結(jié)合btla的人類單克隆抗體及使用方法

專利名稱：：結(jié)合btla的人類單克隆抗體及使用方法結(jié)合BTLA的人類單克隆抗體及使用方法
背景技術(shù)：
：正性及負(fù)性共刺激信號(hào)在調(diào)節(jié)B細(xì)胞及T細(xì)胞活性方面起決定性的作用，并且已經(jīng)證明介導(dǎo)這些信號(hào)的分子是免疫調(diào)制劑的有效靶標(biāo)。正性共刺激，除接合T細(xì)胞受體(TCR)之外，也是幼稚T細(xì)胞的最理想活化所需要的，然而負(fù)性共刺激被認(rèn)為是獲得自身免疫耐受性、及效應(yīng)T細(xì)胞功能的終止所需要的。CD28，即原型T細(xì)胞共刺激分子，當(dāng)在抗原呈遞細(xì)胞(APC)表面與B7.1或B7.2相互作用時(shí)，發(fā)出信號(hào)促進(jìn)響應(yīng)于TCR接合的T細(xì)胞增殖和分化，而CD28同源物細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗原4(CTLA-4)介導(dǎo)對(duì)T細(xì)胞增殖以及效應(yīng)物功能的抑制作用(ChambersWa/"Ann.Rev.Immunol"19:565-594，2001;EgenWfl/"NatureImmunol"3:611-618,2002)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了幾種與B7家族同源的新分子(Abbasetal.，Nat.Med.，5:1345-6，1999;Coyleetal"Nat.Immunol.,2:203-9，2001;Carrenoetal"Annu.Rev.Immunol"20:29-53,2002;Liangetal"Curr.Opin.Immunol"14:384-90,2002)，并且開始闡明它們?cè)赥細(xì)胞活化中的作用。這些新的共刺激配體包括B7h、PD-L1、PD-L2、以及B7-H3。B7h(Swallowetal"Immunity,11:423-32，1999)、又名B7RP-1(Yoshinagaetal"Nature,402:827-32，1999)、GL50(Ung，etal"J.Immunol.，164:1653-7，2000)、B7H2(Wangetal"Blood,96:2808-13，2000)、以及LICOS(Brodie"Curr.Biol"10:333-6，2000),結(jié)合活化的T細(xì)胞上一種可"^秀導(dǎo)的共刺激體(ICOS)，并且共刺激T細(xì)胞增殖并產(chǎn)生諸如白細(xì)胞介素4(IL-4)及IL-10的細(xì)胞因子。PD-L1(Freeman"a/"J.Exp.Med.，192:1027-34，2000)，又名B7-H1(DongCNat.Med.，5，1365-9，1999)、以及PD-L2(LatchmanWfl/"Nat.Immunol.,2:261-8，2001)，也稱為B7國DC(Tseng""/"J.Exp.Med.，193，839-46，2001)結(jié)合至T細(xì)胞和B細(xì)胞上的程序性死亡1(PD-1)受體上。最后，B7-H3結(jié)合一種至今仍未知的、活化的T細(xì)胞上的反-受體，并且有報(bào)告稱B7-H3提高CD4+T輔助(Th)細(xì)胞及CD8陽性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTLs或Tcs)的增殖，并選擇性提高IFN-y的表達(dá)(Chapoval"fl/"Nat.Immunol"2,269-74，2001;Sun"a/"J.Immunol"168,6294-7，2002)。已有報(bào)道稱B7-H3是一種負(fù)性調(diào)節(jié)物(SuhNat.Immunol.,4，899-906，2003;PrasadC"/，J.Immunol.,173，2500-2506，2004)。已有報(bào)道稱B7-H3是一種負(fù)性調(diào)節(jié)物(Suhfl/.，Nat.Immunol.,4,899誦卯6，2003;PrasadCJ.Immunol.，173，2500-2506，2004)。因?yàn)榫哂蠺細(xì)胞共刺激活性的附加分子的基本生物學(xué)的重要性以及能夠影響它們的活性的試劑的治療潛力，所以人們對(duì)這些附加分子的鑒定具有強(qiáng)烈的興趣。能夠調(diào)整共刺激信號(hào)、并且從而能夠調(diào)整CD8+CTL及CD4+Th細(xì)胞的活化和/或效應(yīng)功能的試劑可在免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中使用，并且是非常理想的。特別是已知許多自身免疫性病癥涉及自體反應(yīng)性T細(xì)胞及自身抗體。能夠抑制或消除自身反應(yīng)性淋巴細(xì)胞而不影響免疫系統(tǒng)抵抗病原體能力的試劑是非常理想的。反之，許多癌癥免疫療法、例如過繼性免疫療法，擴(kuò)大腫瘤特異的T細(xì)胞群并且指導(dǎo)它們?nèi)ス舨⑺滥[瘤細(xì)胞(Dudleyetal.，Science298:850-854，2002;Pardoll，NatureBiotech.，20:1207-1208，2002;Egenetal.，NatureImmunol.,3:611-618，2002)。能夠增強(qiáng)對(duì)肺瘤攻擊的試劑是非常理想的。另外，對(duì)許多不同的抗原(例如微生物抗原或腫瘤抗原)的免疫應(yīng)答盡管可以檢測(cè)到，但強(qiáng)度不足以提供對(duì)抗由表達(dá)那些抗原的媒介(例如傳染性微生物或腫瘤細(xì)胞)所介導(dǎo)的疾病進(jìn)程的保護(hù)。將抗原連同佐劑(該佐劑在受試者體內(nèi)提高針對(duì)抗原的免疫反應(yīng))一起給予受試者經(jīng)常是理想的。在某些情況下抑制針對(duì)抗原的正常免疫應(yīng)答也是理想的。例如，抑制接受移植的患者的正常免疫應(yīng)答是理想的，并且顯示這種免疫抑制活性的試劑是非常理想的。共刺激信號(hào)，特別是正性共刺激信號(hào)，在B細(xì)胞活性的調(diào)節(jié)中也起一定作用。例如，除由抗原刺激之外，B細(xì)胞活化以及生發(fā)中心B細(xì)胞的存活還需要源于T細(xì)胞的信號(hào)。存在于輔助性T細(xì)胞表面上的CD40配體與B細(xì)胞表面上的CD40相互作用，并且在B細(xì)胞中介導(dǎo)許多此類T細(xì)胞依賴性效應(yīng)。蛋白質(zhì)BTLA(B及T淋巴細(xì)胞衰減子)是CD28受體家族的一員，CD28受體家族也包括CD28、CTLA-4、ICOS、以及PD-1。通過加入單克隆抗體后增大T細(xì)胞增殖的功能效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)了該家族的初始成員CD28及ICOS(HutloffWfl/.(1999)7V"似"^22:263-266;HansenC(1980)/附wwmogew/"W:247-260)。通過在TH1細(xì)胞內(nèi)篩查差異性表達(dá)發(fā)現(xiàn)了BTLA。另外，已經(jīng)將BTLA描述為提供負(fù)性刺激信號(hào)，類似于CTLA-4。激動(dòng)劑抗-BTLAmAb存在時(shí)，被抗-CD3及抗-CD28活化的T細(xì)胞顯示IL畫2的產(chǎn)量及增殖降低(KreigCfl/.，/./附柳wio/"175，6420-6472，2005)。缺乏完整BTLA基因的小鼠顯示出對(duì)DNP-KLH免疫作用后的較高的效價(jià)并且對(duì)EAE的敏感性增加(WatanabeCfl/"7V"/./附附wio/"4，670-679，2003)。HVEM(皰滲病毒進(jìn)入介體)被認(rèn)為是BTLA的配體(ScullyC(2005)7Vfl^,/附附wwo/.^:90-98;Gonzalez/.(2005)A^^7./4cad(/.5U.巡:1116-1121)。因此，識(shí)別BTLA的試劑，及使用這種試劑的方法是理想的。概述本公開提供了分離的單克隆抗體，特別是結(jié)合BTLA、并且表現(xiàn)出多種理想特性的人類單克隆抗體。這些特性包括，例如高親合力結(jié)合人類BTLA，但是缺乏基本的與人類CD28、CTLA-4、PD-1、或ICOS的交叉反應(yīng)。更進(jìn)一步，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)本公開的抗體調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。因此，本公開的另一個(gè)方面涉及使用抗-BTLA抗體調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法。特別是本公開提供了刺激T細(xì)胞應(yīng)答的方法。本公開還提供了使用抗-BTLA抗體在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法。在一個(gè)方面，本公開涉及分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，其中該抗體表現(xiàn)以下特性中的至少一種(a)以lxl(^M或更小的Ko與人類BTLA相結(jié)合；(b)基本上不與人類TrkB、CD28、CTLA-4、PD-1或ICOS相結(jié)合。(c)抑制HVEM與BTLA的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，該抗體進(jìn)一步(a)刺激T細(xì)胞應(yīng)答；(b)刺激抗體應(yīng)答；(c)在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長?？贵w優(yōu)選是人類抗體，盡管在可替代的實(shí)施方案中，該抗體可以是，例如，鼠類抗體、嵌合抗體或人源化抗體。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體以5xl(T8M或更小的KD與人類BTLA相結(jié)合，以lxlO-SM或更小的Kn與人類BTLA相結(jié)合，以5xlO力M或更小的Ko與人類BTLA相結(jié)合，或以lxlO-8M與lxlO"。M之間的K。與人類BTLA相結(jié)合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，其中該抗體與參照抗體交叉竟?fàn)幗Y(jié)合BTLA，該參照抗體包含(a)人類重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基酸序列；和(b)人類輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基^列。在不同的實(shí)施方案中，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:l;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:7;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:2;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:8;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:9;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:10;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:4;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:11;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:5;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:12;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:6;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:13;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:75;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，它含有氨基酸序列SEQIDNO:76;或者，該參照抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:85;以及(b)輕鏈可變區(qū)，含有氨基酸序列SEQIDNO:86。在另一方面，本公開涉及分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包含作為人類VH2-05基因的產(chǎn)物或由其衍生的重鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包含作為人類Va2-70基因的產(chǎn)物或由其衍生的重鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包含作為人類VH4-59基因的產(chǎn)物或由其衍生的重鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人VH3-20基因的產(chǎn)物或由其衍生的重鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人類VH3-33基因的產(chǎn)物或由其衍生的重鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人VkA27基因的產(chǎn)物或由其衍生的輕鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人VkL18基因的產(chǎn)物或由其衍生的輕鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人VkL15基因的產(chǎn)物或由其衍生的輕鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。本公開進(jìn)一步提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括作為人VK04基因的產(chǎn)物或由其衍生的輕鏈可變區(qū)，其中該抗體與BTLA特異地結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH2-05基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH2-70基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH4-59基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKL18基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH4-59基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA2基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類Vu3-20基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKL15基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH3-33基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VK(M基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH3-33基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括(a)人類VH2-05基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。在另一方面，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包括CDR1、CDR2、以及CDR3序列；以及輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)包括CDR1、CDR2、以及CDR3序列，其中(a)該重鏈可變區(qū)CDR3序列包括選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89，以及它們的保守性修飾的氨基酸序列；(b)該輕鏈可變區(qū)CDR3序列包括選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97，以及它們的保守性修飾的氨基酸序列；并且(c)該抗體特異地結(jié)合人類BTLA。優(yōu)選地，重鏈可變區(qū)CDR2序列包含選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、及88,以及它們的保守性修飾的M酸序列；并且輕鏈可變區(qū)CDR2序列包含選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、及96，以及它們的保守性j,務(wù)飾的氨基酸序列。優(yōu)選地，重鏈可變區(qū)CDR1序列包含選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、及87，以及它們的保守性修飾的氨基酸序列并且輕鏈可變區(qū)CDR1序列包含選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、及95，以及它們的保守性修飾的氨基酸序列。而在另一個(gè)方面，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)，其中(a)該重鏈可變區(qū)包括氨基酸序列，該序列與選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基紗列具有至少80%的同源性；(b)該輕鏈可變區(qū)包括氨基酸序列，該序列與選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基酸序列具有至少80%的同源性；(c)該抗體以lxlO,M或更小的K。與人類BTLA相結(jié)合；并且(d)該抗體基本上不與人類TrkB、PD-1、CD28、CTLA-4或ICOS相結(jié)合。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗體額外還抑制一種或多種BTLA配體(例如HVEM)與BTLA的結(jié)合。額外地或備選地，該抗體可以包括以上所列特征中的一種或多種特征。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括(a)重鏈可變區(qū)CDR1，包括選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87的氨基酸序列；(b)重鏈可變區(qū)CDR2，包括選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88的氨基酸序列；(c)重鏈可變區(qū)CDR3，包括選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的氨基酸序列；(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，包括選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95的氨基,列；(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，包括選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的氨基酸序列；以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，包括選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的氨基酸序列；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)CDRl,包才舌SEQIDNO:14;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)CDRl,(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)CDRl,(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括:(a)重鏈可變區(qū)CDRl,(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括:(a)重鏈可變區(qū)CDR1，包括SEQIDNO:20;包括SEQIDNO:26;包括SEQIDNO:32;包括SEQIDNO:39;以及包括SEQIDNO:46。包括SEQIDNO:15;包括SEQIDNO:21;包括SEQIDNO:27;包括SEQIDNO:33;包括SEQIDNO:40;以及包括SEQIDNO:47。包括SEQIDNO:16;包括SEQIDNO:22;包括SEQIDNO:28;包括SEQIDNO:34;包括SEQIDNO:41;以及包括SEQIDNO:48。包括SEQIDNO:16;包括SEQIDNO:22;包括SEQIDNO:28;包括SEQIDNO:35;包括SEQIDNO:42;以及包括SEQIDNO:49。包括SEQIDNO:17;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)CDR1，(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)CDR1，(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括:(a)重鏈可變區(qū)CDR1，(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括:(a)重鏈可變區(qū)CDRl,包括SEQIDNO:23;包括SEQIDNO:29;包括SEQIDNO:36;包括SEQIDNO:43;以及包括SEQIDNO:50。包括SEQIDNO:18;包括SEQIDNO:24;包括SEQIDNO:30;包括SEQIDNO:37;包括SEQIDNO:44;以及包括SEQIDNO:51。包括SEQIDNO:19;包括SEQIDNO:25;包括SEQIDNO:31;包括SEQIDNO:38;包括SEQIDNO:45;以及包括SEQIDNO:52。包括SEQIDNO:77;包括SEQIDNO:78;包括SEQIDNO:79;包括SEQIDNO:80;包括SEQIDNO:81;以及包括SEQIDNO:82。包括SEQIDNO:87;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，另一種優(yōu)選的組合包括:(a)重鏈可變區(qū)CDRl,(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，輕鏈可變區(qū)CDR1，輕鏈可變區(qū)CDR2，輕鏈可變區(qū)CDR3，包括SEQIDNO:88包括SEQIDNO:89包括SEQIDNO:90包括SEQIDNO:91包括SEQIDNO:92以及(d)(e)(f)包括SEQIDNO:77;包括SEQIDNO:78;包括SEQIDNO:79;包才舌SEQIDNO:95;包括SEQIDNO:96;以及包4舌SEQIDNO:97。本公開的其他的優(yōu)選的抗體，或它們的抗原結(jié)合部分包括(a)重鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:l、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基酸序列；(b)輕鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基酸序列；其中該抗體特異地結(jié)合BTLA。一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:l;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:7。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:2;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:8。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基醋列SEQIDNO:9。另一種優(yōu)選的組合，包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:10。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:4;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:ll。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:5;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:12。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:6;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:13。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:75。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:76。另一種優(yōu)選的組合包括(a)重鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:85;以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括氨基酸序列SEQIDNO:86。本公開的抗體可以是，例如全長抗體，例如IgGl、IgG2或IgG4同種型。作為替代，該抗體可以是諸如Fab或Fab，2片段的抗體片段，或單鏈抗體。本公開還提供了一種免疫連接物，該免疫連接物包括連接到治療劑(如細(xì)胞毒素或放射性同位素)上的本公開的抗體，或其抗原結(jié)合部分。本公開還提供了包括本公開的抗體，或其抗原結(jié)合部分的雙特異性分子，該抗體或其抗原結(jié)合部分與具有不同于所述抗體，或其抗原結(jié)合部分的結(jié)合特異性的第二功能部分相連接。還提供了包括本公開的抗體，或其抗原結(jié)合部分、或免疫連接物或雙特異性分子，以及藥學(xué)上可接受的載體的組合物。本公開還包括編碼本公開的抗體，或這些抗體的抗原結(jié)合部分的核酸分子、以及含有這種核酸的表達(dá)載體及包括此類表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。此外，本公開提供了含有人類免疫球蛋白的重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，其中該小鼠表達(dá)本公開的抗體，還提供了由這種小鼠制備的雜交瘤，其中該雜交瘤產(chǎn)生本公開的抗體。在另一方面，本^^開提供了調(diào)節(jié)受試者體內(nèi)免疫應(yīng)答的方法，該方法包括給予受試者本公開的抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得該受試者體內(nèi)的免疫應(yīng)答得到調(diào)節(jié)。優(yōu)選地，本公開的抗體增強(qiáng)、刺激、或增加受試者的免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體抑制、降低或阻遏受試者的免疫反應(yīng)。在另一方面，本公開提供了在受試者體內(nèi)抑制肺瘤細(xì)胞生長的方法，該方法包括對(duì)受試者給予治療有效量的抗-BTLA抗體，或其抗原結(jié)合部分。本公開的抗體優(yōu)選用于該方法，盡管可以替代使用其他抗-BTLA抗體(或與本公開的抗-BTLA抗體聯(lián)合)，例如，嵌合、人源化、或全長人類抗-BTLA抗體可用于抑制腫瘤生長的方法。在另一方面，本公開提供了一種在受試者體內(nèi)治療感染性疾病的方法，包括對(duì)受試者給予治療有效量的抗-BTLA抗體，或其抗原結(jié)合部分。本公開的抗體優(yōu)選用于該方法，盡管其他抗-BTLA抗體能被替換使用(或與本公開的抗-BTLA抗體聯(lián)合)。例如，嵌合、人源化、或全長人類抗-BTLA抗體可用于治療感染性疾病的方法。更進(jìn)一步地，本公開提供了一種在受試者體內(nèi)增強(qiáng)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的方法，包括給予受試者(i)抗原；以及(ii)抗-BTLA抗體，或其抗原結(jié)合部分，使得在受試者體內(nèi)對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答得以增強(qiáng)。該抗原可以是，例如腫瘤抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原或來自病原體的抗原。本公開的抗體優(yōu)選用于該方法，盡管其他抗-BTLA抗體能被替換使用(或與本公開的抗-BTLA抗體相組合)。例如，嵌合、人源化、或全長人類抗-BTLA抗體可用于在受試者體內(nèi)增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的方法?；谠诖颂峁┑目?BTLA抗體的序列，本公開也提供了制造"第二代，，抗-BTLA抗體的方法。例如，本公開提供了一種制備抗-BTLA抗體的方法，包括(a)提供(i)重鏈可變區(qū)抗體序列，包括選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87的CDR1序列，和/或選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88的CDR2序列，和/或選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的CDR3序列，或(ii)輕鏈可變區(qū)抗體序列，包括選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95的CDR1序列，和/或選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的CDR2序列，和/或選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的CDR3序列；(b)在至少一個(gè)可變區(qū)抗體序列內(nèi)改變至少一個(gè)氨基酸殘基，所述序列選自該重鏈可變區(qū)抗體序列以及輕鏈可變區(qū)抗體序列，以產(chǎn)生至少一個(gè)被改變的抗體序列；并且(c)將被改變的抗體序列表達(dá)成蛋白質(zhì)。根據(jù)下文的詳細(xì)說明及實(shí)例，本公開的其他特征及優(yōu)點(diǎn)將變得顯而易見。本申請(qǐng)全文引用的所有參考文獻(xiàn)、Genbank登錄號(hào)、專利、以及已公開的專利申請(qǐng)的內(nèi)容都明確地引入本文作為參考。附圖簡(jiǎn)要說明圖1A示出了1B4人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:53)與氨基紗列(SEQIDNO:1)。描繪了CDR1(SEQIDNO:14)、CDR2(SEQIDNO:20)以及CDR3(SEQIDNO:26)區(qū)域，并指明了V、D及J的種系來源。圖1B示出了1B4人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:59)及氨基紗列(SEQIDNO:7)。描繪了CDR1(SEQIDNO:32)、CDR2(SEQIDNO:39)以及CDR3(SEQIDNO:46)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖2A示出了E4H9人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:54)及氨基斷列(SEQIDNO:2)。描繪了CDRl(SEQIDNO:15)、CDR2(SEQIDNO:21)以及CDR3(SEQIDNO:27)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖2B示出了E4H9人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷,歹'j(SEQIDNO:60)及氨基i^列(SEQIDNO:8)。描繪了CDRl(SEQIDNO:33)、CDR2(SEQIDNO:40)以及CDR3(SEQIDNO:46)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖3A示出了3C2人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:55)及氨基紗列(SEQIDNO:3)。描繪了CDRl(SEQIDNO:16)、CDR2(SEQIDNO:22)以及CDR3(SEQIDNO:28)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖3B示出了3C2人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:61)及氨基餅列(SEQIDNO:9)。描繪了CDRl(SEQIDNO:34)、CDR2(SEQIDNO:41)以及CDR3(SEQIDNO:48)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖3C示出了3C2人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:62)及氨基酸序列(SEQIDNO:19)。描繪了CDRl(SEQIDNO:35)、CDR2(SEQIDNO:42)以及CDR3(SEQIDNO:49)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖4A示出了6A5人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:56)及氨基紗列(SEQIDNO:4)。描繪了CDRl(SEQIDNO:17)、CDR2(SEQIDNO:23)以及CDR3(SEQIDNO:29)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖4B示出了6A5人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:63)及氨基酸序列(SEQIDNO:11)。描繪了CDRl(SEQIDNO:36)、CDR2(SEQIDNO:43)以及CDR3(SEQIDNO:50)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖5A示出了11E2人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:57)及氨基紗列(SEQIDNO:5)。描繪了CDRl(SEQIDNO:18)、CDR2(SEQIDNO:24)以及CDR3(SEQIDNO:30)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖5B示出了11E2人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:64)及氨基酸序列(SEQIDNO:12)。描繪了CDRl(SEQIDNO:37)、CDR2(SEQIDNO:44)以及CDR3(SEQIDNO:51)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖6A示出了E8D9人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:58)及氨基紗列(SEQIDNO:6)。描繪了CDRl(SEQIDNO:19)、CDR2(SEQIDNO:25)以及CDR3(SEQIDNO:31)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖6B示出了E8D9人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:65)及氨基酸序列(SEQIDNO:13)。描繪了CDRl(SEQIDNO:38)、CDR2(SEQIDNO:45)以及CDR3(SEQIDNO:52)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖7示出了1B4的重鏈可變區(qū)的氨基紗列與人類種系VH2-05氨基酸序列(SEQIDNO:66)的比對(duì)。