(jù)。將重約1-5 mg的試樣置于鉑托架上的 鋁盤中，并且以1(TC/min的線性加熱速率從環(huán)境溫度至30(TC掃描。在使用期間以氮氣 凈化天平和爐腔。圖2和圖5中也分別顯示化合物1的結(jié)晶硫酸鹽試樣和化合物1的硫 酸鹽的結(jié)晶水合物試樣的代表性TGA曲線。實例12:動態(tài)吸濕評估在25'C下使用VTI大氣微天平SGA-100系統(tǒng)(佛羅里達(dá)州海爾勒阿市VTI公司(VTI Corp., Hialeah, FL) (33016))進(jìn)行動態(tài)吸濕(DMS)評估。使用約5-10 mg的試樣尺寸， 并且在分析開始時將濕度設(shè)為環(huán)境值。典型DMS分析由三個掃描組成以5呢RH/步的 掃描速率，環(huán)境濕度至2%相對濕度(RH)、 2呢RH至卯呢RH、 90% RH至5% RH。每 兩分鐘測量一次質(zhì)量并且當(dāng)試樣質(zhì)量5個連續(xù)點穩(wěn)定在0.02%內(nèi)時將RH換為下一值(± 5% RH)。圖3和圖6中分別顯示化合物1的結(jié)晶硫酸鹽試樣和化合物1的硫酸鹽的結(jié) 晶水合物試樣的代表性DMS曲線。實例13:紅外分析使用配備有漫反射紅外傅里葉變換光譜(diffuse reflectance infrared fourier transform spectroscopy, DRIFTS)模組的阿凡達(dá)(Avatar) 360 FT-IR光譜儀在4000 cm"至400 cm-1 的頻率范圍內(nèi)測定紅外(IR)吸收光譜。本發(fā)明的結(jié)晶硫酸鹽試樣的代表性IR吸收光 譜在以下各處具有顯著吸收帶430±1、 590±1、 639±1、 705±1、 867±1、 1036±1、 1053±1、 1105±1、 1171±1、 1231±1、 1277±1、 1375±1、 1391±1、 1452±1、 1476 ±1、 1553±1、 1596±1、 1639±1、 1664±1、 2852±1、 2907±1、 2928±1、 2967±1、 3168±1和3357±1 cnT1。實例14: X射線衍射晶體結(jié)構(gòu)分析將尺寸為0.43 X 0.05 X 0.031 mm的化合物1硫酸鹽塊狀晶體安裝于玻璃纖維 上。使用由SMART 5.630版軟件(布魯克公司(Bruker) > 2003)控制的具有13.5 cm 視窗直徑的布魯克SMART 6K CCD x射線區(qū)域檢測器，使用CuKa輻射獲得X射線衍 射晶體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。試樣至檢測器的距離為5.039 cm。在-153土rC的溫度下收集數(shù)據(jù)并且 使用SHELXS6.14版(布魯克公司，2003)軟件加以分析。導(dǎo)出以下晶格參數(shù)單位晶 胞為斜方晶，尺寸為a=6.8239 A，b=16.2275 A，c=24.2021 A, a=e = Y=90° ;晶胞體積(V)為2680.0 A3;計算密度為1.38 g/cm3;空間群為P2"^i (#19)。通過目測判斷根 據(jù)Mercury 1.4軟件從導(dǎo)出原子位置預(yù)測的粉末x射線衍射峰與圖1的實驗結(jié)果極為一 致。實例15:固態(tài)穩(wěn)定性評估在20'C和60%相對濕度(RH)下以及在40'C和757。RH下，將本發(fā)明的硫酸鹽試 樣儲存于多個開口玻璃小瓶中。以特定時間間隔，取出代表性小瓶的內(nèi)容物并且通過 DSC、 TGA、 PXRD進(jìn)行分析和通過HPLC進(jìn)行化學(xué)純度分析。儲存4周之后，在任一 條件下儲存的試樣的DSC或TGA熱分析圖中以及XRPD圖中均不存在可檢測變化。根 據(jù)HPLC，儲存試樣的化學(xué)純度在99.7%不變。實例16:平衡離子含量的測定通過硫酸根離子色譜法，使用配備有陰離子自再生抑制器、電導(dǎo)率檢測器、IonPac AS11-HC分析陰離子交換柱和IonPac AG11-HC保護(hù)柱的Dionex ICS-2000離子色譜系 統(tǒng)，分析本發(fā)明的硫酸鹽試樣。試樣的硫酸根含量測定為17.1%,其與每摩爾母化合物 一摩爾當(dāng)量硫酸根離子的17.6%理論硫酸根含量相當(dāng)。實例17:水合物的水含量的測定通過對初始重量損失期間所蒸發(fā)的物質(zhì)進(jìn)行TGA聯(lián)用IR分析來分析本發(fā)明的水合 物試樣。