專利名稱：：苯基呋咱氮類一氧化氮供體型2-苯胺嘧啶衍生物、其制備方法、含有該化合物的組合物及...的制作方法
技術領域：
：本發明涉及新穎的苯基呋咱氮類一氧化氮(NO)供體2-苯胺嘧啶衍生物、其制備工藝、作為酪氨酸蛋白激酶抑制劑用于癌癥等與酪氨酸激酶特別是Bcr-Abl有關的疾病的治療。具體涉及到通過溴乙酸或直接偶聯方式合成NO供體與2-苯胺嘧啶偶聯化合物，及其在抗腫瘤活性中的應用。
背景技術：
：癌癥極大的威脅人類健康，隨著生命科學、分子生物學、細胞學等的發展，惡性腫瘤細胞內的信號轉導、細胞周期的調節、細胞凋亡的誘導等過程逐漸被闡明。以一些與腫瘤細胞分化增殖相關的細胞信號轉導通路的關鍵酶作為藥物篩選靶點，開發選擇性作用于特定耙點的高效、低毒、特異性強的新型抗腫瘤藥物己成為當今抗腫瘤藥物研究開發的重要方向。蛋白酪氨酸激酶(proteintyrosinekinase,PTK)是一類在體內嚴格控制的具有酪氨酸激酶活性的蛋白質，它們能催化三磷酸腺苷ATP上的Y-磷酸基轉移到許多與細胞生命活動有關的蛋白質的酪氨酸殘基上，使其發生磷酸化，從而調控細胞生長、分化、凋亡等一系列生理過程。PTKs功能的失調則引起生物體內的一系列疾病。已有的資料表明，超過70%的原癌基因和癌基因產物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達將導致細胞增殖調節的紊亂，進而導致腫瘤的發生。此外，PTKs的異常表達還與腫瘤細胞的侵襲和轉移、腫瘤新血管的生成、腫瘤的化療抗性密切相關。因此，以酪氨酸激酶為靶點進行藥研發成為國際上抗腫瘤藥物研究的熱點。開發ATP競爭性抑制齊lJ(ATP-competitiveinhibitor)就是其中的一個重要的方向。其中嘧啶類化合物是一類ATP競爭性PTK抑制劑，雖然PTK的ATP結合域與絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的ATP結合域具有高度的同源性，但是嘧啶類作為PTK抑制劑還是具有很大的選擇性。苯胺基類化合物中，3位取代基的衍生物比2位和4位取代基的衍生物具有更強的抑制活性(周意明，孫黎光。酪氨酸蛋白激酶抑制劑的研究進展[J]。解剖科學進展2000，6(3):214-217).其中最成功的如諾華公司開發的用于慢性髓細胞樣白血病CML和胃腸道基質瘤GISTs的格列衛(GLeevec),Gleevec以2-苯胺嘧啶為先導化合物，通過競爭性抑制ATP與酪氨酸蛋白激酶Abl-Bcr的結合，特異性的阻止Abl-Bcr自身磷酸化，影響細胞信號轉導，抑制腫瘤細胞的增殖。歐洲專利1470120揭示了N-苯基-2-嘧啶胺衍生物，它作為酪氨酸激酶抑制劑用于神經膠質瘤、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌等腫瘤的治療。一氧化氮(NO)是人體內重要的信使分子和效應分子，與多種生理和病理過程有關，具有廣泛的生理功能。在細胞毒性方面，NO可直接與含有鐵的酶和蛋白質作用，從而抑制這些酶所調節的細胞活性，促進細胞凋亡和阻止DNA的修復；在免疫系統方面，NO介導巨噬細胞對腫瘤細胞和細胞病原體等發揮細胞毒作用外；NO可作用于線粒體呼吸鏈，使線粒體呼吸受阻，ATP消耗增大和產生過少，促進腫瘤細胞死亡.NO抑制原癌基因的表達，并且與蛋白激酶C有關;同時NO有胃腸道保護作用，可以減少抗腫瘤藥物的胃腸道毒副作用(JamesF.Kerwin,Jr.NitricOxide:ANewParadigmforSecondMessengers[J],乂Me(i.C72e肌1995,22(38):4342-4362.)。然而NO作為氣體信號分子，在體內半衰期短，不穩定，可控性差等，所以越來越多的研究集中于利用特異性的載體與NO供體偶聯，從而在機體的特定部位釋放NO,達到殺死癌細胞的作用。到目前為止，NO的靶向性釋放仍是研究的重點。
發明內容本發明的目的在于提供了一種可用作蛋白激酶抑制劑的苯基呋咱氮類一氧化氮供體型2-苯胺基嘧啶衍生物類化合物。本發明的目的還在于提供制備該類化合物的方法。本發明的目的也在于提供一種含有該類化合物的組合物。本發明進一步的目的在于提供該類化合物和組合物在制備作為蛋白激酶抑制劑的藥物中的用途。本發明提供了下列通式(I)化合物和其藥學上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(I)其中X是-(CH2)m-COO-，m=l5，或直接鍵(即X不存在)；Y是《CH2VO-或者-(CH2VPhO-，n=l10，或直接鍵(即Y不存在)；其中-(CH2)m-是指含15個碳原子的直鏈或支鏈的垸烴基，《CH2)n-是指含110個碳原子的直鏈或支鏈的烷烴基，-Ph-是指苯基，-Me是甲基。本發明的化合物，X優選-CH2-COO-或直接鍵；Y優選—(CH2)nO-(n=l-3)，o,p,w-CH2-PhO-或直接鍵。本發明還提供了一種上述的通式(I)化合物的制備方法包括以N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-喳啶胺和通式HI)化合物為原料合成的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>(II)其中X和Y的定義同上，R是鹵素，包括C1、Br和I。合成路線如下本發明的制備方法，其中當化合物是Ia時，通式(II)化合物的R優選Br;當化合物是Ib時，R優選C1;當化合物是Ie或者Ia時，R優選Br;當化合物是Ie或者If時，R優選Cl。