圖8示出了1B4的輕鏈可變區(qū)的氨基紗列與人類種系VKA27的氨基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖9示出了E4H9的重鏈可變區(qū)的氨基紗列與人類種系VH2-70氨基酸序列(SEQIDNO:67)的比對(duì)。圖10示出了E4H9的輕鏈可變區(qū)的氨基^/f列與人類種系VxA27氨基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖ll示出了3C2的重鏈可變區(qū)的氨基餅列與人類種系VH4-59氨基酸序列(SEQIDNO:68)的比對(duì)。圖12示出了3C2的輕鏈可變區(qū)的氨基斷列與人類種系VKLI8氨基酸序列(SEQIDNO:71)的比對(duì)。圖13示出了3C2的輕鏈可變區(qū)的氨基麟列與人類種系VKL15氨基酸序列(SEQIDNO:72)的比對(duì)。圖14示出了6A5的重鏈可變區(qū)的氨基^列與人類種系VH2-05氨基*列(SEQIDNO:66)的比對(duì)。圖15示出了6A5的輕鏈可變區(qū)的氨基餅列與人類種系VKA27氨基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖16示出了11E2的重鏈可變區(qū)的氨基*列與人類種系VH3-20氨基酸序列(SEQIDNO:69)的比對(duì)。圖17示出了11E2的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列與人類種系VKL15氨基酸序列(SEQIDNO:72)的比對(duì)。圖18示出了E8D9的重鏈可變區(qū)的氨基酸序列與人類種系Vh2-05氛基酸序列(SEQIDNO:66)的比對(duì)。圖19示出了E8D9的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列與人類種系VxA27氨基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖20示出了人類BTLA的序列(SEQIDNO:73)。圖21A示出了10H6人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:83)及氨基醋列(SEQIDNO:74)。描繪了CDRl(SEQIDNO:77)、CDR2(SEQIDNO:78)以及CDR3(SEQIDNO:79)區(qū)域，并指明了V、D、以及J的種系來源。圖21B示出了10H6人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷,列(SEQIDNO:84)及氨基酸序列(SEQIDNO:75)。描繪了CDRl(SEQIDNO:80)、CDR2(SEQIDNO:81)以及CDR3(SEQIDNO:82)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖21C示出了10H6a人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:98)及氨基紗列(SEQIDNO:76)。描繪了CDRl(SEQIDNO:95)、CDR2(SEQIDNO:96)以及CDR3(SEQIDNO:97)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖22示出了10H6的重鏈可變區(qū)的氨基紗列與人類種系VH3-33氨基酸序列(SEQIDNO:99)的比對(duì)。圖23示出了10H6的輕鏈可變區(qū)的氨基i^列與人類種系VK04氨基酸序列(SEQIDNO:100)的比對(duì)。圖24示出了10H6a的輕鏈可變區(qū)的氨基賄列與人類種系VKA27氨基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖25A示出了4C9人類單克隆抗體的重鏈可變區(qū)的核苷酸序列(SEQIDNO:93)及氨基酸序列(SEQIDNO:85)。描繪了CDRl(SEQIDNO:87)、CDR2(SEQIDNO:88)以及CDR3(SEQIDNO:89)區(qū)域，并指明了V、D、及J的種系來源。圖25B示出了4C9人類單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)的核苷^列(SEQIDNO:94)及氨基酸序列(SEQIDNO:86)。描繪了CDRl(SEQIDNO:90)、CDR2(SEQIDNO:91)以及CDR3(SEQIDNO:92)區(qū)域，并指明了V與J的種系來源。圖26示出了4C9的重鏈可變區(qū)的氨基^列與人類種系VH2-05氨基酸序列(SEQIDNO:66)的比對(duì)。圖27示出了4C9的輕鏈可變區(qū)的氨基,列與人類種系VkA27氛基酸序列(SEQIDNO:70)的比對(duì)。圖28A證明抗-BTLA抗體與BTLA-CHO細(xì)胞的結(jié)合是濃度依賴性的。圖28B與圖28C證明抗-BTLA抗體以濃度依賴的方式阻止HVEM與BTLA-CHO細(xì)月包的結(jié)合。圖29證明抗-BTLA抗體的抗原專一性。A描繪了將不同的抗-BTLA抗體與其他CD28分子的結(jié)合進(jìn)行比較，不同的抗-BTLA抗體的結(jié)合專一性。B描繪了抗原特異性對(duì)照。詳述一方面，本公開涉及分離的單克隆抗體，特別是特異地結(jié)合BTLA的人類單克隆抗體。在某些實(shí)施方案中，本公開的抗體展現(xiàn)出一種或多種理想的功能特性，例如高親和力結(jié)合BTLA、缺乏與其他CD28家族成員的交叉反應(yīng)、刺激T和/或B細(xì)胞增殖的能力、抑制一種或更多BTLA配體(例如，HVEM)與BTLA結(jié)合的能力、在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長的能力、刺激抗原特異性記憶應(yīng)答的能力、和/或刺激抗體應(yīng)答的能力。在一些實(shí)施方案中，本公開的抗體抑制免疫應(yīng)答。額外地或可替代地，本公開的抗體衍生于特定的重鏈及輕鏈種系序列和/或包括特定的結(jié)構(gòu)特征，例如包括特定氨基酸序列的CDR區(qū)域。本公開提供了，例如分離的抗體、制備此類抗體的方法、包含此類抗體的免疫連接物及雙特異性分子以及含有本公開的抗體、免疫連接物或雙特異性分子的藥物組合物。另一方面，本公開涉及使用抗-BTLA抗體在受試者體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞生長的方法?？?BTLA抗體能夠在體內(nèi)抑制肺瘤細(xì)胞生長。本7>開也涉及一些方法，這些方法使用抗體修飾免疫應(yīng)答、治療疾病(例如癌癥或感染性疾病)、或刺激保護(hù)性自身免疫反應(yīng)或刺激抗原特異的免疫應(yīng)答(例如，將目的抗原與抗-BTLA同時(shí)給藥)。為了更容易地理解本公開，首先定義了某些術(shù)語。其他定義在整個(gè)詳細(xì)說明中給出。術(shù)語"B與T淋巴細(xì)胞衰減子"及"BTLA"，基因/蛋白質(zhì)是可互換地使用的，它包括變體、同種型、同源物直向同源物和側(cè)向同源物。例如，在某些實(shí)施方案中，特異性針對(duì)人類BTLA的抗體可以與來自非人類物種的BTLA進(jìn)行交叉反應(yīng)。在其他實(shí)施方案中，對(duì)人類BTLA特異性的抗體可能是對(duì)人類BTLA完全特異性的，并且可不展示物種或其他類型的交叉反應(yīng)性。術(shù)語"人類BTLA"是指人類序列的BTLA，例如人類BTLA的完全的氨基酸序列，它具有Genbank登錄號(hào)NP—861445。這些人類BTLA序列不同于SEQIDNO:73的人類BTLA之處為具有(例如)保守突變或在非保守區(qū)域中的突變，并且該BTLA具有與SEQIDNO:73的人類BTLA基本上相同的生物學(xué)功能。例如，人類BTLA的一項(xiàng)生物學(xué)功能是阻遏免疫應(yīng)答，例如T細(xì)胞應(yīng)答。也就是說，BTLA被認(rèn)為是一種負(fù)性調(diào)節(jié)物。它具有C-末端抑制基序，這些基序涉及IL-2產(chǎn)量及T細(xì)胞增殖的減少(Watanabeetal"Nat.Immunol"4,670-679，2003;Chemnitzetal"J.Immunol"176,6603-6614，2006)。此外，人類BTLA的生物學(xué)功能可以具有，例如BTLA的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域的一個(gè)表位，其被由本公開的抗體特異地結(jié)合。一種特定的BTLA序列通常與SEQIDNO:73的人類BTLA在氨基酸序列上具有至少90%的同一性，并且含有多個(gè)氨基酸殘基，當(dāng)與其他物種(例如鼠類)的BTLA氨基酸序列相比時(shí)，這些氨基酸殘基鑒定該氨基酸序列是人類的。在某些情況下，人類BTLA可能與SEQIDNO:73的人類BTLA具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%、或99%的同一性。在某些實(shí)施方案中，與SEQIDNO:73的BTLA序列相比，人類BTLA序列將展示出將不超過10個(gè)氨基酸差異。在某些實(shí)施方案中，與SEQIDNO:73的BTLA相比，人類BTLA序列將展示出不超過5個(gè)、或甚至不超過4個(gè)、3個(gè)、2個(gè)、或l個(gè)氨基酸差異。同一性百分比由在此描述的方法確定。術(shù)語"免疫應(yīng)答"是指例如，淋巴細(xì)胞、抗原呈遞細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、以及由上述細(xì)胞或肝臟產(chǎn)生的可溶性大分子(包括抗體、細(xì)胞因子、以及補(bǔ)體)的作用，這些作用導(dǎo)致對(duì)侵入性病原體、被病原體感染的細(xì)胞或組織、癌細(xì)胞，或者，在自身免疫及病理炎癥情況下，正常的人類細(xì)胞或組織的選擇性損害、破壞或?qū)⑺鼈儚娜梭w清除。"信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑"是指在多種信號(hào)傳導(dǎo)分子之間的生物化學(xué)關(guān)系，這些分子在將信號(hào)從細(xì)胞的一部分傳遞到細(xì)胞的另一部分中發(fā)揮作用。在此使用的短語"細(xì)胞表面受體，，包括，例如，能夠接受信號(hào)并將這種信號(hào)傳遞穿過細(xì)胞的原生質(zhì)膜的分子及分子的復(fù)合體。本公開的"細(xì)胞表面受體"的一個(gè)實(shí)例是BTLA受體。在此使用的術(shù)語"抗體"包括整個(gè)抗體及它們的任何抗原結(jié)合片段(即"抗原結(jié)合部分")或它們的單鏈。"抗體"指包括通過二硫鍵互相連接的至少兩條重鏈(H鏈)及兩條輕鏈(L鏈)的糖蛋白，或其抗原結(jié)合部分。每一條重鏈都包括重鏈可變區(qū)(在此縮寫為VH)以及重鏈恒定區(qū)。該重鏈恒定區(qū)包括三個(gè)結(jié)構(gòu)域，CH1、Ch2以及Ch3。每一條輕鏈都包括輕鏈可變區(qū)(在此縮寫為VL)及輕鏈恒定區(qū)。該輕鏈恒定區(qū)包括一個(gè)結(jié)構(gòu)域，CL。Vh和V^區(qū)域可以進(jìn)一步被細(xì)分為多個(gè)高可變性區(qū)域，被稱為互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)，其間散布有更為保守的被稱為構(gòu)架區(qū)(FR)的多個(gè)區(qū)域。每個(gè)VH以及VL均由3個(gè)CDR及4個(gè)FR構(gòu)成，按照以下順序從氨基端至羧基端排布FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合域。這些抗體的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主的組織或因子的結(jié)合，這些宿主的組織或因子包括免疫系統(tǒng)的不同細(xì)胞(例如效應(yīng)細(xì)胞)及經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一成分(Clq)。此處使用的術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"(或簡(jiǎn)稱為"抗體部分")，是指保留特異性結(jié)合抗原(例如BTLA)的能力的抗體的一個(gè)或多個(gè)片段。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)抗體的抗原結(jié)合功能可以由全長抗體的片段來實(shí)現(xiàn)。術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"中所涵蓋的結(jié)合片段的實(shí)例包括(i)Fab片段，由VH、CL及Cm結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單價(jià)片段組成；(ii)F(ab')2片段，為包括在鉸鏈區(qū)由二硫橋連接的兩個(gè)Fab片段的一個(gè)二價(jià)片段；(iii)由Vh及Cw結(jié)構(gòu)域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的V^及VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；(v)由VH結(jié)構(gòu)域組成的dAb片段(WardC(1989)Nature341:544-546);以及(vi)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，雖然Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，Vl與Vh，是由單獨(dú)的基因編碼的，但是可以使用重組方法由合成接頭將它們連接起來，該接頭使它們成為單一蛋白鏈，其中Vl及Vh區(qū)域配對(duì)形成單價(jià)分子(被稱為單鏈Fv(scFv);參見例如BirdW/.(1988)Science242:423-426;及Hustonetal.(1988)Science242:423-426:及Huston"fl/.(1988)Proc.iVW/.Jcflcf.^:5879-5883)(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA^:5879-5883)。術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"也旨在涵蓋此類單鏈抗體。這些抗體片段可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法獲得，并且對(duì)于這些片段進(jìn)行的有用性的篩選與篩選完整抗體的方式相同。此處使用的"分離的抗體"，意指抗體，它基本上沒有具有不同抗原特異性的其他抗體(例如，特異性結(jié)合BTLA的分離的抗體基本上沒有特異性結(jié)合除BTLA以外的抗原的抗體)。然而，特異性結(jié)合BTLA的分離的抗體對(duì)于其他抗原，例如來自其他物種的BTLA分子，可以具有交叉反應(yīng)性。此外，分離的抗體可以基本上沒有其他細(xì)胞材料和/或化學(xué)物。此處使用的術(shù)語"單克隆抗體，，或"單克隆抗體組合物"是指由單一分子組分的抗體分子形成的制劑。單克隆抗體組合物顯示了針對(duì)某一特定表位的單一結(jié)合特異性及親和力。此處使用的術(shù)語"人類抗體"意指包括具有可變區(qū)的抗體，在這些可變區(qū)中，構(gòu)架區(qū)及CDR區(qū)均源自人類種系免疫蛋白序列。此外，如果該抗體包括恒定區(qū)，則該恒定區(qū)也源自人類種系免疫球蛋白序列。本公開的人如，在體外由隨機(jī)誘變或位點(diǎn)特異性誘變引入的突變或在體內(nèi)由體細(xì)胞突變引入的突變)。然而，此處使用的術(shù)語"人類抗體"并非意指包括以下抗體其中源自另一個(gè)哺乳動(dòng)物物種(例如小鼠)的種系的CDR序列被移植到人類構(gòu)架區(qū)序列上。術(shù)語"人單克隆抗體，，是指顯示出單一結(jié)合特異性的抗體，這些抗體具有多個(gè)可變區(qū)，其中構(gòu)架和CDR區(qū)均源自人類種系免疫球蛋白序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，人單克隆抗體由雜交瘤產(chǎn)生，該雜交瘤包括由轉(zhuǎn)基因非人類的動(dòng)物(例如轉(zhuǎn)基因小鼠)獲到的B細(xì)胞，所述動(dòng)物具有包括融合至無限增殖化細(xì)胞的人類重鏈轉(zhuǎn)基因及輕鏈轉(zhuǎn)基因的基因組。此處使用的術(shù)語"重組人類抗體，，包括通過重組方法制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的所有人類抗體，例如(a)從動(dòng)物(例如小鼠)中分離的抗體，該動(dòng)物對(duì)于人類免疫球蛋白基因是轉(zhuǎn)基因的或轉(zhuǎn)染色體的，或從由其制備出的雜交瘤分離的抗體(以下將進(jìn)一步說明)；(b)從經(jīng)轉(zhuǎn)化以表達(dá)人類抗體的宿主細(xì)胞(例如轉(zhuǎn)染瘤)中分離的抗體，(c)從重組的組合人類抗體文庫中分離的抗體，以及(d)通過任何其他方法來制備、表達(dá)、產(chǎn)生或分離的抗體，這些方法包括將人類免疫球蛋白基因序列剪接到其他DNA序列。這種重組人類抗體具有可變區(qū)，其中構(gòu)架區(qū)及CDR區(qū)均源自于人類種系免疫球蛋白序列。然而，在某些實(shí)施方案中，這種重組人類抗體也可經(jīng)受體外誘變(或者，在使用對(duì)于人類Ig序列轉(zhuǎn)基因的動(dòng)物時(shí)，經(jīng)受體內(nèi)體細(xì)胞誘變)，并且接著，重組抗體的VH和Vt區(qū)域的氨基酸序列為這樣的序列其盡管衍生于人類種系Vh和V^序列并與其相關(guān)，但是并不天然存在于體內(nèi)人類抗體種系所有組成成分之中。此處使用的"同種型"是指由重鏈恒定區(qū)基因編碼的抗體種類(例如IgM或IgGl)。短語"識(shí)別抗原的抗體"與"對(duì)抗原特異的抗體"此處可以與術(shù)語"特異性結(jié)合抗原的抗體"互換使用。術(shù)語"人類抗體衍生物，，是指人類抗體的任何經(jīng)修飾的形式，例如，該抗體與另一種試劑或抗體的偶聯(lián)物。術(shù)語"人源化抗體"意指以下抗體，其中源自另一個(gè)哺乳動(dòng)物物種(如小鼠)的種系的CDR序列被移植到人類構(gòu)架序列上。可以在人類構(gòu)架序列中進(jìn)行額外的構(gòu)架區(qū)修飾。術(shù)語"嵌合抗體"意指以下抗體，其中可變區(qū)序列源自一個(gè)物種而恒定區(qū)序列源自另一個(gè)物種，例如一種抗體，其中可變區(qū)序列源自小鼠抗體而恒定區(qū)序列源自人類抗體。此處使用的"特異性結(jié)合人類BTLA，，的抗體意指一種抗體，該抗體以lxl0^或更小，更優(yōu)選為5xl(rSM或更小，更優(yōu)選為lxl(rSM或更小，更優(yōu)選為5xlO力M或更小的Ku結(jié)合到人類BTLA上。此處使用的術(shù)語"Kass。e"或"Ka"意指特定的抗體-抗原相互作用的結(jié)合速率，而此處使用的術(shù)語"Kdis"或"Kd，，意指特定的抗體-抗原相互作用的解離速率。此處使用的術(shù)語"KD"意指解離常數(shù)，它是由Kd與Ka之比(即Kd/Ka)得到，并被表示為摩爾濃度(M)?？贵w的Ku值能夠用本領(lǐng)域確立的方法測(cè)定。測(cè)定抗體的KD的優(yōu)選方法是使用表面等離振子共振，優(yōu)選使用諸如Biacore系統(tǒng)的生物傳感器系統(tǒng)。此處使用的術(shù)語IgG抗體的"高親和力"是指對(duì)于靶抗原而言，抗體具有的KD值為1(T8M或更低、更優(yōu)選1(T9M或更低以及甚至更優(yōu)選10"°M或更低。然而，對(duì)于其他抗體同種型而言，"高親和力"結(jié)合可以發(fā)生變化。例如，對(duì)于一種IgM同種型而言，"高親和力"結(jié)合是指一種抗體具有的Kn值為10^M或更低、更優(yōu)選1(T8M或更低、甚至更優(yōu)選10^M或更低。此處使用的術(shù)語"受試者，，包括任何人類或非人類動(dòng)物。術(shù)語"非人類動(dòng)物，，包括所有脊推動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物及非哺乳動(dòng)物，如非人類靈長類動(dòng)物、綿羊、狗、貓、馬、奶牛、雞、兩棲類動(dòng)物、爬行類動(dòng)物等。在以下各分部中詳細(xì)說明了本公開的不同方面?？?BTLA抗體本公開的抗體的特征在于抗體的特定的功能性特征或特性。例如，抗體特異性結(jié)合BTLA(例如結(jié)合人類BTLA、并可以與來自諸如獼猴的其他物種的BTLA交叉反應(yīng))。優(yōu)選地，本公開的抗體以高親和力結(jié)合BTLA，例如具有的KD值為1x10—〒M或更低。本公開的抗-BTLA抗體優(yōu)選地表現(xiàn)以下特征中的一種或多種特征(a)以lxl(T7M或更小的Kn與人類BTLA相結(jié)合；(b)基本上不與人類TrkB、CD28、CTLA-4、PD-1或ICOS相結(jié)合；或(c)抑制HVEM與BTLA的結(jié)合。在額外的實(shí)施方案中，本公開的抗-BTLA抗體表現(xiàn)出以下特征(a)刺激免疫應(yīng)答；(b)刺激抗體應(yīng)答；或(c)抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長。在額外的實(shí)施方式中，本公開的抗-BTLA抗體刺激免疫應(yīng)答。也就是說在一些實(shí)施方案中，本公開的抗體是拮抗劑抗體并且阻止HVEM介導(dǎo)的抑制信號(hào)，而在本公開的其他實(shí)施方案中，所述抗體是激動(dòng)劑抗體，該激動(dòng)劑抗體激活BTLA、并且向表達(dá)BTLA的細(xì)胞提供抑制信號(hào)。優(yōu)選地，抗體以5xlO-SM或更小的K。與人類BTLA相結(jié)合、以lxl(T8M或更小的K。與人類BTLA相結(jié)合、以5xl(T9M或更小的Ko與人類BTLA相結(jié)合、或以lxl(T8M至1x10"°M之間或更小的Kj)與人類BTLA相結(jié)合。本公開的抗體可能表現(xiàn)以上所列的特征的任何組合，例如以上所列的特征中的兩種、三種、四種、五種或更多特征。評(píng)價(jià)抗體對(duì)BTLA的結(jié)合能力的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定在本領(lǐng)域內(nèi)是已知的，包括例如ELISA、蛋白質(zhì)印跡法以及RIA。還可以用本領(lǐng)域內(nèi)已知的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定來評(píng)估抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)(例如結(jié)合親和性)，例如通過Biacore分析。用于評(píng)估以上所述的特征中任何一種特征的適宜測(cè)定在實(shí)例中都有詳述。單克隆抗體1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、及4C9本公開優(yōu)選的抗體是如實(shí)例1和2所述的分離的并進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征的人類單克隆抗體1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9。1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9的VH氨基^列分別顯示在SEQIDNO:l、2、3、4、5、6、74、以及85中。3C2a的VH氨基酸序列與3C2的VH氨基斷列相同。10H6a的VH氨基酸序列與10H6的Vh氛基餅列相同。lB4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9的Vi^氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86中。由于這些抗體中每一種抗體均可結(jié)合BTLA，則VH和VL序列可以"混合并匹配"，以產(chǎn)生本公開的其他抗-BTLA結(jié)合分子。可以使用上文以及實(shí)施例中說明的結(jié)合測(cè)定法(例如ELISA)來檢測(cè)這種"混合并匹配，，的抗體與BTLA的結(jié)合。優(yōu)選地，當(dāng)Vh和VL鏈被混合并進(jìn)行匹配時(shí)，源自某一特定VH/V^對(duì)的Vh序列被結(jié)枸相似的Vh序列代替。類似地，優(yōu)選地源自特定VH/V^對(duì)的V^序列被結(jié)構(gòu)相似的Vl序列代替。因此，在一個(gè)方面，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括(a)重鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、74、及85的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包括選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、及86的氨基酸序列；其中該抗體特異性結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類BTLA。優(yōu)選的重鏈及輕鏈組合包括(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:1;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:7;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:2;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:8;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:9;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:3;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:10;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:4;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:ll;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:5;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:12;或(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:6;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:13;(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:75;(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:74;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:76;(a)重鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:85;以及(b)輕鏈可變區(qū)，其包括氨基酸序列SEQIDNO:86。在另一方面，本乂>開提供了多種抗體，這些抗體包括1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9的重鏈及輕鏈CDR1、CDR2、以及CDR3，或它們的組合。1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6、以及4C9的VHCDR1的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87中。1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6、以及4C9的VHCDR2的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88中。1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6、以及4C9的VHCDR3的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89中。1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a,及4C9的VkCDR1的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、以及95中。1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9的VkCDR2的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96中。1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a，及4C9的VkCDR3的氨基酸序列分別顯示在SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97中。CDR區(qū)是用Kabat系統(tǒng)進(jìn)行描繪的(Kabat，E.A.，W(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)。在這些抗體的每一種抗體均能夠結(jié)合BTLA，并且抗原結(jié)合特異性主要由CDR1、CDR2、以及CDR3區(qū)域提供的條件下，VHCDR1、CDR2、以及CDR3序列與VkCDRl、CDR2、以及CDR3序列可以被"混和并匹配"(例如，來自不同抗體的CDR可以被混和并進(jìn)行匹配，盡管各個(gè)抗體必須含有VHCDR1、CDR2、以及CDR3以及VkCDR1、CDR2、以及CDR3,)以產(chǎn)生本公開的其他抗-BTLA結(jié)合分子?？梢允褂蒙衔募皩?shí)施例說明的結(jié)合分析(例如ELISA、Biacore分析)來檢測(cè)這種"混和并匹酉己，，的抗體的BTLA結(jié)合。優(yōu)選地，當(dāng)VHCDR被混合并匹配時(shí)，來自某一特定Vh序列的CDR1、CDR2、和/或CDR3序列被結(jié)構(gòu)相似的CDR序列代替。類似地，當(dāng)VkCDR被混合并且匹配時(shí)，來自某一特定Vk序列的CDRl、CDR2、和/或CDR3序列被結(jié)構(gòu)相似的另一個(gè)或另一些CDR序列代替。針對(duì)單克隆抗體1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、以及4C9，可以通過將一個(gè)或多個(gè)Vh和/或VLCDR區(qū)域序列替換為來自在此所披露的CDR序列的結(jié)構(gòu)相似的序列，可以產(chǎn)生新穎的VH和Vl序列，這對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在另一方面，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87的氨基,列；(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包4舌選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88的氨基^列；(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包括選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的氨基酸序列；(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包括選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、以及95的氨基#列；(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的氨基酸序列；以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的氨基酸序列；其中該抗體特異性結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:14;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:20;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包4舌SEQIDNO:26;(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:32;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:39;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:46。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDRl,其包括SEQIDNO:15;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:21;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:27;(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,其包括SEQIDNO:33;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:40;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:47。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:16;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:22;(c)重鏈可變區(qū)CDR3,其包括SEQIDNO:28;(d)輕鏈可變區(qū)CDR1,其包括SEQIDNO:34;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:41;以及(i)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:48。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDRl,其包括SEQIDNO:16;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:22;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:28;(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,其包括SEQIDNO:35;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:42;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:49。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:17;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:23;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:29;(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:36;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2,其它包括SEQIDNO:43;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:50。