專利名稱：普拉格雷硫酸鹽、組合物及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種氫化吡啶衍生物鹽硫酸普拉格雷，及其制備方法 和以該化合物為活性成分的組合物，以及它們在用于預防或治療人的血栓形成或栓塞引起 的疾病的藥物中的用途。
背景技術：
普拉格雷(Prasugrel)是一種新型的噻吩并吡啶P2Y12拮抗劑，化學名2-乙酰氧基 -5- ( a -環丙基羰基-2-氟節基)-4， 5， 6, 7-四氫噻吩并[3, 2-C]吡啶，結構式如下式(I ):
(I )
由美國禮來公司和日本三共公司共同開發，目前正處于研究階段的一種血小板ADP受體阻 斷劑，研究表明普拉格雷的預防血栓的作用比氯吡格雷的作用還要強，在試驗中發現普拉 格雷能更快起作用，而且有更好的效果，普拉格雷組的患者用藥后血液中的血栓比氯吡格 雷組更少，普拉格雷組缺血事件的發生率比氯吡格雷組降低，普拉格雷抗血小板聚積的作 用明顯而且迅速。來自約翰斯霍普金斯大學的研究表明普拉格雷顯然比氯吡格雷在抗血小 板方面更有潛力，普拉格雷比目前批準劑量的氯吡格雷在抑制ADP誘導血小板凝聚上的效 果更強勁，且在普拉格雷臨床研究的代號為JUMB0-TIMI26第二階段研究中，普拉格雷的確 比氯匹格雷更快和更統一的抑制了血小板。
EP1298132 (氫化吡啶衍生物酸加成鹽)公開了 2-乙酰氧基-5- ( a-環丙基羰基-2-氟 節基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3,2-C]吡啶的鹽酸鹽和馬來酸鹽、其制備方法及其抗血栓形 成方面的用途，盡管在此申請的說明書中列出的可藥用酸加成鹽中提到了硫酸鹽，但并未 描述過(II)式的硫酸鹽。EP0542411公開了一種氫化吡啶衍生物及其互異變構體的制備方法，所述的氫化吡啶 衍生物為普拉格雷的母核，但并不涉及普拉格雷硫酸鹽及其制備方法。
—US2004024013公開了含有2-乙酰氧基-5-( a-環丙基羰基-2-氟代芐基)-4， 5， 6， 7_ 四氫噻吩并[3， 2-c]吡啶或其藥理上可接受的鹽和阿斯匹林作為有效成分的藥用組合物。
本發明人以開發用于預防或治療人的血栓形成或栓塞引起的疾病的藥物為目的，通過 對普拉格雷的物理化學性質進行長時間深入的研究，在大量的試驗基礎上，另辟蹊徑，提 出篩選并制備普拉格雷的更穩定、不良反應更低的加成鹽，最終制備出了預期目標化合物 硫酸普拉格雷，并且提供一種以該化合物為活性成分的藥物組合物，通過與普拉格雷的其 它藥用鹽藥理活性實驗對比，其具有良好的口服吸收性、代謝活性和血小板凝集抑制作用， 毒性低，因此是一種很有發展前途的用于預防或治療人的血栓形成或栓塞引起的疾病的抗 凝藥。
本發明提供了下述式(II)表示的普拉格雷硫酸鹽
本發明普拉格雷(2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并 [3，2-C]吡啶)與酸反應成鹽，其中酸優選硫酸，普拉格雷的硫酸鹽可通過以下方法制得
發明內容
將2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶溶
<formula>formula see original document page 4</formula>解溶劑中，攪拌降溫，攪拌下緩慢滴加濃硫酸或濃硫酸與溶劑混合液，滴加完畢繼續保溫 攪拌至反應完全。
反應完成后，用常規的方法處理就可得到目標產物，如有晶體析出可通過過濾得到產 物，或反應結束后減壓蒸餾溶劑，降溫析晶得到目標產物，也可通過重結晶、柱層析等方 法精制化合物，這種方法得到的目標產物各種晶型混合的產物，如制備單一晶型的目標產 物，需在反應完成后，加入目標產物的晶種，放置析晶，就可得到較純的單一晶型的目標 產物。
在上述制備反應中
(1) 反應溫度隨試劑或溶劑等的變化而變化，但反應溫度通常是-50'C 3(TC，優選 -35°C 0°C,更優選反應溫度-25'C -15i:，反應時間也隨著試劑或溫度的變化而變化， 通常反應時間需要6分鐘到24小時，優選30分鐘到8小時。
(2) 在反應中濃硫酸相對于普拉格雷是過量的，首選摩爾比為普拉格雷濃硫酸=1: 1 1.1。
(3) 濃硫酸可在強力攪拌下一次性加入，也可分批次加入，可直接加入濃硫酸，也可 用溶劑稀釋后加入，還可將普拉格雷用溶劑溶解后加入用溶劑稀釋的濃硫酸溶液中。