通式(I)化合物具體表示如下表通式(I)化合物lalbIcIdIeIf<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>本發明的制備方法，反應體系的溶劑是指本領域常用惰性有機溶劑指本領域常用惰性有機溶劑，包括但不限于四氫呋喃、甲苯、苯、氯仿，優選四氫呋喃(THF);本發明的制備方法，是在堿性物質存在的條件下進行的，堿性物質是指本領域常用的堿，包括但不限于有機堿如三乙胺、吡啶，無機堿如氫氧化鈉水溶液、固體碳酸鉀、氫氧化鉀、碳酸鈉，優選三乙胺(TEA);本發明的制備方法，以相轉移催化劑為催化劑中，相轉移催化劑是指本領域常用的相轉移催化劑，包括但不限于聚乙二醇400,聚乙二醇600，四丁基溴化胺，三乙基苯甲基銨等，優選四丁基溴化胺。本發明的制備方法，其中通式(II)化合物，是以肉桂醇為原料，通過中間體化合物3-羥甲基-4-苯基-l，2,5-噁二唑-2-氧化物合成的，中間體化合物3-羥甲基-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物是以肉桂醇為原料，在亞硝酸鹽例如亞硝酸鈉或者亞硝酸鉀和有機弱酸例如甲酸、乙酸、丙酮酸存在的條件下，以酸性三氧化二鋁為催化劑合成的。上述方法由于加入了酸性三氧化二鋁作為催化劑，使反應的收率大大提高，與不加催化劑相比，提高了10%。通式(II)化合物的合成路線如下其中，R是鹵素，定義同上。本發明的先導化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)的合成，參見[US5521184和ZoltdnSzaMcs,SzabolcsB6ni，Zolt紐Varga，Ldszlo6rfi,Gy6rgyK6ri，B61aNoszdl.Acid-BaseprofilingofImatinib(Gleevec)anditsfragment[J].2005,48(1):253-254.]，合成路線如下N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-啼啶胺的合成路線本發明也提供了一種組合物，該組合物含有上述的通式(I)化合物和藥學上可接受的載體。本發明的組合物可以制成任何一種藥學上可接受的劑型，包括但不限于注射劑、片劑、緩釋片、滴丸、顆粒劑、粉針劑、膠囊劑、微粒劑等。本發明的通式(I)化合物及含有它的組合物，具有蛋白質激酶抑制活性，特別是酪氨酸激酶抑制活性，同時又具有NO的誘導細胞凋亡的作用，可用于與蛋白質激酶活性增高有關的疾病的治療，特別是與Bcr-Abl激酶有關的癌癥，尤其是白血病的治療。下面以實驗例為例，具體說明本發明的化合物對蛋白質激酶相關的癌癥的治療作用。實驗例抗癌活性試驗一.材料l.試驗材料癌細胞株及培養基HL-60(promyelocyticleukemia),K562(promyelocyticleukemia),PC-3(prostate),HT-29(colon)，DU145(colon)用RPMI1640培養液(Gibco-BRL)配成懸液，加入10。/。經加熱滅活的胎牛血清(FCS，Gibco),100IU/ml青霉素100IU/ml鏈霉素；癌細胞株均購買于美國組織培養中心(ATCC,Rocksville,Maryland,USA).2.試齊!J:MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl〗-2,5-diphenyltetrazoliumbromide;Sigma)3.儀器96孔平板(CONING)，自動化分光光度平板讀數計(DynatechMR5000)。4.藥物按照實施例15方法制備的I,Is,Gleevec二.實驗方法向96孔平板的每孔內加入O.lmL含有1000個細胞的由RPMI1640培養液配成的懸浮液，然后于37'C，C02(5。/。)培養箱中培養24小時，加入含有不同受試化合物的培養基，于37°C,C02(5%)，培養2天，每孔加入50nlMTT溶液(2mg/ml),37。C下培養4小時，吸出上清液，每孔加入150plDMSO，振搖15分鐘，平板通過自動化分光光度平板讀數計，于540nm波長處測量每個孔的光密度(OD)。以孔中細胞未加受試化合物測得的光密度作為對照品，以下式分別計算每個化合物的細胞存活率，細胞生存能力與藥物濃度作曲線，細胞存活率為50%即為ICso值。(其中加藥細胞孔OD值是孔中加入細胞、藥物時測得的OD值，空白藥物孔OD值是孔中加入藥物，未加細胞時測得的OD值，對照細胞OD值是孔中加入細胞，未加藥物時測得的OD值)。加藥細胞孔OD值-空白藥物孔OD值細胞存活率(％)=100°/^-對照細胞孔OD值三.實驗結果采用MTT法，研究了8個目標化合物體外對六種人體瘤細胞株的生長抑制作用，其中包括兩種直腸癌細胞株(DU-145，HT-29，)，前列腺癌細胞株(PC-3)，髓性細胞白血病細胞株(HL-60，K562),結果見表l。表l受試化合物在各癌細胞株中的IC5。(jxg/ml)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>I31.560.6730.5635.3434.25I43.761.7625,7819.0516.75I55.880,8513.5623.448.69I75.5510.4519,2618.7912.42Il06.1110.4515.5713.2320.78I182.242.134.346.758.79I223.543.247.896.9820.45I,是(2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-4-苯基-l，2，5-噁二唑-2氧化物-3-甲酯)根據實施例2合成，12是(3-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨萄-苯基]甲基-4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物的合成)根據實施例3合成13是(2