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:18;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案(a)重鏈可變區(qū)CDR1，(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(i)輕鏈可變區(qū)CDR3，在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案(a)重鏈可變區(qū)CDRl,(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案(a)重鏈可變區(qū)CDR1，(b)重鏈可變區(qū)CDR2，(c)重鏈可變區(qū)CDR3，(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方,(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包括SEQIDNO:24;其包4舌SEQIDNO:30;其包括SEQIDNO:37;其包括SEQIDNO:44;以及其包括SEQIDNO:51;中，該抗體包含其包括SEQIDNO:19;其包括SEQIDNO:25;其包括SEQIDNO:31;其包才舌SEQIDNO:38;其包括SEQIDNO:45;以及其包括SEQIDNO:52。中，該抗體包含其包括SEQIDNO:77;其包括SEQIDNO:78;其包4舌SEQIDNO:79;其包才舌SEQIDNO:80;其包括SEQIDNO:81;以及其包4舌SEQIDNO:82。中，該抗體包含其包括SEQIDNO:87;其包括SEQIDNO:88;其包括SEQIDNO:89;其包括SEQIDNO:卯；其包括SEQIDNO:91;以及其包括SEQIDNO:92。中，該抗體包含其包括SEQIDNO:77;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:78;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:79;(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,其包括SEQIDNO:95;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包括SEQIDNO:96;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包括SEQIDNO:97。在本領(lǐng)域中所熟知的是，CDR3結(jié)構(gòu)域獨(dú)立于一個(gè)或多個(gè)CDR1和/或CDR2結(jié)構(gòu)域，可以單獨(dú)決定抗體對(duì)于同族抗原的結(jié)合特異性，并且可預(yù)期地產(chǎn)生多種抗體，這些抗體具有基于共同的CDR3序列的相同的結(jié)合特異性。參見，例如Klimka5W泡A/o,CVmcgr83(2):252-260(2000)(描述了僅使用鼠類抗CD30抗體Ki-4的重鏈可變結(jié)構(gòu)域CDR3來產(chǎn)生人源化抗CD30抗體)；BdboerC丄Mo/.22^:833-849(2000)(描述了僅使用親代鼠類MOC-31抗EGP-2抗體的重鏈CDR3序列的重組上皮糖蛋白-2(EGP-2)抗體)；Rader"fl/"7V""爿ow/.t/^.J.2^:8910-8915(1998)(描述了4吏用鼠類抗整聯(lián)蛋白0^卩3抗體LM609的重鏈及輕鏈可變CDR3結(jié)構(gòu)域的一組人源化抗整聯(lián)蛋白01^3抗體，其中每一種成員抗體在CDR3結(jié)構(gòu)域之外均包含不同的序列，并且與親代鼠類抗體一樣結(jié)合相同的表位，并且親和力與親代鼠類抗體一樣高或比親代鼠類抗體更高)；Barbas""/"丄^4附.C7^附.嵐:2161-2162(1994)(披露了CDR3結(jié)構(gòu)域?qū)乖Y(jié)合的貢獻(xiàn)度最大)；Barbase"A，iVoc.A^/./4crf.5W.f/J.A2^:2529-2533(1995)(描述了將三個(gè)針對(duì)人類胎盤DNA的Fab(SI-l、SI-40、以及SI-32)的重鏈CDR3序列移植到抗破傷風(fēng)類毒素Fab的重鏈上，由此替換現(xiàn)有的重鏈CDR3，并證實(shí)僅有CDR3結(jié)構(gòu)域就能夠賦予結(jié)合特異性)；以及DitzelW//附附mwo/.157:739-749(1996)(描述了移植研究，其中僅將親代多特異性FabLNA3的重鏈CDR3移植到單特異性IgG破傷風(fēng)類毒素結(jié)合的Fabp313抗體的重鏈上，就足以保留親代Fab的結(jié)合特異性)。這些參考文獻(xiàn)中每一篇均完整引入本文作為參考。因此，在某些方面，本公開提供了包括來自非人類抗體(例如小鼠或大鼠抗體)的一個(gè)或多個(gè)重鏈和/或輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域的單克隆抗體，其中該單克隆抗體能夠特異地性結(jié)合BTLA。在一些實(shí)施方案中，包括來自非人類抗體的一個(gè)或多個(gè)重鏈和/或輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域的此類創(chuàng)造性的抗體與相應(yīng)的親代非人類抗體相比(a)能夠與其竟?fàn)幗Y(jié)合；(b)保留其功能特性；(c)與其結(jié)合至相同的表位；和/或(d)與其具有相似的結(jié)合親和力。在其他方面，本公開提供了多種單克隆抗體，其包括來自第一人類抗體(例如，從非人類的動(dòng)物獲得的人類抗體)的一個(gè)或多個(gè)重鏈和/或輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，其中該第一人類抗體能夠特異性結(jié)合BTLA，并且其中來自該第一人類抗體的CDR3功能域替換了人類抗體中缺乏BTLA結(jié)合特異性的CDR3結(jié)構(gòu)域，以產(chǎn)生能夠特異性結(jié)合BTLA的第二人類抗體。在一些實(shí)施方案中，包括來自第一人類抗體的一種或多種重鏈和/或輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域的這種發(fā)明的抗體對(duì)相應(yīng)的親代第一人類抗體而言(a)能夠與其竟?fàn)幗Y(jié)合；(b)保留其功能特征；(c)與其結(jié)合至相同的表位；和/或(d)與其具有相似的結(jié)合親和力。具有特定種系序列的抗體在某些實(shí)施方案中，本公開的抗體包括來自特定的種系重鏈免疫球蛋白基因的重鏈可變區(qū)和/或來自特定的種系輕鏈免疫球蛋白基因的輕鏈可變區(qū)。例如，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH2-05基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH2-70基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH4-59基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA,優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH3-20基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH3-33基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA,優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VkA27基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA,優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VkL18基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA,優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VkL15基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或該抗體的抗原結(jié)合部分，包括輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VK04基因的產(chǎn)物或由其衍生，其中該抗體特異地結(jié)合BTLA，優(yōu)選人類的BTLA。在又一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，其中該抗體(a)包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH2-05、2-70、4-59、3-20、或3-33的產(chǎn)物或由其衍生(該基因所編碼的氨基酸序列分別在SEQIDNO:66、67、68、69、或99中給出)；(b)包括輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VKA27、L18、L15、或04基因的產(chǎn)物或由其衍生(該基因所編碼的氨基酸序列分別在SEQIDNO:70、71、或72中給出)；并且(c)特異地結(jié)合BTLA。分別具有VH2-05及VKA27的Vh及VK的抗體的實(shí)例是1B4、6A5、以及E8D9。分別具有VH2-70及VKA27的Vh及VK的抗體的實(shí)例是E4H9。分別具有Vh4-59及VkL18的Vh及Vk的抗體的實(shí)例是3C2。分別具有VH4-59及VKA27的Vh及Vk的抗體的實(shí)例是3C2a。分別具有VH3-20及VK115的Vh及VK的抗體的實(shí)例是11E2。分別具有VH3-33及VK04的Vh及VK的抗體的實(shí)例是10H6。分別具有VH3-33及VKA27的Vh及Vk的抗體的實(shí)例是10H6a。分別具有VH2-05及VKA27的Vh及VK的抗體的實(shí)例是4C9。如此處所用，如果一種人類抗體的可變區(qū)由使用人類種系免疫球蛋白基因的系統(tǒng)獲得，則所述人類抗體包括的重鏈或輕鏈可變區(qū)是特定種系序列的"產(chǎn)物"或者由其"衍生"。這種系統(tǒng)包括用目的抗原對(duì)攜帶人類免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行免疫，或者用目的抗原對(duì)在噬菌體上展示的人類免疫球蛋白基因文庫進(jìn)行篩選。通過對(duì)人類抗體的氨基^列與人類種系免疫球蛋白的氨基^列進(jìn)行比較，并選擇在序列上最接近(即最大百分?jǐn)?shù)同一性)人類抗體的序列的人類種系免疫球蛋白序列，"產(chǎn)自，，或"源自，，人類種系免疫球蛋白序列的人類抗體就可以被鑒定為是此類抗體。一種"產(chǎn)自"或"源自"特定的人類種系免疫球蛋白序列的人類抗體，與該種系序列相比，可以含有氨基酸差異，因?yàn)槔?，自然產(chǎn)生的體細(xì)胞突變或故意引入定點(diǎn)突變。然而，經(jīng)選擇的人類抗體典型地與由人類種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列在氨基酸序列上具有至少卯％的同一性，而且與其他物種的種系免疫球蛋白氨基酸序列(例如，鼠類種系序列)進(jìn)行比較時(shí)，含有將所述人類抗體鑒定為人源的氨基酸殘基。在某些情況下，人類抗體與該種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基酸序列在氨基酸序列上可以具有至少95%、或甚至至少96%、97%、98%、或99%的同一性。典型地，與由人類種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基^列相比，來自特定的人類種系序列的人類抗體將展示不超過10個(gè)氨基酸差異。在某些情況下，與由該種系免疫球蛋白基因所編碼的氨基^列相比，所述人類抗體可以展示不超過5個(gè)，或甚至不超過4個(gè)、3個(gè)、2個(gè)，或l個(gè)氨基酸差異。同源抗體在又一個(gè)實(shí)施方案中，本公開的抗體包括一些重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)，這些可變區(qū)含有與本文所述的優(yōu)選抗體的氨基酸序列同源的氨基酸序列，并且其中，該抗體保留本公開的抗-BTLA抗體的所希望的功能特性。例如，本公開提供了分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)，其中(a)該重鏈可變區(qū)包括氨基酸序列，它與選自SEQIDNO:1、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基酸序列具有至少80%的同源性；(b)該輕鏈可變區(qū)包括氨基酸序列，它與選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基酸序列具有至少80%的同源性；該抗體表現(xiàn)下列特性中的一種或多種特性該抗體以lxl(^M或更小的Ku與人類BTLA相結(jié)合；該抗體基本上不與人類TrkB、CD28、CTLA-4、PD-l或ICOS相結(jié)合；該抗體抑制HVEM與BTLA的結(jié)合。(iv)該抗體刺激免疫應(yīng)答；該抗體刺激抗體應(yīng)答；該抗體抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長。在其他實(shí)施方案中，該抗體抑制或阻遏免疫應(yīng)答。在其他實(shí)施方案中，VH和/或VL氨基酸序列可以與以上給出的序列具有85%、90%、95%、96%、97%、98%、或99%的同源性。具有與以上給出的序列的Vh與Vk區(qū)具有高度同源性(即，80%或更大)的Vh與Vl區(qū)的抗體可以通過以下方式來獲得對(duì)編碼SEQIDNO:53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、和/或65的核酸分子進(jìn)行誘變(例如，位點(diǎn)定向誘變或PCR介導(dǎo)的誘變)，然后用此處所述的功能測(cè)定檢測(cè)所編碼的、被改變的抗體所保留的功能(即以上(c)到(g)所給出的功能)。如在此所使用，兩個(gè)氨基^列之間的同源性百分比等同于兩個(gè)序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)。在這兩個(gè)序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)是這些序列共有的相同位置的數(shù)目的函數(shù)(即，M同源性-相同位置勤位置總數(shù)xl00)，考慮到空位(gap)的數(shù)目，及每個(gè)空位的長度，它們需要被引入用于這兩條序列的最優(yōu)比對(duì)。正如在以下的非限制性實(shí)例中所述，使用數(shù)學(xué)算法可以完成兩條序列之間的序列比較以及同一性百分?jǐn)?shù)的測(cè)定。使用E.Meyers及W.Miller(Q7附/"t祝畫.，差11-17(1988)的算法可以確定在兩條氨基酸序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)，該算法已經(jīng)結(jié)合至ALIGN程序(版本2.0)中，該算法使用了PAM120權(quán)重殘基表(weightresiduetable)、空位長度罰分(gaplengthpenalty)12以及空位罰分4。此外，使用Needleman及Wimsch(丄Afo/.B,V/.444-453(1970))算法能確定在兩條氨基酸序列之間的同一性百分?jǐn)?shù)，該算法已結(jié)合至GCG軟件包的GAP程序中(可在http:〃www.gcg.com獲得)，該算法使用了Blossum62矩陣或PAM250矩陣，以及空位斥又重16、14、12、10、8、6,或4以及長度權(quán)重1、2、3、4、5，或6。額外地或者可替代地，本公開的蛋白質(zhì)序列可進(jìn)一步用作"查詢序列"，對(duì)公共數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，例如鑒定相關(guān)序列。這種檢索可采用Altschul，etal.(1990)/^To/.^!f:403-10的XBLAST程序(版本2.0)來進(jìn)行。通過XBLAST程序，記分=50，字長-3進(jìn)行BLAST蛋白質(zhì)檢索，以獲得與本公開的抗體分子同源的氨基酸序列。為獲得用于比較目的的空位比對(duì)，可利用如Altschule,d((1997)7Vwc/"c^"Vfe/^s.25(17):3389曙3402所述的GappedBLAST。當(dāng)利用BLAST及GappedBLAST程序時(shí)，可使用各自的程序(例如XBLAST與NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)(參見www.ncbi.nlin.iiih.gov)。具有保守性^"飾的抗體在某些實(shí)施方案中，本公開的抗體包括含有CDR1、CDR2以及CDR3序列的重鏈可變區(qū)，以及含有CDR1、CDR2以及CDR3序列的輕鏈可變區(qū)，其中這些CDR序列中一個(gè)或多個(gè)序列包括基于本文所述的優(yōu)選抗體(例如，1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、及E8D9)的特定的氨基酸序列，或它們的保守性修飾，并且其中這些抗體保留了本公開的抗BTLA抗體的所需功能特性。因此，本公開提供了分離的單克隆抗體或，其抗原結(jié)合部分，包含含有CDR1、CDR2、及CDR3序列的重鏈可變區(qū)，以及含有CDR1、CDR2、及CDR3序列的輕鏈可變區(qū)，其中(a)該重鏈可變區(qū)CDR3序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、及89的氨基酸序列，以及它們的保守性修飾；(b)該輕鏈可變區(qū)CDR3序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、及97的氨基酸序列，以及它們的保守性修飾；并且該抗體表現(xiàn)下列一種或多種特性該抗體以lxi(T"M或更小的Ku與人類BTLA相結(jié)合；該抗體基本上不與人類TrkB、PD-1、CD28、CTLA-4或ICOS相結(jié)合；該抗體抑制HVEM與BTLA的結(jié)合。(iv)該抗體刺激免疫應(yīng)答；該抗體刺激抗體應(yīng)答；該抗體抑制體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長。在其他實(shí)施方案中該抗體抑制或阻遏免疫應(yīng)答。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該重鏈可變區(qū)CDR2序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、及88的氨基酸序列，以及它們的保守性修飾；并且該輕鏈可變區(qū)CDR2序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、及96的氨基酸序列，以及它們的保守性修飾。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該重鏈可變區(qū)CDR1序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、及87的氨基酸序列，以及它們的保守性修飾；并且該輕鏈可變區(qū)CDR1序列含有選自氨基酸序列SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、及95d氨基酸序列，以及它們的保守性修飾。如在此所使用，術(shù)語"保守性序列修飾"意指不會(huì)顯著影響或改變含有該氨基酸序列的抗體的結(jié)合特性的氨基酸修飾。這種保守性修飾包括氨基酸的置換、添加、以及缺失。通過本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(例如位點(diǎn)定向誘變及PCR介導(dǎo)的誘變)可將修飾引入本公開的抗體中。保守性氨基酸置換是指以下的置換，其中氨基酸殘基被具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基替換。已經(jīng)在本領(lǐng)域中定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈的氨基酸(如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)，具有酸性側(cè)鏈的氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸)，具有不帶電荷的極性側(cè)鏈的氨基酸(如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)，具有非極性側(cè)鏈的氨基酸(如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、曱硫氨酸)，具有p-分支側(cè)鏈的氨基酸(如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)，以及具有芳香族側(cè)鏈的氨基酸(如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，本公開的抗體的CDR區(qū)中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基可以被來自相同側(cè)鏈家族的其他氨基酸殘基替代，并且使用此處說明的功能測(cè)定對(duì)已改變的抗體的保留功能(即，在以上(c)至(g)中給出的功能)進(jìn)行測(cè)試。與本7>開的抗BTLA抗體結(jié)合至相同表位的抗體在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開提供了多種抗體，它們?nèi)绫竟_的BTLA單克隆抗體中的任何抗體同樣地結(jié)合至人類BTLA的相同表位上(即，這些抗體有能力與本公開的單克隆抗體中的任何抗體進(jìn)行交叉竟?fàn)?。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，用于交叉竟?fàn)幯芯康膮⒄湛贵w可以是單克隆抗體1B4(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:l及7)或單克隆抗體E4H9(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:2及8)，或單克隆抗體3C2(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:3及9)，或單克隆抗體3C2a(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:3及10)，或單克隆抗體6A5(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:4及11)，或單克隆抗體11E2(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:5及12)，或單克隆抗體E8D9(具有的VH與Vl序列分別示于SEQIDNO:6及13)，或單克隆抗體10H6(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:74及75)，或單克隆抗體10H6a(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:74及76),或單克隆抗體4C9(具有的Vh與Vl序列分別示于SEQIDNO:85及86)。根據(jù)此類交叉竟?fàn)幍目贵w與1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、或4C9進(jìn)行交叉竟?fàn)幍哪芰Γ捎脴?biāo)準(zhǔn)的BTLA結(jié)合測(cè)定能夠鑒定此類交叉竟?fàn)幍目贵w。例如，可以使用BIAcore分析、ELISA測(cè)定或流式細(xì)胞術(shù)來證明與本公開的抗體的交叉竟?fàn)帯＠鐪y(cè)試抗體對(duì)1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、或4C9與人類BTLA結(jié)合的抑制能力說明測(cè)試抗體可以與1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a、或4C9竟?fàn)幮越Y(jié)合人類BTLA,從而與1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a或4C9一樣結(jié)合至人類BTLA相同上的表位。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、腦6、10H6a、或4C9一樣結(jié)合至人類BTLA上的相同表位上的抗體是一種人類單克隆抗體。如實(shí)施例中所述可以對(duì)這種人類單克隆抗體進(jìn)行制備并分離。工程化并修飾的抗體通過以下方式可以進(jìn)一步制備本公開的抗體使用具有在此披露的VH和/或Vt序列中的一個(gè)或多個(gè)序列的抗體作為起始材料，對(duì)經(jīng)修飾的抗體進(jìn)行工程化，這種經(jīng)修飾的抗體可能具有與起始抗體不同的特性。通過在一個(gè)或兩個(gè)可變區(qū)(即Vh和/或Vl)中，例如在一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)內(nèi)和/或在一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架區(qū)內(nèi)中修飾一個(gè)或多個(gè)殘基，可以對(duì)抗體進(jìn)行工程化。額外地或備選地，通過在一個(gè)或多個(gè)恒定區(qū)中修飾殘基，可以對(duì)抗體進(jìn)行工程化，例如以改變?cè)摽贵w的一種或多種效應(yīng)功能?？梢赃M(jìn)行的一類可變區(qū)的工程化是CDR移植?？贵w與耙抗原主要通過位于六個(gè)重鏈及輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)中的氨基酸殘基進(jìn)行相互作用。因此，CDR中的氨基酸序列在各個(gè)抗體之間比在CDR之外的序列更具有多樣性。因?yàn)镃DR序列負(fù)責(zé)大部分抗體-抗原相互作用，所以通過構(gòu)建表達(dá)載體，表達(dá)模擬特定自然發(fā)生的抗體特性的重組抗體是可能的，所述表達(dá)載體括來自自然生的抗體的CDR序列，其被移植至來自具有不同54特性的不同抗體的構(gòu)架序列(參見，例如Riechmann，L.(1998)iV"似"巡:323-327;Jones,P.W(1986)A^wr坦:522-525;Queen,C.""/(1989)iVoc.7Vfl,/.Jow/.f/^./4.處:10029-10033;Winter的美國專利號(hào)5,225,539，以及Queen等人的美國專利號(hào)5,530,101;5,585,089;5,693,762及6,180,370)。因此，本公開的另一個(gè)實(shí)施方案涉及分離的單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分，該單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分包括含有CDR1、CDR2、以及CDR3序列的重鏈可變區(qū)，該CDR1、CDR2、以及CDR3序列各包含一個(gè)氨基酸序列，所述序列分別選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87，SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、及88，以及SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、及89;以及含有CDR1、CDR2、以及CDR3序列的輕鏈可變區(qū)，該CDR1、CDR2、以及CDR3序列各包括一個(gè)氨基酸序列，所述序列分別選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、及95，SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、及96，以及SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、及97。因此，此類抗體含有單克隆抗體1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6A、以及4C9的VH與VLCDR序列，但仍有可能含有不同于這些抗體的構(gòu)架序列。這種構(gòu)架序列可以從包括種系抗體基因序列的公共DNA數(shù)據(jù)庫或已公開的參考文獻(xiàn)獲得。例如，人類重鏈及輕鏈可變區(qū)基因的種系DNA序列可以在"VBase，，人類種系序列數(shù)據(jù)庫中找到(在互聯(lián)網(wǎng)http:〃www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase中獲得)，并且在以下文獻(xiàn)中找到Kabat，E.A.，ef/(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242;Tomli謂n，I.M.，"at/.(1992)"TheRepertoireofHumanGermlineVHSequencesRevealsaboutFiftyGroupsofVHSegmentswithDifferentHypervariableLoops"/jB'W.^2:776畫798;以及Cox，J.P.L."ff/.(1994)"ADirectoryofHumanGerm-lineVHSegmentsRevealsaStrongBiasintheirUsage"http://附附"朋/.M:827-836;這些文獻(xiàn)的每一篇內(nèi)容均明確地并入本文作為參考。用序列相似性檢索方法中的一種方法(坤皮稱為GappedBLAST)將抗體蛋白序列與匯編的蛋白數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較(Altschul"(1997)7Vwc/e/cJ"Vfe/^^wrA25:3389-3402)，這種方法對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是熟知的。BLAST是一種啟發(fā)式算法，因?yàn)樵诳贵w序列與數(shù)據(jù)庫序列之間的在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的比對(duì)可能包含比對(duì)字符的高得分片段對(duì)(HSP)。通過擴(kuò)展或修正不能提高片段對(duì)分?jǐn)?shù)的片段對(duì)被稱為命中項(xiàng)(hit)。簡(jiǎn)言之，翻譯VBASE來源的核苷酸序列(A??；"c.wA/v6a^//Kw2./^/7)，并且保留FRl至FR3構(gòu)架區(qū)之間的區(qū)域(包括FRl至FR3構(gòu)架區(qū))。這些數(shù)據(jù)庫序列具有的平均長度為98個(gè)殘基。除去重復(fù)序列(它們是蛋白質(zhì)全部長度上的精確匹配)。用于蛋白質(zhì)的BLAST搜索，使用帶有默認(rèn)值的程序blastp、除低復(fù)雜性過濾(已被關(guān)閉)以外的標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)，以及BLOSUM62的置換矩陣，針對(duì)實(shí)現(xiàn)序列相配的前5個(gè)命中項(xiàng)進(jìn)行過濾。在全部六個(gè)框架中翻譯核苷,列，并且在數(shù)據(jù)庫序列的匹配片段中不具有終止密碼子的框架被視為潛在的命中項(xiàng)。進(jìn)而使用BLAST程序tblastx對(duì)此進(jìn)行確認(rèn)。該程序翻譯了全部六個(gè)框架中的抗體序列，并且將這些翻譯與在全部六個(gè)框架中被動(dòng)態(tài)翻譯的VBASE核苷酸序列進(jìn)行比較。同一性是在抗體序列與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫之間序列的全長上精確的氨基酸匹配。這些陽性項(xiàng)(同一性+取代匹配)不是相同的，而是由BLOSUM62置換矩陣所引導(dǎo)的氨基酸置換。如果抗體序列以相同的同一性匹配數(shù)據(jù)庫序列中的兩條序列，則具有最大陽性的命中項(xiàng)將被判定為匹配的序列命中項(xiàng)。擇的抗體所使用的構(gòu)架序列相似的構(gòu)架序列，例如與由本公開優(yōu)選的單克隆抗體所使用的vH2-05構(gòu)架序列(SEQIDNO:66)和/或VH2-70構(gòu)架序列(SEQIDNO:67)和/或VH4-59構(gòu)架序列(SEQIDNO:68)和/或VH3-20構(gòu)架序列(SEQIDNO:69)和/或VH3-33構(gòu)架序列(SEQIDNO:99)和/或VKA27構(gòu)架序列(SEQIDNO:70)和/或VKL18構(gòu)架序列(SEQIDNO:71)和/或VKL15構(gòu)架序列(SEQIDNO:72)和/或VK04構(gòu)架序列(SEQIDNO:100)相似。這些VHCDR1、CDR2、和CDR3序列，以及VkCDR1、CDR2、和CDR3序列可以被移植至多個(gè)構(gòu)架區(qū)上，這些構(gòu)架區(qū)具有與從中衍生出該構(gòu)架序列的種系免疫球蛋白基因中所發(fā)現(xiàn)的序列相同的序列，或者這些CDR序列可以被移植至多個(gè)構(gòu)架區(qū)上，這些構(gòu)架區(qū)與這些種系序列相比含有一個(gè)或多個(gè)突變。例如，已發(fā)現(xiàn)在某些情況下對(duì)構(gòu)架區(qū)內(nèi)的殘基進(jìn)行突變以保持或增強(qiáng)該抗體的抗原結(jié)合能力是有益的(參見例如Queen等人的美國專利號(hào)5,530,101;5，585，089;5,693,762以及6,180,370)。另一種類型的可變區(qū)修飾是在VH和/或VKCDR1、CDR2和/或CDR3區(qū)中對(duì)氨基酸殘基進(jìn)行突變，由此改善目的抗體的一種或多種結(jié)合特性(例如親和力)?？梢赃M(jìn)行定向誘變或PCR介導(dǎo)的誘變來引入一種或多種突變，并且對(duì)于抗體的結(jié)合能力、或其他目的功能特性的作用可以在體內(nèi)或體外試驗(yàn)中進(jìn)行評(píng)估，如本文所述并在實(shí)施例中所提供。優(yōu)選地引入保守性修飾(如上所述)。這些突變可以是氨基酸置換、添加、或缺失，但優(yōu)選是置換。此外，典型地在一個(gè)CDR區(qū)域中改變不超過一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)殘基。因此，在另一實(shí)施方案中，本公開提供了分離的抗-BTLA單克隆抗體，或它們的抗原結(jié)合部分，包括重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)包括(a)VHCDR1區(qū)，包括氨基酸序列，該氨基斷列選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、及87，或與SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、及87相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序列；(b)VHCDR2區(qū)域，包括氨基酸序列，該氨基,列選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78，及88，或與SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、及88相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序列；(c)VhCDR3區(qū)域，包括氨基酸序列，該氨基,列選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、及89,或與SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、及89相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序歹'J;(d)VKCDR1區(qū)域，包括氨基酸序列，該氨基酸序列選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90，及95,或與SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、卯、及95相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序列；(e)VKCDR2區(qū)域，包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基斷列選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91，及96，或與SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、及96相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序列；②VKCDR3區(qū)域，包括一個(gè)氨基酸序列，該氨基酸序列選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、及97，或與SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、及97相比具有一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)或五個(gè)氨基酸置換、缺失、或添加的氨基酸序列。