TGA曲線顯示在IO(TC以下重量損失為3.2%,其可與化合物1硫酸鹽的單水合 物的3.1%理論重量損失相當(dāng)。所蒸發(fā)物質(zhì)的IR光譜與水的參考IR光譜一致。分析l:對人類M、人類6和豚鼠ic阿片受體的放射配體結(jié)合分析a.膜制備使穩(wěn)定轉(zhuǎn)染有人類H阿片或豚鼠K受體cDNA的CHO-Kl (中國倉鼠卵巢)細(xì)胞于 培養(yǎng)基中于5% C02、加濕恒溫箱中37'C下生長，所述培養(yǎng)基由補(bǔ)充有10% FBS、 100 單位/毫升青霉素(penicillin) -100 ug/mL鏈霉素(streptomycin)和800 u g/mL遺傳 霉素(Geneticin)的Ham's-F12培養(yǎng)基組成。在膜放射配體結(jié)合分析中，使用["H]-二丙 諾啡([3H]-Diprenorphine)(比活性約50-55 Ci/mmol)測定受體表達(dá)量(B醒分別為約 2.0和約0.414 pmol/mg蛋白質(zhì))。使細(xì)胞生長至80%-95%鋪滿(小于25代繼代培養(yǎng))。對于細(xì)胞系繼代而言，將細(xì)胞 單層在室溫下培育5分鐘并通過在補(bǔ)充有5 mM EDTA的10 mL PBS中機(jī)械攪動來收集。 再懸浮之后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至40 mL新鮮生長培養(yǎng)基中以在1000 rpm下離心5分鐘并且 以適當(dāng)分流比(split ratio)將其再懸浮于新鮮生長培養(yǎng)基中。對于膜制備而言，通過以于PBS中的5mMEDTA溫和機(jī)械攪動接著離心(2500 g持續(xù)5分鐘)來收集細(xì)胞。將離心塊再懸浮于pH 7.4的分析緩沖液(50 mM 4-(2-羥乙 基)哌嗪-l-乙烷磺酸iV-(2-羥乙基)哌嗪-iV'-(2-乙烷磺酸)(HEPES))中，并且在冰上以 polytron破碎器均質(zhì)化。將所得勻漿離心(1200 g持續(xù)5分鐘)，棄去離心塊并將上清液 離心(40,000 g持續(xù)20分鐘)。通過再懸浮于分析緩沖液中將離心塊洗滌一次，接著再 離心(40,000 g持續(xù)20分鐘)。將最終離心塊再懸浮于分析緩沖液(等效1 T-225燒瓶/1 mL分析緩沖液)中。使用Bio-Rad Bradford蛋白質(zhì)分析試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度，并且 將膜以冷凍等分試樣形式儲存在-80。C直至需要為止。從珀金埃爾默公司(Perkin Elmer)購得人類S阿片受體(hDOP)膜。所報導(dǎo)的通 過在[3印-納曲哚(Natrindole)放射配體結(jié)合分析中的飽和分析測定的這些膜的Kd和Bmax 分別為0.14 nM (pKd=9.85)禾B 2.2 pmol/mg蛋白質(zhì)。使用Bio-Rad Bradford蛋白質(zhì)分析試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度。將膜以冷凍等分試樣形式儲存在-8crc直至需要為止。 b.放射配體結(jié)合分析在愛思進(jìn)(Axygen) 1.1 mL深度孔的96孔聚丙烯分析板中，在200 ix L的總分析 體積中進(jìn)行放射配體結(jié)合分析，所述總分析體積含有在補(bǔ)充有0.025 %牛血清白蛋白 (BSA)的分析緩沖液中適當(dāng)量的膜蛋白(對于)J、 S和k分別為約3、約2和約20 Pg)。 使用在0.001 nM-5 nM范圍內(nèi)的8-12個不同濃度的[SH]-二丙諾啡進(jìn)行用于測定放射配體 Kd值的飽和結(jié)合研究。用對于p、 S和k分別為0.5nM、 1.2nM和0.7 nM的[311]-二丙 諾啡和在10pM-100 nM范圍內(nèi)的11個濃度的化合物進(jìn)行用于測定化合物pKi值的置 換分析。通過用格蘭帕德普里森(GraphPad Prism)軟件包(加利福尼亞州圣地亞哥市格蘭 帕德軟件公司(GraphPad Software, Inc., San Diego, CA)),使用單個位點競爭的3參數(shù) 模型進(jìn)行非線性回歸分析來分析結(jié)合數(shù)據(jù)。