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯)根據實施例4合成14是(3-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯)根據實施例5合成15是(4-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯)根據實施例6合成17是(N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基丙酯)根據實施例7合成110是(N陽[4-甲基-3陽[[4-(3-吡啶)-2-嘧P定]氨基]-苯基]乙酸-(4陽苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己酯)根據實施例8合成118是(N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧噴]氨基]-苯基]-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲胺)根據實施例9合成122是(N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己胺)根據實施例10合成結論從抗癌活性試驗結果可以看出，受試化合物對六種人體瘤細胞株的生長均具有一定的抑制作用。其中對白血病細胞株的抑制作用明顯高于其他幾種細胞株，表明該類化合物作為抗白血病藥物使用具有更大的優勢，化合物13、14、U對髓性細胞白血病細胞株(HL-60，K562)的抑制作用最顯著。具體實施例方式這篇申請書中所公開的的所有文章和參考文獻都是整體文獻的參考部分。這個發明將利用下面的實例進一步解釋本發明，不是理解為僅描述的這些步驟與范圍。這個發明的起始原料和各種中間體可以買到，或可以用商品原料制備。實施例lN-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-噴啶胺(A)和通式(II)化合物中間體的制備N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)的制備3-乙酰基吡啶(100g，0.826mol)加入N，N-二甲基甲酰胺二甲基縮醛(N,N-dimethylformamidedimethylacetal)(156.5g，1.27mol)回流23小時，冷卻到(TC，加入混合液乙醚和正己烷(3:2，v/v)(500ml)，攪拌4小時，過濾得到的固體用乙醚和正己垸(3:2,v/v)(400ml)沖洗，干燥得到3-二甲氨基-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-1-酮;2_甲基_5-硝基苯胺(100g，0.657mol)溶于250ml無水乙醇，在30-40。C，1小時內滴加65%的硝酸(54.5ml，0.788mo1),當這個放熱反應停止時，氨腈水(42g:42g)加入到其中，褐色溶液回流24小時，冷卻到0。C，過濾，乙醇乙醚(500ml，l:1，v/v)沖洗，60-70C干燥得到2-甲基-5-硝基苯基胍硝酸鹽；3-二甲氨基-1-(3-吡啶基)-2-丙烯-1-酮(55g，0.31mo1)，2-甲基-5-硝基苯基-硝酸胍(80g，0.31mo1)和NaOH(14.5g,0.363mol)溶于250ml正丁醇回流18小時，冷卻到(TC，過濾，異丙醇和甲醇(500ml,2:l,v/v)沖洗，干燥得到N-(2-甲基-5-硝基苯)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺；N-(2-甲基-5-硝基苯)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(35g，0.114mol)和二水氯化亞錫(128.5g，0.569mo1)溶于乙酸乙酯和乙醇的混合液中(250ml，10/1，v/v)加熱回流4小時，溶液冷卻到室溫，用10X的NaOH水溶液沖洗，過濾，乙酸乙酯萃取，濃縮得到N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(八)。收率81.7%.mp:140-143。CESI-MSm/z:277，300[M+23];IR(KBr，v(cm")):'H-NMR(300MHz,DMSO-c/6)S(ppm):9.2(d,lH,J=1.66,NH)，8.7(m,2H),8.4(m,2H),7.5(m,lH),7.4(d,lH,J=5.14)6.8(dd,2H,J=5.19,J=25.20),6.3(dd，lH,J=2.32,J=8.00),4.8(s,2H),2.1(s,3H)通式(II)化合物的中間體化合物的制備3-羥甲基-4-苯基-l,2,5-噁二唑-2-氧化物(中間體2)的制備(加催化劑的情況)在三頸瓶內加入肉桂醇(20g,149.25mmo1)，冰醋酸30ml，室溫機械攪拌。待溶解后，接著再滴加飽和亞硝酸鈉(30g，434.78mmol)水溶液，1h內滴完。滴加過程中保持溫度小于40'C，滴完后室溫繼續攪拌3h，反應液由淡黃色轉至橙色，漸有大量橙黃色粘稠物生成。向反應液中加入飽和食鹽水稀釋一倍，用乙酸乙酯(4X50ml)萃取。合并有機相，濃縮，100ml乙腈溶解，加入20g酸性三氧化二鋁，6(TC攪拌3h，過濾，濃縮，殘留物用乙酸乙酯溶解，以10%的氫氧化鈉水溶沖洗，水洗至接近中性，飽和食鹽水洗一次，無水硫酸鎂干燥，濃縮，柱層析(乙酸乙酯石油醚=1:6)得白粉末狀固體15.23g，收率56%。3-羥甲基-4-苯基-l,2,5-噁二唑-2-氧化物(中間體2)的制備(不加催化劑的情況)與上述的3-羥甲基-4-苯基-1,2，5-噁二唑-2-氧化物(2)的制備(加催化劑的情況)方法步驟條件相同，只不過沒有加催化劑，得到產物3-羥甲基-4-苯基-1,2，5-噁二唑-2-氧化物，收率45%。