本^^開的工程化抗體包括以下抗體其中在Vh和/或VK內(nèi)已經(jīng)對(duì)構(gòu)架殘基進(jìn)行了修飾，例如改進(jìn)了抗體的特性。典型地，對(duì)這種構(gòu)架進(jìn)行修飾，以降低抗體的免疫原性。例如，一個(gè)方法是將一個(gè)或多個(gè)構(gòu)架殘基"回復(fù)突變"成為相應(yīng)的種系序列。更具體地說，已經(jīng)經(jīng)歷了體細(xì)胞突變的抗體可能包含與從中衍生出該抗體的種系序列不同的構(gòu)架殘基。這些殘基可以通過將該抗體構(gòu)架序列與從中衍生出該抗體的種系序列進(jìn)行比較而被鑒定。例如，在以下表l中顯示在抗-BTLA抗體lB4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a及4C9的構(gòu)架區(qū)內(nèi)的許多與親代種系序列不同的氨基酸變化。為了將構(gòu)架區(qū)序列中氨基酸殘基中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基變回至它們的種系構(gòu)型，通過例如位點(diǎn)定向誘變或PCR介導(dǎo)的誘變，可以將體細(xì)胞突變"回復(fù)突變，，為該種系序列。圖7顯示了1B4的Vh區(qū)域與親代種系VH2-05的氨基酸序列的比對(duì)。圖8顯示了1B4的Vk區(qū)域與親代種系VkA27的氨基酸序列的比對(duì)。圖9顯示了E4H9的VH區(qū)域與親代種系VH2-70的氨基酸序列的比對(duì)。圖10顯示了E4H9的Vk區(qū)域與親代種系VkA27的氨基酸序列的比對(duì)。圖11顯示了3C2的VH區(qū)域與親代種系VH4-59的氨基酸序列的比對(duì)。表12顯示了3C2的Vk區(qū)域與親代種系VkL18的氨基酸序列的比對(duì)。圖13顯示了3C2a的Vk區(qū)域與親代種系VkL15的氨基酸序列的比對(duì)。圖14顯示了6A5的VH區(qū)域與親代種系VH2-05的氨基酸序列的比對(duì)。圖15顯示了6A5的Vk區(qū)域與親代種系VkA27的氨基,列的比對(duì)。圖16顯示了11E2的VH區(qū)域與親代種系VH3-20的氨基酸的比對(duì)。圖17顯示了11E2的Vk區(qū)域與親代種系VkL15的氨基^列的比對(duì)。圖18顯示了E8D9的Vh區(qū)域與親代種系VH2-05的氨基酸序列的比對(duì)。圖19顯示了E8D9的Vk區(qū)域與親代種系VkA27的氨基酸序列的比對(duì)。圖22顯示了10H6的VH區(qū)域與親代種系VH3-33的氨基酸序列的比對(duì)。圖23顯示了10H6的Vk區(qū)域與親代種系Vk04的氨基酸序列的比對(duì)。圖24顯示了10H6a的Vk區(qū)域與親代種系Vk04A27的氨基酸序列的比對(duì)。圖26顯示了4C9的VH區(qū)域與親代種系VH2-05的氨基酸序列的比對(duì)。圖27顯示了4C9的Vk區(qū)域與親代種系VkA27的氨基酸序列的比對(duì)。表l.從種系構(gòu)型對(duì)1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2抗體進(jìn)行修飾。<table>tableseeoriginaldocumentpage59</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>另一種類型的構(gòu)架修飾涉及對(duì)構(gòu)架區(qū)內(nèi)一個(gè)或多個(gè)殘基，或甚至對(duì)一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)域內(nèi)的一個(gè)或多個(gè)殘基進(jìn)行突變，以去除T細(xì)胞表位，由此降低該抗體的潛在免疫原性。這一方法也被稱為"去免疫原化"，并且在Carr等人的美國專利乂^開號(hào)20030153043中有進(jìn)一步的詳細(xì)說明。除了在構(gòu)架區(qū)或CDR區(qū)域內(nèi)進(jìn)行的j務(wù)飾之外，或作為其替代，還可以對(duì)本公開的抗體進(jìn)行工程化，以在Fc區(qū)域內(nèi)也包括一些修飾，典型地改變?cè)摽贵w的一種或多種功能特性，例如血清半衰期、補(bǔ)體固定(complementfixation)、Fc受體結(jié)合、和/或依賴抗原的細(xì)胞毒性作用。此外，本7>開的抗體可以祐:化學(xué)修飾(例如，可以將一個(gè)或多個(gè)化學(xué)物部分附著至該抗體)，或被修飾以改變其糖基化作用，再次以便改變?cè)摽贵w的一個(gè)或多個(gè)功能特性。以下對(duì)這些實(shí)施方案中的每一個(gè)均進(jìn)行進(jìn)一步詳細(xì)的說明。Fc區(qū)中殘基的編號(hào)是Kabat的EU索引編號(hào)。在一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)CH1的鉸鏈區(qū)進(jìn)行修飾，使得鉸鏈區(qū)中的半胱氨酸殘基的個(gè)數(shù)發(fā)生變化(例如，增加或減少)。在Bodmer等人的美國專利號(hào)5，677，425中進(jìn)一步說明了該方法。CH1的鉸鏈區(qū)中的半胱氨酸殘基的數(shù)目發(fā)生變化，例如便于組裝輕鏈及重鏈或者增大或減小該抗體的穩(wěn)定性。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)抗體的Fc鉸鏈區(qū)進(jìn)行突變以減小該抗體的生物半衰期。更確切地說，將一個(gè)或多個(gè)氨基酸突變引入Fc鉸鏈片段的CH2-CH3結(jié)構(gòu)域界面區(qū)域，使得相對(duì)于天然Fc鉸鏈域的葡萄球菌A蛋白(StaphylococalproteinA，SpA)的結(jié)合而言，該抗體減弱了SpA的結(jié)合。Ward等人的美國專利號(hào)6,165,745更詳細(xì)地說明了這一方法。在另一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)該抗體進(jìn)行修飾以增大其生物半衰期。不同的方法是可能的。例如，如Ward的美國專利號(hào)6,277,375所述，引入以下突變中的一個(gè)或多個(gè)突變T252L、T254S、T256F。備選地，為增加生物半衰期，該抗體可以在CH1或CL區(qū)域中發(fā)生變化以包括從IgG的Fc區(qū)域的CH2結(jié)構(gòu)域的兩個(gè)環(huán)處獲得的補(bǔ)救受體(salvagereceptor)結(jié)合表位，如Presta等人的美國專利號(hào)5，869，046及6，121，022中所述。在另外的其他的實(shí)施方案中，通過用不同的氨基酸殘基替換至少一個(gè)氨基酸殘基以改變Fc區(qū)，從而改變?cè)摽贵w的一種或多種效應(yīng)功能。例如，選自氨基酸殘基234、235、236、237、297、318、320及322的一個(gè)或多個(gè)氨基酸可以被不同的氨基酸殘基所替換，使得抗體對(duì)于效應(yīng)物配體而言具有已改變的親和力，但仍保留該親本抗體的抗原結(jié)合能力。例如，親和力被改變的效應(yīng)物配體可以是Fc受體或補(bǔ)體的Cl成分。Winter等人的美國專利號(hào)5,624,821及5,648,260進(jìn)一步詳細(xì)說明了這一方法。在另一個(gè)實(shí)例中，選自氨基酸殘基329、331及322的一個(gè)或多個(gè)氨基酸可以被不同的氨基酸殘基所替換，使得該抗體具有已改變的Clq結(jié)合能力和/或減低的或消除的依賴補(bǔ)體的細(xì)胞毒性(CDC)。Idusogie等人的美國專利號(hào)6,194,551進(jìn)一步詳細(xì)說明了這一方法。在另一個(gè)實(shí)例中，改變氨基酸位置231及239中的一個(gè)或多個(gè)氨基酸，由此改變抗體固定補(bǔ)體的能力。Bodmer等人的PCT公開WO94/29351中進(jìn)一步詳細(xì)說明了這一方法。在另一個(gè)實(shí)例中，為了提高該抗體介導(dǎo)抗體依賴性細(xì)胞毒作用(ADCC)的能力和/或提高該抗體對(duì)Fcy受體的親和性，通過在下列位置修飾一個(gè)或多個(gè)氨基酸，對(duì)Fc區(qū)域進(jìn)行了修飾238、239、248、249、252、254、255、256、258、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。Presta的PCT公開文件WO00/42072中進(jìn)一步詳細(xì)地說明了這一方法。此外，在人類IgGl上已做出針對(duì)FcyRI、FcyRII、FcyREI及FcRn的結(jié)合位點(diǎn)的圖譜，并說明了具有改善的結(jié)合的變體(參見Shields,R丄."cr/.(2001)/.C7^g附.276:6591-6604)。在位置256、2卯、298、333、334及339具有的特定突變顯示出改善對(duì)FcYRIII的結(jié)合。另外，下列組合突變體顯示出改善FcyRIII的結(jié)合T256A/S298A，S298A/E333A，S298A/K224A及S298A/E333A/K334A。在再一個(gè)實(shí)施方案中，對(duì)抗體的糖基化進(jìn)行了修飾。例如，可以制備去糖基化的抗體(即，該抗體缺乏糖基化)?？梢愿淖兲腔饔?，以(例如)增加該抗體對(duì)抗原的親和力。例如，通過在該抗體序列中改變一個(gè)或多個(gè)糖基化的位點(diǎn)可以實(shí)現(xiàn)這種碳水化合物修飾。例如，可以進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)氨基酸的置換，這導(dǎo)致去除一個(gè)或多個(gè)可變區(qū)構(gòu)架的糖基化位點(diǎn)，由此在該位點(diǎn)處消除糖基化作用。這種去糖基化作用可以提高該抗體對(duì)抗原的親和力。Co等人的美國專利號(hào)5,714,350及6，350，861進(jìn)一步詳細(xì)地說明了這一方法。額外地或備選地，可以制備具有改變的糖基化類型的抗體，例如具有減少的巖藻糖殘基含量的低巖藻糖化抗體或具有增加的二等分GlcNac結(jié)構(gòu)的抗體。已經(jīng)證實(shí)這種已改變的糖基化模式可以提高一些抗體的ADCC能力。例如，通過在具有被改變的糖基化機(jī)器的宿主細(xì)胞中表達(dá)該抗體可以實(shí)現(xiàn)這種碳水化合物修飾。具有被改變的糖基化機(jī)器的細(xì)胞在本領(lǐng)域中描述，并可以用作表達(dá)本公開的重組抗體的宿主細(xì)胞，由此產(chǎn)生具有被改變的糖基化作用的抗體。例如，細(xì)胞系Ms704、Ms705、及Ms709缺乏巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶基因FUT8(a(l，6)巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶)，使得在Ms704、Ms705，及Ms709細(xì)胞系中表達(dá)的抗體在它們的碳水化合物上缺乏巖藻糖。Ms704、Ms705以及Ms709FUT8一細(xì)胞系是通過使用兩種替換載體對(duì)CHO/DG44細(xì)胞中的FUT8基因進(jìn)行靶向破壞之后產(chǎn)生的(參見Yamane等人的美國87:614-22)。作為另一個(gè)實(shí)例，Hanai等人的EP1,176,195描述了一種帶有在功能上被破壞的FUT8基因的細(xì)胞系(該基因編碼巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶)，使得通過減少或消除a1，6鍵相關(guān)的酶，在這種細(xì)胞系中表達(dá)的抗體表現(xiàn)出低巖藻糖基化。Hanai等人也描述了多種細(xì)胞系，這些細(xì)胞系具有用于將巖藻糖添加至N-乙酰葡糖胺的低酶活性(該N-乙酰葡糖胺結(jié)合至該抗體的Fc區(qū)域)，或者不具有該酶活性，例如大鼠骨髓瘤細(xì)胞系YB2/0(ATCCCRL1662)。Presta的PCT公開號(hào)WO03/035835描述了一種變異CHO細(xì)胞系Lecl3細(xì)胞，其將巖藻糖連接至與Asn(297)相連的碳水化合物的能力降低，這也導(dǎo)致在該宿主細(xì)胞中表達(dá)的抗體的低巖藻糖化(還可參見Shields,R.L.(2002)/AW.C7^附.^22:26733-26740)。Umana等人的PCT公開文件WO99/54342中描述了經(jīng)過工程化而表達(dá)修飾糖蛋白的糖基轉(zhuǎn)移酶(例如，P(l，4)-N-乙酰葡糖胺基轉(zhuǎn)移酶m(GnTm))的細(xì)胞系，使得在這種經(jīng)過工程化的細(xì)胞系中表達(dá)的抗體具有增多的二等分GlcNac結(jié)構(gòu)，這導(dǎo)致抗體的ADCC活性提高(還可參見UmanaC"/.(1999)7V"A12:176-180)。作為替代，可以使用巖藻糖苷酶切去該抗體的巖藻糖殘基。例如，該巖藻糖苷酶a-L-巖藻糖苷酶從抗體上除去巖藻糖殘基(Tarentino，A丄.(1975)U:5516-23)。由本^Hf在此所考慮的抗體的另一種修飾是聚乙二醇化(pegylation)。對(duì)抗體進(jìn)行聚乙二醇化以便(例如)增加抗體的生物學(xué)半衰期(例如血清半衰期)。為了對(duì)抗體進(jìn)行聚乙二醇化，典型地在使一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇(PEG)基團(tuán)附著至該抗體或抗體片段的條件下，將該抗體，或其片段與PEG(例如PEG的反應(yīng)活性酯或醛衍生物)進(jìn)行反應(yīng)。優(yōu)選地，使用反應(yīng)活性PEG分子(或一種類似的反應(yīng)性的水溶性聚合物)，通過?；磻?yīng)或烷基化反應(yīng)進(jìn)行聚乙二醇化。在此使用的術(shù)語"聚乙二醇"旨在涵蓋已用于衍生其他蛋白的PEG的任何形式，例如單(C1-C10)烷氧基聚乙二醇或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-馬來酰亞胺。在某些實(shí)施方案中，有待聚乙二醇化的抗體是去糖基化的抗體。對(duì)蛋白進(jìn)行聚乙二醇化的方法在本領(lǐng)域中是已知的，并可以被應(yīng)用于本公開的抗體。參見，例如Nishimura等人的EP0154316及Ishikawa等人的EP0401384。工程化抗體的方法如上所述，通過<務(wù)飾VH和/或Vk序列，或其附著的一個(gè)或多個(gè)恒定區(qū)，可以使用具有在此披露的Vh和Vk序列的抗-BTLA抗體以產(chǎn)生新的抗-BTLA抗體。因此，在本公開的另一方面，使用本公開的抗-BTLA抗體(例如1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、或E8D9)的結(jié)構(gòu)特征，產(chǎn)生在結(jié)構(gòu)上相關(guān)的抗-BTLA抗體，該抗體保留了本公開抗體的至少一種功能特性，例如結(jié)合人類BTLA。例如，如以上所討論，可以將1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、或E8D9的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)，或它們的突變與已知的構(gòu)架區(qū)和/或其他CDR重組組合，以產(chǎn)生額外的重組工程化的本公開的抗-BTLA抗體。其他類型的修飾包括上節(jié)中描述的那些修飾。用于工程化方法的起始材料是在此提供的VH和/或Vk序列中的一個(gè)或多個(gè)序列，或它們的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)。為產(chǎn)生工程化的抗體，不必實(shí)際制備出一種抗體(即，表達(dá)成蛋白質(zhì))，該抗體具有在此提供的Vh和/或Vk序列中的一個(gè)或多個(gè)序列，或它們的一個(gè)或多個(gè)CDR區(qū)。相反，使用這個(gè)或這些序列中含有的信息作為起始材料，生成源自這個(gè)或這些原始的序列的"第二代"序列，并接著制備這個(gè)或這些"第二代"序列，并將其表達(dá)成蛋白質(zhì)。因此，在另一個(gè)實(shí)施方案中，本公開提供了一種制備抗-BTLA抗體的方法，包4舌(a)提供(i)重鏈可變區(qū)抗體序列，其包括CDR1序列，該序列選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87，CDR2序列，該序列選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88,和/或CDR3序列，該序列選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89;和/或(ii)輕鏈可變區(qū)抗體序列，其包括CDR1序列，該序列選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95，CDR2序歹'j，該序列選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96，和/或CDR3序列，該序列選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97;(b)改變?cè)谥劓溈勺儏^(qū)抗體序列和/或輕鏈可變區(qū)抗體序列中的至少一個(gè)氨基酸殘基，以產(chǎn)生至少一種被改變的抗體序列；并且(c)將^f皮改變的抗體序列表達(dá)成蛋白質(zhì)?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)來制備并表達(dá)被改變的抗體序列。優(yōu)選地，由被改變的一種或多種抗體序列編碼的這種抗體是這樣一種抗體，它保留了在此所述的抗-BTLA抗體的一種、幾種或全部功能特性，該功能特性包括但不限于(a)該抗體以lxlO力M或更小的KD與人類BTLA相結(jié)合；(b)該抗體基本上不與人類TrkB、PD-1、CD28、CTLA-4或ICOS相結(jié)合；(c)該抗體抑制HVEM與BTLA的結(jié)合；(d)該抗體刺激免疫應(yīng)答；(e)該抗體刺激抗體應(yīng)答；(f)該抗體在體內(nèi)抑制腫瘤細(xì)胞的生長。在其他實(shí)施方案中，抗體抑制或阻遏免疫應(yīng)答。使用本領(lǐng)域已知的和/或在此所述的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定法例如實(shí)例中給出的測(cè)定法(例如流式細(xì)胞術(shù)，結(jié)合測(cè)定)可以對(duì)改變的抗體的功能特性進(jìn)行評(píng)估。在本^^開的工程化抗體的方法的某些實(shí)施方案中，可沿抗-BTLA抗體編碼序列的全長或一部分中隨機(jī)地或選擇性地引入突變，并針對(duì)結(jié)合活性和/或在此所述的其他功能特性對(duì)得到的經(jīng)修飾的抗-BTLA抗體進(jìn)行篩選。突變方法已經(jīng)在本領(lǐng)域中進(jìn)行說明。例如，Short的PCT公開文件WO02/092780說明了使用飽和誘變、合成連接裝配、或它們的組合來生成并篩選抗體突變的方法。備選地，Lazar等人的PCT公開文件WO03/074679說明了使用計(jì)算機(jī)篩選方法優(yōu)化抗體的理化特性的方法。編碼本公開的抗體的核酸分子本公開的另一個(gè)方面涉及對(duì)本公開的抗體進(jìn)行編碼的核酸分子。這些核酸可以存在于整個(gè)細(xì)胞中、細(xì)胞裂解液中、或者以部分純化或基本上純的形式存在。當(dāng)通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)(包括堿/SDS處理，CsCl成帶、柱層析、瓊脂糖凝膠電泳以及本領(lǐng)域的其他熟知技術(shù))從其他細(xì)胞成分或其他雜質(zhì)(如其他細(xì)胞核酸或蛋白質(zhì))中純化出核酸時(shí)，該核酸是"分離的"或"使之基本上是純的"。參見F.Ausubel"a/.(1987)CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingandWileyInterscience，NewYork。本公開的核酸可以是，例如DNA或RNA，并且可以含有或不含有內(nèi)含子序列。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，核酸為cDNA分子。使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)可以獲得本公開的核酸。對(duì)于雜交瘤表達(dá)的抗體(例如，從以下進(jìn)一步說明的攜帶人類免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因小鼠制備的雜交瘤)而言，通過標(biāo)準(zhǔn)的PCR擴(kuò)增或cDNA克隆技術(shù)可以獲得編碼雜交瘤產(chǎn)生的抗體的輕鏈和重鏈的cDNA。對(duì)于從免疫球蛋白基因文庫中獲得的抗體(例如使用噬菌體展示技術(shù))而言，可以從該文庫回收編碼該抗體的核酸。本/^開的優(yōu)選的核酸分子是對(duì)1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、10H6a或4C9單克隆抗體的Vh和VL序列進(jìn)行編碼的核酸分子。對(duì)1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6，以及4C9的Vh序列進(jìn)行編碼的DNA序列分別顯示在SEQIDNO:53、54、55、56、56、58、83及93中。對(duì)1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6以及4C9的VL序列進(jìn)行編碼的DNA序列分別顯示在SEQIDNO:59、60、61、62、63、64、65、84、98、以及94中。一旦獲得了編碼Vh和VL區(qū)段的DNA片段，則通過標(biāo)準(zhǔn)的重組DNA技術(shù)可以進(jìn)一步操作這些DNA片段，例如將可變區(qū)基因轉(zhuǎn)變成全長抗體鏈基因、Fab片段基因或scFv基因。在這些操作中，編碼VL或VH的DNA片段被有效連接至編碼另一種蛋白質(zhì)(例如抗體恒定區(qū)或柔性接頭)的另一條DNA片段。在此使用的術(shù)語"有效連接"意指連接兩條DNA片段，使得由這兩條DNA片段編碼的氨基,列保留在讀框內(nèi)。通過將編碼Vh的DNA有效連接至另一個(gè)編碼重鏈恒定區(qū)(CH1、CH2及CH3)的DNA分子，可以將編碼VH區(qū)的分離的DNA轉(zhuǎn)化成全長重鏈基因。人類重鏈恒定區(qū)基因的序列在本領(lǐng)域中是已知的(參見例如Kabat，E.A.，dal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242),并且包含這些區(qū)域的DNA片段可以通過標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增來獲得。該重鏈恒定區(qū)可以是IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定區(qū)，但最優(yōu)選是IgGl或IgG4恒定區(qū)。對(duì)于Fab片段重鏈基因而言，可以將編碼Vh的DNA有效連接至另一個(gè)僅對(duì)重鏈CHI恒定區(qū)進(jìn)4亍編碼的DNA分子。通過將編碼VL的DNA有效連接至另一個(gè)編碼輕鏈恒定區(qū)CL的DNA分子上，可以將編碼V^區(qū)的分離的DNA轉(zhuǎn)化成全長輕鏈基因(以及Fab輕鏈基因)。人類輕鏈恒定區(qū)基因序列在本領(lǐng)域中是已知的(參見例如Kabat，E.A.，elal.(1991)SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices,NIHPublicationNo.91-3242)，并且通過標(biāo)準(zhǔn)PCR擴(kuò)增可以獲得包含這些區(qū)的DNA片段。該輕鏈恒定區(qū)可以是k或k恒定區(qū)，但最優(yōu)選是k恒定區(qū)。為了產(chǎn)生scFv基因，將編碼VH和VL的DNA片段有效連接至編碼柔性接頭的另一條片段，例如編碼氨基酸序列(Gly4-Ser)3，使得V^和Vh序列可表達(dá)為連續(xù)的單鏈蛋白，其中Vh和Vt區(qū)域通過柔性接頭連接(參見，例如BirdC"/.(1988)5Wewce2il:423-426;HustonCW(1988)iVoc.A^/.爿cflflf.Sc/.t/5J^:5879-5883;McCafferty"(1990)iVa似re348:552-554)。本公開的單克隆抗體的生產(chǎn)可以通過多種技術(shù)產(chǎn)生本公開的單克隆抗體(mAb)，該技術(shù)包括常規(guī)的單克隆抗體方法學(xué)，例如KohlerandMilstein(1975)7V"似"495的標(biāo)準(zhǔn)體細(xì)胞雜交技術(shù)。雖然優(yōu)選體細(xì)胞雜交步驟，但是原則上可以釆用其他用于生產(chǎn)單克隆抗體的技術(shù)，例如B淋巴細(xì)胞的病毒性轉(zhuǎn)化或致癌性轉(zhuǎn)化。用于制備雜交瘤的優(yōu)選的動(dòng)物系統(tǒng)是鼠類系統(tǒng)。在小鼠中產(chǎn)生雜交瘤是充分確立的程序。用于分離被免疫的脾細(xì)胞以進(jìn)行融合的免疫方案和技術(shù)在本領(lǐng)域中是已知的。融合伴倡(例如鼠骨髓瘤細(xì)胞)和融合程序也是已知的?；谌缟纤鲋苽涞氖箢悊慰寺】贵w的序列，可以制備本公開的嵌合抗體或人源化抗體。從目的鼠類雜交瘤可以獲得對(duì)重鏈和輕鏈免疫球蛋白進(jìn)行編碼的DNA，并且使用標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行工程化，以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。例如，為生成嵌合抗體，使用本領(lǐng)域中已知的方法可以將鼠類可變區(qū)與人類恒定區(qū)連接(參見例如Cabilly等人的美國專利號(hào)4,816,567)。為了產(chǎn)生人源化抗體，使用本領(lǐng)域已知的方法可以將鼠類CDR區(qū)插入人類構(gòu)架區(qū)(參見例如Winter的美國專利號(hào)5,225,539及Queen等人的美國專利號(hào)5，530，101;5,585,089;5,693,762以及6,180,370)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開的抗體是人類單克隆抗體。使用攜帶部分人免疫系統(tǒng)而不是小鼠系統(tǒng)的轉(zhuǎn)基因小鼠或轉(zhuǎn)染色體小鼠，可以產(chǎn)生針對(duì)BTLA的這種人類單克隆抗體。這些轉(zhuǎn)基因小鼠及轉(zhuǎn)染色體小鼠包括在此分別稱為HuMAb小鼠及KMmiceTM的小鼠，并在此統(tǒng)稱為"人類Ig小鼠"。HuMAbmouse(Medarex，Inc.)含有對(duì)非重排的人重鏈(n及y)以及k輕鏈免疫球蛋白序列進(jìn)行編碼的人類免疫球蛋白基因微基因座，并含有使內(nèi)源性ji和k鏈基因座失活的耙向突變(參見例如Lonberg，W(1994)Nature368(6474)856-859)。因此，這些小鼠表現(xiàn)出小鼠IgM或k的表達(dá)降低，并且響應(yīng)于免疫應(yīng)答，被導(dǎo)入的人類重鏈和輕鏈轉(zhuǎn)基因經(jīng)歷了類別轉(zhuǎn)換及體細(xì)胞突變，以產(chǎn)生高親和力的人類IgGK單克隆抗體(Lonberg,N.Ca/.(1994),s"/;m;Lonberg，N.(1994)/to必00A:jE!xygW附ew似/尸feflr附fc0/ogv113:49-101;Lonberg，N.andHuszar,D.(1995)/rtferw.及ev./附附"wo/.J^:65-93，以及Harding,F.andLonberg，N.(1995)WKJc"J.5W.2^:536-546中綜述)。HuMAb小鼠的制備和用途，以及由這種小鼠攜帶的基因組修飾，進(jìn)一步記載于Taylor,"tf/.(1992)jVwc/eZc/i"Vfe及esefl"/r2^:6287-6295;Chen,J."a/.(1993)/wfmiflft'owfir//附附mwo/柳^:647-656;Tuaillon"cr/.(1993)尸度.AM<7&42^:3720-3724;ChoiWa/.(1993)7VW"re117-123;Chen，J.C"A(1993)U:821-830;TuaillonWfl/.(1994)丄/附附"wo/.巡:2912-2920;Taylor,L."/.(1994)/"&謹(jǐn)".麵//畫謝/柳f:579國591;以及Fishwild，D.C(1996)7VW""祝otecA/k/ogyJi:845-851，所有這些文獻(xiàn)的內(nèi)容完整并入本文作為參考。進(jìn)一步參見，均為Lonberg及Kay的美國專利號(hào)5,545,806;5,569,825;5,625,126;5，633，425;5,789,650;5,877,397;5,661,016;5,814,318;5,874,299;及5,770,429;Surani等人的美國專利號(hào)5,545,807;均為Lonberg及Kay的PCT公開號(hào)WO92/03918，WO93/12227,WO94/25585，WO97/13852,WO98/24884及WO99/45962;以及Korman等人的PCT公開號(hào)WO01/14424。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用在轉(zhuǎn)基因及轉(zhuǎn)染色體上攜帶人類免疫球蛋白序列的小鼠(例如，攜帶一個(gè)人類重鏈轉(zhuǎn)基因及一個(gè)人類輕鏈轉(zhuǎn)染色體的小鼠)可以生產(chǎn)本公開的人類抗體。這種小鼠在此被稱為"KMmiceTM，，，在Ishida等人的PCT公開文件WO02/43478中有詳細(xì)的說明。再者，備選的表達(dá)人類免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物系統(tǒng)在本領(lǐng)域內(nèi)是可以獲得的，并且可以用于生產(chǎn)本公開的抗-BTLA抗體。例如，可以使用被稱作Xenomouse(Abgenix,Inc,)的備選轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)；這種小鼠記載于，例如Kucherlapat等人的美國專利號(hào)5，939，598;6，075，181;6,114,598;6,150,584及6,162,963中。此外，備選的表達(dá)人類免疫球蛋白基因的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物系統(tǒng)在本領(lǐng)域內(nèi)是可以獲得的，并且可以用于生產(chǎn)本公開的抗-BTLA抗體。例如，可以使用被稱作"TC小鼠"的小鼠，該小鼠同時(shí)攜帶人類重鏈轉(zhuǎn)染色體和人類輕鏈轉(zhuǎn)染色體；這種小鼠記載于Tomizuka"(2000)A^汰Jcflrf.CAS^422:722-727中。此外，在本領(lǐng)域中已經(jīng)說明了攜帶人類重鏈轉(zhuǎn)染色體和人類輕鏈轉(zhuǎn)染色體的奶牛(KuroiwaW"/.(2002)TV",""祝otec/^o/ogy^:889-894)，并且這些奶?？梢员挥糜谏a(chǎn)本公開的抗-BTLA抗體。通過用于篩選人類免疫球蛋白基因文庫的噬菌體展示方法也可以制備本公開的人類單克隆抗體。這種用于分離人類抗體的噬菌體展示方法在本領(lǐng)域內(nèi)已經(jīng)建立。參見例如Ladner等人的美國專利號(hào)5,223,409;5,403,484;以及5,571,698;Dower等人的美國專利號(hào)5,427,908及5,580,717;McCafferty等人的美國專利號(hào)5，969，108及6,172,197;以及Griffiths等人的美國專利號(hào)5，885，793;6,521,404;6,544,731;6，555，313;6,582,915以及6,593,081。使用SCID小鼠也可以制備本公開的人類單克隆抗體，其中人類免疫細(xì)胞已被重建入SCID小鼠，使得免疫時(shí)可產(chǎn)生人類抗體反應(yīng)。這種小鼠記栽于，例如Wilson等人的美國專利號(hào)5,476,996及5,698,767中。人類Ig小鼠的免疫當(dāng)人類Ig小鼠被用于生產(chǎn)本公開的人類抗體時(shí)，如Lonberg，N.(1994)7Vflm"368(6474):856-859;Fishwild，D."ff/(1996)7V"似"必/W"A腳/^);M:845-851;以及PCT公開文件WO98/24884及WO01/14424所述，用經(jīng)純化的或富集的BTLA抗原和/或重組BTLA、或BTLA融合蛋白制劑對(duì)這種小鼠進(jìn)行免疫。優(yōu)選地，這些小鼠在初次輸注時(shí)是6至16周齡。例如，純化的或重組的BTLA抗原制劑(5至50pg)可用于經(jīng)腹膜內(nèi)對(duì)人類Ig小鼠進(jìn)行免疫。在以下實(shí)施例1中說明了用于產(chǎn)生抗BTLA的全長人類單克隆抗體的詳細(xì)步驟。關(guān)于不同抗原的積累的經(jīng)驗(yàn)已顯示，轉(zhuǎn)基因小鼠在以下條件下會(huì)應(yīng)答當(dāng)用Ribi(SigmaM6536:MPL+TDM)中的抗原經(jīng)腹膜內(nèi)(IP)進(jìn)行初始免疫，隨后每隔一周用佐劑中的抗原進(jìn)行IP免疫(達(dá)到共6次)然而，也發(fā)現(xiàn)除Ribi(弗氏完全佐劑及弗氏不完全佐劑)之外的佐劑也是有效的。另外，也發(fā)現(xiàn)在沒有佐劑的情況下整個(gè)細(xì)胞具有高度的免疫原性。在免疫過程中可以用眶后取血得到的血漿樣品監(jiān)測(cè)免疫應(yīng)答。通過ELISA(如以下所述)可以篩選該血漿，并且具有足夠滴度的抗-BTLA人類免疫球蛋白的小鼠可用于融合?？梢栽谔幩啦⑷〕銎⑴K前的3天，通過靜脈內(nèi)對(duì)小鼠用抗原加強(qiáng)。預(yù)期對(duì)每個(gè)免疫可能需要進(jìn)行2至3次融合。每種抗原通常對(duì)6至24只小鼠進(jìn)行免疫。通常使用HCo7與HCo12品種。另夕卜，HCo7與HCo12兩個(gè)轉(zhuǎn)基因均可以被共同培育成單一小鼠，該小鼠具有兩種不同的人類重鏈轉(zhuǎn)基因(HCo7/HCo12)。備選地或額外地，如實(shí)施例1所述，可以使用KMmouseTM系。產(chǎn)生人單克隆抗體的雜交瘤的生成為了生成產(chǎn)生本公開的人單克隆抗體的雜交瘤，可從被免疫的小鼠分離脾細(xì)胞和/或淋巴結(jié)細(xì)胞，并且與合適的無限增殖化細(xì)胞系(例如小鼠骨髓瘤細(xì)胞系)融合。針對(duì)抗原特性抗體的產(chǎn)生可以對(duì)得到的雜交瘤進(jìn)行篩選。例如，用50%PEG可以將來自經(jīng)免疫小鼠的脾淋巴細(xì)胞的單細(xì)胞懸液與P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤細(xì)胞(ATCC，CRL1580)融合。將大約2xl()S細(xì)胞接種在平底微量滴定板上，隨后在以下選擇性培養(yǎng)基內(nèi)培育2周該培養(yǎng)基含有10%FBS、3-5%Origen(IGEN)、OPI補(bǔ)充成分(Sigma05003:1.1x103MOxalo乙酸、4.5x104M丙酮酸鈉、以及24國際單位/L牛胰島素)、4mML-谷氨酰胺、0.055mM2-巰基乙醇、50單位/ml青霉素、50mg/ml鏈霉素、以及l(fā)xHAT(SigmaH0262)。在大約2周后，可以將細(xì)胞培養(yǎng)于以HT(SigmaH0137)替代HAT的培養(yǎng)基中。然后可以通過ELISA篩選這些單個(gè)孔中的人單克隆IgG抗體?？梢詫⒎置诳贵w的雜交瘤再次平板接種，再篩選，并且如果仍然是對(duì)人類IgG陽性的，則可以通過有限稀釋將該雜交瘤進(jìn)行亞克隆至少2次。