用作hsp90抑制劑的吡咯并嘧啶衍生物的制作方法

專利名稱：：用作hsp90抑制劑的吡咯并嘧啶衍生物的制作方法用作HSP90抑制劑的吡咯并嘧啶衍生物本發明涉及具有HSP90抑制活性的取代的雙環吡咯并嘧啶化合物，涉及該化合物在對抑制HSP90活性有反應的相關疾病如癌癥治療中的應用，還涉及包含該化合物的藥物組合物。
背景技術：
：分子侶伴蛋白能維持蛋白質合適的折疊和構象，在調節蛋白質合成與降解之間的平衡具有關鍵作用。已證明它們對調節許多重要的細胞功能，例如細胞增殖和凋亡至關重要(Jolly和Morimoto，2000;Smith等，1998;Sm他，2001)。熱激蛋白(Hsps)當細胞接觸許多環境應激，包括熱激、醇、重金屬和氧化應激時，可導致細胞蓄積許多侶伴蛋白，這些侶伴蛋白通常稱為熱激蛋白(Hsp)。誘導Hsps能保護細胞對抗最初的應激攻擊，促進恢復和維持對應激的耐受狀態。然而也很清楚，某些Hsp在正常無應激狀態下也可通過調節生長期間重要細胞蛋白質的正確折疊、降解、定位和功能起著重要的分子侶伴蛋白作用。Hsp存在許多多基因家族，各基因的產物在細胞表達、功能和定位上有所不同。根據分子量可分為Hsp70、Hsp90和Hsp27。人類獲得的一些疾病可能是蛋白質錯誤折疊的結果(綜述參見Tytell等，2001;Smith等，1998)。因此，開發能擾亂侶伴蛋白結構的療法證明可能是有益的。在一些疾病中(如阿耳茨海默病、朊病毒病和亨廷頓病)，錯誤折疊的蛋白質可導致蛋白質凝集而引起神經變性疾病。并且，錯誤折疊的蛋白質可引起野生型蛋白質的功能喪失，導致細胞中分子和生理學功能失調。Hsp也證明與癌癥有關。例如，有證據表明Hsp表達差異可能與腫瘤進程的階段有關(Martin等，2000;Conroy等，1996;Kawanishi等，1999;Jameel等，1992;Hoang等，2000;Lebeau等，1991)。由于Hsp90參與了多種關鍵的致癌路徑，并且發現某些具有抗癌活性的天然產物靶向這種分子侶伴蛋白，提示抑制Hsp90的功能可用于治療癌癥。為此，第一類天然產物17AAG目前已進入II期臨床試驗。Hsp90Hsp90占細胞總蛋白質約1-2%。細胞中，它能與多種輔助蛋白(稱為輔-侶伴蛋白)形成動態的多重蛋白復合物，這些輔助蛋白看來負責調節侶伴蛋白的功能。這是細胞存活所必需的，顯示侶伴蛋白有雙重功能(Young等，2001)。當細胞經受各種環境的細胞應激時，Hsp90的天然構象被改變后，通過與許多蛋白質相互作用而形成細胞應激反應的核心組分。環境應激，如熱激、重金屬或醇，導致局部蛋白質折疊展開。Hsp90(與其他侶伴蛋白一起)能結合這些展開的蛋白質，使其適當再折疊而防止非特異凝集(Smith等，1998)。此外，近年來的研究結果提示，Hsp90在緩沖對抗突變的作用中也起著一定的作用，推測是通過糾正突變蛋白質的不適當折疊(Rutherford和Lindquist，1998)。而且，Hsp90也具有重要的調控作用。在正常生理狀態下，Hsp90與其內質網同系物GRP94—起，在細胞中起管家作用，維持許多對象蛋白的構象穩定和成熟。這些對象蛋白可細分為三組(a)甾體激素受體(例如雌激素受體、孕酮受體)(b)絲氨酸/蘇氨酸或酪氨酸激酶(例如Her2、Raf-l、CDK4和Lck)和(c)看似不相關蛋白質的集合，例如突變蛋白p53與端粒酶hTERT催化亞基的集合。近年來還發現，Hsp90負責穩定和激活突變的激酶，而野生型激酶不是Hsp90的作用對象(例如，參見刊登daRochaDias等中的B-Raf故事，2005)。所有這些蛋白質在細胞的許多生理學和生物化學過程中都起著關鍵的調控作用。