(4) 反應所用的溶劑只要能溶解反應物且不阻礙反應進行即可，可以為芳香烴、脂肪 烴、鹵代烴、酯類、醚類、酮類、醇類、腈類有機試劑一種或一種以上，如苯、甲苯、二 甲苯、乙烷、環己烷、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚、四氫呋喃、石油醚、丙酮、 丁酮、甲醇、乙醇、乙腈、DMF等，優選四氫呋喃、丙酮、甲醇、乙醚、丁酮，進一步優 選丙酮、乙醚、甲醇。溶劑量隨溶劑的不同而變化，但應使物料溶解。
本發明的氫化吡啶衍生物硫酸鹽可經口或不經口給藥，給藥量因藥物不同而不同，對 成人來說，每天l-1000mg比較合適。經口服給藥時，首先使該化合物與常規的藥用輔助劑 如賦形劑，崩解劑，黏合劑，潤滑劑，抗氧化劑，包衣劑，著色劑，芳香劑，表面活性劑 等混合，將其制成顆粒劑，膠囊，片劑等形式給藥，非經口給藥時可以注射液，輸液劑或 栓劑等形式給藥。制備上述制劑時，可使用常規的制劑技術。
本發明的硫酸普拉格雷具有良好的口服吸收性，生物利用度高，通過實施例14可以看 出，灌胃給藥后，灌服硫酸普拉格雷的大鼠出血率顯著低于灌服馬來酸普拉格雷的大鼠， 這說明口服硫酸普拉格雷后出血率低，不良反應小。另外，通過實施例14還可以看出，硫 酸普拉格雷對ADP和膠原引起的大鼠血小板聚集有非常顯著的抑制作用，和馬來酸普拉格 雷比較無顯著性差異，表明硫酸普拉格雷的藥效完全達到了現有技術的效果，甚至在一定
5程度上優于馬硫酸普拉格雷。通過實施例13可以看出，本發明的硫酸普拉格雷在beagle 犬體內的生物利用度優于鹽酸普拉格雷。
具體實施例方式
現通過以下實施例進一步說明發明，但并非限定本發明范圍
實施例1化合物(II ) 2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4, 5， 6， 7-四氫噻 吩并[3， 2-C]吡啶硫酸鹽的制備
將2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶8g 溶解在50ml丙酮中，降溫至-20 -23°C，控制反應溫度，1. 5小時內攪拌下緩慢滴加濃硫 酸2.5ml，滴加完畢繼續保溫攪拌反應4小時，此時有大量晶體析出，當不再有晶體析出 時停止反應，過濾，用冰凍的丙酮洗滌濾餅，將濾餅6(TC真空干燥，得到白色晶體8.2g， 收率為78%。 ；
& NMR(CDCI3)Sppm:0.87-1.30(4H,m)，1.78 (1H，m)， 2.26(3H,s), 2.85陽3.34(2H，m), 3.11-3.40(2H，m)，4.05-4.78(2H,m),5.94-6.08 (lH,m),6.27-6.44 (lH,m),7.19-7.88(4H，m).
IR譜(KBr) v咖xcnf、 1754， 1712
質i普(Cl， m/z) :374(M++1)，304
實施例2化合物(1) 2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5, 6， 7-四氫噻吩 并[3, 2-C]吡啶硫酸鹽的制備
將2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶8g 溶解在160ml無水乙醚中，降溫至-35 -32'C，控制溫度，攪拌下45分鐘內緩慢滴加2. 5ml 濃硫酸與30ml無水乙醚的混合液，繼續保溫攪拌反應6小時停止反應，將反應液l(TC減 壓蒸餾110ml乙醚，將蒸餾后反應液放入冰柜中-2(TC析晶48小時，有大量晶體析出后， 過濾，用冰凍的無水乙醚100ml洗滌濾餅，將濾餅35'C真空干燥，得到白色晶體8.0g,收 率為79. 2%。
IR譜(KBr) Vmaxcm":1751,1692
質i普(CI， m/z) :374 (MM) ，304實施例3化合物(1) 2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4，5，6，7-四氫噻 吩并[3， 2-C]吡啶硫酸鹽的制備
將2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶8g 溶解在50ml丙酮中，降溫至-25 -23'C，控制反應溫度，攪拌下將配好的2. 5ml濃硫酸和 30ml丙酮混合液分兩次加入，10分鐘內滴加18ml，加入實施例8得到的結晶0. 1克作晶 種，保溫攪拌1.5小時，再在1小時內滴加剩余的硫酸液，保溫攪拌3小時，過濾得到析 出的晶體，用冰凍的丙酮洗滌濾餅，將濾餅6(TC真空干燥得到白色晶體8. 5g,收率為84. 2%。
IR譜(KBr) v鵬cm—1.. 1750， 1685
質譜(CI， m/z) :374(r+l)，304
