專利名稱：一種羥基紅花黃色素a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從藥用植物中提取有效成分的方法，具體是一種羥基紅花黃色素A的制備方法。
背景技術(shù)：
紅花(Catthamus tinctotins L.)為菊科一年生草本植物，在我國(guó)已有2100多年的栽培 與用藥歷史。其干燥管狀花是一味常用中藥，具有活血通絡(luò)、祛瘀止痛的功效。臨床上常用 來治療子宮充血，心血管、血栓形成等疾病，也作止痛、消炎劑。羥基黃色素A是目前得到 認(rèn)可的紅花有效成分之一，藥理實(shí)驗(yàn)證明羥基紅花黃色素A能明顯提高缺氧耐受力，使冠脈擴(kuò) 張，增加冠脈流量，并有明顯抑制ADP誘導(dǎo)的家兔血小板聚集作用。羥基紅花黃色素A主要用作凍干粉針劑。羥基紅花黃色素A的提取純化，目前需解決的主 要問題是有效去除雜質(zhì)，提高羥基紅花黃色素A的含量，降低生產(chǎn)成本。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外對(duì)羥基 紅花黃色素A( HSYA)的精制工藝研究的工作主要有①1993年Meselhy (ChemPhar -m.Bull.. 1993， 41(10): 1796-1802〕報(bào)道了通過丙酮提取，醋酸乙脂沉淀，然后通過纖維柱SephadexLH-20 凝膠色譜柱反復(fù)精制制備羥基紅花黃色素A的方法。在凝膠色譜柱分離時(shí)，另一紅花査耳酮成 分與HSYA混在一起，且需用制備型聚酰胺薄層板進(jìn)行精制制備HSYA，該方法不適合工業(yè)化生 產(chǎn)。②2004年李盛學(xué)(申請(qǐng)?zhí)朇N02132781.5)將紅花提取液進(jìn)行柱層析，醇沉，之后再進(jìn) 行3-5次反復(fù)柱層析進(jìn)行精制，冷凍干燥得到90X-99X的羥基紅花黃色素A干粉。該工藝需進(jìn) 行反復(fù)層析，且在精制過程中選用的是價(jià)格比較昂貴的葡聚糖凝膠作為填料。③2004金鳴等 報(bào)道(中草藥，2004， 35(1)25-28)用D—4020型非極性大孔樹脂柱水洗脫糖類等雜質(zhì)，以30 %和10%乙醇洗脫分別得SY和HSYA;兩洗脫液中所含SY和HSYA純度分別為92. 4%和83. 0 % 。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種生產(chǎn)成本低、工藝簡(jiǎn)單、無污染、收率高、純度高、適合適合 工業(yè)化生產(chǎn)的羥基紅花黃色A的制備方法。本發(fā)明提供的一種羥基紅花黃色A的制備方法，包括如下步驟(1)提取取干燥紅花，用紅花重量20 40倍的去離子水提取兩次，每次提取30 90 min， 提取溫度40°C 90°C，將兩次所得提取液合并，過濾，除去藥渣，6(TC減壓濃縮至比重為 1.05 1.15的水提液；(2) 分離上述水提液用大孔吸附樹脂或氫鍵鍵合型柱層析材料柱層析，上樣量為1:1 3 (w/w)，先用水淋洗2 4個(gè)柱體積，再用濃度為10% 60%乙醇水溶液淋洗1 5個(gè)柱體積，收集醇水淋洗液，60'C減壓濃縮至比重為1. 05 1. 15得初步分離濃縮液；(3) 精制將上述初步分離濃縮液用非極性反相層析材料柱層析，上樣量為0.5 2:1(w/w)，先用濃度為0% 10%乙醇水溶液淋洗2 4個(gè)柱體積，再用濃度為10% 70%乙醇水 溶液淋洗2 5個(gè)柱體積，收集醇水淋洗液，6(TC減壓濃縮至比重為1.05 1.2得精制濃縮液；(4) 冷凍干燥上述精制濃縮液經(jīng)冷凍干燥得橘黃色羥基紅花黃色素A產(chǎn)品。 