然后可以在體外培養(yǎng)穩(wěn)定的亞克隆以便在組織培養(yǎng)基中產(chǎn)生少量抗體用于表征。為了純化人類單克隆抗體，可以將已選擇的雜交瘤培養(yǎng)于2升的旋瓶中用于單克隆抗體純化。可以對(duì)上清液進(jìn)行過濾并濃縮，之后用A蛋白-瓊脂糖(Pharmacia,Piscataway，N.J.)進(jìn)行親和層析。通過凝膠電泳及高效液相色譜可以檢查被洗脫的IgG以確保純度?？梢詫⒃摼彌_液交換為PBS，并且通過OD，使用1.43的消光系數(shù)確定其濃度。可以將單克隆抗體等份，并保存于-80。C。產(chǎn)生單克隆抗體的轉(zhuǎn)染瘤的生成使用(例如)本領(lǐng)域中熟知的重組DNA技術(shù)及基因轉(zhuǎn)染方法的結(jié)合，在宿主細(xì)胞轉(zhuǎn)染瘤中也可以產(chǎn)生本公開的抗體(例如Morrison,S.(1985)229:1202)。例如，為了表達(dá)抗體，或它們的抗體片段，可以通過標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)(例如，使用表達(dá)目的抗體的雜交瘤的PCR擴(kuò)增或cDNA克隆)獲得對(duì)部分或全長輕鏈和重鏈進(jìn)行編碼的DNA,并且可以將這些DNA插入至表達(dá)載體中，使得這些基因被有效連接至轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列。在本文中，術(shù)語"有效連接"意指將抗體基因連接進(jìn)入載體，使得載體中轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列起到其調(diào)節(jié)抗體基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯的預(yù)期功能。對(duì)表達(dá)載體及表達(dá)控制序列進(jìn)行選擇以便與所使用的表達(dá)宿主細(xì)胞相容。可以將該抗體輕鏈基因與該抗體重鏈基因插入至單獨(dú)的載體中，或者更典型地是將兩個(gè)基因均插入至相同的表達(dá)載體中。通過標(biāo)準(zhǔn)的方法(例如，連接抗體基因片段和載體上的互補(bǔ)限制位點(diǎn)，或者如果不存在限制位點(diǎn)則進(jìn)行平端連接)將這些抗體基因插入至該表達(dá)載體中?？梢酝ㄟ^以下方法將本文所述的該抗體的輕鏈和重鏈可變區(qū)用于生產(chǎn)任何抗體同種型的全長抗體基因?qū)⑤p鏈和重鏈可變區(qū)插入至已經(jīng)對(duì)希望的同種型的重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)進(jìn)行編碼的表達(dá)載體中，使得Vh區(qū)段有效連接至栽體中的Ch區(qū)段，并且將VK區(qū)段有效連接至載體中的CL區(qū)段。另外地或備選地，重組的表達(dá)載體可以編碼一種信號(hào)肽，該信號(hào)肽有助于從宿主細(xì)胞中分泌抗體鏈。可以將抗體鏈基因克隆進(jìn)入該載體，使得該信號(hào)肽符合讀框地被連接至該抗體鏈基因的氨基末端。該信號(hào)肽可以是免疫球蛋白信號(hào)肽或者是異源的信號(hào)肽(即，來自非免疫球蛋白的信號(hào)肽)。本公開的重組表達(dá)載體除了抗體鏈基因之外，還攜帶在宿主細(xì)胞中調(diào)控抗體鏈基因表達(dá)的調(diào)節(jié)序列。術(shù)語"調(diào)節(jié)序列，，意指包括啟動(dòng)子、增強(qiáng)子以及控制抗體鏈基因的轉(zhuǎn)錄或翻譯的其他表達(dá)控制元件(例如，多聚腺苷酸化信號(hào))。這種調(diào)控序列被描述于，例如Goeddd(GeneExpressionTechnology.MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego，CA(1990))中。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)了解，表達(dá)載體的設(shè)計(jì)，包括調(diào)節(jié)序列的選擇，可以依賴于以下因素，如待轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇、希望的蛋白質(zhì)的表達(dá)水平等。用于哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞表達(dá)的優(yōu)選調(diào)節(jié)序列包括指導(dǎo)蛋白質(zhì)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高水平表達(dá)的病毒元件，例如來自巨細(xì)胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(例如，腺病毒主要晚期啟動(dòng)子(AdMLP))及多瘤病毒的啟動(dòng)子和/或增強(qiáng)子。備選地，可以使用非病毒調(diào)節(jié)序列，例如泛蛋白啟動(dòng)子或P-珠蛋白啟動(dòng)子。再者，可使用由來自不同來源的序列組成的調(diào)節(jié)元件，例如SRa啟動(dòng)子系統(tǒng)，它包含來自SV40早期啟動(dòng)子及人類T細(xì)胞白血病病毒I型的長末端重復(fù)序列(Takebe，Y.C"/.(1988)Mo/.CW/.^:466-472)。本公開的重組表達(dá)載體除了攜帶抗體鏈基因和調(diào)節(jié)序列之外，還可以攜帶另外的序列，例如在宿主細(xì)胞中調(diào)節(jié)載體復(fù)制的序列(例如，復(fù)制起點(diǎn))及可選擇的標(biāo)記基因。該可選擇的標(biāo)記基因有利于對(duì)其中已導(dǎo)入載體的宿主細(xì)胞的選擇(參見例如，均為Axel等人的美國專利號(hào)4,399,216、4,634,665及5,179,017)。例如，典型地可選擇的標(biāo)記基因賦予已導(dǎo)入載體的宿主細(xì)胞對(duì)，例如G418、潮霉素或甲氨喋呤的藥物抗性。優(yōu)選的可選擇的標(biāo)記基因包括二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(在dhfr-宿主細(xì)胞中用于甲氨喋呤選擇/擴(kuò)增)以及neo基因(用于G418選擇)。為了輕鏈及重鏈的表達(dá)，通過標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將編碼這些重鏈與輕鏈的一個(gè)或多個(gè)表達(dá)載體轉(zhuǎn)染進(jìn)入宿主細(xì)胞中。術(shù)語"轉(zhuǎn)染"的不同形式旨在涵蓋范圍寬廣的多種技術(shù)，這些技術(shù)一般用于將外源DNA導(dǎo)入原核的或真核的宿主細(xì)胞，例如電穿孔、磷酸鈣沉淀、DEAE-葡聚糖轉(zhuǎn)染等等。雖然在理論上可以無論在原核宿主細(xì)胞或在真核宿主細(xì)胞中均表達(dá)本公開的抗體，但是在真核細(xì)胞中抗體的表達(dá)，并且最優(yōu)選在哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞中的表達(dá)是最優(yōu)選的，因?yàn)檫@種真核細(xì)胞，并且特別是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，比原核細(xì)胞更有可能組裝并分泌正確折疊并且具有免疫活性的抗體。已經(jīng)報(bào)道了抗體基因的原核表達(dá)不能有效產(chǎn)生大量活性抗體(Boss,M.A.andWood,C.R.(1985)/附附""o/ogyr"flf"^6:12-13)。用于表達(dá)本公開的重組抗體的優(yōu)選的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞包括中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞X包括dhfr-CHO細(xì)胞，說明于Urlaub和Chasin，(1980)/VocA^,/.Jaw/.f/5L422:4216-4220,使用DHFR選擇標(biāo)記，例如R.J.KaufmanandP.A.Sharp(1982)丄Mo/.1^2:601-621中所說明)、NSO骨髓瘤細(xì)胞、COS細(xì)胞及SP2細(xì)胞。特別是，對(duì)于使用NSO骨髓瘤細(xì)胞而言，另一種優(yōu)選的表達(dá)系統(tǒng)是在WO87/04462、WO89/01036、以及EP338,841中披露的GS基因表達(dá)系統(tǒng)。在編碼抗體基因的重組表達(dá)栽體基因被引入哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞時(shí)，通過對(duì)宿主細(xì)胞培養(yǎng)一段時(shí)間可以產(chǎn)生抗體，所述時(shí)間足夠使該抗體在該宿主細(xì)胞中得到表達(dá)，或者更優(yōu)選地使該抗體分泌進(jìn)入生長宿主細(xì)胞的培養(yǎng)基。使用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白純化方法可以從培養(yǎng)基中回收抗體。結(jié)合至抗原的抗體的表征可以通過例如標(biāo)準(zhǔn)ELISA測(cè)試本公開的抗體與BTLA的結(jié)合。簡(jiǎn)言之，將^:量滴定板用PBS中的1ng/ml的經(jīng)純化的BTLA進(jìn)行包被，并接著用含1。/。牛血清白蛋白的PBS/吐溫(tween)進(jìn)行封閉。在每個(gè)孔中加入抗體的稀釋物(例如，來自被BTLA免疫的小鼠血漿的稀釋物)，并在室溫下孵育1至2小時(shí)。用PBS/吐溫沖洗該板，并接著與綴合至堿性磷酸酶的第二試劑(例如，對(duì)于人類抗體而言，一種山羊-抗人類IgGFc特異性的多克隆試劑)在37°C孵育1小時(shí)。沖洗后，用pNPP底物(1mg/ml)對(duì)該板進(jìn)4于顯影，并在OD405至650下進(jìn)行分析。優(yōu)選地，形成最高效價(jià)的小鼠將用于融合。以上說明的ELISA測(cè)定還可用于篩選與BTLA免疫原顯示陽性反應(yīng)的雜交瘤。對(duì)以高親合力結(jié)合BTLA的雜交瘤進(jìn)行亞克隆并且進(jìn)一步表征?？梢詮拿總€(gè)雜交瘤(通過ELISA)選擇保持親本細(xì)胞反應(yīng)性的一個(gè)克隆，用于制備5至10小瓶細(xì)胞庫，保存于-140。C，并用于抗體純化。為了純化抗-BTLA抗體，可以將已選擇的雜交瘤以2升體積培養(yǎng)于組織培養(yǎng)瓶或旋瓶中用于單克隆抗體純化?？梢詫⑸锨逡哼M(jìn)行過濾并濃縮，之后用A蛋白-瓊脂糖(Pharmacia,Piscataway，N.J.)進(jìn)行親和層析。通過凝膠電泳及高效液相色譜可以檢查被洗脫的IgG以確保純度?？梢詫⒃摼彌_液交換到PBS中，并且通過OD，使用1.43消光系數(shù)確定其濃度?？梢詫慰寺】贵w等分，并保存于-80。C。為了確定已選擇的抗-BTLA單克隆抗體是否結(jié)合至獨(dú)特的表位，使用可商購的試劑(Pierce，Rockford，IL)可以對(duì)每種抗體進(jìn)行生物素化。使用未標(biāo)記的單克隆抗體及生物素化的單克隆抗體的竟?fàn)幮匝芯靠梢杂靡陨厦枋龅慕?jīng)BTLA包被的ELISA板進(jìn)行。使用鏈霉抗生物素蛋白-抗生物素蛋白-堿性磷酸酶探針可以檢測(cè)生物素化的mAb結(jié)合。另外，類似的竟?fàn)幮匝芯靠梢酝ㄟ^FACS法在BTLA-CHO細(xì)胞上完成。生物素標(biāo)記的BTLA抗體對(duì)細(xì)胞的結(jié)合可以用鏈霉抗生物素蛋白-藻紅蛋白探針檢測(cè)。為了確定純化的抗體的同種型，可以使用對(duì)特定同種型的抗體特異的試劑進(jìn)行同種型ELISA。例如，為了確定人類單克隆抗體的同種型，可以用ljig/ml的抗-人類免疫球蛋白抗體在4°C下過夜對(duì)微量滴定板的孔進(jìn)行包被。用1。/。BSA封閉后，該板與l照/ml或更低的測(cè)試單克隆抗體或者經(jīng)純化的同種型對(duì)照在環(huán)境溫度下反應(yīng)1至2小時(shí)。隨后將這些孔與人類IgGl或人類IgM-特異的堿性磷酸酶綴合的探針進(jìn)行反應(yīng)。如以上所述對(duì)板進(jìn)行顯影并分析。FACS測(cè)定可以用來證實(shí)本發(fā)明的抗體與細(xì)胞上表達(dá)的天然BTLA的結(jié)合。簡(jiǎn)言之，將在含有1%BSA及0.5%疊氮化鈉的PBS(FACS緩沖液)中的抗體稀釋液與經(jīng)轉(zhuǎn)染的、表達(dá)BTLA的CHO細(xì)胞(105細(xì)胞)在4。C下孵育30分鐘。將細(xì)胞通過離心洗滌兩次，吸出上清液，并加入新鮮的FACS緩沖液。與細(xì)胞上BTLA結(jié)合的抗體可以通過以下操作檢測(cè)將經(jīng)PE標(biāo)記的山羊抗-人類IgG(Fc特異性)抗體與這些細(xì)胞在4。C下將育30分鐘，如上洗涂這些細(xì)胞兩次，并且用FACS進(jìn)4亍分析。通過蛋白質(zhì)印跡法可以進(jìn)一步測(cè)試抗-BTLA人類IgG與BTLA抗原的反應(yīng)性。簡(jiǎn)言之，可以制備BTLA并對(duì)其進(jìn)行十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳。電泳后，將分離的抗原轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，用10%的胎牛血清進(jìn)行封閉，并用待測(cè)試的單克隆抗體進(jìn)行探測(cè)。人類IgG的結(jié)合可以用抗-人類IgG堿性磷酸酶進(jìn)行檢測(cè)并用BCIP/NBT底物片(SigmaChem.Co"St.Louis,Mo.)進(jìn)行顯影。抗體的物理特性本公開的抗體還可以通過抗-BTLA抗體的不同物理特性進(jìn)行進(jìn)一步表征?；谶@些物理特性，可以使用不同測(cè)定法來檢測(cè)和/或區(qū)分不同類型的抗體。在一些實(shí)施方案中，本公開的抗體可以在該輕鏈或重鏈可變區(qū)含有一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)。在可變區(qū)中一個(gè)或多個(gè)糖基化位點(diǎn)的存在可導(dǎo)致抗體的免疫原性提高或抗體的pK值發(fā)生變化，這是因?yàn)榭乖Y(jié)合發(fā)生改變(MarshallC"/(1972)Jwww及ev5/oc/^附":673-702;GalaFAandMorrisonSL(2004)//附附mwo/Hl:5489-94;Wallick""/(1988)/E;cp巡:1099-109;SpiroRG(2002)G/3;cM1W0g3;U:43R-56R;ParekhC(1985)TV",we^:452-7;MimuraC(2000)Af<//附附""o/e:697誦706)。已知糖基化作用發(fā)生在含有N-X-S/T序列的基序中。使用Glycoblot測(cè)定可以檢測(cè)可變區(qū)的糖基化作用，在該測(cè)定中對(duì)該抗體進(jìn)行切割產(chǎn)生Fab，并接著使用測(cè)量高碘酸氧化及席夫堿形成的測(cè)定法來檢測(cè)糖基化作用。備選地，使用Dionex光色i普(Dionex-LC)可以檢測(cè)可變區(qū)的糖基化，在該測(cè)試中將Fab上的糖類剪切成單糖，并分析每種糖的含量。在某些情況下，優(yōu)選具有不包含可變區(qū)糖基化作用的抗-BTLA抗體。這可以通過選擇在可變區(qū)中不含有糖基化基序的抗體，或者通過使用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對(duì)糖基化基序中的殘基進(jìn)行突變來實(shí)現(xiàn)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開的抗體不含有天冬酰胺異構(gòu)化位點(diǎn)。在N-G序列或D-G序列上可分別發(fā)生脫酰胺反應(yīng)或異天冬氨酸效應(yīng)。脫酰胺反應(yīng)或異天冬氨酸效應(yīng)導(dǎo)致異天冬氨酸的生成，這通過在側(cè)鏈羧基端而不是在主鏈上生成纏繞結(jié)構(gòu)，降低了抗體的穩(wěn)定性。使用等產(chǎn)量測(cè)定(iso-quantassay)可以測(cè)量異天冬氨酸的產(chǎn)生，該測(cè)試使用反相HPLC來檢測(cè)異天冬氨酸。每種抗體都具有獨(dú)特的等電點(diǎn)(pi),但是抗體的等電點(diǎn)通常都落在pH6至9.5之間的范圍內(nèi)。IgGl抗體的pi典型地落在pH7至9.5的范圍內(nèi)，并且IgG4抗體的pi典型地落在pH6至8的范圍內(nèi)?？贵w可以具有在此范圍以外的等電點(diǎn)。雖然這些效果并不完全清楚，但是推測(cè)pl在正常范圍之外的抗體在體內(nèi)條件下可能會(huì)有一些解折疊(unfolding)及不穩(wěn)定性。使用毛細(xì)管等電聚焦測(cè)定可以測(cè)量等電點(diǎn)，該測(cè)定產(chǎn)生pH梯度，并可以使用激光聚焦來提高準(zhǔn)確性(Janini""/(2002)^:1605畫11;Ma"a/.(2001)Or廳togr—/"^:S75-89;Hunt"/(1998)/C^/y淤"togr^800:355-67)。在某些情況下，優(yōu)選具有包含pl值落在正常范圍內(nèi)的抗-BTLA抗體。這可以通過選擇pl值在正常范圍內(nèi)的抗體，或者通過使用本領(lǐng)域熟知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)對(duì)帶電荷的表面殘基進(jìn)行突變來實(shí)現(xiàn)。每種抗體都有解鏈溫度，這是熱穩(wěn)定性的指標(biāo)(KrishnamurthyRandManningMC(2002)Cwt尸/^/tw5/WecA加/2:361-71)。較高的熱穩(wěn)定性表明抗體在體內(nèi)的總體穩(wěn)定性較好。可以使用諸如差示掃描量熱法的技術(shù)來測(cè)量抗體的解鏈溫度(ChenWa/(2003)尸Aw附及m^:1952-60;Ghirlando"fl/(1999)/mw"m/Z^rt^:47-52)。TM1表示抗體起始解折疊的溫度。TM2表示抗體的完全解折疊的溫度。通常地，優(yōu)選本公開抗體的T脆高于60。C的，優(yōu)選高于65°C，甚至更優(yōu)選高于70°C。備選地，使用圓二色性可以測(cè)量抗體的熱穩(wěn)定性(MurrayW(2002)/.CAnwatogfSd處:343-9)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇不會(huì)快速降解的抗體。使用本領(lǐng)域所熟知的毛細(xì)管電泳(CE)及MALDI-MS可以測(cè)量抗-BTLA抗體的片段化(AlexanderAJandHughesDE(1995)爿wfl/C7^附^2:3626-32)。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇具有最小聚集效應(yīng)的抗體。聚集作用可能導(dǎo)致引發(fā)不需要的免疫反應(yīng)和/或改變的或不利的藥物動(dòng)力學(xué)特性?？傮w上，可接受的抗體的聚集度是25%或更低，優(yōu)選20%或更低，甚至更優(yōu)選是15%或更低，甚至更優(yōu)選是10%或更低，并甚至更優(yōu)選地是5%或更低。通過本領(lǐng)域熟知的幾種技術(shù)可以對(duì)聚集進(jìn)行測(cè)量以鑒定單體、二聚體、三聚體或多聚體，這些技術(shù)包括大小排阻柱(SEC)、高效液相色鐠(HPLC)及光散射法。免疫綴合物在另一方面，本公開的特征還在于綴合至治療性部分的抗-BTLA抗體，或該抗體的片段，該治療性部分例如是細(xì)胞毒素、藥物(例如，免疫抑制劑)、或放射性毒素。這種綴合物在此被稱為"免疫綴合物"。包括一種或多種細(xì)胞毒素的免疫綴合物被稱為"免疫毒素"。細(xì)胞毒素或者細(xì)胞毒性物質(zhì)包括任何對(duì)細(xì)胞有害(例如殺死細(xì)胞)的物質(zhì)。實(shí)例包括紫杉醇、細(xì)胞松弛素B、短桿菌肽D、溴化乙錠、吐4M^、絲裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、長春新堿、長春堿、秋水仙素、多柔比星、柔紅霉素、二羥基炭疽菌素二酮(dihydroxyanthracindione)、米托蒽醌、光輝霉素、放射菌素D、l-去氫睪酮、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛爾，及噤呤霉素及它們的類似物或同系物。治療性物質(zhì)還包括，例如抗代謝物(如曱氨蝶呤、6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨氮烯咪胺)、烷基化試劑(如氮芥、噻替哌、苯丁酸氮芥、美法侖、卡莫司汀(BSNU)及洛莫司汀(CCNU)、環(huán)磷酰胺、白消安、二溴甘露醇、鏈脲霉素、絲裂霉素C，及順鉑(II)(DDP)、蒽環(huán)類抗生素(如柔紅比星(以前稱柔紅霉素)及多柔比星)，抗生素(如更生霉素(以前稱放線菌素)、博來霉素、光輝霉素，及安曲霉素(AMC))，以及抗有絲分裂劑(如長春新堿及長春堿)。可與本公開的抗體相綴合的治療性細(xì)胞毒素的其他優(yōu)選的實(shí)例包括多卡霉素(duocarmycin)、加利車霉素、美登素及阿里斯達(dá)汀(auristatin)，以及它們的衍生物。一種加利車霉素抗體綴合物的實(shí)例是可商購的(Mylotarg.,Wyeth-Ayerst)。使用本領(lǐng)域已知的接頭技術(shù)可以將細(xì)胞毒素綴合至本公開的抗體上。已用于將細(xì)胞毒素綴合至抗體的接頭類型的實(shí)例包括但不限于腙、硫醚、酯類，二硫化物及含有接頭的肽。可選擇一個(gè)接頭，例如，該接頭在溶酶體區(qū)室中易于被低pH值剪切，或者易于被蛋白酶(例如，優(yōu)先在腫瘤組織中表達(dá)的蛋白酶，例如組織蛋白酶(例如，組織蛋白酶B、C、D))剪切。關(guān)于細(xì)胞毒素、接頭以及將治療劑與抗體綴合的方法的進(jìn)一步討論，還參見Saito，G.&"/:(2003)Jdv.2>/7^Z)"/v.及ev.經(jīng):199-215;Trail,P.A.C/.(2003)Ca"cc/附/wmwo/.^:328-337;Payne，G.(2003)C療wCW/2:207畫212;Allen，T,M.(2002)艦Wev.2:750-763;Pastan，I.andKreitman，R.J.(2002)Cm/t.O/;/"./"ve5^.Dfwgs2:1089-1091;Senter，P.D.andSpringer,C.J.(2001)Jt/v.DmgZ)"iv.及ev.^1:247-264。本公開的抗體還可以被綴合至放射性同位素上，以產(chǎn)生細(xì)胞毒性的放射性藥物，也被稱為放射免疫綴合物。可偶聯(lián)至抗體上而用于診斷或治療的放射性同位素的實(shí)例包括但不限于碘131、銦111、釔90以及镥177。制備放射免疫綴合物的方法在本領(lǐng)域內(nèi)已經(jīng)確立。放射免疫綴合物的實(shí)例是可商購的，包括Zevalin(IDECPharmaceuticals)及Bexxar(CorixaPharmaceuticals)，并且使用類似的方法用本公開的抗體可以制備放射免疫綴合物。本公開的抗體綴合物可被用于修飾給定的生物學(xué)應(yīng)答，并且該藥物部分不應(yīng)被理解為僅限于經(jīng)典的化學(xué)治療劑。例如，該藥物部分可以是具有希望的生物活性的蛋白質(zhì)或多肽。這種蛋白質(zhì)可能包括，例如酶活性毒素，或其活性片段，例如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假單胞菌外毒素，或白喉毒素；蛋白質(zhì)，例如腫瘤壞死因子或干擾素-Y;或者，生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑，例如淋巴因子、白細(xì)胞介素-1("IL-l，，)、白細(xì)胞介素-2("IL-2")、白細(xì)胞介素-6("IL-6")、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子("GM-CSF，，)、粒細(xì)胞集落刺激因子("G-CSF，)、或其他生長因子。用于將這種治療性部分綴合至抗體上的技術(shù)是熟知的，參見例如Arnon""MonoclonalAntibodiesForImmunotargetingOfDrugsInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesAndCancerTherapy,ReisfeldC(eds.),pp.243-56(AlanR.Liss，Inc.1985);HellstromC/""AntibodiesForDrugDelivery",inControlledDrugDelivery(2ndEd.),RobinsonWfl/.(eds.)，pp.623-53(MarcelDekker，Inc.1987);Thorpe,"AntibodyCarriersOfCytotoxicAgentsInCancerTherapy:AReview",inMonoclonalAntibodies'84:BiologicalAndClinicalApplications,Pinchera"a/,(eds.)，pp.475-506(1985);"Analysis,Results,AndFutureProspectiveOfTheTherapeuticUseOfRadiolabeledAntibodyInCancerTherapy",inMonoclonalAntibodiesForCancerDetectionAndTherapy,Baldwin"(eds.)，pp.303-16(AcademicPress1985)，以及ThorpeCA，"ThePreparationAndCytotoxicPropertiesOfAntibody-ToxinConjugates",Immunol.Rev.，62:119-58(1982))。雙特異性分子在另一方面，本公開的特征在于包含本y〉開的抗-BTLA抗體，或該抗體的片段的雙特異性分子。本公開的抗體，或其抗原結(jié)合部分可被衍生化或與另一種功能分子相連接，例如與另一種肽或蛋白質(zhì)(例如，另一種抗體或受體的配體)相連接，以生成結(jié)合至少兩種不同的結(jié)合位點(diǎn)或耙分子的雙特異性分子。事實(shí)上，本公開的抗體可能被衍生化或連接至多于一個(gè)的其他功能分子上，以生成結(jié)合到多于兩種不同的結(jié)合位點(diǎn)和/或靶分子的多特異性分子；在此所使用的術(shù)語"雙特異性分子，，也旨在涵蓋這種多特異性分子。為了生成本^Hf的雙特異性分子，可將本>^開的抗體與一個(gè)或多個(gè)其他的結(jié)合分子(例如，另一種抗體、抗體片段、肽或結(jié)合模擬物)功能性地連接(例如，通過化學(xué)偶聯(lián)、遺傳融合、非共價(jià)連接等等)，由此得到雙特異性分子。因此，本公開還包括雙特異性分子，該雙特異性分子含有針對(duì)BTLA的至少一種第一結(jié)合特異性以及針對(duì)第二靶表位的第二結(jié)合特異性。在本公開的一個(gè)具體實(shí)施方案中，該第二靶表位是Fc受體，例如人類FcyRI(CD64)或人類Fca受體(CD89)。因?yàn)?，本公開包括的雙特異性分子既能夠結(jié)合表達(dá)FcyR或FcaR受體的效應(yīng)細(xì)胞(例如單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞或多形核細(xì)胞(PMN))，又能夠結(jié)合表達(dá)BTLA的靶細(xì)胞。這些雙特異性分子將表達(dá)BTLA的細(xì)胞耙向效應(yīng)細(xì)胞，并觸發(fā)Fc受體介導(dǎo)的效應(yīng)細(xì)胞活性，例如，表達(dá)BTLA的細(xì)胞的吞噬作用、抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC)、細(xì)胞因子的釋放、或超氧化物陰離子的生成。在本公開的一個(gè)實(shí)施方案(其中該雙特異性分子是多特異性的)中，該分子除了包括抗-Fc結(jié)合特異性及抗-BTLA結(jié)合特異性之外，還能進(jìn)一步包括第三種結(jié)合特異性。在一個(gè)實(shí)施方案中，第三結(jié)合特異性是抗增強(qiáng)因子(EF)部分，例如，結(jié)合至涉及細(xì)胞毒素活性的表面蛋白上并由此增強(qiáng)針對(duì)靶細(xì)胞的免疫應(yīng)答的分子。"抗增強(qiáng)因子部分"可以是結(jié)合至給定分子(例如抗原或受體)的抗體、功能抗體片段、或配體，并且由此增強(qiáng)Fc受體或靶細(xì)胞抗原的結(jié)合決定簇的效果。"抗增強(qiáng)因子部分"可以結(jié)合Fc受體或靶細(xì)胞抗原。備選地，抗增強(qiáng)因子部分可以結(jié)合實(shí)體，該實(shí)體不同于第一及第二結(jié)合特異性結(jié)合的實(shí)體。例如，抗增強(qiáng)因子部分可結(jié)合細(xì)胞毒性T細(xì)月包(例如，經(jīng)CD2、CD3、CD8、CD28、CD4、CD40、ICAM國1、或其他免疫細(xì)胞，導(dǎo)致針對(duì)該靶細(xì)胞的免疫應(yīng)答的增強(qiáng))。在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開的雙特異性分子包含作為一種結(jié)合特異性的至少一種抗體、或該抗體的抗體片l更，包括，例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、或單鏈Fv。該抗體還可以是輕鏈或重鏈二聚物，或是其任何最小片段，例如Fv或單鏈構(gòu)建體，如在Ladner等人的美國專利號(hào)4,946,778所迷，其內(nèi)容明確地并入本文作為參考。在一個(gè)實(shí)施方案中，F(xiàn)cy受體的結(jié)合特異性由單克隆抗體提供，其結(jié)合并未被人類免疫球蛋白G(IgG)所阻斷。在此所使用的術(shù)語"IgG受體"指位于染色體1上的8個(gè)y鏈基因的任何基因。這些基因總共編碼12種跨膜或可溶性受體同種型，它們被分為三類Fq受體FqRI(CD64)、FqrRlI(CD32)、以及FqrRlII(CD16)。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，F(xiàn)cy受體是人類高親合性FcyRI。人類FeyRI是一種72kDa的分子，它對(duì)單體IgG具有高親合性(10S至1(^M")。在Fanger等人的PCT公開文件WO88/00052及美國專利號(hào)4，954，617中描述了某些優(yōu)選的抗-Fqr單克隆抗體的制備及表征，其中傳授的內(nèi)容都通過引用全部結(jié)合在此。這些抗體結(jié)合至FcyI、FcyII及Fcym的表位上不同于受體的Fc7結(jié)合位點(diǎn)的位點(diǎn)，并因此它們的結(jié)合基本上不會(huì)被IgG的生理水平所阻斷。在本公開有用的特異性抗-FcYRI抗體是mAb22、mAb32、mAb44、mAb62及mAb197。產(chǎn)生mAb32的雜交瘤可以從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)獲得，ATCC保藏號(hào)HB9469。在其他實(shí)施方案中，抗-Fqr受體抗體是一種單克隆抗體22(H22)的人源化形式。H22抗體的制備及表征說明于Graziano，R.F."/.(1995)/附附wwo/JJ^(10):4996-5002，及PCT公開文件WO94/10332中。產(chǎn)生H22抗體的細(xì)胞系保藏于美國典型培養(yǎng)物保藏中心，被命名為HA022CL1,保藏號(hào)為CRL11177。在另外的優(yōu)選實(shí)施方案中，對(duì)于Fc受體的結(jié)合特異性由結(jié)合至人類IgA受體的抗體提供，所述人類IgA受體例如是Fca受體(FcaRI(CD89))，這種結(jié)合優(yōu)選不會(huì)被人類免疫球蛋白A(IgA)所阻斷。術(shù)語"IgA受體"意在包括位于染色體19上的一個(gè)a基因(FcaRI)的基因產(chǎn)物。已知這一基因編碼幾種55至110kDa的選擇性剪接的跨膜同種型。FcaRI(CD89)在單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及嗜中性粒細(xì)胞中組成型表達(dá)，但在非效應(yīng)細(xì)胞類群中不組成型表達(dá)。FcaRI對(duì)于IgAl和IgA2都具有中等的親合力(《5xl07M"),該親合性在暴露于細(xì)胞因子例如G-CSF或GM-CSF時(shí)會(huì)增加(Morton,H.C."fl/.(1996)CWric"/及ev/e將/"/附膽朋/柳1^:423-440)。已經(jīng)描述了四種FcaRI特異性的單克隆抗體，被鑒定為A3、A59、A62及A77,它們結(jié)合IgA配體結(jié)合域外側(cè)的FcaRI(Monteiro,R.C."(1992)//附附wwo/.雄:1764)。在本公開的雙特異性分子的使用中，F(xiàn)caRI及FcyRI是優(yōu)選的觸發(fā)受體，因?yàn)樗鼈?1)主要表達(dá)于免疫效應(yīng)細(xì)胞(例如單核細(xì)胞、PMN、巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞)；(2)表達(dá)水平高(例如5,000至100，000/細(xì)胞)；(3)是細(xì)胞毒性活性(例如ADCC、吞噬作用)的介體；以及(4)介導(dǎo)靶向它們的抗原(包括自身抗原)的增強(qiáng)的抗原呈遞。雖然人類單克隆抗體是優(yōu)選的，但是可用于本公開的雙特異性分子的其他抗體是鼠類抗體、嵌合抗體及人源化單克隆抗體。使用本領(lǐng)域中已知的方法通過綴合組成性結(jié)合的特異性(例如，抗-FcR及抗-BTLA的結(jié)合特異性)可以制備^^^^開的雙特異性分子。例如，可以單獨(dú)地生成雙特異性分子中的每一種結(jié)合特異性，并接著將它們綴合在一起。當(dāng)結(jié)合特異性是蛋白質(zhì)或肽時(shí)，可以使用多種偶聯(lián)試劑或交聯(lián)試劑來進(jìn)行共價(jià)綴合。交聯(lián)試劑的實(shí)例包括蛋白A、碳二亞胺、N-琥珀酰亞胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5，5，-二硫雙(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、鄰-亞苯基二馬來酰亞胺(oPDM)、1\-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡梵基二硫代)丙酸酯(SPDP)、以及4-(N-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-l-羧酸磺基琥珀酰亞胺S旨(磺基畫SMCC)(參見例如，Karpovsky"a/.(1984)/.M^/.巡:1686;Liu，MA"(1985)7V",/.爿aw/.fASJ^:8648)。其他方法包括在Paulus(1985)BehringIns.Mitt.No.78，118-132;BrennanW"/.(1985)5Wewce^12:81-83)，以及GlennieW"/(1987)/./麵謝/.139:2367-2375)中說明的方法。優(yōu)選的綴合試劑是SATA及磺基-SMCC，都可從PierceChemicalCo.(Rockford，IL)公司購得。當(dāng)這些結(jié)合特異性是抗體時(shí)，它們可以通過兩個(gè)重鏈之間的C末端鉸鏈區(qū)的巰基鍵合相綴合。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，在綴合之前對(duì)鉸鏈區(qū)進(jìn)行修飾，使其含有奇數(shù)個(gè)巰基殘基，優(yōu)選地含有一個(gè)巰基殘基。備選地，兩種結(jié)合特異性均可以在相同的載體中被編碼并在同一宿主細(xì)胞中被表達(dá)并且組裝。當(dāng)雙特異性分子是mAbxmAb、mAbxFab、FabxF(ab，)2或配體xFab融合蛋白時(shí)，這一方法特別有用。本公開的一種雙特異性分子可以是含有一個(gè)單鏈抗體及一個(gè)結(jié)合決定簇的單鏈分子，或含有兩個(gè)結(jié)合決定簇的單鏈雙特異性分子。雙特異性分子可以含有至少兩種單鏈分子。制備雙特異性分子的方法說明在例如美國專利號(hào)5，260，203;美國專利號(hào)5,455,030;美國專利號(hào)4,881,175;美國專利號(hào)5,132,405;美國專利號(hào)5,091,513;美國專利號(hào)5,476,786;美國專利號(hào)5,013,653;美國專利號(hào)5,258,498;以及美國專利號(hào)5,482,858中。例如酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、放射免疫測(cè)定(RIA)、FACS分析、生物測(cè)定(例如生長抑制)、或蛋白印跡測(cè)定。