正不斷鑒定到Hsp90作用的新對象蛋白質，參見http:〃www.picard.ch/downloads/Hsp90interactors.pdf，記載了迄今所矢口的多類女對象。人體中高度保守的Hsp90家族由四類基因組成，即胞液Hsp90a和Hsp90卩同工型(Hickey等，1989)、內質網中的GRP94(Argon等，1999)和線粒體基質中的Hsp75/TRAPl(Felts等，2000)。除了亞細胞定位上的區別之外，關于Hsp90a/p、GRP94與TRAP1之間的功能差異的了解極少。最初報道提出某些對象蛋白由特定的Hsp90陪伴(例如，Her2僅由Grp94陪伴)看來是錯誤的。Hsp90參與了許多對象蛋白和調節蛋白的一系列復雜相互作用(Smith，2001)。雖然仍待闡明其準確的分子細節，但過去幾年進行的生物化學和X-射線晶體學研究(Prodromou等，1997;Stebbins等，1997)對Hsp90侶伴蛋白的功能提供了越來越深入的了解。經過該問題的早期爭論之后，現已明白Hsp90是ATP-依賴性分子侶伴蛋白(Prodromou等，1997)，其核苷酸結合域的二聚化是ATP水解所必需的，進而是侶伴蛋白功能所必需的(Prodromou等，2000a)。ATP結合導致形成環形二聚體結構，其中N末端結構域相互間緊密接觸，導致稱為"鉗夾機制"的構象轉換(Prodromou和Pearl，2000b)。這種構象轉換部分地受到與Hsp90相關的各種輔-侶伴蛋白的調節(Siligardi等，2004)。已知的Hsp90抑制劑發現的第一類Hsp90抑制劑是苯醌安沙霉素類，包括化合物除莠霉素A和格爾德霉素。證明它們能夠逆轉v-^c癌基因轉化成纖維細胞的惡性表型(Uehara等，1985)，然后在體外(Schulte等，1998)和體內動物模型(Supko等，1995)中顯示具有強效抗腫瘤活性。免疫沉淀反應和親和基質研究表明，格爾德霉素的主要作用機制涉及與Hsp90結合(Whitesell等，1994;Schulte和Neckers，1998)。而且，X-射線晶體學研究發現，格爾德霉素競爭ATP結合位點而抑制Hsp90的內在ATP酶活性(Prodromou等，1997;Panaretou等，1998)。中斷這種侶伴蛋白環(通過阻斷ATP周轉)可導致復合物中輔-侶伴蛋白p23喪失，靶向對象蛋白，使其經泛素蛋白酶體途徑降解。17-烯丙基氨基，17-去甲氧基格爾德霉素(17AAG)能保留Hsp90的抑制活性，在細胞培養物和異種移植物模型中導致對象蛋白耗竭而產生抗腫瘤活性(Schulte等，1998;Kelland等，1999)，而且其肝臟毒性顯著低于格爾德霉素(Page等，1997)。令人感興趣的是，已證明17AAG對腫瘤細胞的活性比其對純化的Hsp90的親和力高得多。這就提示，腫瘤細胞(而不是非致瘤細胞)含有高親和力構象的Hsp90，17AAG能與之更緊密地結合，而賦予Hsp90抑制劑對腫瘤的選擇性(Kamal等，2003)。17AAG目前正處于II期臨床試驗中。根赤殼菌素是大環類抗生素，能夠逆轉v-&c和v-i^-iw轉化成纖維細胞的惡性表型(Kwon等，1992;Zhao等，1995)。已證明由于抑制Hsp卯它能降解許多信號轉導蛋白(Schulte等，1998)。X-射線晶體學數據證實，根赤殼菌素也結合Hsp90的N末端結構域而抑制內在ATP酶活性(Roe等，1998)。由于該化合物化學性質不穩定而致根赤殼菌素在體內缺乏抗腫瘤活性。已知香豆素抗生素能結合細菌DNA回旋酶與Hsp90同源的ATP結合位點。