專利名稱：：紫莖澤蘭中一種具有抗腫瘤活性的新化合物及其它四種新化合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及一種具有抗腫瘤活性的新化合物，以及其它四種同時分離得到的新化合物，其中一種具有新化合物骨架。
背景技術：
：紫莖澤蘭(五w/^w/MWi^fewop/wn/wSpreng)為菊科澤蘭屬多年生草本植物,原產墨西哥,20世紀50年代前后自緬甸和越南傳入我國云南南部。這種植物具有驚人的繁殖能力，可形成密集成片的單種優勢部落而排斥其它作物的生長。近30年來，紫莖澤蘭幾乎以每年三十公里的速度向北、向東飛速蔓延，分布范圍已達云南、貴州、廣東、廣西、四川、西藏等省區，給蔓延區的農林牧副業帶來了嚴重的危害，成為我國目前危害最為嚴重的外來入侵物種之一。為了充分的利用這種惡性雜草，使其變廢為寶，本案首次公開了新化合物紫莖澤蘭H的抗人結腸癌細胞、抗人肝癌細胞以及抗人卵巢癌細胞活性，以及其它四個新化合物成分，為紫莖澤蘭綜合利用開辟新思路，以期同時達到綜合控制的目的。
發明內容本發明的目的是提供一種具有抗腫瘤活性的新化合物——紫莖澤蘭H，以及同時分離得到的紫莖澤蘭中的其它四種新化合物成分——紫莖澤蘭D、紫莖澤蘭E、紫莖澤蘭F、紫莖澤蘭G。一、五種新化合物的結構、性質及波譜數據表l.化合物a的&NMR數據"ppm乂Hz)編紫莖澤蘭E紫莖澤蘭F紫莖澤蘭G紫莖澤蘭H紫莖澤蘭號D2.58dd(16.3,2.63dd(16.4,1.95t(14.6)1.67m4.8)4.7)2.82dd(18.6，2.84dd(16.4,2.56dd(15.8,1.92m2.3)2.3)4.2)1.80m6.60s2-1.93m31.87s1.65s46.35brs6.26d(1.3)6.60d(4.5)5.34s7.48d(8.5)1.86m4.03brs3.99brs2.57brs7.92m63.91brs1.85m2.35-2.37m1.64m72.1m1.83m1.15brs2.10m8.17s8a1.17-1.22m1.02-1.07m2.20dd(14.8,3.3)1.45m3.21-3.25m8A1.84dd(13.2,3.4)2.40m2.27t(14,7)1.65m94.72dd(11.3，5.7)3.70dd(11.2,4.7)3.86-3.94m101.42d(7.0)111.65m12a4.17d(16.2)1.17d(6.9)2.67s12-4.80d(16.1)131.78s1.91s1.89s1.10d(7.1)140.97s1,01d(6.36)1.07d(6.3)1.65s151.79s1.82s1.87s0.94d(5.7)a溶劑為CDCl3，測試為500MHz表2.化合物3的13'CNMR數據(3ppm,/Hz)編號紫莖澤蘭E紫莖澤蘭F紫莖澤蘭G紫莖澤蘭H紫莖澤蘭D141.2140.8t38.2124.4q2198.1s197.3s197.6s26.1t103.0d3134.6s137.4s137.4s135,6s162.4s4a128.7d4147.0d141.0d140.1d119.6d110.9d544.7d38.7d36.3d45.0d124.5d5638.5d44.8d44.6d36.6d132.6s726.1d27.6d32.9d35.1d121.8d7a157.4s841.5t41.4t40.3t40.1136.7d997.0s78.3d91.5s72.2d66.1t10131.1s161.9s160.9s76.8s15.1q11127.3s121.3s127.7s26,41197.8s1273.01174.1s172.4sH.8q26.7q1313.7q8.4q9.4q19.0q1418.8q19.1q18.9q24.1q1515.6q15.6q15.7q19.4q溶劑為CDC13，測試為125MHz(一)、紫莖澤蘭H屬倍半萜類化合物，其理化性質、波譜數據及結構如下1、無色針狀晶體，易溶于丙酮、氯仿，易升華。2、mp93-94°C;[cc〗D20-23.4(c0.9，CHC13);IR(KBr)v,3401,1660,讓,1585,1468，1271，1072cm-l;!HNMR與"CNMR數據參見表1、2;EIMS附/z218[M〗+(15),187(100),171(48),143(18),115(11),43(3);HREIMSm/z218.0946[M]+(calcdforC13H1403)。3、澤蘭H的X-單晶衍射晶體數據見表3。4、化合物澤蘭H的結構為H三14[I]5、化合物紫莖澤蘭H的確認-通過X-單晶衍射，參見附圖1，可以證實該結構為[I]，且通過X-單晶衍射給出化合物的相對構型。