用HPLC測(cè)定上述所得產(chǎn)品的羥基紅花黃色素A的含量，可達(dá)85% 99. 9%。 所述步驟(2)中的大孔吸附樹脂可以是AB-8或H103;氫鍵鍵合型柱層析材料可以是聚酰胺。初步分離可有效去除大量雜質(zhì)，為下一步柱層析得到高純度產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。所述步驟(3)中的非極性反相層析材料可選用^ffiS; MDS可再生重復(fù)利用，如用95%乙醇淋洗柱體即可使材料再生。本發(fā)明羥基紅花黃色素A含量測(cè)定方法用HPLC測(cè)定(按外標(biāo)法測(cè)定)。HPLC色譜條件為流動(dòng)相甲醇乙睛0.25%磷酸=33.5:0.7:65.8 ;色譜柱Hypersil C18(4.0X250mm);柱溫25。C;流速1.0mL/min;測(cè)定波長(zhǎng)402nm， 10ul進(jìn)樣。與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)(1) 本發(fā)明精制工藝簡(jiǎn)單，提取效率高。按羥基紅花黃色素A不同用途對(duì)純度的要求， 純度可達(dá)85% 99.9%，提取率可達(dá)0. 8% 1. 5%。(2) 本發(fā)明使用溶劑安全無毒，價(jià)格低廉可回收再用，對(duì)環(huán)境無污染；(3) 本發(fā)明使用分離精制材料便宜，且易于洗脫再生，可多次利用；總之，本發(fā)明羥基紅花黃色素A的制備方法，不僅生產(chǎn)成本低、工藝簡(jiǎn)單、無污染，而 且所得羥基紅花黃色素A的收率高、純度高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例/取0.4Kg干燥紅花，用12Kg去離子水提取兩次，提取溫度60'C，提取時(shí)間45min，合 并提取液，過濾，濾液6(TC減壓濃縮至約比重為1.10的水提液；水提液上聚酰胺柱分離(徑 高比為1:20)，上樣量為1:3。先用去離子水淋洗3個(gè)柱體積，再用50%乙醇淋洗4個(gè)柱體積， 收集淋洗液，60。C減壓濃縮至比重為1. 05得初步分離濃縮液；初步分離濃縮液上柱MDS-5(徑 高比為I:IO)，上樣量為0.5:1,先用10%乙醇淋洗2個(gè)柱體積，再用20%乙醇淋洗4個(gè)柱體 積，收集20%醇淋洗液。薄層層析檢測(cè)(展開劑為乙酸乙酯:甲醇:3.6%鹽酸=1:3:6)，合并 含有羥基紅花黃色素A單一斑點(diǎn)的淋洗液，6(TC減壓濃縮至比重為1.16，冷凍干燥即得橘黃色羥基紅花黃色素A產(chǎn)物。以羥基紅花黃色素A為對(duì)照品，用HPLC測(cè)得羥基紅花黃色素A 的含量為99.9%，收率為0.8%。實(shí)施例2取0.4Kg干燥紅花，用15Kg去離子水提取兩次，提取溫度8(TC，提取時(shí)間60min，合 并提取液，過濾，濾液6(TC減壓濃縮至約比重為1.05的水提液；水提液上AB-8柱分離(徑 高比為1:20)，上樣量為1:2。先用去離子水淋洗2個(gè)柱體積，再用30%乙醇淋洗4個(gè)柱體積， 收集淋洗液，6(TC減壓濃縮至比重為1. 10得初步分離濃縮液；初步分離濃縮液上柱MDS-5(徑 高比為1:10),上樣量為1:1，先用去離子水淋洗3個(gè)柱體積，再用30%乙醇淋洗4個(gè)柱體積， 收集30%醇淋洗液，薄層層析檢測(cè)，合并含有羥基紅花黃色素A斑點(diǎn)的淋洗液，60'C減壓濃 縮至比重為1.10，冷凍干燥即得橘黃色羥基紅花黃色素A產(chǎn)物。以羥基紅花黃色素A為對(duì) 照品，用HPLC測(cè)得羥基紅花黃色素A的含量為92. %，收率為1.2%。