3-氯甲基-4-苯基-l，2,5-噁二唑-2-氧化物(中間體3)將3-羥甲基-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(13.44g,70mmol)溶于無水二氯甲垸100ml中，加入無水吡啶(6.64g,84mmo1)，于冰浴下慢慢加入重蒸過的二氯亞砜(IOg,84mmol)，室溫攪拌過夜。將反應液倒入冰水200ml中，分出二氯甲烷層，以飽和碳酸氫鈉水溶液洗一次，無水硫酸鈉干燥，濃縮，得淺黃色油狀物，正己烷重結晶得12.52g淺黃色固體2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(中間體4)將鄰羥基苯甲醇(1.37g,llmmol)溶于乙腈約60ml中，加入無水碳酸鉀(6.9g，50mmol)和催化量的碘化鉀(10%)，于劇烈攪拌下加入3-氯甲基-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(2.1g,.10mmo1)室溫攪拌3.5h。過濾，濾液濃縮，殘留物溶于乙醚100ml中，水洗至接近中性，飽和食鹽水洗兩次，無水硫酸鈉干燥，濃縮得黃色固體，以乙酸乙酯-石油醚重結晶得白色粉末狀晶體2.39g，收率80.2%，mp70.571.5"中間體5:3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇，中間體6:4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇，中間體7:4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基乙醇，中間體8:3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基丙醇，中間體10:3_(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己醇，中間體ll:4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己醇，中間體12:2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯戊醇)，和中間體13:3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯葵醇)的合成參見中間體4的合成，分別由相應的二醇或醇酚與中間體3在碳酸鉀存在下反應而得。實施例22-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶l氨基-苯基]乙酸-4-苯基-l，2,5-噁二唑-2-氧化物-3-甲酯將3-羥甲基-4-苯基-1,2，5-噁二唑-2-氧化物(2)(2.4g,12.5mmo1)溶于40ml無水二氯甲垸中，加入溴乙酸(1.91g,13.74mmo1),冰浴下分批加入DCC(3.86g,18.74mmo1)和催化量DMAP攪拌溶解，室溫攪拌三小時，過濾，飽和碳酸氫鈉溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮得淡黃色固體3-溴乙酸(-4-苯基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物)甲酯3.58g.收率91.8%。N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(2.22g，8.01mmol)與三乙胺(1.45ml，10.41mmo1)溶于50ml氯仿中，攪拌溶解后，加入3-溴乙酸(-4-苯基-l,2，5-噁二唑-2-氧化物)甲酯3.01g,9.62mmol)和聚乙二醇400(10%)(加熱回流4.5小時.過濾，濾液濃縮，柱層析(乙酸乙酯石油醚=5:1)，乙酸乙酯重結晶得2-^[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-4-苯基-l,2,5-噁二唑-2-氧化物-3-甲酯2.65g。收率65%，mp:15L2-153.4°C，ESI-MSm/z:509;IR(KBr，v(cm")):'H-NMRS(ppm):9.22(d,lH,J=2.11,NH),8.72(d,lH,J=7.43),8.65(dd,lH，Jl=1.56,J2=4.79),8.44(m，lH),8.38(td，lH,Jl=1.90,J2=1.90,J3=8.00),7.68(m，2H)，7.53(m,4H,),7.36(d，lH,J=5.15),6.89(d,lH,J=8.23),6.80(d，lH,J=2.30),6.22(dd,lH,Jl=2.38，J2=8.15)，5.14(s,2H)，3.87(s，2H),3.33(s,lH),2.06(s，3H)實施例33-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶l氨基卜苯基甲基-4-苯基-l，2，5-噁二唑-!2-氧化物的合成N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)(2.77g，10mmol)與無水碳酸鉀(1.79g,13mmol)溶于60ml四氫呋喃中，攪拌20分鐘后，加入3-氯甲基-4-基-1,2,5-噁二唑-2-氧化物(3)(2.10g,10mmol)和催化量的四丁基溴化銨(TBAB)加熱回流4小時.