該化合物的兩個環為順式結構，兩個羥基和7位甲基位于同一側，異丙基位于另外一側。'該化合物對人結腸癌細胞(HCT-8)、人肝癌細胞(Bel-7402)以及人卵巢癌細胞(A2780)具有較好的抑制作用，可以用作開發新的抗癌藥物。(二)、紫莖澤蘭D屬倍苯并呋喃類化合物，其理化性質、波譜數據及結構如下1、無色針狀晶體，易溶于氯仿、丙酮，溶液常溫下長時間放置不穩定。2、mp93-94°C;[oc]D20-23.4(c0,9,CHC13);IR(KBr)vmax3401，1660,1601,1585,1468,1271,1072cm-l;'HNMR與"CNMR數據參見表1、2;EIMSw/z218[M]+(15),187(100)，171(48),143(18),115(11)，43(3);HREIMSw/z218.0946[M]十(calcdforC13H1403)。化合物澤蘭D的結構為4、化合物紫莖澤蘭D的確認通過1D，2DNMR,確定了該化合物的結構為[II]，該化合物只有一個手(三)、紫莖澤蘭E屬倍半萜類化合物，其理化性質、波譜數據及結構如下1、無色針狀晶體，易溶于丙酮、氯仿，常溫下結構易變不穩定。2、[ct〗D20+124.4(c0.9，CHC13);IR(KBr)v隨3363,2950，1651，1371，1153，1116,994,535cm";!HNMR與13CNMR數據參見表1、2;EIMSm/z264岡+(19)，246(44),188(55),175(90),161(100),91(55),57(57),43(53);HREIMS附/z264.1365[M]+(calcdforC15H20O4)。3、澤蘭E的X-單晶衍射晶體數據見表3。4、化合物澤蘭E的結構為is[m]5、化合物紫莖澤蘭E的確認-通過x-單晶衍射，參見附圖2，可以證實該結構為[m]，且通過x-單晶衍射給出化合物的相對構型。該化合物的A、B兩個環為順式結構，羥基和甲基分別位于面的兩側。另外C環為l，2-氧雜-4-環己烯結構單元，使得該化合物擁有倍半萜類的新骨架。(四)、紫莖澤蘭F屬倍半萜類化合物，其理化性質、波譜數據及結構如下1、無色膠狀液體，易溶于丙酮、氯仿。2、[a〗D20+172.0(c1.0,CHC13);IR(KBr)vmax2961,1755,1676,1368,1105,1086,1072,1032,755cm";iHNMR與"CNMR數據參見表l、2;EIMS附/z246[M〗十(50),204(73),191(24),175(28)，136(100),121(37)，110(25)，82(16);HREIMS油246.1259[M]十(calcdforCi5Hi803)。3、化合物澤蘭F的結構為性中心。14[IV]4、化合物紫莖澤蘭F的確認通過1D，2DNMR，確定了該化合物的結構為[IV]，通過Noesy譜的鑒定，確定了化合物的相對構型。該化合物A、B環為順式結構，并且甲基和內酯環位于分子的同一側，結構恰好為紫莖澤蘭G的一半單元。(五)、紫莖澤蘭G屬倍半萜類化合物，其理化性質、波譜數據及結構如下1、無色棒狀晶體，易溶于氯仿，易結晶。2、mp242-244°C;[]D20+228.5(c0.1,CHCI3);IR(KBr)vmax2964,1759,1683,1278,1111,968,918,754cm";'HNMR與"CNMR數據參見表1、2;EIMS柳/z490[M]+(2)，245(100),202(30)，175(54),161(38)，136(18)，91(23);HREIMS附/z4卯.2362[M]+(calcdforC30H34O6).3、澤蘭G的X-單晶衍射晶體數據見表3。4、化合物澤蘭G的結構為"[V]5、化合物紫莖澤蘭G的確認通過X-單晶衍射，參見附圖3，可以證實該結構為[V]，且通過X-單晶衍射給出化合物的相對構型。該化合物的A、B兩個環為順式結構，甲基和內酯環分別位于面的兩側。整個分子由相同的兩部分結構單元連接而成。表3.澤蘭E、澤蘭G和澤蘭H的X--單晶衍射晶體數據紫莖澤蘭E紫莖澤蘭G紫莖澤蘭HEmpiricalformulaG15H20O4G30H34O6G15H26O2M264.31490.57238.36T/K293(2)293(2)293(2)Wavelength/A0.710730.710730.71073CrystalsystemHexagonalOrthorhombicSpacegroupP6(5)P2(l)2(l)2(l)a/A14.058(2)7.8562(16)5,5810(11)b/A14.058(2)12.231(2)14.767(3)c/A15.624(3)27.278(6)18.119(4)a/。