專利名稱：：一種微生物酶法生產l-色氨酸的方法一種微生物酶法生產L-色氨酸的方法C絲領域本發明屬于氨基酸的^fe^領域，涉及ffiil微生物酶法轉^^tffj體生產L色氨酸的方法。
背景技術：
：L-色氨m^人和動物體內的重要必需氨基酸，在醫藥、食品和飼料等領域均具有非常廣泛的用途。近年來，由于飼料工業發展鵬，以及L色氨酸在醫藥行業的用途不斷擴大，國內夕卜對于L色氨酸的需求量日益增加。但由于長期以來L-色氨酸的生產難度高、價格昂貴，除醫藥用途外，L-色氨酸在其它領鵬未能大量推廣應用。L-色氨酸是直接發酵法;^t生產的氨基M^—，其生產方法主要有蛋白水解提取法、化學合成法、微生物發,去和酶法合成法四種。其中，酶法合成法利用虹合成的前f糊為原料，既充分發揮了有機合成技術的優勢，又具有,濃度高、收率高、純度高、畐U產物少和麟臊作容易等優點，為當MS推崇的MT生產L色氨酸的好方法。酶法合itL-色氨酸的途fcfe要涉及色氨^成酶(EC4.2丄20)和色氨酸酶(EC4丄99.1)，二者均可催{1絲氨酸和噴哚合》1色氨酸。由于柳*^色氨酸合具有強烈的抑制作用，而色氨酸酶對吲哚貝懼有良好的穩定性，所以近年來人們更為關注色氨酸酶fc色氨酸生物合成中的應用。色氨酸酶正常情況下儘L"色氨酸生成丙酮酸、吲哚和氨，但在高濃度丙酮酸和氨的^K牛下也能有效的催化丙,、ti引哚和氨合成L色氨酸。該酶還能催化L絲氨酸或L-半胱氨酸和ti引n跆成L"色氨酸。色氨MW崔化丙酮酸、吲哚和氨合成L-色氨酸的途徑中，由于底糊引口樹色氨酸酶抑制作用較弱，且丙酮酸價格不高，因而具有一定的實用性，但該途徑是色氨M/K解的逆反應，要求底物濃度較高，反應平衡不易把握。以L-絲氨酸和H引哚為原料合成L-色氨酸的途徑中，由于底物L-絲氨酸的價格幾乎與L色氨酸相當，因此實用性不強。利用色氨MHi崔化L-半胱氨酸和吲哚合成L"色氮酸的途徑中，由于底物L半胱氨酸的^成;^為低廉，因此該途徑具有重要的工業化應用價值。酶法轉化L-半胱氨酸和噴哚合成L-色氨酸的途徑中，分離純化產物L-色氨酸的主要難點在于，反應液的纟Bj^t分^J復雜，殘留的吲哚和L-半胱氨酸等物質與產物L-色氨酸不易分離，目前尚未有成熟可行的方法鵬。
發明內容本發明的目的是解決現有技術中存在的戰問題，掛共一種微生物酶法生產L色氨酸的新方法。本發明涉及利用惡臭假單胞菌TS1138(fto^腳層/7^必TS1138)細胞和高效，色氨酸酶的大腸桿菌菌體全細胞、菌體裂解液或固定化酶為酶源，從底物DL-2-氨基A2-噻唑啉4-羧酸(DL-2-aminO"A2-thia2line4"Carboxylicacid，DL-ATC)出發，經兩錢續的或一步混合的酶促反應合成L色氨酸，并最終分離純化獲得產物L色氨酸的工藝路線。本發明自行分離獲得一株惡臭假單胞菌TS1138菌株(尸^M/o7no顯/7wtebTS-1138)，該菌株保藏于"中國徵物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，臓號為CGMCCNo.1920，該菌株所包含的L-半胱氨酸合成酶系倉,催4t/S物DL-ATC合成L-半胱氨酸。齡卜，本發明還自行構建了高效鋭色氨酸酶的大腸桿菌基因工程菌株，即以大腸桿菌JM109菌縫因組DNA為模板，PCR擴增獲得色氨酸酶基因，并將雜大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達'重組表達的色氨酸酶活力達到宿主菌的110倍。以J^兩種菌株的菌體錢胞、菌體裂繊或固定化酶為酶源，本發明分別建立了經L-半胱氨酸兩步^或一步混合的,反應生物合成L-色氨酸的新方法，合成路線見圖1。