過濾，濾液濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯中，10%碳酸氫鈉水溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析(乙酸乙酯石油醚=5:1)，乙酸乙酯重結晶得3-N-[l甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]甲基_4-苯基-1，2,5-噁二唑-2-氧化物1.35g.收率74.83%，mp:154.9-157.0°C,ESI國MSm/z:451，474[M+Na]+;IR(KBr，v(cm-1))3257(N-H),3028(C-H，Ar)，2899(NH-CH2),1589,1577(C=C,Ar),1420(N-H),1019(N-H),792,824(C-H，Ar)，694(C-H，Ar)'H-NMR(MHz,DMSO-必)S(ppm):9.21(d,1H,J=1.79),8.73(s,1H),8.67(dd,1H,J1=1.59,J2=4.76),8,43(d,lH,J=5.14),8.36(td，lH,Jl=1.88,J2=1.88,J3=8.01),7.78(dd,2H，J1=1.74,J2=7.71),7.51(m,4H),7.37(d,lH,J=5.16),6.91(d,lH,J=8.26),6.72(d,lH,J=2.30),6.27(dd,lH,Jl=2.37,J2=8.17),6.1l(t,1H，J1=5.49,J2=5.49),4.30(d,2H，J=5.50)，2.06(s,3H)實施例42-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧淀氨基]-苯基]乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯將(2-(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(中間體4，按照實施例1的方法制備，1.49g，5mmo1)溶于40ml無水二氯甲烷中，加入溴乙酸(0.7g,5mmo1),冰浴下分批加入DCC(1.24g，6mmd)攪拌溶解，室溫攪拌5小時，過濾，飽和碳酸氫鈉溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮得淡淺黃色固體，乙酸乙酯重結晶得2-溴乙酸-2-(4-苯基-1,2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯1.92g.收率91.65%。N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)(l.08g,3.91mmo1)與吡啶(0.41ml,5.12mmol)溶于50ml甲苯中，攪拌20分鐘后，加入2-溴乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯(1.8g,4.29mmol)和催化量的氯化三乙基苯甲基銨(TEBA)加熱回流4小時.過濾，濾液濃縮，殘留物溶于乙酸乙酯中，10%碳酸氫鈉水溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，柱層析(乙酸乙酯石油醚=3:1)，乙酸乙酯重結晶得2-^[4-甲基-3-[[4-(3-吡錠)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯1."g.收率63.75%，mp:128.6-130.3°C,ESI-MSm/z:615,638[M+23]+;IR(KBr，v(cm-'))3365,3200(N-H),3038(C-H，Ar),1725(C=0),1578(OC，Ar),1450(N-H)，1201(C-O-C),1013(N-H)，804(C-H),755(C-H)'H-NMR(MHz,DMSO-必)S(ppm):9.25(d，1H，J=1.92)，8.76(s，1H),8.68(dd，1H,J1=1.51,J2=4.75),8.42(ddd,2H，J=3.48,J=8.58,J=8.03)7.82(dd,2H,Jl=1.74，J2=7.68),7.62(m,3H),7.51(dd，lH,J=4.80，J=7.98),7.37(d，lH,J=5.15),7.26(d,2H，J=8.63),6.94(d,3H，J=8.58),6.83(d，lH，J=2.24)，6.31(dd,lH，Jl=2.34,J2=8.17)，5.92(s，lH,)5.19(s,2H),5.05(s,2H),3.91(d,2H,J=5.26),2.10(s,3H),實施例53-N-4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧聢度基-苯基l乙酸-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯依照實施例4的步驟，由3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(中間體5，按照實施例l制備)為起始原料所制備，收率50.00%，mp:112.2-114.7。