如在10 iiM納洛酮(naloxone)存在下測 定，將曲線最小值確定為非特異性結(jié)合的值。使用程-普方程式(Cheng-Prusoff equation) (Ki=IC50/(l+([L]/Kd)，其中[L]^H]-二丙諾啡的濃度)，在普里森(Prism)中從最佳擬 合ICso值和放射配體的Kd值計算測試化合物的Ki值。將結(jié)果表示為Ki值的負(fù)的以10 為底數(shù)的對數(shù)，pKi。在這些分析中具有較高pKi值的測試化合物對ja、 5或k阿片受體具有較高的結(jié)合 親和力。化合物1的硫酸鹽顯示對人類n阿片受體9.9的pKi值。分析2:由表達(dá)人類n阿片受體的CHO-K1細(xì)胞制備的膜中促效劑介導(dǎo)的p阿片受 體的活化在此分析中，通過測量在由表達(dá)人類p阿片受體的CHO-K1細(xì)胞制備的膜中受體活化合物的效能和固有活性值。 阿片受體膜制備人類n阿片受體(hMOP)膜如上所述來制備或從珀金埃爾默公司購得。所報導(dǎo)的 通過在[SH]-二丙諾啡放射配體結(jié)合分析中的飽和分析測定的所購膜的pKd和Bm^分別為 10.06和2.4 pmol/mg蛋白質(zhì)。使用Bio-Rad Bradford蛋白質(zhì)分析試劑盒測定蛋白質(zhì)濃度。 將膜以冷凍等分試樣形式儲存在-8(TC直至需要為止。將凍干GTP-Eu和GDP于重蒸餾 水中分別稀釋至IO yM和2mM，接著混合并且在室溫下放置30分鐘，隨后將其轉(zhuǎn)移 至個別等分試樣中以儲存在-2(TC 。b.人類M GTP-Eu核苷酸交換分析使用AcroWeIl 96孔濾板中的DELPHIA GTP結(jié)合試劑盒(珀金埃爾默公司)根據(jù) 制造商說明書進(jìn)行GTP-Eu核苷酸交換分析。如上所述來制備膜，并且在開始分析之前， 將等分試樣于分析緩沖液中(50mMHEPES， pH7.4在25'C下)稀釋至200 u g/mL的 濃度，接著使用Polytron均質(zhì)機(jī)均質(zhì)化10秒鐘。得到呈DMSO中10 mM儲備溶液形式 的測試化合物，將其于含有0.1呢BSA的分析緩沖液中稀釋至400 uM，并接著制成連 續(xù)(1:5)稀釋液以產(chǎn)生在40 pM至80 " M范圍內(nèi)的十個濃度的化合物，分別將GDP 和GTP-Eu于分析緩沖液中稀釋至4 u M禾Q 40 nM。在含有稀釋于10 mM MgCl2、50 mM NaCl和0.0125% BSA (最終分析濃度)中的5 u g膜蛋白、在10 pM-20 uM范圍內(nèi)的 測試化合物、1 y M GDP和10 nM GTP-Eu的100 n L總體積中進(jìn)行分析。在每個板上 包括DAMGO (Tyr-D-Ala-Gly-(甲基)Phe-Gly-ol)濃度-反應(yīng)曲線(在12.8 pM-1 li M的 范圍內(nèi))。在分析之前，在添加25 uL分析緩沖液、25 測試化合物和25 GDP和 GTP-Eu之后，立即制備分析板。通過添加25 nL膜蛋白起始分析并使其培育30分鐘。 接著將分析板以與調(diào)節(jié)至10-12英寸Hg的室內(nèi)真空相連的Waters真空歧管過濾并且以 室溫GTP洗滌溶液(2X300 mL)洗滌。吸干板的底部以去除過量液體。接著立即讀取 板以通過測量在帕卡德酶標(biāo)儀(Packard Fusion Plate ReaderVehicle)上的時間分辨熒光 (TRF)來測定結(jié)合GTP-Eu的量DMSO不超過1%最終分析濃度。結(jié)合GTP-Eu的量與p阿片受體由測試化合物的活化程度成比例。表示為百分比的 固有活性(IA)按所觀察的由測試化合物活化的結(jié)合GTP-Eu的量與所觀察的由DAMGO 活化的量(其假定為完全促效劑(IA=100))的比率來測定。在此分析中，化合物1的 硫酸鹽顯示-5的固有活性。由此，已顯示本發(fā)明的硫酸鹽為拮抗劑。分析3:活體內(nèi)功效的大鼠模型在此分析中，在胃腸通過(gastrointestinal transit)模型(其評估周邊活性)中評估 測試化合物的功效。此研究由治療先鋒公司(Theravance， Inc.)的實驗動物管理和使用 委員會(Institutional Animal Care and Use Committee)批準(zhǔn)并且符合由美國國家科學(xué)院 (National Academy of Sciences)公布的實驗動物管理和使用指南(Guide for the Care and Use of Laboratory Animals) ( 1996)。