本發明掛共的微生物酶法生產L-色氨酸的方法，具體包括第l、兩步連續的^f足反應第1.1、首先以惡臭假單胞菌TS1138菌體的全細胞或菌體裂解液為酶源，酶法轉化底物DL"2-氨基-A2-噻唑啉4-羧酸得到含有L-半胱氨酸的反應液；第1.2、再以高效表達色氨酸酶的^桿菌菌體的全細胞、菌體裂解液或固定fW為酶源，以上述L-半胱氨艦應液和B引哚為底物，經酶法轉化合成L-色氨酸；或者，第2、一步混合的^f足反應以惡臭假單胞菌TS1138菌體的全細胞或菌體裂解液和高效表達色氨酸酶的^桿菌菌體的全細胞、菌體裂M或固定化酶為混合酶源，酶法轉ft^物DL2-氨基-A2-噻唑畔!4-羧酸和吲口始成L"色氨酸。戶腿的兩步體的,反I^ii程中，同B助口入輔^^酸吡哆醛，以及翔刻乍為L-半胱氨酸月ME基酶的抑制劑，所述輔M酸吡哆醛的用量為0.05g/L至lg/L,所述尹勁安的終濃度為0.5mmol/L至3.0廳ol/L;TS1]38菌體用量一般為50g/L至500g/L，菌體裂IWS量一般為10g至100g菌體細胞的裂解瓶高效表達色氨酸酶的大腸桿菌菌體用量一般為1g/L至100g/L，菌體裂IWS量一般為0.5g至30g菌體細胞的裂解液，固定化酶用量一般為lg/L至50g/L;底物DL-2-氨基-A2-噻唑啉4-羧酸的濃度為1g/L至15g^;底物吲哚用量為1g/L至20g/L。所述的輔酶磷酸吡哆醛的用量，為0.15g/L，所用羥胺的終濃度優選為1.0mmol/L;TS1138菌體用量ttit為150,，菌體SM用量,為30g菌體細胞的^液；高效表達色氨酸酶的，桿菌菌體用量,為10^，菌體裂^OT量,為3g菌體細胞的裂解液，固定化酶用量,為15g/L;底物DL-2-氨基-A2-噻唑Rfr4-羧酸的終濃度,為6,;底物吲哚用量雌為4.5*。所述的一步混合的斷足反應過程中，可以同時加入輔驗比哆醛，其用量為0.05g/L至lg/L;TS1138菌體用量一般為50至500菌體裂餘OT量一般為10g至100g菌體細胞的裂解液；高效^ii色氨酸酶的大腸桿M體用量1為1g/L至100g^L，菌體裂解、TO量一般為0.5g至30g菌體細胞的裂^t，固定化酶用量1為lg/L至50g^;底物DL-2-氨基-A2-l!WM^^的終,為l^L至15^L，吲哚用M^l^L至20g^。輔,聯比鵬用量雌為0.15g^，還38菌體用量雌為200^，菌體^OT量優選為40g菌體細胞的^S^;^^色氨,的桿^1體用量為15菌體，細量tt^J5g菌體細胞的^g，固定化酶用量雌為20g^;底物DL-2-E^A2應M4羧酸的終濃度雌為6g^，吲哚用量雌為5g^。本發明所合成的b色氨酸的分離純化方,，■S8M^孔樹脂去l^有L色氨m^液中殘留的DL"2-M^A2-噻IW^4^酸和吲哚，雜pH為5的剝牛下用NKA-IIS^W脂吸附L"色氨酸，排除L半胱氨酸的干擾，ftjg經乙^M、ME^TP燥，獲得L色氨酸。在本發明實施例中，，Gaitonde^測定L半胱氨酸的^4，具體方法如下精確—定量L半胱氨^^準品，溶h定量0.05mol/LHCl中，制備終濃度為500mg^的標鵬液，進~^用蒸餾水將±^母液分另1鵬為10，20，……，100mgL的標準溶液。取一定量辦示準溶液或待測樣品溶液的11#液0.211^，加入0.21^冰酺，再加入0.2統^14茚三811^0，于沸水浴中皿10min,然后3t即在冷7j^中，，最后加入2.4mL酒精，使總^R為3mL。皿10min后，于560nm下測定其吸爐，以濃度和吸艦織併示準曲線。艦該標準曲線將出未知溶液中的L半胱氨^feg。在本發明^6I例中，，iW^相色譜fe!5測定L-色氨酸的^S，具^^法如下:分別取5(M,500m^L濃度的L色氨敏示，2()ML進樣，^^進樣5次，計算峰高并取平i^1，以L色氨酸濃度(X，mg^L)為橫坐標，峰高(Y)為M^^併示準曲線。