香豆素、新生霉素能結合Hsp90的羧基末端，其結合位點與苯醌安沙霉素和根赤殼菌素結合N-末端不同(Marcu等，2000b)。然而，這仍能抑制Hsp90功能和降解許多Hsp90-侶伴蛋白的信號轉導蛋白(Marcu等，2000a)。(結合)新生霉素后格爾德霉素不能結合Hsp90;這提示N末端與C末端域之間必然存在某種相互作用，此與兩個末端位點對于Hsp90侶伴蛋白性能至關重要的觀點相一致。基于嘌呤的Hsp90抑制劑PU3能導致包括Her2在內的信號轉導分子的降解，導致細胞周期停止和乳腺癌細胞分化(Chiosis等，2001)。近年研究發現了具有抗Her2活性和細胞生長抑制活性的其他基于嘌呤的化合物(Dymock等，2004;Kasibhatla等，2003;Llauger等，2005)。專利公開WO2004/050087，WO2004/056782，WO2004/072051，WO2004/096212，WO2005/000300，WO2005/021552，WO2005/034950涉及Hsp90抑制劑。Hsp90作為治療靶標由于Hsp90參與了在啟動腫瘤表型過程中起著關鍵作用的許多信號轉導途徑的調節，以及發現了某些生物活性天然產物通過Hsp活性而發揮作用，目前正在評估分子侶伴蛋白Hsp90作為抗癌藥物開發的新靶標(Neckers等，1999)。格爾德霉素、17AAG和根赤殼菌素的主要作用機制包括結合Hsp90N-末端區域的ATP結合位點，導致Hsp90內在ATP酶活性的抑制(Prodromou等，1997;Stebbins等，1997;Panaretou等，1998)。17AAG抑制Hsp90ATP酶活性導致侶伴蛋白-對象蛋白復合物中p23的喪失而中斷了侶伴蛋白環。這就導致能形成能耙向這些對象蛋白的Hsp-對象蛋白復合物形成，通過泛素蛋白酶體途徑而降解(Neckers等，1999;Whitesell和Lindquist，2005)。用Hsp90抑制劑處理導致參與細胞增殖、細胞周期調節和凋亡、這些癌癥發生的基礎關鍵過程中的重要蛋白質(例如，Her2、Akt、雌激素受體和CDK4)選擇性降解。17AAG作為抗癌藥的臨床前研究已有很好的記載(Sausville等，2003)，目前正在進行II期臨床試驗。I期臨床試驗結果最近已發表(Banerji等，2005;Goetz等，2005;Ramanathan等，2005禾QGrem等，2005)。所有這些試驗中，Banerji等進行的試驗證明在大多數患者中用PD標記物的應答反應最大劑量為450mg/m2/周時活的了最佳效果，在兩位患者中可能有抗腫瘤活性。已證明抑制Hsp90功能可導致參與細胞增殖、細胞周期調節和凋亡、這些癌癥發生的基礎關鍵過程和常見的失調過程中的重要信號轉導蛋白的選擇性降解(Hostein等，2001)。開發可用于臨床的針對該靶標的藥物所以吸引人的基本原理是，能同時耗盡與轉化表型相關的蛋白質，可獲得強抗腫瘤效果，和實現對癌細胞的作用高于正常細胞的治療效益。相信在細胞培養和動物模型中，Hsp90抑制的這些下游作用承擔了Hsp90抑制劑的抗腫瘤活性(Schulte等，1998;Kelland等，1999)。近年研究表明，Hsp90的乙酰化狀態在控制侶伴蛋白環中也發揮了作用。利用小分子抑制劑或通過siRNA基因靶向抑制HDAC6可中斷該侶伴蛋白環。這種處理導致對象蛋白以類似于小分子ATP位點抑制劑的方式降解(Kovacs等，2005;Aoyagi和Archer，2005)。近年的報道(參見Cowen等，Science309，2185(2005)和Heitman，Science309，2175，2005)也表明，出現耐受抗真菌藥的真菌分離株需要Hsp90，一旦產生持久耐藥的菌株也需要Hsp。