這些測(cè)定中的每一種測(cè)定通常都是通過采用對(duì)目的復(fù)合體特異的標(biāo)記試劑(例如，抗體)，檢測(cè)特定目的蛋白-抗體復(fù)合體的存在。例如，可以使用例如識(shí)別并且特異性結(jié)合至抗體-FcR復(fù)合體的酶聯(lián)抗體或抗體片段來檢測(cè)這些FcR-抗體復(fù)合體。備選地，使用多種其他免疫測(cè)定中的任何測(cè)定可以檢測(cè)這些復(fù)合體。例如，該抗體可被J故射性標(biāo)記，并用于放射免疫測(cè)定(RIA)中(參見例如，Weintraub，B.，PrinciplesofRadioimmunoassays,SeventhTrainingCourseonRadioligandAssayTechniques,TheEndocrineSociety,March,1986,將其并入本文作為參考)?？梢允褂美鐈計(jì)數(shù)器或閃爍計(jì)數(shù)器或通過放射自顯影來檢測(cè)放射性同位素。藥物組合物在另一方面，本公開提供了一種組合物，例如藥物組合物，該組合物包含本公開的一種單克隆抗體或多種單克隆抗體的組合、或它們的一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合部分，并與藥學(xué)上可接受的載體共同配制而成。這種組合物可包含本公開的一種抗體或(例如，兩種或多種不同的)多種抗體的組合、或免疫綴合物、或雙特異性分子。例如，本公開的藥物組合物可以包含多種抗體(或免疫綴合物、或雙特異性分子)的組合，這些抗體與該靼抗原上的不同表位結(jié)合、或具有互補(bǔ)的活性。還可以在聯(lián)合治療中施用本公開的藥物組合物(即，與其他試劑組合)。例如，該聯(lián)合療法可以包括本公開的抗-BTLA抗體，該抗-BTLA抗體與至少一種其他抗炎性或免疫抑制劑組合。以下在本公開的關(guān)于抗體用途的章節(jié)中對(duì)可用于聯(lián)合治療的治療劑的實(shí)例進(jìn)行了更加詳盡的說明。如此處使用的"藥學(xué)上可接受的載體"包括任何及全部的生理學(xué)上相容的溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延緩劑等。優(yōu)選地，該載體適宜于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、胃腸外、脊髓或表皮給藥(例如通過注射或輸注)。依據(jù)給藥途徑，活性化合物(即抗體、免疫綴合物、或雙特異性分子)可用材料包被以保護(hù)該化合物免受可能導(dǎo)致該化合物失活的酸以及其他自然條件的作用。本公開的藥物化合物可包含一種或多種藥學(xué)上可接受的鹽。"藥學(xué)上可接受的鹽"是指一種鹽，它保持了母體化合物的希望的生物活性并不會(huì)引起任何不希望的毒理學(xué)效應(yīng)(參見例如Berge，S.M.，""/(1977)/尸^wtm.^:1-19)。這種鹽的實(shí)例包括酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括源自無毒無機(jī)酸的鹽，例如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸、磷酸等，以及源自無毒有機(jī)酸的鹽，例如脂肪族單羧酸及二羧酸、苯基取代的烷醇酸、羥基烷醇酸、芳香酸、脂肪族及芳香族磺酸等。堿性加成鹽包括源自堿土金屬的鹽，例如鈉、鉀、鎂及鉤等的鹽，以及源自無毒有機(jī)胺的鹽，例如N，N'-二節(jié)基乙二胺、N-甲基葡糖胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺及普魯卡因等。本公開的藥物組合物還可包含藥學(xué)上可接受的抗氧化劑。藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括(1)水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫鈉、偏亞石克酸氫鈉、亞硫酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸棕櫚酸酯、丁基羥基茴香醚(BHA)，丁基羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、沒食子酸丙酯及a-生育酚等；以及(3)金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸及磷酸等。在本公開的藥物組合物中可以采用的適宜的水性及非水性載體的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇及聚乙二醇等)，以及它們的適宜的混合物、植物油，如橄欖油，以及可注射的有機(jī)酯，例如油酸乙酯。例如通過使用包衣材料(如卵磷脂)、通過維持分散系中所需顆粒的大小、以及通過使用表面活性劑，可以維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。這些組合物還可包含佐劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑及分軟劑。可通過滅菌程序(見上文)，以及通過加入不同的抗細(xì)菌劑及抗真菌劑(例如對(duì)羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸等)均可確保防止微生物的存在。將等滲劑(如糖及氯化鈉等)包含進(jìn)入這些組合物中也可能是令人希望的。另外，通過包含延遲吸收的物質(zhì)(如單硬脂酸鋁及明膠)可以實(shí)現(xiàn)可注射藥物形式的延長吸收。藥學(xué)上可接受的載體包括無菌水溶液或分散液、以及用于無菌注射溶液或分散液的即時(shí)配制的無菌粉末。用于藥學(xué)活性物質(zhì)的這種介質(zhì)及試劑的使用在本領(lǐng)域中是已知的。除了與活性化合物不相容的任何常規(guī)介質(zhì)或試劑之外，可考慮它在本公開的多種藥學(xué)組合物中使用。還可以在這些組合物中摻入輔助性活性化合物。治療組合物典型地必須是無菌的并且在制造及存儲(chǔ)條件下是穩(wěn)定的。該組合物可以被配制成溶液、微乳劑、脂質(zhì)體、或者其他適于高藥物濃度的有序結(jié)構(gòu)。該載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，包含例如水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇，以及液體聚乙二醇等)，以及它們的適宜的混合物。例如，通過使用一種包衣(如卵磷脂)、通過維持分散系中所需顆粒的大小、以及通過使用表面活性劑，可維持適合的流動(dòng)性。在許多情況下，優(yōu)選在組合物中包含等滲試劑，例如糖、多元醇(如甘露醇、山梨醇)，或氯化鈉。通過在組合物中包含延遲吸收的試劑，例如單硬脂酸鹽及明膠，可以實(shí)現(xiàn)可注射組合物的延長吸收。通過在適當(dāng)?shù)娜軇┲袑⑺枇康幕钚曰衔锱c以上列舉的多種組分中的一種或組合(按照需要)相摻和、然后進(jìn)行無菌微過濾即可制備出無菌注射液?？傮w上，通過將活性化合物摻入至無菌載體(它包含基本分散介質(zhì)及上述列舉的所需的其他組分)來制備分散體。對(duì)于用于制備無菌注射液的無菌粉末的情況，優(yōu)選的制備方法是真空干燥及冷凍干燥(凍干)，制得該活性組分以及任何來自其預(yù)先無菌過濾的溶液的其他希望的組分的粉末。與載體物質(zhì)組合以產(chǎn)生單一劑型的活性組分的量值將隨著正在接受治療的受試者及具體給藥方式而變化。與載體物質(zhì)組合以產(chǎn)生單一劑型的活性組分的量一般是產(chǎn)生治療效果的組合物的量。總體上講，在100%的數(shù)量?jī)?nèi)，與藥學(xué)上可接受的載體組合的活性組分的量大約是從0.01%至約99%的范圍內(nèi)，優(yōu)選從約0.1%至約70%，最優(yōu)選從約1%至約30%。對(duì)劑量方案進(jìn)行調(diào)節(jié)以提供最佳的理想的反應(yīng)(如治療反應(yīng))。例如，可給予單次大丸劑，可以隨時(shí)間施用幾次分份劑量，或者根據(jù)治療情況的緊急程度所示按比例減少或增加劑量。為給藥方便以及劑量統(tǒng)一而按劑量單位形式配制成腸胃外組合物尤為有利。此處使用的劑量單位形式指用于待治療的受試者單一劑量的物理上不連續(xù)的單位；每個(gè)單位包含經(jīng)計(jì)算能與所需的藥學(xué)載體相結(jié)合產(chǎn)生理想的療效的預(yù)定量的活性化合物。本公開的劑量單位形式的說明由以下因素決定并直接取決于以下因素(a)活性化合物的獨(dú)特特性及待實(shí)現(xiàn)的特定療效，以及(b)配制這種用于治療個(gè)體敏感性的活性化合物的領(lǐng)域中固有的局限性。對(duì)于該抗體的給藥，劑量為約0.0001至100mg/kg，并且更經(jīng)常是O.Ol至5mg/kg宿主體重。例如，劑量可以是0.3mg/kg體重、lmg/kg體重、3mg/kg體重、5mg/kg體重或10mg/kg體重或者在1至10mg/kg的范圍內(nèi)。一種示例性治療方案限定為每周給藥一次、每?jī)芍芤淮?、每三周一次、每四周一次、每月一次、每三個(gè)月一次或每3至6個(gè)月一次。本公開的抗-BTLA抗體的優(yōu)選的劑量方案包括通過靜脈內(nèi)給藥lmg/kg體重或3mg/kg體重，使用以下劑量方案之一給予抗體(i)每4周給予6個(gè)劑量，之后每3個(gè)月給藥；(ii)每三周給藥；(iii)3mg/kg體重一次給藥，接著每三周按1mg/kg體重給藥。在一些方法中，兩種或多種具有不同的結(jié)合特異性的單克隆抗體被同時(shí)給藥，這種情況下，所給予的每種抗體的劑量都在所指示的范圍之內(nèi)。通常在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)給予抗體。單個(gè)劑量之間的間隔可以是，例如一周、一個(gè)月、每三個(gè)月或一年。間隔也可以是不規(guī)則的，如通過測(cè)量患者的針對(duì)靶抗原的抗體的血液水平所指示。在一些方法中，調(diào)整劑量使血漿抗體濃度大約是1至1000fig/ml，并且在一些方法中大約是25至300jig/ml。備選地，抗體可以作為緩釋制劑給藥，在這種情況中需要以較低頻率給藥。劑量及頻率隨抗體在患者體內(nèi)的半衰期而變。一般而言，人類抗體的半衰期最長，其次是人源化抗體、嵌合抗體、以及非人類抗體。給藥的劑量及頻率可根據(jù)治療是預(yù)防性的或是治療性的而變化。在預(yù)防性應(yīng)用時(shí)，在很長的一段時(shí)間內(nèi)以相對(duì)較不頻繁的間隔給予相對(duì)少的劑量。一些患者在其余生中繼續(xù)接受治療。在治療性的應(yīng)用時(shí)，有時(shí)需要在相對(duì)較短的間隔內(nèi)給予相對(duì)較高的劑量直至疾病緩減或終止，并且優(yōu)選地直至患者顯示疾病癥狀的部分或完全改善。之后，該患者可以接受預(yù)防性的給藥方案。可以改變本公開的藥物組合物中的活性成分的實(shí)際劑量水平，以獲得針對(duì)特定患者、組合物、以及給藥方式實(shí)現(xiàn)希望的治療反應(yīng)有效而對(duì)該患者無毒的活性組分的量。所選的劑量水平取決于多種藥物代謝動(dòng)力學(xué)因素，包括采用的本公開的特定組合物或其酯、鹽或酰胺的活性、給藥途徑、給藥時(shí)間、所采用的特定化合物的排泄速率、療程、以及與采用的特定組合物組合中使用的其他藥物、化合物和/或材料、正在接收治療的患者的年齡、性別、體重、狀態(tài)、總體健康狀態(tài)及病史，以及在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域熟知的類似因素。本公開的抗-BTLA抗體的"治療有效劑量，，優(yōu)選地導(dǎo)致疾病癥狀的嚴(yán)重程度降低、無癥狀期的頻率和持續(xù)時(shí)間增加、或防止由于該病痛產(chǎn)生的損害或殘疾。例如，對(duì)于治療腫瘤，與未治療的受試者相比，"治療有效劑量"優(yōu)選地抑制細(xì)胞生長或腫瘤生長至少約20%，更優(yōu)選至少約40。/。，甚至更優(yōu)選至少約60%,并仍更優(yōu)選至少約80%?；衔镆种颇[瘤生長的能力可以在預(yù)測(cè)人類腫瘤功效的動(dòng)物模型系統(tǒng)中進(jìn)行評(píng)價(jià)。備選地，組合物的這一特性可通過檢驗(yàn)該化合物的抑制能力來評(píng)價(jià)，這種抑制作用可通過有經(jīng)驗(yàn)的從業(yè)者已知的測(cè)定方法在體外測(cè)定。治療性化合物的治療有效量可減小腫瘤的大小，或者緩解受試者的癥狀。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)能根據(jù)受試者的大小、受試者癥狀的嚴(yán)重程度、以及所選具體組合物或所選擇的給藥途徑等因素而確定這種量值。使用本領(lǐng)域已知的一種或多種方法通過一種或多種給藥途徑可以對(duì)本公開的組合物進(jìn)行給藥。如技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，給藥途徑和/或方式將隨所希望的結(jié)果而變化。本公開的抗體的優(yōu)選給藥途徑包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、脊髓或其他胃腸外給藥途徑，例如通過注射或輸注。此處使用的短語"胃腸外給藥，，是指除了腸內(nèi)及局部給藥外的其他給藥方式，通常通過注射，并包括但不限于靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)、嚢內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、經(jīng)氣管、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、嚢下、蛛網(wǎng)膜下腔、脊柱內(nèi)、硬膜外及胸骨內(nèi)注射及輸注。備選地，本公開的抗體可經(jīng)非胃腸外途徑進(jìn)行給藥，非胃腸外途徑例如局部、表皮或粘膜途徑給藥，例如經(jīng)鼻內(nèi)、口服、陰道、直腸、舌下或局部途徑給藥。活性化合物可用載體制備，該載體將保護(hù)化合物免于快速釋放，例如控釋制劑，包括植入劑、經(jīng)皮貼劑、以及微嚢化遞送系統(tǒng)?？梢允褂蒙锝到獾?、生物相容性的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯、以及聚乳酸。用于制備這種制劑的許多方法已獲得專利，或者是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。參見，例如S附似/"^/"rn/CWi^^//MjRe/efl^eDe//vefyiS"te附sJ.R.Robinson,ed.，MarcelDekker，Inc.，NewYork,1978。治療組合物可利用本領(lǐng)域中已知的醫(yī)用裝置進(jìn)行給藥。例如，在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開的治療組合物可利用無針皮下注射裝置進(jìn)行給藥，例如在美國專利號(hào)5,399,163、5,383,851、5,312,335、5,064,413、4,941,880、4,790,824或4，596，556中所披露的裝置。在本公開中有用的熟知的植入劑與裝置的實(shí)例包括美國專利號(hào)4，487，603，它披露了用于以受控速度釋放藥物的一種可植入式微量輸注泵；美國專利號(hào)4,486,194，它披露了用于通過皮膚給藥的一種治療裝置；美國專利號(hào)4,447,233，它披露了用于以精確的輸注速度遞送藥物的一種藥物輸注泵；美國專利號(hào)4,447,224，它披露了用于持續(xù)藥物遞送的一種可變流速的可植入輸注裝置；美國專利號(hào)4，439，196，它披露了一種具有多腔區(qū)室的滲透藥物送遞系統(tǒng)；以及美國專利號(hào)4，475，196，它披露了一種滲透藥物送遞系統(tǒng)。這些專利通過引用并入本文。許多其他這種植入劑、遞送系統(tǒng)、以及模型是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。在某些實(shí)施方案中，對(duì)本公開的人類單克隆抗體進(jìn)行配制以確保其在體內(nèi)分布適宜。例如，血腦屏障(BBB)阻止了許多高親水性化合物。為確保本公開的治療性化合物穿過BBB(如果需要時(shí))，(例如)可以將它們配制在脂質(zhì)體中。用于制造脂質(zhì)體的方法，參見，例如，美國專利號(hào)4，522，811;5,374,548;以及5,399,331。這些脂質(zhì)體可能包含一個(gè)或多個(gè)部分，這些部分被選擇性地輸送到特定的細(xì)胞或器官中，由此增強(qiáng)扭標(biāo)藥物的遞送(參見,例如V.V.RanadeJ.Clin.Pharmacol.29:685,(1989))。示例性耙向部分包括葉酸鹽或生物素(參見，例如Low等人的美國專利號(hào)5,416,016);甘露糖苷(UmezawaCff/.，(1988)5"cAe附.5/o;;/i".及m.O附附"".Ul:1038);抗體(P.G.BloemanW(1995)丄g仗357:140;M.Owais(1995)Jw,/附,cro6.爿gewteC7^加W/^r.^2:180);表面活小生劑蛋白A受體(Briscoe"a/.(1995)J抓/尸A",0/.1233:134);p120(Schreier"a/.(1994)/別W.C/iem.^2:9090);也參見K.Keinanen;M丄.Laukkanen(1994)/^551丄e汰^:123;J.J.Killion;I.J.Fidler(1994)/附附"朋附"/^A4:273。本公開的用途及方法本公開中的抗體、抗體組合物及方法在體內(nèi)和體外具有多種用途，包括例如檢測(cè)BTLA或是通過阻斷BTLA而增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施方案中，抗體通過與BTLA結(jié)合而阻遏免疫應(yīng)答。在這一實(shí)施方案中，該抗體作為激動(dòng)劑發(fā)揮作用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本公開的抗體是人類抗體。例如，這些分子可以被給予至體外或活體外的培養(yǎng)細(xì)胞，或者給予人類受試者，例如在體內(nèi)，以增強(qiáng)多種情形下的免疫性。因此，在一方面，本公開提供了改變受試者內(nèi)的免疫應(yīng)答的方法，包括給予該受試者本公開的抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得受試者體內(nèi)的免疫應(yīng)答發(fā)生變化。優(yōu)選地，該應(yīng)答得到增強(qiáng)、受到刺激、或被上調(diào)。在此所使用的術(shù)語"受試者，，意在包括人類及非人類動(dòng)物。非人類動(dòng)物包括所有脊推動(dòng)物，例如哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物，例如，非人靈長類動(dòng)物、綿羊、狗、貓、奶牛、馬、雞、兩棲動(dòng)物、以及爬行動(dòng)物，然而哺乳動(dòng)物是優(yōu)選的，如非人靈長類動(dòng)物、綿羊、狗、貓、奶牛和馬。優(yōu)選的受試者包括需要增強(qiáng)免疫應(yīng)答的人類患者。該方法還特別適合治療患有可通過增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答來治療的病癥的病人。在具體的實(shí)施方案中，這些方法尤其適宜治療體內(nèi)癌細(xì)胞。為實(shí)現(xiàn)抗原特異的免疫性增強(qiáng)，可將這些抗BTLA抗體與目的抗原共同給藥。當(dāng)抗BTLA的抗體與另一種藥物聯(lián)合給藥時(shí)，這兩種物質(zhì)可以依次或者同時(shí)給藥。本公開進(jìn)一步提供了用于檢測(cè)樣品中是否存在人類BTLA抗原，或者測(cè)量人類BTLA抗原的量的方法，包括使該樣品，及對(duì)照樣品與人類單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分相接觸，所述人類單克隆抗體，或其抗原結(jié)合部分特異性結(jié)合人類BTLA，接觸條件允許該抗體或其部分與人類BTLA之間形成復(fù)合體。然后檢測(cè)該復(fù)合體的形成，其中，該樣品與對(duì)照樣品相比之間的復(fù)合體形成的差異指示在樣品中存在人類BTLA抗原?？紤]到本公開的抗體對(duì)BTLA的特異性結(jié)合，與CD28、ICOS及CTLA-4相比，本公開的抗體可用于特異檢測(cè)BTLA在細(xì)胞表面的表達(dá)情況，并甚至可以用于通過免疫親和純化法純化BTLA。癌癥通過抗體阻斷BTLA可增強(qiáng)患者體內(nèi)對(duì)癌細(xì)胞的免疫應(yīng)答。BTLA的配體HVEM是TNFR家族成員，并且可在一些體細(xì)胞組織及淋巴細(xì)胞，包括T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、樹突細(xì)胞、及髓樣細(xì)胞中被誘導(dǎo)(Murphyetal"NatReviewsImmunology,6，671-681，2006)。由HVEM/BTLA相互作用引起的免疫抑制可以通過抑制BTLA與HVEM局部的相互作用而逆轉(zhuǎn)。(Watanabeetal"Nat.Immunol"4,670-679，2003;Otsukietal"BBRC344，1121-1127，2006)。在一方面，本公開涉及使用抗-BTLA抗體對(duì)受試者進(jìn)行體內(nèi)治療，使得癌性腫瘤的生長受到抑制。可單獨(dú)使用一種抗-BTLA抗體以抑制癌性腫瘤的生長。備選地，如下所述，抗-BTLA抗體可與其他免疫原性藥劑、標(biāo)準(zhǔn)癌癥治療、或其他抗體結(jié)合使用。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本公開提供了一種在受試者體內(nèi)抑制肺瘤細(xì)胞生長的方法，包括對(duì)該受試者給予治療有效量的抗-BTLA抗體，或其抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，該抗體是人類抗-BTLA抗體(例如本文所述的任何人類抗-人類BTLA抗體)。額外地或者備選地，該抗體可以是嵌合的或人源化的抗-BTLA抗體。優(yōu)選的可使用本公開的抗體抑制其生長的癌癥包含典型地對(duì)免疫療法作出響應(yīng)的癌癥。用于治療的優(yōu)選的癌癥的非限制性實(shí)例包括黑色素瘤(如轉(zhuǎn)移性惡性黑色素瘤)、腎癌、前列腺癌、乳癌、結(jié)腸癌及肺癌?？墒褂帽竟_的方法治療的其他癌癥的實(shí)例包括骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、表皮或眼內(nèi)惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)的癌癥、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病(包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病)、兒童期的實(shí)體瘤、淋巴細(xì)胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、腫瘤血管發(fā)生、脊柱軸瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波西肉瘤、表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋巴瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌(包括那些由石棉誘發(fā)的癌癥)、以及所述癌癥的組合。本公開還可用于治療轉(zhuǎn)移性癌癥。任選地，抗BTLA的抗體可與免疫原性物質(zhì)組合，例如癌細(xì)胞、經(jīng)純化的肺瘤抗原(包括重組蛋白、肽、以及碳水化合物分子)、細(xì)胞、以及用編碼免疫刺激性細(xì)胞因子的基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞(Heetal(2004)/./附/mmo/.173:4919-28)?？墒褂玫姆瘟鲆呙绲姆窍拗菩詫?shí)例包括黑色素瘤抗原的肽，例如gp100、MAGE抗原、Trp-2、MART1和/或酪氨酸酶、或經(jīng)轉(zhuǎn)染以表達(dá)細(xì)胞因子GM-CSF的腫瘤細(xì)胞的肽(以下進(jìn)一步討論)。在人類中，已經(jīng)表明一些腫瘤具有免疫原性，例如黑色素瘤。據(jù)預(yù)計(jì)，通過阻斷BTLA提高T細(xì)胞活化的閾值，可在宿主體內(nèi)激活腫瘤應(yīng)答。當(dāng)與接種疫苗方案組合時(shí)，BTLA阻斷可能是最為有效的。已經(jīng)設(shè)計(jì)了許多實(shí)驗(yàn)策略用于接種疫苗對(duì)抗腫瘤(參見Rosenberg,S.，2000，DevelopmentofCancerVaccines,ASCOEducationalBookSpring:60-62;Logothetis,C.，2000,ASCOEducationalBookSpring:300-302;Khayat，D.2000，ASCOEducationalBookSpring:414-428;Foon，K.2000，ASCOEducationalBookSpring:730-738;也參見Restifo，N.andSznol，M.,CancerVaccines,Ch.61，pp3023-3043inDeVita，V."(eds.)，1997，Cancer:.PrinciplesandPracticeofOncology.FifthEdition)。在這些策略的其中之一，使用自體或同種異體的腫瘤細(xì)胞來制備疫苗。已經(jīng)表明這些細(xì)胞疫苗在腫瘤細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)以表達(dá)GM-CSF時(shí)最為有效。已經(jīng)表明，對(duì)于腫瘤接種而言，GM-CSF是抗原呈遞的有效激活劑(Dranoff"fl/.(1993)尸亂層/.Jed2^:3539-43)。對(duì)不同腫瘤中的基因表達(dá)及大規(guī)模基因表達(dá)模式的研究導(dǎo)致對(duì)所謂的腫瘤特異性抗原給出了定義(Rosenberg,SA(1999)Immunity10:281-7)。在4艮多情況下，這些腫瘤特異性抗原是在腫瘤中、以及從其中產(chǎn)生腫瘤的細(xì)胞中表達(dá)的分化抗原，例如黑色素細(xì)胞抗原gp100、MAGE抗原、以及Trp-2。更重要的是，這些抗原中有許多抗原可以顯示為在宿主體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的腫瘤特異性T細(xì)胞的靶標(biāo)。BTLA阻斷可與在腫瘤中表達(dá)的一組重組蛋白和/或肽結(jié)合使用，目的是產(chǎn)生對(duì)這些蛋白質(zhì)的免疫應(yīng)答。這些蛋白質(zhì)通常被免疫系統(tǒng)視為是自身抗原，并因此對(duì)它們具有耐受性。肺瘤抗原還可包括端粒酶蛋白，該酶是合成染色體的端粒所必需的，并且在超過85。/。的人類癌癥中、以及僅在有限數(shù)量的體細(xì)胞組織中表達(dá)(Kimetal.(1994)Sc/e/ice266:2011-2013)(這些體細(xì)J包組織可通過不同方式免受免疫攻擊)。因?yàn)楦淖兊鞍仔蛄谢蛟趦蓚€(gè)無關(guān)序列(如費(fèi)城染色體(Philadephiachromosome)中的bcr-abl)之間生成融合蛋白的體細(xì)胞突變，或來自B細(xì)胞腫瘤的獨(dú)特型，腫瘤抗原也可以是在癌細(xì)胞中表達(dá)的"新抗原，，。其他肺瘤疫苗可以包括來自涉^A類癌癥的病毒蛋白，例如人乳頭瘤病毒(HPV)、肝炎病毒(HBV及HCV)及卡波西皰滲肉瘤病毒(KHSV)。可與BTLA阻斷聯(lián)合使用的腫瘤特異性抗原的另一種形式是從腫瘤組織自身分離出來的經(jīng)純化的熱休克蛋白(HSP)。這些熱休克蛋白含有來自腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)片段，并且這些HSP在送遞至抗原呈遞細(xì)胞時(shí)對(duì)于引發(fā)腫瘤免疫性是高度有效的(Suot，R&Srivastava，P(1995)Sc/ew"1^2:1585-1587;Tamura，Y."fl/.(1997)腸臟278:117-120)。胞。DC可在活體外(exvivo)產(chǎn)生，并且負(fù)載有不同蛋白及肽抗原、以及腫瘤細(xì)胞提取物(Nestle,F.etal.(1998)A^"^AfW/d"e4:328-332)。DC同樣也可通過遺傳方法被轉(zhuǎn)導(dǎo)以表達(dá)這些肺瘤抗原。為了進(jìn)行免疫，還將DC直接與腫瘤細(xì)胞進(jìn)4亍融合(Kugler，A.etal.(2000)7Va似"Af^Z/"Vief:332-336)。作為接種的一種方法，DC免疫可與BTLA阻斷有效地聯(lián)合，以激活更有效的抗腫瘤應(yīng)答。BTLA阻斷還可與標(biāo)準(zhǔn)的癌癥治療相結(jié)合。BTLA阻斷可與化學(xué)療法的方案有效聯(lián)合。在這些情況下，降低所給予的化療試劑的劑量是可能的(Mokyr，M.etal.(1998)C""cw/^^"/rAf5:5301隱5304)。此類組合的一個(gè)實(shí)例是抗-BTLA抗體與氨烯咪胺組合用于治療黑色素瘤。此類組合的另一個(gè)實(shí)例是抗-BTLA抗體與白細(xì)胞介素-2(IL-2)組合用于治療黑色素瘤。BTLA阻斷與化學(xué)療法的聯(lián)合使用背后的科學(xué)理論在于大部分化療化合物的細(xì)胞毒性作用所致的細(xì)胞死亡將會(huì)導(dǎo)致抗原呈遞途徑中腫瘤抗原水平的升高。通過細(xì)胞死亡可能導(dǎo)致與BTLA阻斷起到協(xié)同作用的其它聯(lián)合療法是方文射、外科手術(shù)、以及激素剝奪(hormonedeprivation)。這些方法中每一種方法在宿主中均生成了腫瘤抗原的來源。血管發(fā)生抑制劑也可與BTLA阻斷組合。血管發(fā)生的抑制作用導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡，這可使肺瘤抗原進(jìn)入宿主抗原呈遞途徑。BTLA阻斷抗體可以與雙特異性抗體聯(lián)合使用，這些雙特異性抗體可以將表達(dá)Fca或Fc/受體的效應(yīng)細(xì)胞耙向腫瘤細(xì)胞(參見例如美國專利號(hào)5，922，845及5，837，243)。雙特異性抗體可以用于革巴向兩個(gè)單獨(dú)的抗原。例如抗Fc受體/抗肺瘤抗原(如Her-2/neu)雙特異性抗體已經(jīng)被用于將巨噬細(xì)胞靶向腫瘤位點(diǎn)。這一靶向可更有效地激活腫瘤特異性應(yīng)答。這些應(yīng)答的T細(xì)胞分支(arm)可通過使用BTLA阻斷得到增大。備選地，通過使用雙特異性抗體可將抗原直接遞送至DC，這些雙特異性抗體結(jié)合肺瘤抗原及樹突細(xì)胞特異性的細(xì)胞表面標(biāo)記。腫瘤通過多種機(jī)制逃避宿主免疫監(jiān)視?？赡芡ㄟ^使由腫瘤表達(dá)并且具有免疫抑制性的蛋白質(zhì)的失活來克服這些機(jī)制中的許多機(jī)制。除此之外，這些蛋白包括TGF-p(Kehrl，J.C"/.(J)1986和163;1037-1050),IL畫IO(Howard,M.&O'Garra，A.(1992)/附畫朋/柳7W"j;12:198-200)，及Fas配體(Hahne，M."(1996)腸臟274:1363-1365)?？惯@些實(shí)體中的每一種的抗體可能與抗-BTLA聯(lián)合使用，以抵銷免疫抑制劑的作用，并有助于宿主的腫瘤免疫應(yīng)答。可用于激活宿主免疫應(yīng)答的其他抗體可以與抗-BTLA聯(lián)合使用。這些抗體包括在樹突細(xì)胞表面激活DC功能及抗原呈遞的分子?？?CD40抗體能夠有效的取代T細(xì)胞輔助細(xì)胞的活性(Ridge，J.W/.(1998)Nature393:474-478))并且可以用于結(jié)合BTLA抗體(Ito，N."a/(2000)/附/fi"加6&Agy迎(5)527-40)。激活T細(xì)胞共刺激分子的抗體，例如CTLA畫4(美國專利號(hào)5,811,097)、OX-40(Weinberg,A.""/.(2000)/附/wm10/里2160-2169)，4-1BB(Melero，I."(1997)7VW"reM^Z/d"e2:682-685(1997)、以及ICOS(Hutloff,A.Ca/.(1999)7Va似"^22:262-266)也可以使T細(xì)胞的活化水平增加。目前，骨髓移植被用來治療多種造血源的腫瘤。盡管移植物抗宿主病是由于這種治療所致，但是治療益處可能獲自移植物抗腫瘤的應(yīng)答。BTLA阻斷可以用于提高移植肺瘤特異性T細(xì)胞的供體的有效性。還有幾個(gè)實(shí)驗(yàn)性治療方案，這些治療方案涉及抗原特異性T細(xì)胞的活體外激活和擴(kuò)增，以及將這些細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移進(jìn)入受者，以便抗原特異性T細(xì)胞對(duì)抗腫瘤(Greenberg，R.&Riddell，S.(1999)Sc/e""285:546-51)。這些方法還可用于激活對(duì)于諸如CMV的感染物的T細(xì)胞應(yīng)答。在抗-BTLA抗體存在時(shí)，活體外激活有望增加過繼轉(zhuǎn)移的T細(xì)胞的頻率及活性。感染性疾病本公開的其它方法可用于治療暴露于特定毒素或病原體的患者。因此，本公開的另一方面提供了治療受試者體內(nèi)感染性疾病的方法，包含給予受試者抗-BTLA抗體或，其抗原結(jié)合部分，使得受試者的感染性疾病得以治療。優(yōu)選地，該抗體是一種人類抗-人類BTLA抗體(例如本文所述的人類抗-BTLA抗體中任何抗體)。另外地或備選地，該抗體可以是一種嵌合的或人源化的抗體。與以上討論的對(duì)腫瘤的應(yīng)用相似，抗體介導(dǎo)的BTLA阻斷可以單獨(dú)使用，或作為佐劑與疫苗聯(lián)合，以刺激針對(duì)病原體、毒素、以及自身抗原的免疫應(yīng)答。本治療方法特別適用的病原體的實(shí)例包括目前沒有有效疫苗的病原體、或者常規(guī)疫苗不完全有效的病原體。這些病原體包括但不限于HIV、肝炎(乙型，及丙型)、流行性感冒、皰滲、賈弟蟲、瘧疾、利什曼原蟲、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌。BTLA阻斷對(duì)抗由諸如HIV(它在感染過程中呈現(xiàn)經(jīng)改變的抗原)的物質(zhì)建立的感染是特別有用的。這些新表位在抗-人類BTLA給藥期間被識(shí)別為外源的，因此引起強(qiáng)烈的T細(xì)胞應(yīng)答，該應(yīng)答不會(huì)被提供BTLA的負(fù)性信號(hào)減弱。引起本公開方法可治療的感染的病原性病毒的一些實(shí)例包括HIV、肝炎(乙型、或丙型)、皰滲病毒(如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II、以及CMV、EB病毒)、腺病毒、流感病毒、黃病毒、?？刹《尽⒈遣《尽⒖滤_奇病毒、冠狀病毒(cornovirus)、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻瘆病毒、風(fēng)滲病毒、細(xì)小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革熱病毒、乳頭瘤病毒、軟疣病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒、以及蟲媒病毒性腦炎病毒。引起本公開的方法可治療的感染的病原性細(xì)菌的一些實(shí)例包括衣原體、立克次體細(xì)菌、分支桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌及'淋球菌(conococci)克雷伯氏菌屬、變形菌、沙雷氏菌、假單胞菌、軍團(tuán)桿菌、白喉、沙門氏菌、芽孢桿菌、霍亂、破傷風(fēng)、肉毒桿菌、炭疽、鼠疫、鉤端螺旋體病、以及萊姆病細(xì)菌?？梢鸨竟_方法可治療的感染的病原性真菌的一些實(shí)例包括假絲酵母屬(白假絲酵母、克魯斯假絲酵母、光滑假絲酵母、熱帶假絲酵母等)、新型隱球酵母、曲霉屬(煙曲霉、黑曲霉等)、毛霉菌目的屬(毛霉屬、犁頭霉屬、根霉屬(rhizophus))、申克氏孢子絲菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌、以及夾膜組織胞漿菌。引起本公開方法可治療的感染的病原性寄生蟲的一些實(shí)例包括溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoebahistolytica)、結(jié)腸腸袋蟲(Balan礎(chǔ)腿coli)、福氏耐格里原蟲(Naegleriafowleri)、棘阿米巴屬的種(Acanthamoebasp.)