敝^S^f產生的L"色氨驗高^^相色譜檢測后與標準曲^比較即可進fi^確定量。本發明ftlWI^:本發明從化學合成的底物DLATC出發，禾擁惡臭假單胞菌TS1138和高效^^色氨酸酶的桿0^體的，胞、菌體^teK固定^SI為酶源，分別經兩i^的和一步混合的,反應^L色氨酸。由于底物DLATC的^^^H據，因jfe^:發明在L"色氨酸的:nik化^^鵬有廣闊的鵬前景。圖l:酶^^化DLATC合成I^色氨酸的路g意圖，圖2:iW^ffife譜^^^液中以^W^的L"色氨酸，(A)，破液(紫外檢測)(B)，反應液(蒸發光散色雜測)；(C)，純化的L色氨酸(紫外^i3);(D),純化的L色氨酸(HS光散fe^l^測)；色^t分別為1，匸色氨酸(保留時間，4.732min);2，吲哚(保留時間，5.965min);3,L半胱氨酸(保留時間，3.223min)。本發明^6tJ惡臭假單胞菌TS1138，分類命名Aeudb卿nos/n^,已于2007年1月17曰^于"中國,IWt^i管,員^iyim^物中心"，，時皿北^nr海淀區中關村中科院敝柳鄉內，臓號為CGMCCNo.1920。同時，該菌株已記縱2007年10月17曰公開的200710056754.9"^利申請文件中。具^JKr式鄉例i規桿菌色氨^l^因的克隆與親根據大腸桿菌K12菌株的色氨酸酶基因序列，設計色氨酸酶基因上游引物5'-CCGGAATTCATGGAAAACTTTAAACATCTCC-3'和下游引物5'-CCCAAGCTnTAAACTTCnTCAGTTTTGCGG-3'。分別以大腸桿MDH5cuJM109和BL21菌株的基因組DNA為模板，PCR擴增獲得色氨,基因，并分別構建重組韃質粒pET-tnaA(D)、pET-tnaA(J)和pET-tnaA(B)。將三種重組質粒分別轉化Mi^桿飾L21(DE3)，構建得到各自的色氨酸酶基因工程菌株。接種重組菌株于4mL含有氨節青霉素100^mL的LB培養基中，37。C振蕩培養1216h后，以1%接種量轉接至50mLiffi羊LB培養基，繼續t歸至OD6oo達0.5時，添加終濃度為O.l腿ol/L的IPTG，于37。C誘導^ii2小時。收集菌體細磷,緩沖液(pH8.0)洗滌后重懸，超聲波破碎處理5分鐘，使菌體充分裂解，離心后收集上清液，測定重組表達色氨,的活力。結果表明，來源于三株不同大腸桿菌的色氨酸,因SM^&，的酶活力相近，均超脆主菌自身色氨,活力的10O倍以上(表l)。表l不同菌株的色氨麵幼<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>所有數值均為三次平行實驗的平i^ffl^示糖(Meanvalue土S.D.)。鄉例2惡臭假單胞菌麗38菌鵬源的制備從平板上挑取一環惡臭假單胞菌TS138接入4mL種子培養基中(葡萄糖20g，ATC3g，玉米漿5g，尿素3g，NaC11.5g，MnS04.H2Q0.1g，K2HP043g，MgS04.7H200.5g，FeS04'7H200.01g，定容至1L，pH7.5)，28。Cl60r/min培養16h后，以P/o^種量轉接到50mL產鵬養基中(葡萄糖30g，ATC4g，就漿1g，尿素3g，NaCl1.5g，MnS04'H200.1g，K2HP043g，MgS04'7H200.5g，FeSO4.7H2O0.01g，定容至IL，pH7.5)，28°C160r/min培養16h后，離心，收集菌體，用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液(pH8.0)洗滌菌體1M2次，稱取一定量的上述菌體，加入甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液，即制得酶源細胞懸液。