因此，Hsp90抑制劑能使耐受唑類抗真菌藥(例如氟康唑)和較新藥物如棘球白素的菌株重新敏感。發明詳述一方面，本發明提供了式(I)的化合物或其藥學上可接受的鹽:(I)式中A是氫、氟、氯、溴、或式(IA)的基團扁X-Alk、(Zk(AlkVQ(IA)式中X是—O-、-S--S(O)-、-802-或-麗-，Z是-O-、-S誦、-(C=0)-、-(C=S)-、-S(O)-、-S02-、—NRA-、或者任一取向的-C(-O)O-、-C(=0)NRA-、-C(=S)NRA-、-S02NRA-、-艦八(:(=0)-或-服02-，其中RA是氫或CVQ垸基，Alk1和AlP任選地被二價CrC3亞烷基或C2-C3亞烯基所取代，m、n和p獨立地是0或1，和Q是氫或任選取代的碳環或雜環基團；R2是式(IB)的基團-(ArV(AlkV(ZV(A的s-Q(IB)式中Ar1是任選取代的芳基或雜芳基，Alk1、Alk2、Z和Q如式(IA)中所定義，和p、q、r和s獨立地是0或1;和Rs是氰基(-CN)、氟、氯、溴、一個或多個氫原子任選地被氟原子所取代的甲基、一個或多個氫原子任選地被氟原子所取代的乙基、環丙基、-OH、-CH2OH、-C(=0)NH2、-C(=0)CH^-NH2。在另一方面，本發明提供了式(I)的化合物、或其鹽、N-氧化物、水合物或溶劑合物在制備用于抑制HSP90的體外或體內活性的組合物中的應用。本發明還提供了治療哺乳動物響應抑制HSP90活性的疾病的方法，該方法包括給予哺乳動物一定量如權利要求1所述的化合物以有效抑制所述HSP90活性。本發明的體內應用和方法適用于治療與HSP90活性相關的疾病，包括用于免疫抑制或治療病毒疾病，耐藥性真菌感染(因為HSP90抑制劑能重新敏化對唑類抗真菌藥(例如氟康唑)以及較新的試劑如棘球白素耐藥的菌株)，炎性疾病如類風濕性關節炎、哮喘、多發性硬化、I型糖尿病、狼瘡、牛皮癬和炎性腸病；囊性纖維化病；血管新生-相關疾病如糖尿病視網膜病、血管瘤和子宮內膜異位；或用于保護正常細胞免于化療誘導的毒性；或者不能凋亡是其潛在因素的疾病；或保護心臟和腦免于Hsp70升高導致的缺氧-缺血損傷；綿羊瘙癢病/CJD，亨廷頓病或阿耳茨海默病。尤其適用于治療癌癥。本文所用術語"(CVCb)烷基"(其中a和b是整數)指具有a-b個碳原子的直鏈或支鏈垸基。因此，當a為1，b為6時，該術語包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基。本文所用術語"二價(CVCb)亞烷基"(其中a和b是整數)指具有a-b個碳原子和兩個不飽和化學價的飽和烴鏈。本文所用術語"(CVCb)烯基"(其中a和b是整數)指具有至少一個適當時立體化學為E或Z的雙鍵的具有a-b個碳原子的直鏈或支鏈烯基部分。該術語包括例如，乙烯基、烯丙基、l-和2-丁烯基和2-甲基-2-丙烯基。本文所用術語"二價(CVCb)亞烯基"指具有至少一個雙鍵和兩個不飽和化學價的具有a-b個碳原子的烴鏈。本文所用術語"環垸基"指具有3-8個碳原子的飽和碳環基團，包括例如環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基和環辛基。本文所用術語"環烯基"指包含至少一個雙鍵的具有3-8個碳原子的碳環基團，包括例如、環戊烯基、環己烯基、環庚烯基和環辛烯基。本文所用術語"芳基"指單環、雙環或三環碳環芳族基團，包括與非芳族碳環或雜環稠合的芳族單環或雙環碳環基團。該基團的例子是苯基、聯苯基、萘基和下式基團<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>式中，環A(i)任選地被取代，(ii)包含它所稠合的苯環碳的5或6元環，和(iii)具有至少一個雜原子O、S或N雜原子作為環原子。