a. 大鼠胃排空分析在大鼠胃排空分析中評估測試化合物以測定其逆轉(zhuǎn)洛哌丁胺(loperamide)誘導(dǎo)的 延遲胃排空的能力。使大鼠禁食過夜，隨后通過靜脈內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)或經(jīng)口投藥途徑 以在0.001毫克/公斤至約30毫克/公斤(mg/kg)范圍內(nèi)的劑量投與測試化合物或媒劑。 投與測試化合物之后皮下投與1 mg/kg劑量的洛哌丁胺或媒劑。投與洛哌丁胺或媒劑五 分鐘后，經(jīng)口管飼投與無營養(yǎng)、不可吸收的炭粗粉并允許動物自由獲取水持續(xù)實驗的六 十分鐘時間。接著經(jīng)由二氧化碳窒息對動物施以安樂死，接著進(jìn)行開胸術(shù)并小心地切除 胃。將胃在下食道括約肌和幽門括約肌處結(jié)扎以防止在組織摘除期間的額外排空。接著 在去除結(jié)扎之后測定胃重量。b. 數(shù)據(jù)分析和結(jié)果使用格蘭帕德普里森軟件包(加利福尼亞州圣地亞哥市格蘭帕德軟件公司)分析數(shù) 據(jù)。通過使用S形劑量反應(yīng)(可變斜率)模型的非線性回歸分析來構(gòu)建百分比逆轉(zhuǎn)曲線 并計算最佳擬合ID5o值。將曲線最小值和最大值分別確定為洛哌丁胺對照值(指示0% 逆轉(zhuǎn))和媒劑對照物(指示100%逆轉(zhuǎn))。將結(jié)果表示為IDsQ，即50%逆轉(zhuǎn)洛哌丁胺作用 所需的劑量，單位為毫克/公斤。經(jīng)口投與的化合物1的硫酸鹽在胃排空模型中顯示0.26 mg/kg的IDsQ值。盡管本發(fā)明已參考其特定實施例加以描述，但所屬領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)了解，在不脫離 本發(fā)明的真正精神和范圍的情況下可作出各種改變并且可用等效物替代。此外，可作出 許多修改以使特定情況、材料、物質(zhì)組合、方法、單個方法步驟或多個方法步驟適用于 本發(fā)明的目標(biāo)、精神和范圍。所有這些修改希望在本文隨附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。此外， 上文引用的所有公開案、專利和專利文件均以全文引用的方式并入本文中，其引用程度 就如同以引用的方式個別地并入一般。
權(quán)利要求
1.一種結(jié)晶鹽形式，其為3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸鹽或其溶劑化物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式為結(jié)晶硫酸鹽。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由具有兩個或兩個以上在 選自以下各值的2e值處的衍射峰的x射線粉末衍射圖來表征6.58±0.20、 7.52 ±0.20、 9.35±0.20、 14.69±0.20、 16.01±0.20、 17.45±0.20、 17.99±0.20、 18.62 ±0.20、 19.76±0.20、 21.11±0.20、 22.07±0.20、 23.18±0.20、 23.74±0.20、 24.56 土0.20、 25.63±0.20、 26.45±0.20、 27.86±0.20、 28.31 ±0.20、 29.54±0.20、 30.59 ±0.20、 31.58±0.20、 33.89±0.20禾卩36.02±0.20。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述x射線粉末衍射圖包含兩個或兩個以 上在選自以下各值的2 9值處的衍射峰14.69±0.20、 16.01±0.20、 21.11±0,20、 22.07±0.20和23.18±0.20。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由峰位置大體上與圖1中 所示的圖的峰位置一致的x射線粉末衍射圖來表征。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由以1(TC/分鐘的加熱速 率記錄的差示掃描量熱曲線來表征，所述曲線顯示在約19(TC與約205'C之間的溫 度下吸熱熱流的最大值。