對酶源細M《灘聲波破碎，離心后收*±清液，艮蹄幌菌體裂繊。鄉例3高效鋭色氨,的鄉桿離源的制備接種實施例1中制備的包含pET-tnaA(J)的fic^BL2](DE3)重組菌株于4mL含有氨節青霉素100一mL的LB培養基中，37。C振蕩培養1216h后，以1%接種量轉接至50mL新鮮LB培養基繼續培養至OD6oo達0.5時，添加終濃度為0.1mmol/L的IPTG，于37'C誘導表達2小時。收集菌體采用磷ISW緩沖液(pH8.0)洗滌菌體1至2次，稱取一定量的，菌體，加入磷,緩沖液，艮蹄掃酶源細胞懸液。翻超聲波破碎酶源細胞，離心后收ai:清液，艮蹄勝菌體裂M。稱取lgDEAE-22纖維素，加入3.5。/。戊二醛40mL，室溫下攪拌5h，靜M;夜，離心去除上清液，將所得載體用蒸餾水反復沖洗以除去殘存的戊二醛，抽濾后即得交聯載體。交聯后的載體中加入可溶性蛋白含量為15^的菌體S^液30mL，4'C靜置12h，每隔0.5h攪拌一次。離心，棄去上清液，沉淀物用蒸餾水反復沖洗去除游離裂鵬，抽濾后即制得固定化酶。鄉例4以菌體，胞為酶源，經兩^^^M^合成L"色氨酸在一個內容積為500mL，有攪拌器的容器中，配制300mL,反應液，包含6g/LDL-ATC、6g/LK2HP04、1.0mmol/L羥』安以及150g/L的實施例2中制備的TS1138菌株酶源細胞，用5%的氫氧化鉀7jC溶液調整pH輕8.0，置于42。C恒feK浴中，攪拌反應2,5h。反應完成后，在4。C^rf牛下12,000r/min離心5min，將固液分離，上清液為含有L半胱氮酸的混合液，檢測其中L-半胱氨齢量為4.8g/L，底物DL-ATC的摩爾轉化率為96.5%。在i:述含有L-半胱氨酸的反應液中分別加入終濃度為4.5,的B引哚、0.15g/L的輔,駒比哆醛和IOg/L的高效^ii色氨酸酶的大腸桿菌酶源細胞，用5%的氫氧化鉀水溶液調整pH輕8.0，于45。C恒溫水浴中，攪拌反應3h。反應完itB，在4。C斜牛下12,000r/min離心5min，將固液分離，上清液為含有L-色氨酸的混合液，檢測其中L色氨齡量為6.2^，底物1半胱氨酸的摩爾轉化率為76.6%，吲哚的摩爾轉化率為79.0%，AAT虔物DL-ATC至U產物L"色氨酸的總摩爾轉化率為73.9%。戰L半胱氨齢量的測定采用Gaitonde法，具體方法如下精確稱取一定量L-半胱氨酸標準品，溶t定量0.05mol/LHCl中，制備終濃度為500mg^的標準母液，進一步用蒸餾水將上述母液分別稀釋為IO，20，......，100m^L的標準溶液。取一定量的標準溶液或待測樣品溶液的稀釋液0.21111，加入0.2mL冰醋酸，再加入0.2mL酸性茚三酮試劑，于沸水浴中反應10min，然后立即在冷水中冷卻，最后加入2.4mL酒精，使總體積為3mL。放置10min后，于560nm下測定其吸光度，以濃度和吸光度會飾訴示準曲線。ffiil該標準曲線計算出未知溶液中的L-半胱氨酸濃度。L-色氨酸含量的測定采用高效液相色譜法，具體;^法如下分別取5(M,500mg/L、濃度的L色氨酸標準液20)^進樣，驗進樣5次，計算峰高并取平i^f直，以L色氨酸濃度(X，mg/L)為橫坐標，峰高(Y)為繼標會魏訴示準曲線。謝足反應所產生的L-色氨^^高效液相色譜檢測后與標準曲線相比較即可進行精確定量。