實施例4化合物(1) 2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4,5，6，7-四氫噻 吩并[3， 2-C]吡啶硫酸鹽的制備
將2-乙酰氧基-5- ( a -環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶8g 溶解在50ml甲醇中，降溫至-15 -12'C，控制反應溫度，攪拌下將配好的2. 5na濃硫酸和 30ml甲醇混合液分兩次加入，10分鐘內滴加18ml，加入實施例9得到的結晶0. 1克作晶 種，保溫攪拌1.5小時，再在1小時內滴加剩余的硫酸液，保溫攪拌3小時，過濾得到析 出的晶體，用冰凍的甲醇洗滌濾餅，將濾餅6(TC真空干燥得到白色晶體8. 3g，收率為82. 2%。
IR譜(KBr) v^cnf1:1752， 1693
質譜(CI， m/z) :374(M++1),304
實施例5化合物(II) 2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)_4，5，6，7-四氫噻 吩并[3， 2-C]吡啶硫酸鹽的制備
將濃硫酸2.5ml用50ml丙酮稀釋，降溫至-25。C，將2-乙酰氧基-5_ ( a -環丙基羰基 -2-氟節基)-4, 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶8g溶解在50ml丙酮中放入冰柜冰凍，然后 控制反應溫度為-20 -23°C， 1. 5小時內攪拌下緩慢將冰凍料液滴加到硫酸中，滴加完畢 繼續保溫攪拌反應4小時，過濾得到析出的晶體，用冰凍的丙酮洗滌濾餅，將濾餅6(TC真 空干燥，得到白色晶體8. 35g，收率為82. 7%。
IR譜(KBr) v^cnf1:1753， 11705
質譜(CI， m/z) :374(M+十1)，304實施例6硫酸普拉格雷生物利用度的測定
健康雄性比格犬6只，年齡7個月左右，體重無統計學差異，實驗前正常飼養2周且 未服任何藥物。將6只比格犬隨機分成硫酸普拉格雷組、鹽酸普拉格雷組，每組3只。 按照專利CN1214031試驗例1公開的測定方法，測定給藥后各組犬的血漿中S-甲基體的藥 動學參數(兩組的給藥劑量均為10mg/kg)。
試驗結果顯示，硫酸普拉格雷組與鹽酸普拉格雷組相比，具有顯著性差異，說明硫酸 普拉格雷在beagle犬體內的生物利用度優于鹽酸普拉格雷。
表1 beagle犬給藥后的血漿中S-甲基體的藥動學參數
組別nAUC (p g*min/ml)Cmax (u g/ml)
鹽酸普拉格雷組363.7±11.00. 98 ±0. 09
硫酸普拉格雷組482. 3 ±7. 6*1.21±0. 13*
與鹽酸普拉格雷組相比，*P<0. 05
實施例7硫酸普拉格雷對大鼠血小板聚集的抑制作用
1. 分組與給藥
取SD大鼠30只，雄性，重量200-300g，魯南制藥實驗動物中心提供，隨機分5組， 每組10只，預養一周。賦形劑組(相同體積的生理鹽水)、馬來酸普拉格雷組(10mg/kg)、 硫酸普拉格雷組(10mg/kg)，灌胃給藥，每日一次，共7天。
2. 指標測定
2.1抗血小板聚集作用的測定
動物經上述給藥2天后，隔夜禁食，于次日給藥l小時候后，用烏拉坦腹腔注射麻醉 后剖腹分離腹主動脈，插入聚乙烯管取血5ml于試管內(管內按抗凝劑和血l: 9預置3.8% 枸櫞酸鈉溶液0.5ml)，將全血按1000轉/分離心4min，取富血小板血漿(PRP) lml。再將 余液按3000轉/分離心8min，取貧血小板血漿(PPP) lml，分置兩塑料試管內。調劑后恒 溫(37±0.1) °C。用ADP G0ul/管)和膠原(30ul/管)做聚集誘導劑，測定最大聚集強度， 并計算其抑制率。
聚集抑制率=(賦形劑組聚集強度一試驗組聚集強度)/賦形劑組聚集強度X100% 2.2出血率的測定
測定完聚集抑制率后處死大鼠，解剖，借助放大鏡觀察胃粘膜充血、水腫、出血情況， 有胃粘膜充血、水腫、出血現象的大鼠，記入相應的實驗組胃粘膜出血例。3.試驗結果
由表2可以看出，硫酸普拉格雷對ADP和膠原引起的大鼠血小板聚集非常顯著的抑制 作用，和馬來酸普拉格雷比較無顯著性差異，表明硫酸普拉格雷的藥效完全達到了現有技 術的效果，甚至優于馬硫酸普拉格雷。
由表3可以看出，灌胃給藥后，硫酸普拉格雷組的出血率顯著低于馬來酸普拉格雷組， 這說明口服硫酸普拉格雷后出血率低，不良反應小。
表2硫酸普拉格雷對ADP和膠原引起的大鼠血小板聚集的抑制作用
組別nADP膠原
聚集強度(％)抑制率(％)聚集強度(％)抑制率(％)