7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由大體上與圖2中所示的 曲線一致的差示掃描量熱曲線來表征。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式為硫酸鹽的水合物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由具有兩個或兩個以上在 選自以下各值的2 0值處的衍射峰的x射線粉末衍射圖來表征9.41 ±0.20、 9.98 ±0.20、 15.17±0.20、 16.70±0.20、 18.59±0.20、 19.46±0.20、 19,91 ±0.20、 20.63 ±0.20、 21.35±0.20、 21.89±0.20、 23.00±0.20、 24.20±0.20、 25.40±0.20、 26,03 ±0.20、 27.44±0.20、 28.46±0.20、 29.45±0.20、 31.22±0.20、 31.82±0.20、 33.17 ±0.20、 33.56士0.20和36.89±0.20。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述x射線粉末衍射圖包含兩個或兩個以 上在選自以下各值的2 9值處的衍射峰16.70±0.20、 18.59±0.20、 19.46±0.20、 19.91 ±0.20、 23.00±0.20和24.20±0,20。
11. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由峰位置大體上與圖4中 所示的圖的峰位置一致的x射線粉末衍射圖來表征。
12. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的結(jié)晶鹽形式，其中所述結(jié)晶鹽形式由大體上與圖5中所示的 曲線一致的差示掃描量熱曲線來表征。
13. —種醫(yī)藥組合物，其包含醫(yī)藥上可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利 要求所述的結(jié)晶鹽形式。
14. 一種制備3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙 環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的方法，所述方法包含(a) 使羥基經(jīng)保護(hù)的經(jīng)保護(hù)3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨 基]乙基)-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.]辛-3-基)芐酰胺前驅(qū)體與硫酸接觸以形成第一反應(yīng)混合 物；(b) 從所述第一反應(yīng)混合物分離3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙酰 基)氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的中間體級固體硫酸鹽；(c) 將所述中間體級固體硫酸鹽分散于包含甲醇的稀釋劑中以形成第二反應(yīng)混合 物；禾口(d) 從所述第二反應(yīng)混合物分離所述結(jié)晶硫酸鹽。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中所述經(jīng)保護(hù)的前驅(qū)體為(S)-2，2-二甲基-[l，3]二氧 戊環(huán)-4-甲酸{2-[3-(3-氨甲?；?苯基)-8-氮雜雙環(huán)[3.2.1]辛-8-基]乙基}環(huán)己基甲基-酰胺。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述包含甲醇的稀釋劑另外包含至多約25%的 水。
17. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述包含甲醇的稀釋劑包含約5%與約15%之間 的水。