90卯卯p/。909090120卯90v/A2674,1(8)262LI(9)1493.3(5)z644Dc/mgm-30.9851.243l細0.0710.0860細F(OOO)8521048528Reflectionscollected/unique16453/163411444/26652626/2626Data/restraints/parameters1634/1/1732665/0/3262626/0/155Goodness-of-fitonF20.9751.0100.891FinalRindices[I>2sigma(I)]Ri=0.0450,R,=0.0432,Ri=0.0387,wR2=0.0954wR2=0細1wR2=0.0774Rindices(alldata)Ri=0.0941,R!=0.0734,R!=0.0620，wR2=0.0998wR2=0.0967wR2=0.0820二、化合物紫莖澤蘭D-H的提取步驟如下1、取干燥的紫莖澤蘭葉31kg，用95%工業甲醇室溫浸泡提取，過濾，減壓濃縮濾液得到總浸膏。2、總浸膏用少量甲醇溶解，加適量水，依次用石油醚、氯仿萃取，濃縮萃取液，分別得石油醚浸膏(675)、氯仿浸膏(208)及殘留物。3、石油醚浸膏經60100目硅膠柱層析，以石油醚乙酸乙酯30:11:1梯度洗脫，采用TLC跟蹤檢測每1000ml接一瓶，合并相同組分后，得到六組分AaAf。Ae組分硅膠(200300目，下同)柱層析，用石油醚乙酸乙酯30:11:1梯度洗脫，收集到AalAal2共12組分。其中AalO組分經MCI柱層析，用30%~100%甲醇溶液梯度洗脫，得到AalO-lAalO-7共7個組分。將AalO-2濃縮，丙酮重結晶得到紫莖澤蘭H。同樣地，八&11也用30%~100%甲醇溶液梯度洗脫，經MCI柱層析得到Aall-lAall-3共三個組分，其中Aall-l經硅膠柱層析，用石油醚丙酮(10:1)洗脫，得到化合物紫莖澤蘭E(335mg);Aall-2經硅膠柱層析用石油醚丙酮(9:])洗脫，得到紫莖澤蘭G(5mg),其母液進一步用石油醚丙酮(5:1)作為洗脫劑經硅膠柱層析，得到紫莖澤蘭F(66mg)。4、氯仿浸膏經100200目硅膠柱層析，以石油醚丙酮15:11:1梯度洗脫，采用TLC跟蹤檢測每1000ml接一瓶，合并相同組分后，得到五組分BaBe。Bc組分經200300目硅膠柱層析，用石油醚丙酮8:1梯度洗脫，得到紫莖澤蘭D(228mg)。5、紫莖澤蘭E、紫莖澤蘭G、紫莖澤蘭H均經丙酮/甲醇/水混合溶劑培養得到單晶。6、三、化合物的抗腫瘤活性測試結果紫莖澤蘭H對人結腸癌細胞(HCT-8)、人肝癌細胞(Bel-7402)以及人卵巢癌細胞(A2780)具有較好的抑制作用，參見表4。表4.化合物紫莖澤蘭E和紫莖澤蘭H的抗腫瘤活性測試結果化合物HCT-8Bel-7402BGC823A549A2780紫莖澤、>50>50>50〉50>50<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權利要求1、一種具有抗腫瘤活性的新化合物——紫莖澤蘭H，屬倍半萜類化合物，其特征在于該化合物的結構式為該化合物對人結腸癌細胞(HCT-8)、人肝癌細胞(Bel-7402)以及人卵巢癌細胞(A2780)具有較好的抑制作用，可以用作開發新的抗癌藥物。2、四種紫莖澤蘭提取的新化合物，紫莖澤蘭D，屬倍苯并呋喃類化合物；紫莖澤蘭E屬倍半萜類化合物；紫莖澤蘭F屬倍半萜類化合物；紫莖澤蘭G屬倍半萜類化合物。化合物澤蘭D的結構為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>化合物澤蘭E的結構為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>化合物澤蘭F的結構為:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>全文摘要本發明提供的為從紫莖澤蘭中分離得到的一種具有抗腫瘤活性的新化合物紫莖澤蘭H。其屬于倍半萜類化合物，對人結腸癌細胞、人肝癌細胞以及人卵巢癌細胞具有普遍的抑制作用，可以用作開發新的抗癌藥物。同時從紫莖澤蘭中分離得到的其它四種新化合物分別為紫莖澤蘭D、紫莖澤蘭E、紫莖澤蘭F以及紫莖澤蘭G，其中紫莖澤蘭E具有新骨架。文檔編號C07C35/36GK101481299SQ20081000030公開日2009年7月15日申請日期2008年1月7日優先權日2008年1月7日發明者蘭何,婧侯,曹坳程,王秋霞,郭美霞申請人:中國農業科學院植物保護研究所