賦形劑組100.637±0.1030. 753±0. 117
馬來酸普拉格雷組100. 352 ±0. 089"45.2±12.80. 394 ±0. 07(T47.9±12.0
硫酸普拉格雷組100. 336 ±0. 075**48.5 士 10. 60. 346 ±0. 083"54.3 ±13. 5
與對照組比較，p<0.01;
表3硫酸普拉格雷對大鼠出血率的影響
組別 n 出血例 出血率(％)
賦形劑組 10 0 0
馬來酸普拉格雷組10 5 50
硫酸普拉格雷組 10 1 10
實施例8硫酸普拉格雷片劑的制備 硫酸普拉格雷 10g 淀粉 75g 纖維素 20g 硬脂酸鎂 2.5g
制備工藝按照片劑的常規工藝制備
實施例9硫酸普拉格雷片劑的制備 硫酸普拉格雷 10g 淀粉 75g纖維素 20g 硬脂酸鎂 2.5g
制備工藝根據上述處方，按照片劑的常規工藝制備
實施例10硫酸普拉格雷膠囊的制備 硫酸普拉格雷 25g 微晶纖維素 120g e -環糊精 20g 微分硅膠 2g
制備工藝先將硫酸普拉格雷和e-環糊精放入研缽中研磨混合均勻，依次加入微晶纖
維素、微分硅膠混合均勻，裝填膠囊殼，即得。
權利要求
1、2-乙酰氧基-5-(α-環丙基羰基-2-氟芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3，2-C]吡啶的硫酸鹽。
2、 如權利要求1所述化合物的硫酸鹽，其特征在于，其氫譜數據為iHNMR(CDCl3)Sppm:0.87-1.30(4H,m),1.78 (1H，m) , 2.26(3H，s), 2.85-3.34(2H,m), 3.11-3.40(2H,m),4.05-4.78(2H,m),5.94-6.08 (lH,m),6.27陽6.44 (lH，m)，7.19-7.88(4H，m)。
3、 2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4，5,6，7-四氫噻吩并[3，2-C]吡啶的硫酸鹽的制備方法，其特征在于其步驟為將2-乙酰氧基-5- (a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4，5，6，7-四氫噻吩并[3,2-C]吡啶溶解溶劑中，緩慢滴加濃硫酸，滴加完畢繼續保溫攪拌至反應完全。
4、 如權利要求3所述的方法，其特征在于，反應物普拉格雷與濃硫酸的摩爾比為1:1 1. 1。
5、 如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述溶劑為芳香烴、脂肪烴、鹵代烴、酯類、醚類、酮類、醇類、腈類有機試劑的一種或一種以上。
6、 如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述溶劑為苯、甲苯、二甲苯、乙垸、環己垸、二氯甲垸、三氯甲垸、乙酸乙酯、乙醚、四氫呋喃、石油醚、丙酮、丁酮、甲醇、乙醇、乙腈、DMF的一種或一種以上。
7、 如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述溶劑為四氫呋喃、丙酮、甲醇、乙醚、丁酮。
8、 如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述溶劑為丙酮、乙醚、甲醇。
9、 一種藥物組合物，其特征在于，它含有2-乙酰氧基-5-(a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4， 5， 6， 7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶的硫酸鹽和可藥用稀釋劑或載體。
10、 如權利要求9所述組合物，其特征在于它是顆粒劑，膠囊，片劑、輸液劑或栓劑。
11、 2-乙酰氧基-5- ( a-環丙基羰基-2-氟芐基)-4,5,6,7-四氫噻吩并[3， 2-C]吡啶的硫酸鹽在制造用于預防或治療人的血栓形成或栓塞引起的疾病的藥物中的用途。
全文摘要
普拉格雷硫酸鹽、組合物及其制備方法，屬于化學藥物合成領域，具體涉及普拉格雷硫酸鹽、組合物及其制備方法，以及該化合物用于預防或治療人的血栓形成或栓塞引起的疾病的用途。利用本發明提供的制備方法得到的普拉格雷硫酸鹽生物利用度高、藥效顯著及不良反應低。
文檔編號C07D495/04GK101456864SQ20081014610
公開日2009年6月17日 申請日期2008年8月2日 優先權日2007年12月11日
發明者趙志全 申請人:魯南制藥集團股份有限公司