C,ESI-MSm/z:615,638[M+23]+;IR(KBr，v(cm-1))3404(N-H),3038(C-H,Ar),1736(C=0),1574(C=C,Ar),1447(N-H),1243(C-0-C),1020(N國H)，798(C-H)，765(C-H))'H-NMR(MHz，DMSO-c/6)5(ppm):9.25(d,1H，J=1.98),8.73(s，1H),8.68(dd，1H,J1=0,88,J2=4.68),8.43(dd,2H,J=6.55,J=11.72)，7.80(m,2H),7.58(m,4H),7.37(d,lH,J=5.11)，7.26(dd,lH,Jl=5.85,J2=10.08),6.92(m,5H),6.32(dd,lH,J1=2.15,J2=8.13),5.95(t,lH,Jl=6.03,J2-6.03),5.16(s，2H)，5.08(s,2H),3.95(d,2H,Jl=5.53,J2=6.03),2.08(s,3H),實施例64-N-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧啶l氨基]-苯基l乙酸-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯依照實施例4的步驟，以4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(中間體6，按照實施例l制備)為起始原料所制備，收率57.74%,mp:121.8陽123.2。CHPLC(乙腈水=70:30,236nm)Rt=5.78min,99.39%ESI-MSm/z:615,638[M+23]+;IR(KBr，v(cm.1))3399(N-H)，3038(C-H,Ar),1733(C=0),1574(C=C,Ar),1447(N-H),1171,1224(C-0-C),IOIO(N-H)，796(S,C-H),768(C-H)'H-NMR(MHz，DMSO^6)S(ppm):9.22(m,lH)，8.73(s,lH),8.65(dd,lH，J=1.64,J=4.77),8.43(d,lH，J=5.14)，8.38(m,lH)，7.78(m,2H),7.51(m,4H),7.35(d，lH,J=5.16),7.28(m，lH)，7.21(dd,lH，J=1.57，J=7.52),7.08(d,lH,J=7.78)，6.9(m,2H,Jl=7.95,J2=16.39),6.79(d,lH,J=2.35),6.24(dd,lH,J=2.41，J=8.16),5.83(t,lH，J=6.51,J=6.51，)，5.24(s,2H),4.85(s，2H),3.80(d,2H,J=6.42),2.06(s,3H)，實施例7斗[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶1氨基1-苯基1乙酸-(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基丙酯將3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基丙醇(中間體8，按照實施例1制備，1.17g，5mmo1)溶于40ml無水二氯甲烷中，加入溴乙酸(0.7g,5mmo1)，冰浴下分批加入DCC(1.24g,6mmol)攪拌溶解，室溫攪拌5小時，過濾，飽和碳酸氫鈉溶液沖洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮得淡淺黃色固體，乙酸乙酯重結晶得1.58g.收率88.76%。N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺(A)(1.08g,3.91mmol)與三乙胺(0.65ml，4.69mmol)溶于50ml四氫呋喃中，攪拌20分鐘后，加入2-溴乙酸-3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基丙酯(1.52g,4.29mmol)加熱回流6小時.用4厘米厚硅膠過濾，濾液濃縮柱層析(乙酸乙酯石油醚=5:1)，乙酸乙酯重結晶得淺黃色固體1.34g.收率62.32%，mp:134.6-135.4。CESI陽MSm/z:558[M+1]+,580[M+Na]+;IR(KBr，v(cm")):3288,3183(N-H),3031(C-H,Ar),1590,1576(C=C,Ar),1452(N-H),1216(C-0-C),1016(N-H),799(C-H，Ar),754(C-H，Ar),'H-NMRS(ppm):9.25(d，1H,J=1.92),8.76(s,1H)，8.68(dd,1H,J1=1.51，J2=4.75),8.42(ddd,2H,J=3.48,J=8.58,J=8.03)7.82(dd,2H,Jl=1.74,J2=7.68),7.62(m,3H),7.51(dd，lH,J=4.80，J=7.98),7.37(d,lH,J=5.15),7.26(d,2H,J=8.63),6.94(d,3H,J=8.58)，6.83(d,lH,J=2.24),6.31(dd，lH，Jl=2.34，J2=8.17)，5.92(s,lH,)5.19(s,2H)，5.05(s，2H),3.91(d,2H,J=5.26),2.10(s,3H)，實施例8N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶氨基l-苯基乙酸-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2_氧化物-3-)甲氧基己酯參照實施例6，以3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己醇(中間體IO,按照實施例1制備)為起始原料制備，收率54.45%，mp:132.4-134.5ESI陽MSm/z:609,632[M+Na]+;IR(KBr，v(cm")):3375(N-H),3038(C-H,Ar),1735(C=0)，1567(OC，Ar)，1446(N鄰，1208(C-O-C)，IO，-H)，798(C-H),747(C-H)'H-NMRS(ppm):9.25(d,1H,J=1.92),