實(shí)施例3取lKg干燥紅花，用30Kg去離子水提取兩次，提取溫度70'C，提取時(shí)間80min，合并 提取液，過濾，濾液6(TC減壓濃縮至約比重為1.12的水提液；水提液上H103柱分離(徑高 比為1:20)，上樣量為1:3。先用去離子水淋洗4個(gè)柱體積，再用40%乙醇淋洗4個(gè)柱體積， 收集淋洗液，6(TC減壓濃縮至比重為1. IO得初步分離濃縮液；初步分離濃縮液上柱MDS-5(徑 高比為I:IO)，上樣量為2:1，先用去離子水淋洗3個(gè)柱體積，再用40%乙醇淋洗3個(gè)柱體積， 收集40%醇淋洗液，薄層層析檢測(cè)，合并含有羥基紅花黃色素A斑點(diǎn)的淋洗液，6(TC減壓濃 縮至比重為1.12，冷凍干燥即得橘黃色羥基紅花黃色素A產(chǎn)物。以羥基紅花黃色素A為對(duì) 照品，用HPLC測(cè)得羥基紅花黃色素A的含量為86. %，收率為1.5%。
權(quán)利要求
1.一種羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)提取取干燥紅花，用紅花重量20～40倍的去離子水提取兩次，每次提取30～90min，提取溫度40℃～90℃，將兩次所得提取液合并，過濾，除去藥渣，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.15的水提液；(2)分離上述水提液用大孔吸附樹脂或氫鍵鍵合型柱層析材料柱層析，上樣量為1∶1～3，先用水淋洗2～4個(gè)柱體積，再用濃度為10％～60％乙醇水溶液淋洗1～5個(gè)柱體積，收集醇水淋洗液，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.15得初步分離濃縮液；(3)精制將上述初步分離濃縮液用非極性反相層析材料柱層析，上樣量為0.5～2∶1，先用濃度為0％～10％乙醇水溶液淋洗2～4個(gè)柱體積，再用濃度為10％～70％乙醇水溶液淋洗2～5個(gè)柱體積，收集醇水淋洗液，60℃減壓濃縮至比重為1.05～1.2得精制濃縮液；(4)冷凍干燥上述精制濃縮液經(jīng)冷凍干燥得橘黃色羥基紅花黃色素A產(chǎn)品。
2. 如權(quán)利要求1所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述大孔 吸附樹脂是AB-8或H103。
3. 如權(quán)利要求1所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于步驟(2)中所述氫鍵鍵合型柱層析材料是聚酰胺。
4. 如權(quán)利要求1所述的羥基紅花黃色素A的制備方法，其特征在于步驟(3)中所述的反相層析材料是MDS。
全文摘要
一種羥基紅花黃色素A的制備方法，采用干燥紅花為原料，用去離子水作為提取溶劑，依次通過初步分離柱和精制柱，用去離子水和醇水溶液作為洗脫劑，冷凍干燥得羥基紅花黃色素A，含量可達(dá)85％～99.9％。本發(fā)明所用材料便宜，溶劑安全無毒，工藝簡(jiǎn)單；對(duì)紅花的利用率高，按羥基紅花黃色素A不同用途對(duì)純度的要求，提取率為0.8％～1.5％；成本低，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07H15/00GK101215307SQ20081005442
公開日2008年7月9日 申請(qǐng)日期2008年1月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月8日
發(fā)明者張立偉, 俊 賈, 賈菲菲 申請(qǐng)人:山西大學(xué)