本文所用術語"碳環"指環原子都是碳的環狀基團，包括芳基、環烷基和環烯基。本文所用術語"雜芳基"指包含一個或多個選自S、N和O的雜原子的單環、雙環或三環芳族基團。這些基團的例子是噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、苯并異噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基、異噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、妣啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。本文所用術語"雜環基"或"雜環"包括上文限定的"雜芳基"，具體指包含一個或多個選自S、N和O的雜原子的單環、雙環或三環非芳族基團，指包含一個或多個共價連接另一該基團或單環碳環基團的雜原子的單環非芳族基團構成的基團。該基團的例子是吡咯基、呋喃基、噻吩基、哌啶基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、吡唑基、吡啶基、吡咯烷基、嘧啶基、嗎啉基、哌嗪基、吲哚基、嗎啉基、苯并呋喃基、吡喃基、異噁唑基、苯并咪唑基、亞甲基二氧苯基、亞乙基二氧苯基、馬來酰亞胺和琥珀酰亞胺基團。除非說明書中另有說明，術語"取代的"可應用于本文任何部分，表示被至少一個取代基取代，所述取代基例如選自((VC6)垸基、(d-C6)垸氧基(包括在碳環或雜環的相鄰碳原子上的亞甲基二氧和亞乙基二氧取代)、羥基、羥基(CVC6)烷基、巰基、巰基(d-C6)烷基、(CVC6)垸硫基、具有3-6個環碳原子的單環碳環、具有5或6個環原子的單環雜環、鹵素(包括氟和氯)、三氟甲基、三氟甲氧基、硝基、腈(-CN)、氧代、-COOH、-COORA、-CORa、-S02Ra、-CONH2、-S02NH2、-CONHRA、-S02NHRA、-CONRARB、-S02NRARB、-NH2、-NHRA、-NRARB、-OCONH2、-OCONHRA、-OCONRARB、-NHCORA、-麗COORA、-NRBCOORA、-NHS02ORA、-NRBS02ORA、-NHCONH2、-NRACONH2、-NHCONHRB、-NRACONHRB、-NHCONRARB或-NRACONRARB，其中RA和RB獨立地是(d-C6)烷基。在任選的取代基包含烷基的情況下，該烷基可被3-6元單環碳環、或5或6元單環雜環基團所取代。在任選的取代基是或包含3-6元單環碳環、或5或6元單環雜環的情況下，該環本身可被任何上述非環狀任選的取代基所取代。"任選的取代基"可以是上述內容中包含的取代基中的一種。本文所用術語"鹽"包括堿加成鹽，酸加成鹽和季銨鹽。酸性的本發明化合物可與堿形成鹽，包括藥學上或獸藥學上可接受的鹽，所述堿包括堿金屬氫氧化物，例如氫氧化鈉和氫氧化鉀；堿土金屬氫氧化物，例如氫氧化鈣、氫氧化鋇和氫氧化鎂；有機堿，例如N-乙基哌啶、二芐胺等。堿性的化合物(I)可與酸形成鹽，包括藥學上或獸藥學上可接受的鹽，所述酸包括無機酸，例如氫鹵酸如鹽酸或氫溴酸、硫酸、硝酸或磷酸等；有機酸，例如醋酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、蘋果酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸和對甲苯磺酸等。