8'76(s,1H),8.68(dd,1H,J1=1.51,J2=4.75),8.42(ddd，2H,J=3.48,J=8.58,J=8.03)7.61(m，4H),7.51(dd,lH,J=4.80,J=7.98),7.37(d,lH,J=5.15)，7.26(d,2H,J=8.63)，6.83(d,lH,J=2.24)，6.31(dd,lH,Jl=2.34，J2=8.17)，5.92(s，lH,)，4.59(dd,2H,Jl=2.45，J2=7.86),4.12(m,8H),2.10(s,3H),1.87(m,2H)，實施例9N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶氨基l-苯基H-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲胺4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲醇(中間體6，按照實施例1制備，1.2g，4mmol)溶于無水二氯甲烷，加入無水吡啶，冰浴下慢慢滴加二氯亞砜，室溫攪拌2h,將反應液倒入30ml冰水中，分出有機層，飽和碳酸氫鈉溶液沖洗至中性，飽和食鹽水沖洗2次，無水硫酸鈉干燥，濃縮石油醚重結晶得白色固體1.02g,收率80.31%。N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-卩比啶基)-2-嘧啶胺(A)(0.74g,2.67mmo1)與三乙胺(0.45ml，3.20mmol)溶于50ml四氫呋喃中，攪拌20分鐘后，加入4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯氯芐(l.Olg，3.2mmol)加熱回流6小時.用4厘米厚硅膠過濾，濾液濃縮柱層析(乙酸乙酯石油醚=5:1)，乙醚重結晶得白色固體0.86g.收率57.72%，mp:144.6-145.7。CESI-MSm/z:558[M+l]+,580[M+Na〗+;IR(KBr，v(cm力)3288,3183(N-H),3031(C-H,Ar),1590,1576(OC,Ar),1452(N-H)，1216(C-0-C)，1016(N-H),799(C-H,Ar),754(C-H,Ar),'H-NMR(MHz,DMSO-c/6)S(ppm):9.24(d,lH,J=L91),8.69(dd,2H，J1=6.33，J2=7.74)，8.40(m,2H),7.81(dd，2H，Jl=2.73,J2=6.31),7.51(m,4H)，7.36(d,lH，J=5.13)，7.23(dd,2H，J1=7.88，J2=18.05),7.05(d,lH,J=8.14),6.94(t,lH,J1=7.37,J2=7.37),6.85(d，lH,Jl=8.27)，6.70(d，1H，J=1.58),6.14(dd,1H,J1=2.00，J2=8.25)，5.82(t,lH,J1=5.86，J2=5.86),5.29(s，2H),3.93(d,2H，J=5.93),2.05(s,3H)實施例10N-[4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧啶l氨基-苯基l-4-(4-苯基-l,2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基乙胺參照實施例9，以4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-甲氧基乙醇(中間體7，按照實施例l制備)為起始原料，經兩步氯化、取代得目標化合物，收率:63.34%,ESI-MSm/z:495,518[M+Na]+;IR(KBr，v(cm.1)):3405(N-H),3031(C-H,Ar)，1580(C=C,Ar),1446(N-H),1210(C陽0陽C),1008(N-H)，806(C-H,Ar)，752(C-H，Ar)，'H-NMR5(ppm):9.25(d，lH,J=1.91)，8.69(dd,2H，J1=6.33,J2=7.74),8.40(m,2H),7.81(dd,2H,Jl=2.73,J2=6,31),7.51(m,4H),7.36(d,lH,J=5.13),7.23(dd,2H，J1=7.88,J2=18.05),7.05(d，lH，J=8.14),6.94(t,lH,J1=7.37,J2=7.37),6.85(d,lH，Jl-8.27)，6.70(d，1H，J=1.58)，6.14(dd，1H,J1=2.00,J2=8.25),5.82(t,lH，J1=5.86,J2=5.86)，5.31(s,2H),3.93(d,2H,J=5.93)，2,05(s,3H),實施例11N-[4-甲基—3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧咬l氨基l-苯基l-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基己胺參照實施例10，以4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-甲氧基己醇(中間體ll，按照實施例l制備，)為起始原料，經兩步氯化、取代得目標化合物，收率:45.76X,Ms:551實施例12N-[4_甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶l氨基l-苯基乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯基戊酯參照實施例3，由2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯戊醇(中間體12，按照實施例1制備，)為起始原料，經溴乙酸酯化，再與先導化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺取代得目標化合物，收率:25.65%,MS:672實施例13N-4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶氨基]-苯基己酸-:2-(一苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯基戊酯參照實施例3，由3-(4-苯基-l，2,5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯戊醇(中間體12，按照實施例l制備，)為起始原料，經5-氯己酸酯化，再與先導化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺取代得目標化合物，收率27.65%,MS:754。實施例14N_4-甲基-3-[4-(3-吡啶)-2-嘧啶慮基-苯基l乙酸-3-(4-苯基-l,2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯基葵酯參照實施例3，由2-(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯葵醇(中間體13，按照實施例1制備)為起始原料，經溴乙酸酯化，再與先導化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺取代得目標化合物，收率:25.65%,MS:742實施例15N-[4-甲基-3-4-(3-吡啶)-2-嘧啶氨基-苯基l己酸-3-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯基葵酯參照實施例3，由2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯葵醇(中間體13，按照實施例1制備)為起始原料，經5-氯己酸酯化，再與先導化合物N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺取代得目標化合物，收率25.65%,MS:798權利要求1.一種可用作蛋白激酶抑制劑的下列通式(I)化合物和其藥學上可接受的鹽其中X是-(CH2)m-COO-，m＝1～5或直接鍵；Y是-(CH2)n-O-或者-(CH2)n-PhO-，n＝1～10或直接鍵。2.根據權利要求1的通式(I)化合物，其中X是-CH2-COO-或直接鍵，Y是《CH2)nO-，n-l-3，CH2-PhO-或直接鍵。3.根據權利要求1的通式(I)化合物，該化合物是2-N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]乙酸-2-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯。4.根據權利要求1的通式(I)化合物，該化合物是3-^[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2]氨基]-苯基]乙酸-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯。5.根據權利要求1的通式(I)化合物，該化合物是N-[4-甲基-3-[[4-(3-吡啶)-2-嘧啶]氨基]-苯基]-4-(4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲胺。6.—種權利要求1的通式(I)化合物的制備方法，包括以N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺和通式(II)化合物為原料合成的步驟<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>(II)其中X是-(CH2)m-COO-，m=l5或直接鍵；Y是-(CH2)n-0-或者《CH2)n-PhO-，n=l10或直接鍵，R是鹵素。7.如權利要求6的方法，其中通式(II)化合物，是以肉桂醇為原料，通過中間體化合物3-羥甲基-4-苯基-l，2，5-噁二唑-2-氧化物合成的，中間體化合物3-羥甲基-4-苯基-1,2，5-噁二唑-2-氧化物是以肉桂醇為原料，在亞硝酸鹽和有機弱酸存在的條件下，以酸性三氧化二鋁為催化劑合成的。8.如權利要求6的方法，是在相轉移催化劑存在的條件下進行的。9.一種可用作蛋白激酶抑制劑的組合物，含有權利要求l的化合物和藥學上可接受的載體。10.權利要求1的化合物和含有權利要求1的化合物的組合物在制備治療白血病、胃腸道基質瘤的藥物中的應用。全文摘要本發明提供一種可用作蛋白激酶抑制劑的通式(I)化合物和其藥學上可接受的鹽，其中X是-(CH<sub>2</sub>)<sub>m</sub>-COO-，m＝1～5或直接鍵；Y是-(CH<sub>2</sub>)<sub>n</sub>-O-或者-(CH<sub>2</sub>)<sub>n</sub>-PhO-，n＝1～10或直接鍵。本發明還提供了該化合物的制備方法，包括以N-(5-氨基-2-甲基苯基)-4-(3-吡啶基)-2-嘧啶胺和通式(II)化合物為原料合成的步驟。本發明又提供了含有該化合物的組合物及其作為酪氨酸蛋白激酶抑制劑用于癌癥等與酪氨酸激酶特別是Bcr-Abl有關的疾病的治療。文檔編號C07D413/00GK101225085SQ200810000118公開日2008年7月23日申請日期2008年1月3日優先權日2007年1月17日發明者微周,張廣明,董偉兵申請人:天津天士力集團有限公司