、蘭伯賈弟蟲(Giardialamblia)、隱孢子蟲屬的種(Cryptosporidiumsp.)、卡氏肺嚢蟲(Pneumocystiscarinii)、間日癡原蟲(Plasmodiumvivax)、果氏巴貝蟲(Babesiamicroti)、布氏錐蟲(Trypanosomabrucei)、克氏錐蟲(Trypanosomacruzi)、沖土氏利什曼原、蟲(Leishmaniadonovani)、鼠弓形體(Toxoplasmagondi)、巴西日?qǐng)A線蟲(Nippostrongylusbrasiliensis)。在所有以上方法中，BTLA阻斷可與其他形式的免疫療法，例如細(xì)胞因子治療(例如干擾素、GM-CSF、G-CSF、IL-2)、或雙特異性抗體療法聯(lián)合，這會(huì)提供增強(qiáng)的腫瘤抗原呈遞(參見例如，Holliger(1993)胸/.CAS^90:6444-6448;Poljak(1994)2:1121-1123)。自身免疫反應(yīng)抗-BTLA抗體可以引發(fā)并擴(kuò)大自身免疫反應(yīng)。實(shí)際上，使用腫瘤細(xì)胞及肽疫苗引起的抗腫瘤應(yīng)答顯示許多抗腫瘤應(yīng)答參與抗自身反應(yīng)性(在vanElsasWa/.(同上)抗-CTLA-4+GM-CSF-修飾的B16黑色素瘤中觀察到的脫色作用；Trp-2接種的小鼠中的脫色作用(Overwijk，W.C(1999)TV",/.C/^.A2^:2982-2987);通過TRAMP肺瘤細(xì)胞疫苗引起的自身免疫前列腺炎(Hurwitz，A.(2000)s"/m)，在人類臨床試驗(yàn)中觀察到的黑色素瘤肽抗原接種疫苗及白癜風(fēng)(vitiligo)(Rosenberg,SAandWhite,DE(1996)//附附imo狄er￡>/7/rflsisr"附or/附附w朋/g(1):81-4)。因此，可能考慮使用與多種自身蛋白聯(lián)合的抗-BTLA阻斷，目的是設(shè)計(jì)疫苗接種方案，以有效產(chǎn)生針對(duì)這些自身蛋白的免疫應(yīng)答用于疾病治療。例如，阿爾茨海默氏病涉及腦內(nèi)淀粉樣沉積物中A(3肽的不適當(dāng)累積；針對(duì)淀粉狀蛋白的抗體應(yīng)答能夠清除這些淀粉樣沉積物(Schenketal.，(1999)Nature，173-177)。其它自身蛋白也可能用作靶標(biāo)，例如用于治療過敏反應(yīng)及哮喘的IgE，以及用于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的TNFoc。最后，針對(duì)多種激素的抗體應(yīng)答可通過使用抗-BTLA抗體來誘導(dǎo)。對(duì)于生殖激素的中和抗體應(yīng)答可用于避孕。針對(duì)特定腫瘤生長所需的激素以及其他可溶性因子的中和抗體應(yīng)答也可被認(rèn)為是可能的疫苗接種粑標(biāo)。與以上所述的抗-BTLA抗體的使用相似的方法可以用于誘導(dǎo)治療性自身免疫應(yīng)答，以治療具有其他自身抗原不適當(dāng)累積的患者，例如淀粉樣蛋白沉積物，包括阿爾茨海默氏病中的AP、諸如TNFa的細(xì)胞因子、以及IgE。同時(shí)，在一些實(shí)施方案中，激動(dòng)劑也可以用于降低自身免疫應(yīng)答?？?BTLA抗體可用作激動(dòng)劑，由此抑制由表達(dá)BTLA的免疫細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。使用這種激動(dòng)劑抗體可以治療的疾病的一些實(shí)例包括自身免疫疾病、移植排斥、以及炎癥。疫苗通過將抗-BTLA抗體與目的抗原(如疫苗)進(jìn)行同時(shí)給藥，抗-BTLA抗體可用于刺激抗原特異性免疫應(yīng)答。因此，本公開的另一方面提供了在受試者體內(nèi)增強(qiáng)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的方法，包含對(duì)受試者施用(i)抗原；以及(ii)抗-BTLA抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得在受試者體內(nèi)的對(duì)于該抗原的免疫應(yīng)答得以增強(qiáng)。優(yōu)選地，該抗體是人類抗-人類BTLA抗體(例如在此所述的人類抗-BTLA抗體中任何抗體)。另外地或備選地，該抗體可以是嵌合的或人源化的抗體。該抗原可以是，例如腫瘤抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原、或來自病原體的抗原。這種抗原的非限制性實(shí)例包括在以上各部分討論的抗原，例如以上討論的肺瘤抗原(或肺瘤疫苗)、或來自以上所述的病毒、細(xì)菌、或其他病原體的抗原。體內(nèi)或體外施用本公開的抗體組合物(如，人類單克隆抗體、多特異性及雙特異性分子及免疫綴合物)的適宜途徑在本領(lǐng)域中是熟知的，并且可通過本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員進(jìn)行選擇。例如，這些抗體組合物可通過注射(如靜脈內(nèi)或皮下)進(jìn)行給藥。所用分子的適宜劑量取決于受試者的年齡與體重、以及抗體組合物的濃度和/或劑型。如先前所述，本公開的人類抗-BTLA抗體可以與一種或其他多種治療劑(細(xì)胞毒性劑、放射毒性劑、或免疫抑制劑)共同給藥。該抗體可以與該治療劑相連接(作為免疫復(fù)合體)，或者可以與該治療劑分開給藥。在后一種(分開給藥)情況下，該抗體可以在該試劑之前、之后給藥、或與該試劑同時(shí)給藥，或者可以與其他已知治療(例如抗癌治療，如放射)共同給藥。除其他之外，這種治療劑還包含抗腫瘤劑，例如多柔比星(阿霉素)、順鉑、硫酸博來霉素、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、氨烯咪胺以及環(huán)磷酰胺、羥基脲，它們自身只在對(duì)患者有毒性或亞毒性的水平時(shí)有效。順鉬以100mg/ml的劑量靜脈內(nèi)給藥，每四周一次，而阿霉素以60至75mg/ml的劑量靜脈內(nèi)給藥，每21天一次。本公開的人類抗-BTLA抗體，或它們的抗原結(jié)合片段與化學(xué)治療劑共同給藥，提供兩種抗癌治療劑，這兩種抗癌治療劑通過不同的機(jī)制起作用，這些機(jī)制產(chǎn)生針對(duì)人類腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒效應(yīng)。這種共同給藥可以解決由于肺瘤細(xì)胞產(chǎn)生藥物抗性或者抗原性改變方面的問題，該抗原性改變可能會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞與抗體不反應(yīng)。同樣在本公開范圍內(nèi)的是包含本公開的抗體組合物(如人類抗體、雙特異性或多特異性分子、或免疫綴合物)以及使用說明書的試劑盒。該試劑盒可以進(jìn)一步包含至少一種額外的試劑、或者一種或多種額外的本公開人類抗體(例如，具有互補(bǔ)活性的人類抗體，其結(jié)合不同于該第一人類抗體的BTLA抗原中的表位)。試劑盒典型地包括標(biāo)簽，其指示該試劑盒的內(nèi)容物的預(yù)期用途。術(shù)語標(biāo)簽包括在試劑盒上或與該試劑盒一起提供的，或者隨附該試劑盒的任何書面，或錄音材料。通過下列實(shí)施例對(duì)本公開進(jìn)行進(jìn)一步闡述，不應(yīng)將這些實(shí)施例理解為進(jìn)一步限定。本申請(qǐng)通篇引用的所有附圖及所有參考文獻(xiàn)、專利及公開的專利申請(qǐng)的內(nèi)容均明確地并入本文作為參考。實(shí)施例實(shí)施例1:針對(duì)BTLA的人類單克隆抗體的產(chǎn)生抗原免疫接種方案使用以下二者作為抗原(i)包含BTLA的細(xì)胞外部分的重組融合蛋白以及(ii)膜結(jié)合的全長BTLA。這兩種抗原均通過重組轉(zhuǎn)染方法在CHO細(xì)胞系內(nèi)產(chǎn)生。轉(zhuǎn)基因HuMab及KM小鼠TM使用HuMab轉(zhuǎn)基因小鼠的HCo7品系及轉(zhuǎn)基因轉(zhuǎn)染色體小鼠的KM品系制備BTLA的完全人類單克隆抗體，其中的每一種均表達(dá)人類抗體基因。在這些小鼠品系的每一品系中，內(nèi)源性小鼠K輕鏈基因已經(jīng)被純合破壞，如ChenCfl/.(7""五MJ50丄":WJ-S20所述的，并且內(nèi)源性小鼠重鏈基因已經(jīng)被純合地破壞，如PCT公開文件WO01/09187的實(shí)施例1所述。這些小鼠品系中每一種品系攜帶人類K輕鏈轉(zhuǎn)基因KCo5，如Fishwild""/.(1996)TV"似reBZotec/^o/o^1^:845-851所述。HCo7品系攜帶HCo7人類重鏈轉(zhuǎn)基因，如美國專利號(hào)5，545，806;5,625,825;以及5，545，807所述。KM品系含有SC20轉(zhuǎn)染色體，如PCT公開文件WO02/43478中所述。HuMab及KM免疫為產(chǎn)生抗BTLA的完全人類單克隆抗體，用純化的重組BTLA融合蛋白及經(jīng)BTLA轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞作為抗原對(duì)HuMab小鼠及KM小鼠TM進(jìn)行免疫。對(duì)于HuMab小鼠的通用免疫方案說明于Lonberg，N.Wfl/(1994)7Vfl/""e368(6474):856-859;Fishwild，D."(1996)TVWwe祝0tec/mofogj14:845-851以及PCT公開WO98/24884。使用BTLA融合蛋白抗原的純化重組制劑(5至50照)及5至lOxlO6細(xì)胞經(jīng)腹膜內(nèi)(Ip))、或皮下(Sc)對(duì)HuMab小鼠及KM小鼠tm迸行免疫。表2BTLAKM小鼠tm免疫方案細(xì)胞滴細(xì)BTL融合滴細(xì)**/BTL,BTLA-度胞度胞A-IgIg*IgRi第第鼠；w<bi弟20第0天哲，工3153I7天天天二v第90天6286第87天天天559Ig-Ri135細(xì)116bi0胞Ig-Ribibi,559細(xì)胞Ig-R1135，19bi0胞121細(xì)Ig畫PB50胞S融合-55911405細(xì)Ig-PB融合畫559190胞S*Ribi佐劑中BTLA-Ig25一小鼠*細(xì)胞=每只小鼠107個(gè)CHO-BTLA細(xì)胞將BTLAIg抗原及如表2列出的在CHO細(xì)胞上表達(dá)的BTLA聯(lián)合，對(duì)轉(zhuǎn)基因KM小鼠tm進(jìn)行為期90天的免疫。融合前，將Ribi佐劑中的BTLA-Ig作為Sc+Ip免疫進(jìn)行給藥，或在PBS中作為靜脈間注射進(jìn)行給藥。將PBS中的細(xì)胞(lxl0々小鼠))進(jìn)行Ip給藥。該免疫方案見表2。通過眶后取血監(jiān)測(cè)免疫應(yīng)答。通過ELISA篩選血漿(如以下所述)，將具有足夠抗-BTLA人類免疫球蛋白滴度的小鼠用于融合。用抗原經(jīng)靜脈內(nèi)加強(qiáng)免疫小鼠3天，然后處死并取出脾臟。對(duì)10只HuMab及10只KM小鼠tm進(jìn)行免疫。生產(chǎn)抗-BTLA抗體的HuMab或KM小鼠TM的選擇為了選擇產(chǎn)生結(jié)合BTLA的抗體的HuMab或KM小鼠TM，如Fishwild，D.C(1996)所述，用ELISA測(cè)試來自經(jīng)免疫的小鼠的血清。簡(jiǎn)言之，用含有l(wèi)照/ml的來自經(jīng)轉(zhuǎn)染的CHO細(xì)胞的經(jīng)純化的重組BTLA融合蛋白的PBS對(duì)微量滴定板進(jìn)行包被，每孔100pl，在4°C下孵育過夜，然后用含有1%BSA的PBS/吐溫(0.05%)以每孔200pi進(jìn)行封閉。將來自經(jīng)BTLA免疫的小鼠的血清稀釋液加入每一個(gè)孔，并在環(huán)境溫度下孵育1至2小時(shí)。用PBS/吐溫清洗該板，然后用綴合有堿性磷酸酶(AP)的山羊-抗人類IgG多克隆抗體在室溫下孵育1小時(shí)。清洗后，將該板用pNPP底物(SigmaN2770)進(jìn)行顯色，并由分光光度計(jì)在OD405進(jìn)行分析。將形成抗-BTLA抗體最高滴度的小鼠用于融合。如以下所述進(jìn)行融合，并通過ELISA及FACS測(cè)試雜交瘤上清液的抗-BTLA活性。產(chǎn)生抗BTLA的人類單克隆抗體的雜交瘤的生成根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，用PEG將從KM小鼠TM分離的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞系進(jìn)行融合。接著對(duì)產(chǎn)生的雜交瘤進(jìn)行篩選抗原特異性抗體的產(chǎn)生。用50%PEG(Sigma)使來自免疫小鼠的脾細(xì)胞的單細(xì)胞懸液與相同數(shù)目的P3X63-Ag8.653非分泌型小鼠骨髓瘤細(xì)胞(ATCC，CRL1580)進(jìn)行融合、或通過電融合(E-fusion，CytoPulseTM技術(shù))進(jìn)行融合。將細(xì)胞以大約2xl()5培養(yǎng)在平底微量滴定板上，之后在含有以下物質(zhì)的選擇性培養(yǎng)基中培育2周10o/。FBS、3至5%Origen(IGEN)、OPI補(bǔ)充成分(SigmaO5003:l.lxl(T3M草酰乙酸、4.5xl0-4丙酮酸鈉、以及24國際單位/L牛胰島素)、4mML-谷氨酰胺、0.055mM2-巰基乙醇、50單位/ml青霉素、50mg/ml鏈霉素、以及l(fā)xHAT。大約2周后，可以將細(xì)胞培養(yǎng)于以HT替代HAT的培養(yǎng)基中。然后針對(duì)人類抗-BTLA單克隆IgG抗體，通過ELISA及FACS(以上所述)對(duì)各個(gè)孔進(jìn)行篩選。對(duì)分泌抗體的雜交瘤進(jìn)行再次平板接種、再次篩選，并且，如果仍對(duì)人類IgG呈陽性，則通過有限稀釋將抗-BTLA單克隆抗體進(jìn)行亞克隆至少兩次。然后將穩(wěn)定的亞克隆在體外培養(yǎng)以在組織培養(yǎng)基中產(chǎn)生少量抗體用于進(jìn)一步表征。選擇雜交瘤克隆1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2、E8D9、10H6、以及4C9用于進(jìn)一步分析。實(shí)施例2:人類單克隆抗體1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6、以及4C9的結(jié)構(gòu)表征使用標(biāo)準(zhǔn)PCR技術(shù)，分別從1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6及4C9雜交瘤獲得編碼1B4、E4H9、3C2、3C2a、6A5、11E2、E8D9、10H6及4C9單克隆抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)的cDNA序列，并用標(biāo)準(zhǔn)DNA測(cè)序技術(shù)進(jìn)行測(cè)序。1B4的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖1A以及SEQIDNO:53及1所示。1B4的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖1B以及SEQIDNO:59及7所示。將1B4重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明1B4重鏈利用來自人類種系VH2-05的VH區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。1B4的VH序列與種系VH2-05序列的比對(duì)如圖7所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)1B4vh序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖1A及7，以及SEQIDNO:14、20及26所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將1B4輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明1B4輕鏈利用來自人類種系VkA27的vl區(qū)段及來自人類種系JK5的JK區(qū)段。1B4的VL序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖8所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)1B4vl序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖1B及8，以及SEQIDNO:32、39及46所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。E4H9的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖2A以及SEQIDNO:54及2所示。E4H9的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖2B以及SEQIDNO:60及8所示。將E4H9重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明E4H9重鏈利用來自人類種系VH2-70的VH區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。E4H9VH序列與種系VH2-70序列的比對(duì)如圖9所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)E4H9VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖2A及9,以及SEQIDNO:15、21及27所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將E4H9的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明E4H9輕鏈利用來自人類種系VKA27的VL區(qū)段及來自人類種系JK3的JK區(qū)段。E4H9VL序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖10所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)E4H9Vt序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖2B及33，以及SEQIDNO:40和47所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。3C2的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖3A以及SEQIDNO:55及3所示。3C2的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖3B以及SEQIDNO:61及9所示。將3C2的重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明3C2重鏈利用來自人類種系VH4-59的Vh區(qū)段、來自人類種系6-19的D區(qū)段、以及來自人類種系JH4b的JH區(qū)段。3C2Vh序列與種系VH4-59序列的比對(duì)如圖11所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)3C2VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖3A及11，以及SEQIDNO:16、22及28所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將3C2的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明3C2輕鏈利用來自人類種系VKL18的VL區(qū)段及來自人類種系JK4的JK區(qū)段。3C2的V^序列與種系VKL18序列的比對(duì)如圖12所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)3C2VL序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖3B及11，以及SEQIDNO:34、41及48所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的i兌明。3C2a的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖3C以及SEQIDNO:62及10所示。將3C2a的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明3C2a輕鏈利用來自人類種系VKA27的VL區(qū)段及來自人類種系JK2的JK區(qū)段。3C2a的V^序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖13所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)3C2aVi序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖3C和12以及SEQIDNO:35、42及49所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。6A5的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖4A以及SEQIDNO:56及4所示。6A5的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及M酸序列分別如圖4B以及SEQIDNO:63及11所示。將6A5的重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明6A5重鏈利用來自人類種系VH2-05的Vh區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。6A5的VH序列與種系VH2-05序列的比對(duì)如圖14所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)6A5VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖4A及14，以及SEQIDNO:17、23及29所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。行比較，證明6A5輕鏈利用來自人類種系VKA27的VL區(qū)段及來自人類種系JK5的JK區(qū)段。6A5的V^序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖15所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)6A5Vt序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖4B及36，以及SEQIDNO:43及50所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的i兌明。11E2的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖5A以及SEQIDNO:57及5所示。11E2的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖5B以及SEQIDNO:64及12所示。將11E2的重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明11E2重鏈利用來自人類種系VH3-20的VH區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。11E2的VH序列與種系VH3-20序列的比對(duì)如圖16所示。4吏用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)11E2VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖5A及16，以及SEQIDNO:18、24及30所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將11E2的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明11E2輕鏈利用來自人類種系VKL15的VL區(qū)段及來自人類種系JK1的JK區(qū)段。11E2的V^序列與種系VKL15序列的比對(duì)如圖17所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)11E2VL序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖5B及17，以及SEQIDNO:37、44及51所示的輕鏈CDRl、CDR2以及CD3區(qū)的說明。E8D9的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖6A以及SEQIDNO:57及5所示。E8D9的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖6B以及SEQIDNO:65及13所示。將E8D9重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明E8D9重鏈利用來自人類種系VH2-05的VH區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。E8D9的Vw序列與種系VH2-05序列的比對(duì)如圖18所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)E8D9VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖6A及18，以及SEQIDNO:19、25及31所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將E8D9的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明E8D9輕鏈利用來自人類種系VKA27的VL區(qū)段及來自人類種系JK4的JK區(qū)段。E8D9VL的序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖19所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)E8D9VL序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖6B及19，以及SEQIDNO:38、45及52所示的輕鏈CDRl、CDR2以及CD3區(qū)的說明。10H6的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖21A以及SEQIDNO:83及74所示。10H6的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖21B以及SEQIDNO:84及75所示。將10H6重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明10H6重鏈利用來自人類種系VH3-33的VH區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。10H6的VH序列與種系VH4-59序列的比對(duì)如圖22所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)10H6的VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖21A及22，以及SEQIDNO:77、78及79所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將10H6輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明10H6輕鏈利用來自人類種系Vk04的Vl區(qū)段，它被分類為一種擬基因。但是在這種情況下，實(shí)際上它是被表達(dá)的。10H6輕鏈還利用人類種系JK2的JK片段。10H6的Vt序列與種系VK04序列的比對(duì)如圖23所示。4吏用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)10H6Vl序列逃一歩分析，得到分別如圖21B及23，以及SEQIDNO:80、81及82所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。10H6a的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖21C以及SEQIDNO:98及76所示。將10H6a的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明10H6a輕鏈利用來自人類種系VkA27的Vl區(qū)段及來自人類種系JK5的JK區(qū)段。10H6a的V^序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖24所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)10H6aVt序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖21C及24，以及SEQIDNO:95、96及97所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。4C9的重鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖25A以及SEQIDNO:93及85所示。4C9的輕鏈可變區(qū)的核苷酸及氨基酸序列分別如圖25B以及SEQIDNO:94及86所示。將4C9重鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白重鏈序列進(jìn)行比較，證明4C9重鏈利用來自人類種系VH2-05的Vh區(qū)段、來自人類種系3-10的D區(qū)段、以及來自人類種系JH6b的JH區(qū)段。4C9的Vh序列與種系VH2-05序列的比對(duì)如圖26所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)4C9VH序列進(jìn)一步分析，得到分別如圖25A及26，以及SEQIDNO:87、88及89所示的重鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的說明。將4C9的輕鏈免疫球蛋白序列與已知的人類種系免疫球蛋白輕鏈序列進(jìn)行比較，證明4C9輕鏈利用來自人類種系VKA27的VL區(qū)段及來自人類種系JK1的JK區(qū)段。4C9的Vt序列與種系VKA27序列的比對(duì)如圖27所示。使用CDR區(qū)測(cè)定的Kabat系統(tǒng)對(duì)4C9Vl序列迸一歩分析，得到分別如圖25B及27，以及SEQIDNO:90、91及92所示的輕鏈CDR1、CDR2以及CD3區(qū)的"i兌明。實(shí)施例3:抗-BTLA人類單克隆抗體的結(jié)合的表征在本實(shí)施例中，用Biacore分析法檢測(cè)了抗-BTLA抗體的結(jié)合親和力及結(jié)合動(dòng)力學(xué)。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)合動(dòng)力學(xué)及抑制作用。結(jié)合親和力及動(dòng)力學(xué)通過Biacore分析(BiacoreAB，Uppsala，Sweden)表征抗-BTLA抗體的親和力及結(jié)合動(dòng)力學(xué)。使用標(biāo)準(zhǔn)的胺偶聯(lián)化學(xué)及由Biacore提供的試劑盒，將經(jīng)純化的重組人類BTLA融合蛋白通過伯胺共價(jià)連接到CM5芯片(羧甲基葡聚糖包被的芯片)上。通過含有該抗體(濃度為267nM)的HBSEP緩沖液(由BiacoreAB提供)以50jil/min的流速進(jìn)行流動(dòng)，對(duì)結(jié)合進(jìn)行測(cè)定?？乖?抗體的結(jié)合動(dòng)力學(xué)持續(xù)3分鐘，并且解離動(dòng)力學(xué)持續(xù)7分鐘。使用BIA評(píng)估軟件(Biacore，AB)將結(jié)合曲線與解離曲線擬合至1:1的Langmuir結(jié)合模型。為了使結(jié)合常數(shù)的估計(jì)中親合力的影響最小化，只有相應(yīng)于結(jié)合及解離相的最初部分的數(shù)據(jù)用于擬合。所測(cè)定的KE值在表3中示出。表3.重鏈與輕鏈的質(zhì)量(KD)BiaCoreKD重鏈輕鏈克隆同種型xl(T9M質(zhì)量(D)質(zhì)量(D)<table>tableseeoriginaldocumentpage109</column></row><table>通過流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)合特異性在細(xì)胞表面表達(dá)重組人類BTLA的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系被開發(fā)，并用于通過流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定BTLA人類單克隆抗體的特異性。用表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，該質(zhì)粒含有全長cDNA，該cDNA編碼跨膜形式的BTLA。通過將該轉(zhuǎn)染細(xì)胞與濃度為0.01nM至66nM的抗-BTLA人類單克隆抗體一起孵育，來評(píng)估抗-BTLA人類單克隆抗體的結(jié)合。該抗體與105個(gè)BTLACHO細(xì)胞在4。C下在含有1%BSA的PBS中孵育60分鐘。將細(xì)胞在含有1%BSA的PBS里清洗2次，然后用PE標(biāo)記的抗人類IgG進(jìn)行染色(JacksonInmmuoResearch109-115-098)。使用Prism制圖軟件(GraphPadsoftware)，通過平均熒光強(qiáng)度(MFI)對(duì)抗體濃度的對(duì)數(shù)作圖以圖解的方式確定了EC5()。使用FACSArray流式細(xì)胞術(shù)(BectonDickinson,SanJose,CA)進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析。該結(jié)果如圖28A所示。實(shí)施例4:抗-BTLA抗體抑制HVEM配體與表達(dá)BTLA的細(xì)胞的結(jié)合BTLAMab對(duì)HVEM與BTLA的結(jié)合的阻斷能力也可以通過FACS測(cè)定，并表達(dá)為阻止HVEMIg與105個(gè)BTLACHO細(xì)胞的最大程度結(jié)合的一半的抗-BTLAIgG濃度(IC5o)。將BTLACHO細(xì)胞與不同濃度的抗體于4°C下預(yù)先孵育30分鐘，然后將0.5ng/ml經(jīng)生物素標(biāo)記的HVEMIg(R&DSystemsBAF356)加入BTLACHO-IgG混合物，繼續(xù)孵育30分鐘。用含1%BSA的PBS清洗細(xì)胞2次，并用鏈霉抗生物素蛋白-PE(BDParmingen3554061)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色后，通過FACS檢測(cè)生物素HVEMIg的結(jié)合。使用Prism軟件(GraphPadSoftware)通過圖解的方式測(cè)定IC50值。結(jié)果如圖28B及圖28C所繪。實(shí)施例5:抗-BTLA抗體特異性的測(cè)定開發(fā)了ELISA測(cè)定法以確定一組抗-BTLA抗體對(duì)BTLA受體的特異性，并顯示抗-BTLA抗體與CD28受體家族的其他成員基本上沒有交叉反應(yīng)性將ELISA板用融合蛋白包被過夜，這些融和蛋白由一組CD28受體家族分子的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域融合到人類IgG的Fc部分而組成(表4)。將該板進(jìn)行清洗并且封閉，以使非特異性結(jié)合最小化。將一組抗-BTLA抗體及同種型對(duì)照抗體(表5)、以及陽性對(duì)照檢測(cè)抗體(表3)，全部稀釋至lng/mL，以一式兩份加入至檢測(cè)板達(dá)1個(gè)小時(shí)。