落在式(I)內的任何本文無限制參考的化合物都應解釋為該化合物的參考形式，不論其是否是鹽的形式。合適的鹽的綜述參見Stahl和Wermuth的《藥物鹽的手冊性質、選擇禾口應用》(HandbookofPharmaceuticalSalts:Properties，SelectionandUse)師ey-VCH，Weinheim，德國，2002)。與藥物中使用的許多有機物一樣，預計至少一些本發明的化合物可以結晶水合物和溶劑合物的形式重新獲得。當然，這些水合物和溶劑合物僅僅是本發明活性化合物的特殊物理化學形式，因而構成本發明的一部分。落在式(I)內的任何本文無限制參考的化合物都應解釋為該化合物的參考形式，不論其是否是水合物或溶劑合物的形式。本文所用術語"溶劑合物"用于描述包含本發明化合物和化學計量的一種或多種藥學上可接受的溶劑分子如乙醇的分子復合物。所述溶劑是水時，采用術語"水合物"。本發明化合物中存在的稠合嘧啶環中的氮可氧化形成N-氧化物。這些N-氧化物基本上保留了母體化合物的HSP90抑制活性，因而構成本發明的一部分。落在式(I)內的任何本文無限制參考的化合物都應解釋為該化合物的參考形式，不論其是否是N-氧化物的形式。因為不對稱原子或旋轉限制的存在，本發明考慮的化合物可以一種或多種立體異構體的形式存在，可以每個手性中心為R或S立體化學的許多立體異構體形式存在，或者以每個手性軸為R或S立體化學的阻轉異構體形式存在。本發明包括所有這種對映異構體和非對映異構體以及它們的混合物。式(I)化合物的所謂"前藥"也落在本發明的范圍內。因此，某些本身沒有或幾乎沒有藥理學活性的式(I)化合物的衍生物在給予人體或接觸人體之后，例如通過水解裂解可轉化成具有所需活性的式(I)的化合物。這些衍生物被稱為"前藥"。關于前藥應用的進一步信息可參見《前藥新型遞送系統》(Pro-drugsasNovelDeliverySystems),第14巻，ACSSymposiumSeries(T.Higuchi和W.Stella)和《藥物設計中的生物可逆運載體》(BioreversibleCarriersinDrugDesign),PergamonPress,1987(E.B.Roche編，美國藥學協會(AmericanPharmaceuticalAssociation))。本發明的前藥例如可通過用某些本領域技術人員已知稱為"前藥基團(pro-moieties)"的部分來置換式(I)化合物中的合適的官能團來制備，例如參見H.Bundgaard的《前藥的設計》(DesignofProdurgs)(Elsevier，1985)。本發明還包括式(I)化合物的代謝物，即給予藥物后在體內形成的化合物。代謝物的一些例子包括(i)當式(I)化合物包含甲基時，是其羥甲基衍生物(-CH3->-CH2OH);(ii)當式(I)化合物包含垸氧基時，是其羥基衍生物(-OR-〉-OH);(iii)當式(I)化合物包含叔氨基時，是其仲氨基衍生物(-NR1112->-順111或-NHR2);(iv)當式(I)化合物包含仲氨基時，是其伯氨基衍生物(-NHR1->-NH2);(v)當式(I)化合物包含苯基部分時，是其苯酚衍生物(-Ph》-PhOH);禾口(vi)當式(I)化合物包含酰胺基團時，是其羧酸衍生物(-CONH2-〉COOH)。當Ri是式(IA)的基團時國X-Alk!-(Z)m曙(Alk-Q(IA)X可以是-O-、-S—S(O)-、-802-或^11-。目前優選一O-和-S-;如果存在，Z可以是一O-、誦S-、-(C=0)-、-(C=S)-、-S(O)-、-S02-、—NRA-、或是任一取向的-C(=0)0-、-C(=0)NRA-、-C(=S)NRA-、-S02NRA-、-NRAc(K))-或-NRAS02-，其中RA是氫或CrC6烷基。