專利名稱：白花蛇舌草懸浮細胞培養制備半乳糖醇的制作方法
技術領域：
本發明是關于半乳糖醇的制造方法，更具體地說，是關于從白花蛇舌草懸浮細胞系培養 液中制備半乳糖醇的方法。
背景技術：
半乳糖醇屬于生化試劑，主要用于細菌鑒別,培養基配方方面，是微生物研究防病治病必不 可少的重要糖類，半乳糖醇注射液是治療類風濕必不可少的重要藥物，將半乳糖醇與溴化氫作 用，可以制造1，6-二溴-1,6-二脫氧半乳糖醇，它是一種極好的細胞抑制劑,治療脊髓白血病時, 優于傳統的1,6-二溴-1，6-二脫氧甘露糖醇,而且有效劑量明顯少，它還可以用于藥品賦形劑,明 顯提高藥品的外觀片與穩定性。
目前，半乳糖醇主要由兩種方法制備， 一種是由半乳糖加氫制得，由于自然界中半乳糖 量比較少，而且總是與其它糖混合在一起，半乳糖與其他糖類的分離與提取難度較大，半乳 糖醇的生產與制備難度比較大；另一種是從部分中藥中提取；最近禹城福田藥業從木糖醇母 液中模擬流動床分離得到半乳糖醇無色單斜柱狀晶體。無論哪種方法，半乳糖醇的純化均比 較困難，收率低，造成市場價格較高，尚不能工業化生產。
發明內容
本發明是從白花蛇舌草懸浮細胞系培養液中制備得到半乳糖醇，具有分離簡單，純度高 的優點，可以顯著克服現有半乳糖醇制備方法的缺點。白花蛇舌草懸浮細胞系已公開發表在 《海峽藥學》2006年第18巻6期132-134頁論文《白花蛇舌草細胞懸浮培養的建立與條件優 化》中。
本發明通過下述技術方案予以實現將白花蛇舌草懸浮細胞系培養液4000rpm離心20分 鐘，取沉淀，用原培養液體積1/3的水10 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml， 用3 5倍濃縮液體積的丙酮沉淀離心,沉淀加1 3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置 過夜，得到的白色細小碎結晶即為半乳糖醇。
所述水提液最好經超聲10 20分鐘，丙酮沉淀體積最好為3 5倍濃縮液體積，氯仿體 積l倍濃縮液體積即可，結晶溫度為-4'C。
下面結合附圖和實施例對本發明專利進一步說明。 圖l是從白花蛇舌草懸浮細胞系培養液中制備半乳糖醇流程圖。 圖2是半乳糖醇結構圖。
具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明做進一步的描述
將白花蛇舌草懸浮細胞培養液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用1/3倍培養液體積的水 10 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養液，用3 5倍濃縮液體積的丙酮沉 淀，離心后取沉淀加1 3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置過夜，得到的白色細小碎 結晶即為半乳糖醇。
上述工藝條件不需再進行進一步純化，所得半乳糖醇為色譜純，如想進一步精制，可用 氯仿洗。
下面是制備半乳糖醇的實施例。通過實施例可以了解不同制備工藝條件對半乳糖醇純度 及含量的影響。
實施例l:
取白花蛇舌草懸浮細胞培養液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用1/3倍培養液體積的水 IO分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養液，用3倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離 心后取沉淀加1倍濃縮液體積的氯仿溶解,_4°0冷藏放置過夜，半乳糖醉得率為0. 2g/L培養 液左右。
實施例2:
取白花蛇舌草懸浮細胞培養液4000rpm離心20分鐘，取沉淀,用1/3倍培養液體積的水 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養液，用4倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離 心后取沉淀加2倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4°0冷藏放置過夜，半乳糖醇得率為0. 3g/L培養 液左右。
實施例3:取白花蛇舌草懸浮細胞培養液4000rpm離心20分鐘，取沉淀,用1/3倍培養液體積的水 20分鐘超聲溶解，濃縮至2 3ml濃縮液/300ml培養液，用5倍濃縮液體積的丙酮沉淀，離
心后取沉淀加3倍濃縮液體積的氯仿溶解,-4'C冷藏放置過夜，半乳糖醇得率為0. 5g/L培養
液左右。
權利要求
1.一種半乳糖醇的制備方法，其特征是以白花蛇舌草懸浮細胞系為原料，經如下加工工藝過程制備而成的1)水提粗品將白花蛇舌草懸浮細胞系細胞培養液離心，得沉淀物，用原培養液體積1/3的水超聲溶解，然后濃縮至2～3ml濃縮液/300ml培養液；2)精制將濃縮液用丙酮沉淀后離心，取沉淀用氯仿溶解，冷藏過夜即得結晶。
2. 根據權利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于，水提液濃縮至2 3ml濃縮液/300ml 培養液。
3. 根據權利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于，用3 5倍體積丙酮沉淀。
4. 根據權利要求l所述制造半乳糖醇的方法，其特征在于在氯仿中得白色細小碎結晶。
全文摘要
本發明公開了一種從白花蛇舌草懸浮細胞系培養液中制備半乳糖醇的方法，利用本方法可以顯著提高半乳糖醇純度，且具有分離步驟簡單，原料可再生的優點，可以顯著克服現有半乳糖醇制備方法的缺點。白花蛇舌草懸浮細胞系已公開發表在《海峽藥學》2006年第18卷6期132-134頁論文《白花蛇舌草細胞懸浮培養的建立與條件優化》中。本發明通過下述技術方案予以實現將白花蛇舌草懸浮細胞系培養液4000rpm離心20分鐘，取沉淀，用原培養液體積1/3的水10～20分鐘MHz超聲溶解，濃縮至2～3ml濃縮液/300ml，用3～5倍濃縮液體積的丙酮沉淀離心，沉淀加1～3倍濃縮液體積的氯仿溶解，-4℃冷藏放置過夜，得到的白色細小碎結晶即為半乳糖醇。
文檔編號C07C31/26GK101289370SQ20081002550
公開日2008年10月22日 申請日期2008年5月7日 優先權日2008年5月7日
發明者于瑞蓮, 沈文斌, 旻 王 申請人:中國藥科大學