充分清洗后，將適宜的HRP綴合的檢測(cè)抗體加入該板達(dá)l小時(shí)，隨后進(jìn)行清洗，并且使用3，3'，5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)作為底物進(jìn)行顯色。記錄在650nm測(cè)量的光密度。表4.錯(cuò)誤！從編輯字段的代碼無法產(chǎn)生目標(biāo)。表5.錯(cuò)誤！從編輯字段的代碼無法產(chǎn)生目標(biāo)。與觀察到的BTLA特異的反應(yīng)性相比(圖29A及29B),不存在與所測(cè)試的其他CD28受體家族成員中的任何成員的實(shí)質(zhì)性交叉反應(yīng)。這些試驗(yàn)結(jié)果提示這里所測(cè)試的這組抗-BTLA抗體特異性結(jié)合人類BTLA。實(shí)施例6:在體內(nèi)腫瘤S型中使用抗-BTLA抗體的治療用抗-BTLA抗體對(duì)植入了癌性腫瘤的小鼠進(jìn)行體內(nèi)治療，以測(cè)定該抗體在體內(nèi)對(duì)腫瘤生長的影響。使用抗-CTLA-4的抗體作為陽性對(duì)照，因?yàn)橐呀?jīng)表明這種抗體在體內(nèi)抑制腫瘤的生長。為了該項(xiàng)腫瘤研究，將6至8周齡的雌性AJ小鼠(HarlanLaboratories)根據(jù)體重隨機(jī)分成6組。在第0天，將溶解于200jilDMEM培養(yǎng)基中的2xl(^個(gè)SA1/N纖維肉瘤細(xì)胞經(jīng)皮下植入小鼠右側(cè)腹部。用PBS載體、或者10mg/kg的抗體治療這些小鼠。在第l、4、8及第11天，將大約200jtl含有抗體或者載體的PBS以腹膜內(nèi)注射對(duì)這些動(dòng)物給藥。每組包含10只動(dòng)物，并且這些組的構(gòu)成是(i)載體組；(ii)對(duì)照小鼠IgG;(iii)對(duì)照倉鼠IgG;(iv)倉鼠抗-小鼠BTLA抗體以及；(v)完全的人類抗-BTLA。對(duì)小鼠每周監(jiān)測(cè)腫瘤生長兩次，持續(xù)大約6周。使用電子測(cè)徑器對(duì)胂瘤進(jìn)行三維測(cè)量(高度x寬度x長度)并且計(jì)算腫瘤的體積。當(dāng)腫瘤長至腫瘤的終點(diǎn)(1500mm3)或者顯示體重減輕超過15%時(shí)，將小鼠實(shí)施安樂死。實(shí)施例7:抗體的其他結(jié)合特征通過BIAcoreTM使用抗體捕獲方法檢測(cè)了1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2及10H6抗體與重組BTLA蛋白的結(jié)合。使用抗-CHl(—種試劑抗體)捕獲這六種抗-BTLA單克隆抗體的每一種抗體，該抗-CHl對(duì)人類抗體的重鏈恒定區(qū)1是特異的(Zymed，CloneHP6045，儲(chǔ)存液濃度1.0mg/ml)。將抗-CHl以高密度(6200-7960RU)包被在CM5芯片上(BR-1000-14，研究級(jí))?；谟缮a(chǎn)商推薦的標(biāo)準(zhǔn)固定操作進(jìn)行了包被。然后，經(jīng)純化的1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2及10H6抗體以1至10ng/mL的濃度以10fil/min的流速持續(xù)0.5至1分鐘各自被捕獲在經(jīng)抗-CHl包被的芯片表面。將單一濃度的重組人類BTLA融合蛋白(200nM)以30jil/min的流速在被捕獲的抗體上注射了4分鐘。允許抗原解離10分鐘。每次循環(huán)后，用10pl的30mMNaOH對(duì)芯片表面進(jìn)行再生，然后用30jil的HBSEP清洗。在芯片上進(jìn)行同種型對(duì)照，并且將這些數(shù)據(jù)用于減去非特異性結(jié)合。使用BIAcoreControl軟件v3.2，在Biacore3000表面等離振子共振儀上進(jìn)行所有的實(shí)驗(yàn)。使用BiaEvaluationv3.2軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。這些結(jié)果如表6所示。表6:抗-BTLA抗體對(duì)人類BTLA的結(jié)合親和力及動(dòng)力學(xué)<table>tableseeoriginaldocumentpage111</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage112</column></row><table>對(duì)于1B4、E4H9、3C2、6A5、11E2及10H6的BIAcore結(jié)果證實(shí)了流式細(xì)胞術(shù)及較早前的BIAcore結(jié)果(如以上實(shí)例3中所述)，即所述抗體能夠以高親和力結(jié)合人類BTLA。值得注意的是使用在本實(shí)施例中所述的抗體捕獲法獲得的Kn值與實(shí)施例3中描述的Kd但稍有不同，實(shí)施例3使用的是抗原捕獲法。這可能是因?yàn)楸緦?shí)施例中使用的抗體捕獲法對(duì)其不具有抗體親和組分。額外地或備選地，這兩種方法之間的親和力差別可表明mAb對(duì)芯片表面捕獲的抗原與對(duì)溶液中抗原的分子識(shí)別過程中的不同。權(quán)利要求1.分離的人類單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，其中該抗體結(jié)合BTLA，并且其中該抗體表現(xiàn)出以下特性的至少一種(a)以1×10-7M或更小的KD與人類BTLA相結(jié)合；(b)抑制HVEM與BTLA的結(jié)合；或(c)基本上不與人類TrkB、CD28、CTLA-4、PD-1或ICOS相結(jié)合。2.如權(quán)利要求1所述的抗體，該抗體是IgGl或IgG4同種型的全長抗體。3.如權(quán)利要求1所述的抗體4.如權(quán)利要求1所述的抗體與人類BTLA相結(jié)合。5.如權(quán)利要求1所述的抗體與人類BTLA相結(jié)合。6.如^K利要求1所述的抗體與人類BTLA相結(jié)合。7.如權(quán)利要求1所述的抗體之間的KD與人類BTLA相結(jié)合。8.分離的人單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，其中該抗體與參照抗體交叉竟?fàn)幗Y(jié)合BTLA,該參照抗體包含(a)人類重鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:l、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基酸序列；以及(b)人類輕鏈可變區(qū)，其包含選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基酸序列。9.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:l的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:7的氨基,列。10.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQID，該抗體是抗體片段或單鏈抗體。，其中該抗體以5xl0-8M或更小的KD，其中該抗體以lxl(T8M或更小的KD，其中該抗體以5xl(T9M或更小的KD，其中該抗體以lxl0-8M至lxl(T10MNO:2的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。11.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。12.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:3的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:IO的氨基酸序列。13.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:ll的氨基酸序列。14.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。15.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:6的氨基^f列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:13的M酸序列。16.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:74的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:75的氨基酸序列。17.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包舍SEQIDNO:74的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:76的氨基酸序列。18.如權(quán)利要求8所述的抗體，其中所述人類重鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:85的氨基酸序列，并且所述人類輕鏈可變區(qū)包含SEQIDNO:86的氨基酸序列。19.分離的單克隆抗體、或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH2-05基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。20.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH2-70基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。21.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH4-59基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。22.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH3-20基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。23.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，該重鏈可變區(qū)是人類VH3-33基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。24.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VKA27基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。25.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VKL18基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。26.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VKL15基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。27.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含輕鏈可變區(qū)，該輕鏈可變區(qū)是人類VK04基因的產(chǎn)物或衍生于該基因，其中該抗體特異結(jié)合BTLA。28.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH2-05基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。29.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH2-70基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。30.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH4-59基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKL18基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。31.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH4-59基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。32.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類Vw3-20基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKL15基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。33.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH3-33基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VK04基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。34.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)人類VH3-33基因的重鏈可變區(qū)；以及(b)人類VKA27基因的輕鏈可變區(qū)；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。35.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含含有CDR1、CDR2、以及CDR3序列的重鏈可變區(qū)；以及含有CDR1、CDR2、以及CDR3序列的輕鏈可變區(qū)，其中(a)該重鏈可變區(qū)CDR3序列包含選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的氨基酸序列，及其保守性修飾；(b)該輕鏈可變區(qū)CDR3序列包含選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的氨基酸序列，及其保守性4務(wù)飾；并且(c)該抗體特異結(jié)合BTLA。36.如權(quán)利要求35所述的抗體，其中該重鏈可變區(qū)CDR2序列包含選自SEQIDNo:20、21、22、23、24、25、78以及88的氨基,列，及其保守性修飾；并且該輕鏈可變區(qū)CDR2序列包含選自SEQIDNo:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的氨基酸序列，及其保守性修飾。37.如權(quán)利要求36所述的抗體，其中所述重鏈可變區(qū)CDR1序列包含選自SEQIDNo:14、15、16、17、18、19、77、以及87的氨基酸序列，及其保守性修飾；并且所述輕鏈可變區(qū)CDR1序列包含選自SEQIDNo:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95的氨基酸序列，及其保守性修飾。38.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)及輕鏈可變區(qū)，其中(a)該重鏈可變區(qū)包含氨基酸序列，該氨基酸序列與選自SEQIDNO:l、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基,列具有至少80%的同源性；(b)該輕鏈可變區(qū)包含氨基酸序列，該氨基酸序列與選自SEQIDNO:7、8、9、10、11、12、13、75、76、以及86的氨基酸序列具有至少80%的同源性；(c)該抗體以lxl(^M或更小的K。與人類BTLA相結(jié)合；并且(d)該抗體基本上不與人類TrkB、CD28、CTLA-4、PD-1或ICOS相結(jié)合。39.如權(quán)利要求38所述的抗體，其中該抗體阻斷HVEM與BTLA的結(jié)合。40.分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含(a)重鏈可變區(qū)CDRl,其包含選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87的氨基酸序列；(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包含選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88的氨基酸序列；(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包含選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的氨基酸序列；(d)輕鏈可變區(qū)CDRl,其包含選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95的氨基酸序列；(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的氨基酸序列；以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的氨基,列；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。41.如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:14;重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:20;重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:26;輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:32;輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:39;以及輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:46。如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含重鏈可變區(qū)CDRl,其包含SEQIDNO:15;(a)(b)(c)(d)(e)42.(a)(b)(c)(d)(e)()重鏈可變區(qū)CDR2，重鏈可變區(qū)CDR3，輕鏈可變區(qū)CDR1，輕鏈可變區(qū)CDR2，輕鏈可變區(qū)CDR3:其包含SEQIDNO:21其包含SEQIDNO:27其包含SEQIDNO:33其包含SEQIDNO:40其包含SEQIDNO:47以及43.如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:16(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:22(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:28(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:34(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:41;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:48。44.如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDRl,其包含SEQIDNO:17;(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:23;(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:29;(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:36;(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:43;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:50。45.如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:18(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:24(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:30(d)輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:37(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:44:以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:5146.如;f又利要求40所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:19(b)重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:25(c)重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:31(d)輕鏈可變區(qū)CDR1,其包含SEQIDNO:38(e)輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:45;以及(f)輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:52以及以及47如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:77;重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:78;重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:79;輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:80;輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:81輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:82。48如權(quán)利要求40所述的抗體，該抗體包含重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:77;重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:78;重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:79;輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:95;輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:96;輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:97。49如權(quán)利要求40所迷的抗體，該抗體包含重鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:87;重鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:88;重鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:89;輕鏈可變區(qū)CDR1，其包含SEQIDNO:90;輕鏈可變區(qū)CDR2，其包含SEQIDNO:91;輕鏈可變區(qū)CDR3，其包含SEQIDNO:92。50分離的單克隆抗體或該抗體的抗原結(jié)合部分，其包含重鏈可變區(qū)，包含選自SEQIDNO:l、2、3、4、5、6、74、以及85的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含選自SEQIDNO:'75、76、以及86的氨基紗列；其中該抗體特異結(jié)合BTLA。51.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:l的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:7的氨基酸序列。52.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:2的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:8的氨基酸序列。53.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:9的氨基酸序列。54.如4又利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:3的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:10的氨基酸序列。55.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:4的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:ll的氨基酸序列。56.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:5的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:12的氨基酸序列。57.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:6的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:13的氨基酸序列。58.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:74的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:75的氨基酸序列。59.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:74的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:76的氨基酸序列。60.如權(quán)利要求50所述的抗體，該抗體包含(a)重鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:85的氨基酸序列；以及(b)輕鏈可變區(qū)，包含SEQIDNO:86的氨基酸序列。61.組合物，其包含如權(quán)利要求1至60的任何一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合部分、以及藥學(xué)上可接受的載體。62.免疫綴合物，其包含連接到治療劑的如權(quán)利要求1至60的任何一項(xiàng)所述的抗體，或其抗原結(jié)合部分。63.組合物，其包含如權(quán)利要求62所述的免疫綴合物以及藥學(xué)上可接受的載體。64.如權(quán)利要求62所述的免疫綴合物，其中所述治療劑是細(xì)胞毒素。65.組合物，其包含如權(quán)利要求64所述的免疫綴合物以及藥學(xué)上可接受的載體。66.如權(quán)利要求62所述的免疫綴合物，其中所述治療劑是放射性同位素。67.組合物，其包含如權(quán)利要求64所述的免疫綴合物以及藥學(xué)上可接受的載體。68.雙特異性分子，其包含如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分，該抗體或其抗原結(jié)合部分連接到第二功能部分，該第二功能部分具有不同于所述抗體、或其抗原結(jié)合部分的結(jié)合特異性。69.組合物，其包含如權(quán)利要求68所述的雙特異性分子，以及藥學(xué)上可接受的載體。70.分離的核酸分子，其編碼如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分。71.表達(dá)載體，其包含如權(quán)利要求70所述的核酸分子。72.宿主細(xì)胞，其包含如權(quán)利要求71所述的表達(dá)載體。73.轉(zhuǎn)基因小鼠，其包含人類免疫球蛋白的重鏈及輕鏈轉(zhuǎn)基因，其中該小鼠表達(dá)如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體。74.從權(quán)利要求73所述的小鼠制備的雜交瘤，其中該雜交瘤產(chǎn)生所述抗體o75.調(diào)節(jié)受試者中免疫應(yīng)答的方法，該方法包括向該受試者施用如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得該受試者體內(nèi)的免疫應(yīng)答得以調(diào)節(jié)。76.抑制受試者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長的方法，該方法包括對(duì)該受試者施用治療有效量的抗-BTLA抗體、或其抗原結(jié)合部分。77.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述抗體是嵌合抗體。78.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述抗體是人源化抗體。79.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述抗體是全長人類抗體。80.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述胂瘤細(xì)胞是癌癥的細(xì)胞，所述癌癥選自黑色素瘤、腎癌、前列腺癌、乳癌、結(jié)腸癌以及肺癌。81.如權(quán)利要求76所述的方法，其中所述肺瘤細(xì)胞是癌癥的細(xì)胞，該癌癥選自以下列表，其構(gòu)成為骨癌、胰腺癌、皮膚癌、頭或頸癌、表皮或眼內(nèi)惡性黑色素瘤、子宮癌、卵巢癌、直腸癌、肛門區(qū)的癌癥、胃癌、睪丸癌、子宮癌、輸卵管癌、子宮內(nèi)膜癌、宮頸癌、陰道癌、外陰癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食道癌、小腸癌、內(nèi)分泌系統(tǒng)癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、陰莖癌、慢性或急性白血病，包括急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、慢性淋巴細(xì)胞白血病，兒童期的實(shí)體瘤、淋巴細(xì)胞淋巴瘤、膀胱癌、腎或輸尿管癌、腎盂癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)瘤、原發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)淋巴瘤、胂瘤血管發(fā)生、脊柱軸瘤、腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤、垂體腺瘤、卡波西肉瘤、表皮樣癌、鱗狀上皮細(xì)胞癌、T細(xì)胞淋巴瘤、環(huán)境誘發(fā)的癌，包括那些由石棉誘發(fā)的癌癥，以及所述癌癥的組合。82.抑制受試者體內(nèi)腫瘤細(xì)胞生長的方法，該方法包括對(duì)受試者施用有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長量的如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分。83.治療受試者中感染性疾病的方法，該方法包括對(duì)該受試者施用如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得該受試者的感染性疾病得到治療。84.如權(quán)利要求83所述的方法，其中所述感染性疾病選自以下列表，其組成為HIV、流行性感冒、皰疹、賈弟蟲、瘧疾、利什曼原蟲；由以下病毒(甲、乙、以及丙型)肝炎病毒、皰滲病毒(如VZV、HSV-1、HAV-6、HSV-II、以及CMV、EB病毒)、腺病毒、流感病毒、黃病毒、?？刹《?、鼻病毒、柯薩奇病毒、冠狀病毒、呼吸道合胞病毒、腮腺炎病毒、輪狀病毒、麻滲病毒、風(fēng)滲病毒、細(xì)小病毒、痘苗病毒、HTLV病毒、登革熱病毒、乳頭瘤病毒、軟疣病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、狂犬病毒、JC病毒以及蟲媒腦炎病毒所引起的病原性感染；由以下細(xì)菌衣原體、立克次體細(xì)菌、分枝桿菌、葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌、腦膜炎球菌以及淋球菌、克雷伯氏菌、變形菌、沙雷氏菌、假單胞菌、軍團(tuán)桿菌、白喉?xiàng)U菌、沙門氏菌、芽孢桿菌、霍亂、破傷風(fēng)、肉毒桿菌、炭疽、鼠疫、鉤端螺旋體病及萊姆氏病細(xì)菌所引起的病原性感染；由以下真菌假絲酵母屬(白假絲酵母、克魯斯假絲酵母、光滑假絲酵母、熱帶假絲酵母等)、新型隱球酵母、曲霉屬(煙曲霉、黑曲霉等)、毛審菌目的屬(毛霉屬、犁頭霉屬、根霉屬)、申克氏孢子絲菌、皮炎芽生菌、巴西副球孢子菌、粗球孢子菌、以及夾膜組織胞漿菌所引起的病原性感染；以及由以下寄生蟲溶組織內(nèi)阿米巴(Entamoebahistolytica)、結(jié)腸腸袋蟲(Balantidiumcoli)、福氏耐格里原蟲(Naegleriafowleri)、棘阿米巴屬的種(Acanthamoebasp.)、蘭伯賈弟蟲(Giardialamblia)、隱孢子蟲屬的種(Cryptosporidiumsp.)、卡氏肺嚢蟲(Pneumocystiscarinii)、間日痗原蟲(Plasmodiumvivax)、果氏巴貝蟲(Babesiamicroti)、布氏錐蟲(Trypanosomabrucei)、克氏錐蟲(Trypanosomacruzi)、；^土氏禾'H十曼原、蟲(Leishmaniadonovani)、鼠弓形體(Toxoplasmagondi)、巴西曰圓線蟲(Nippostrongylusbrasiliensis)所引起的病原性感染。85.增強(qiáng)受試者體內(nèi)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的方法，其包括對(duì)該受試者施用(i)該抗原；以及(ii)如權(quán)利要求1至60任何一項(xiàng)所述的抗體、或其抗原結(jié)合部分，使得在該受試者體內(nèi)針對(duì)該抗原的免疫應(yīng)答得到增強(qiáng)。86.如權(quán)利要求85所述的方法，其中所述抗原是腫瘤抗原、病毒抗原、細(xì)菌抗原或來自病原體的抗原。87.制備抗-BTLA抗體的方法，該方法包括提供(i)重鏈可變區(qū)抗體序列，其包含選自SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、77、以及87的CDR1序列，選自SEQIDNO:20、21、22、23、24、25、78、以及88的CDR2序列，以及選自SEQIDNO:26、27、28、29、30、31、79、以及89的CDR3序列；或(ii)輕鏈可變區(qū)抗體序列，其包含選自SEQIDNO:32、33、34、35、36、37、38、80、90、以及95的CDR1序列，選自SEQIDNO:39、40、41、42、43、44、45、81、91、以及96的CDR2序列，以及選自SEQIDNO:46、47、48、49、50、51、52、82、92、以及97的CDR3序列；在至少一個(gè)可變區(qū)抗體序列內(nèi)改變至少一個(gè)氨基酸殘基，所述序列選自該重鏈可變區(qū)抗體序列以及該輕鏈可變區(qū)抗體序列，以產(chǎn)生至少一個(gè)被改變的抗體序列；并且將該被改變的抗體序列表達(dá)為蛋白質(zhì)。全文摘要本公開提供了分離的單克隆抗體，特別是以高親和性與BTLA特異性結(jié)合的人類單克隆抗體。還提供了編碼本公開抗體的核酸分子、表達(dá)載體、宿主細(xì)胞、以及用于表達(dá)本公開抗體的方法。還提供了免疫綴合物、雙特異性分子、以及包含本公開的抗體的藥物組合物。本公開也提供了用于檢測(cè)BTLA的方法以及使用抗-BTLA抗體治療多種疾病，包括癌和感染性疾病的方法。文檔編號(hào)C07K16/00GK101578296SQ200780049415公開日2009年11月11日申請(qǐng)日期2007年11月15日優(yōu)先權(quán)日2006年11月15日發(fā)明者A·科曼,D·B·帕斯莫爾,E·哈爾克,K·B·圖迪烏姆,M·塞爾比,M·斯里尼瓦桑申請(qǐng)人:梅達(dá)雷克斯公司