目前優選-NRA-;Alk1(和Alk2，如果存在的話)可以是例如-CHr、-CH2CHr、-CH2CH2CH2-，—CH(CH3)CH2-或-CH2CH^CH-;m、n和p獨立地是0或l。因此，在一類基團(IA)中，m和n都是0。在另一類基團(IA)中，m是l，n是0。在另一類基團(IA)中，m是0，n是l;Q可以是氫或任選取代的碳環或雜環基團。碳環基團Q的例子包括苯基、環丙基、環丁基、環戊基和環己基。雜環基團Q的例子包括雜芳基如吡啶基、噻吩基和呋喃基，和非芳族雜環基團如哌啶基、哌嗪基、四氫吡咯基和嗎啉基。目前優選Aiy和AlP未取代。Q(無論碳環還是雜環)可以未取代，但如果取代的話，任選的取代基可選自例如甲基、乙基、正-或異丙基、乙烯基、烯丙基、甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、異丙氧基、芐氧基、烯丙氧基、氰基甲氧基、氟、氯、溴、氰基、氧代、甲酰基、甲基-、乙基-或正-丙基-羰氧基、甲基-或乙基氨基羰基和式-0(CH2)aZ^勺取代基，其中a是1、2或3，21是伯、仲、叔氨基或環狀氨基、或Q-C6垸氧基；或式-(Alk、Z1的取代基，其中AlP是二價直鏈或支鏈(d-C3)亞烷基，b是0或l，Zi是伯、仲、叔氨基或環狀氨基、或CrC6垸氧基。一種Ri取代基具有式-0(CH2)^或-S(CH2)nZ1，其中n是1、2或3，Z1是伯、仲、叔氨基或環狀氨基，后者可任選地被取代，或CVC6垸氧基。Rj的具體例子包括氫、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基、羥基乙硫基(hydroxyeththylthio)、甲基氨基、二乙基氨基甲硫基、甲基氨基羰基甲硫基和式(A)-(H)的基團<formula>formulaseeoriginaldocumentpage17</formula>其中w是-o-或-s-基團&R2是式(IB)的基團-(Ar^^Alk^^ZMAll^VQc(IB)中Ar1是任選取代的芳基或雜芳基，例如苯基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、苯并咪唑基、噻唑基、苯并噻唑基、異噻唑基、苯并異噻唑基、吡唑基、噁唑基、苯并噁唑基、異噁唑基、苯并異噁唑基、異噻唑基、三唑基、苯并三唑基、噻二唑基、噁二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基和吲唑基。目前優選A—是任選取代的苯基。Alk1禾QAlk2如果存在，可以是例如-CH2-、-CH2CH2-、—CH2CH2CHr,-CH(CH3)CH2-或-CH2CH=CH-;目前優選Alk1和Alk2(如果存在)是-CHr;Z如果存在，可以是-O陽、-S-、畫(CK))-、-(C=S)-、國S(O)-、-SOr、—NRA-、或任一取向的-C(=0)0-、-C(=0)NRA-、-C(=S)NRA-、-S02NRA-、-NRAC(=0)-、或-NRAS02-，其中RA是氫或CVQ烷基。目前優選Z(如果存在)是-O-或-NH-;Q可以是例如苯基、環己基、吡啶基、嗎啉代、哌啶基或哌嗪基環，如任選取代的苯基、2-或3-噻吩基、2-或3-呋喃基、2-、3-或4-吡啶基、嗎啉基或哌啶基。在一類本發明的化合物中，基團R2中，p是l，q、r和s各自是0，Q是氫。在另一類化合物中，p是1，q、r和s是0，Q是任選取代的碳環或雜環。在另一類化合物中，p、q、r和s各自是l，Q是氫。