鄉例5以菌體^i^為酶源，經一步混合艦鵬合成L色氨酸在一個內^^口、為500mL并裝有攪拌器的容器中，配制300mL酶促反應液，包含6g/LDL-ATC、0.6%K2HPO4、1.0腿ol/L，勁安、5g/Ld引哚、0.15^磷酸吡哆醛、25gTS1138菌株菌體的|^液以及5g高效，色氮酸酶的大腸桿菌的菌體裂鵬夜，用5%的氫氧化鉀水溶液調整pH值至8.0，置于42"瞎U/K浴中，攪拌反應3h。反應完^B，在4。C^f牛下12,000r/min離心5min，將固液分離，上清液為含有L-色氨酸的混合液，檢觀淇中L色氨齢量為6.7g^(方法同例4)，底物DLATC的摩爾轉化率為79.9。/。，吲哚的摩爾轉化率為76.9%。魏例6以固定4fcBI為^^,經兩^^SIfeS^合成L"色氨酸在一個內容積為500mL并裝有攪拌器的容器中，配制300mL,足反應液，包含6,DL-ATC、6g/LK2HP04、1.0mmol/L,漲以及150g^L的TS1138菌株酶源細胞，用5%的織化鉀水溶液調整pH值至8.0，置于42。C恒^7jC浴中，攪拌反應2.511。反應完成后，在4。C條件下12,000r/min離心5min，將固液分離，上清液為含有L半胱氨酸的混合液，檢測其中L-半胱氨齢量為4.8g^L(方法同例4)，底物DLATC的摩爾轉化率為96.5%。往Ji^含有L半胱氨酸的反應液中分別加入終濃度為4.5g/L的吲哚、0.15,的輔,駒比眵醛和15g/L的固定化色氨酸酶，用5%的氫氧化鉀水溶液調整pH{趕8.0，于50。C恒^7jC浴中，攪拌反應3h。反應完成后，在4。C條件下12,000r/min離心5min，將固液分離，上清液為含有L色氨酸的混合液，檢測其中L色氨^M為6.8g^L(方法同例4)，底物L半胱氨酸的摩爾轉化率為84.0%,噴哚的摩爾轉化率為86.7%，從底物DLATC到產物L色氨酸的總摩爾轉化率為81.1%。鄉例7L色氨酸的分離純化將包含L色氨酸的lliS反應液于4。C下12,000r/min離心10min去除菌體及未溶解的吲哚，上清液以HCl調節pHitM5.0，取300mL上述溶^:樣于S8型大孔樹脂柱(40x2.6cm)，〗.5mL/min，以吸Pf條液中殘留的DLATC和吲哚，流出液再上樣于NKA-II大孔樹脂柱(40《.6cm)，艦1.0mlVmin，用水充分洗滌后以50%乙,脫，洗月M^0.7mL/min。收纖脫液，并檢測洗脫液中L-色氨酸的含量。合并活性洗脫部分，纟SlMffi^tT^喿處理后獲得L"色氨酸白色粉末1.652g。經高效液相色譜檢測(圖2)，，純度超鵬準品的98.3%。9權利要求1、一種微生物酶法生產L-色氨酸的方法，其特征在于該方法包括第1、兩步連續的酶促反應第1.1、首先以惡臭假單胞菌TS1138菌體的全細胞或菌體裂解液為酶源，酶法轉化底物DL-2-氨基-Δ2-噻唑啉-4-羧酸得到含有L-半胱氨酸的反應液；第1.2、再以高效表達色氨酸酶的大腸桿菌菌體的全細胞、菌體裂解液或固定化酶為酶源，以上述L-半胱氨酸反應液和吲哚為底物，經酶法轉化合成L-色氨酸；或者，第2、一步混合的酶促反應以惡臭假單胞菌TS1138菌體的全細胞或菌體裂解液和高效表達色氨酸酶的大腸桿菌菌體的全細胞、菌體裂解液或固定化酶為混合酶源，酶法轉化底物DL-2-氨基-Δ2-噻唑啉-4-羧酸和吲哚合成L-色氨酸。2、根據權利要求l所述的方法，^#征在于，所述的兩步連續的,反^1程中，同時加入輔M輸比哆醛，以及P漲作為L"半胱氨翻勉i基酶的抑制劑，所述輔酶磷働比P多醛的用量為0.05g/L至1g/L，所述羥胺的終濃度為0.5mmol/L至3.0mmol/L;TS1138菌體用量一般為50^L至500g/L，菌體裂解液用量一般為10g至100g菌體細胞的裂解液高效,色氨酸酶的大腸桿ltiH本用量一般為1g^L至100,，菌體裂餘鵬量一般為0.5g至30g菌體細胞的裂解夜，固定化酶用量一般為lg/L至50^酶蛋白；底物DL-2-氨基-A2-噻唑游M-羧酸的濃度為lg/L至15^;底物吲哚用量為lg/L至20g/L。