18. —種制備3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙 環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的方法，所述方法包含(a) 使3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙環(huán) [3.2.1]辛-3-基)節(jié)酰胺與硫酸接觸以形成反應(yīng)混合物；和(b) 從所述反應(yīng)混合物分離所述結(jié)晶硫酸鹽。
19. 一種制備3-內(nèi)型-(8-(2-[環(huán)己基甲基-((S)-2,3-二羥基-丙?；?氨基]乙基卜8-氮雜-雙 環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽的方法，所述方法包含(a)將3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的硫酸鹽的結(jié)晶水合物分散于包含甲醇的稀釋劑中以形成反 應(yīng)混合物；和(b)從所述反應(yīng)混合物分離所述結(jié)晶硫酸鹽。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中所述包含甲醇的稀釋劑另外包含至多25%的水。
21. —種N-環(huán)己基甲基-(2-氧代乙基)-氨基甲酸芐酯的亞硫酸氫鹽加合物。
22. 根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利要求所述的結(jié)晶鹽形式，其用于療法中。
23. —種根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利要求所述的結(jié)晶鹽形式的用途，其用于制造 治療哺乳動物疾病或醫(yī)學(xué)病況的藥物，所述疾病或醫(yī)學(xué)病況通過用p阿片受體拮抗 劑治療可得到改善。
24. 根據(jù)權(quán)利要求23所述的用途，其中所述疾病或病況為阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂或術(shù) 后腸梗阻。
25. —種治療患有通過用)a阿片受體拮抗劑治療可得到改善的醫(yī)學(xué)病況的哺乳動物的 方法，所述方法包含向所述哺乳動物投與醫(yī)藥組合物，所述醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥上 可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利要求所述的結(jié)晶鹽形式。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述醫(yī)學(xué)病況為阿片誘導(dǎo)的腸功能紊亂或術(shù)后 腸梗阻。
27. —種增強(qiáng)哺乳動物胃腸道運(yùn)動的方法，所述方法包含向所述哺乳動物投與醫(yī)藥組合 物，所述醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥上可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一權(quán)利 要求所述的結(jié)晶鹽形式。
28. —種拮抗哺乳動物體內(nèi)|1阿片受體的方法，所述方法包含向所述哺乳動物投與醫(yī)藥 組合物，所述醫(yī)藥組合物包含醫(yī)藥上可接受的載劑和根據(jù)權(quán)利要求1至12中任一 權(quán)利要求所述的結(jié)晶鹽形式。
全文摘要
本發(fā)明提供3-內(nèi)型-(8-{2-[環(huán)己基甲基-((S)-2，3-二羥基-丙?；?氨基]乙基}-8-氮雜-雙環(huán)[3.2.1]辛-3-基)芐酰胺的結(jié)晶硫酸鹽或其溶劑化物。本發(fā)明還提供包含所述結(jié)晶鹽形式的醫(yī)藥組合物、使用所述結(jié)晶鹽形式治療與μ阿片受體活性相關(guān)的疾病的方法，和適用于制備所述結(jié)晶鹽形式的方法。
文檔編號C07D451/02GK101616916SQ200880005969
公開日2009年12月30日 申請日期2008年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月28日
發(fā)明者皮埃爾-讓·科爾松, 米羅斯拉夫·拉普塔, 肖恩·達(dá)爾齊爾, 萊蒂西亞·M·普雷薩 申請人:施萬制藥