3、根據權利要求2所述的方法，辦征在于，兩步避賣的酶促反i^i程中，戶腿的輔,酸吡眵醛用量,為0.15g/L，所用l勁安的終^^度,為1.0mmol/L;TS1138菌體用量t/選為150g^，菌體裂解液用量,為30g菌體細胞的裂M;高效表達色氨酸酶的桿菌菌體用量,為10^，菌體裂解,量皿為3g菌體細胞的裂解液，固定化酶用量,為15g/L;底物DL"2-氨基A2-噻P^木4-羧酸的終濃度，為6底物吲哚用量,為4.5g/L。4、根據權利要求1戶皿的方法，其特征在于，一步混合的反^1程中，同時加入輔酶磷酸吡眵醛，其用量為0.05^L至lg/L;TS1138菌體用量"^為50^至500g/L，菌體裂解OT量一般為10g至100g菌體細胞的^M;高效^i色氨酸酶的大腸桿菌菌體用量一般為1g/L至100g^L，菌體^^^量一般為0.5§至3(^菌體細胞的裂解液，固定化酶用量一般為1g/L至50g/L;底物DL2-氨基-A2-噻唑啉4-羧酸的終濃度為1g^L至15g/L，吲哚用量為1g/L至20gL。5、根據權利要求4戶，的方法，其特征在于，戶腿的一步混合的斷足反皿程中，輔M酸吡哆醛用量雌為0.15^;TS1138菌體用量雌為200g/L，菌體^TO量雌為40g菌體細胞的^M;高效敏色氨酸酶的鄉桿.離體用量雌為15g/L，菌體裂IM量雌為5g菌體細胞的裂解液，固定化酶用量雌為20g/L;底物DL-2-氨基-A2-噻唑啉4魂酸的終濃度雌為6g/L，吲哚用量雌為5g/L。6、根據^^利要求1至5所述的方法，其特征在于所述的假單胞菌TS1138(尸A、e^,薦/^obTS-1138)，保藏于"中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心"，保藏號為CGMCCNo.1920。7、根據權利要求1至5所述的方法，^f封正在于戶腿的高效,色氨酸酶的大腸桿菌是通過克隆大腸桿菌自身的色氨MK基因并在:W桿菌中進行高效泰逸的基因工程菌株。8、根據權利要求1至5所述的方法，^^特-征在于，所合成的L色氮酸的分離純化方法是，采用S8默孔樹脂去除含有L-色氨酸反應液中殘留的DL2-氨基-A2-噻唑,-羧酸和n引哚，再在pH為5的斜牛下用NKA-II型大孔樹脂吸附L-色氨酸，排除L半胱氨酸的干擾，最后經乙,兌、艦濃縮干燥，獲得L-色氨酸。全文摘要一種微生物酶法生產L-色氨酸的方法。本發明利用惡臭假單胞菌TS1138(PseudomonasputidaTS1138)和高效表達色氨酸酶的大腸桿菌菌體的全細胞、菌體裂解液或固定化酶為酶源，從底物DL-2-氨基-Δ<sup>2</sup>-噻唑啉-4-羧酸(DL-2-amino-Δ<sup>2</sup>-thiazoline-4-carboxylicacid，DL-ATC)出發，經兩步連續的或一步混合的酶促反應轉化合成L-色氨酸，其純化方法是，采用S8型大孔樹脂去除含有L-色氨酸反應液中殘留的DL-2-氨基-Δ<sup>2</sup>-噻唑啉-4-羧酸和吲哚，再在pH為5的條件下用NKA-II型大孔樹脂吸附L-色氨酸，排除L-半胱氨酸的干擾，最后經乙醇洗脫、減壓濃縮干燥，獲得L-色氨酸，從而提供了一種新的L-色氨酸的綠色生產工藝路線。由于底物DL-ATC的生產成本較為低廉，因此本發明在L-色氨酸的工業化生產領域具有廣闊的應用前景。文檔編號C07C227/40GK101525641SQ200810053749公開日2009年9月9日申請日期2008年7月4日優先權日2008年7月4日發明者余養盛,劉春琴,楊文博,段靜靜,鋼白,寧陳申請人:南開大學