在一類本發明的化合物(I)中，R2是苯基，任選地被一個或多個選自以下的取代基所取代甲基、三氟甲基、乙基、正-或異丙基、乙烯基、烯丙基、甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、亞甲基二氧、亞乙基二氧、正-丙氧基、芐氧基、烯丙氧基、氰基甲氧基、氟、氯、溴、氰基、甲酰基、甲基-、乙基-、或正-丙基-羰氧基、甲基-、或乙基氨基羰基、以及式-0(CH2)nZ1的取代基，其中n是l、2或3，Zt是伯、仲、叔氨基或環狀氨基、或CVCV烷氧基；或式-(Alk"mZ1的取代基，其中AlkS是二價直鏈或支鏈(d-C3)亞烷基，m是0或1，Zi是伯、仲、叔氨基或環狀氨基，后者可任選地被取代，或CVC6垸氧基。如果R2是苯基，任選的取代基優選在苯環的2-和/或4-和/或5-位。基團&目前，優選R3是氰基(-CN)。目前尤其優選式(n)的化合物:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(II)Ri是(a)C,-C6烷硫基或CrC6垸氧基，其中的一個或多個氫原子可被氟原子任選地取代，或(b)式-0(0^2)1^1或-8(012)1^1的取代基，其中n是1、2或3，Zi是伯、仲、叔氨基或環狀氨基，后者可任選地被取代。R!o是H、Cl、Br或-CH3;Rn是氫、Cl、Br、CN、甲基、乙基、正-或異-丙基、甲氧基、乙氧基、乙烯基或烯丙基；和Ri2是(i)式-0(CH2)nZi或-S(CH2)nZi的基團，其中n是l、2或3，Z1是(';)伯、仲、叔氨基或環狀氨基，或CrC6烷氧基；或(ii)式一(Alk^^的基團，其中AlP是二價直鏈或支鏈(d-C3)亞垸基，m是0或1，21是伯、仲、叔氨基或環狀氨基，或CrC6垸氧基。本發明化合物的具體例子包括本文實施例中的那些化合物。本發明化合物0O的合成存在許多合成方案，但都依賴于合成有機化學家已知的化學方法。因此，式(I)化合物可根據標準文獻中所述的方法合成，是本領域技術人員所熟知的。常用文獻來源是《高等有機化學》("^/v""c^orga"/cc/zem/wW)，第4版(Wiley)，JMarch，《綜合有機轉化》("C畫/we/ze服'veOgam'crra"yb環油'o",，)，第2版(Wiley)，R.C.Larock，《雜環化學手冊》('7fo"必oo/tCAem/Wr/')，第2版(Pergamon)，A.R.Katritzky)，綜述參見"&"Aewy，，"Jcc.CAem.ie&，，，"CAem.iev"，或標準文獻在線檢索識別的一次文獻來源或二次文獻來源如《化學文摘》("C力e/w'c"/JZ^rac&")或"Se/toe/""。這些文獻方法包括本文的制備實施例以及類似的方法。本發明化合物是HSP90抑制劑，適用于治療與抑制HSP90活性相關的疾病，例如癌癥；病毒疾病如丙型肝炎(HCV)(Waxman，2002);免疫抑制如移植(Bijlmakers，2000禾QYorgin，2000);抗炎癥疾病(Bucci，2000)如類風濕性關節炎、哮喘、MS、I型糖尿病、狼瘡、牛皮癬和炎性腸病；囊性纖維化病(Fuller,2000);血管新生-相關疾病(Hur，2002和Kurebayashi，2001):糖尿病視網膜病、血管瘤、牛皮癬、子宮內膜異位和腫瘤血管新生。本發明Hsp90抑制劑還能保護正常細胞免于化療誘導的毒性，適用于凋亡缺失是其潛在因素的疾病。這些Hsp90抑制劑還適用于宜誘導細胞應激或熱激蛋白響應的疾病，例如避免心臟(Hutter，1996和Trost，1998)和腦(Plumier，1997和Rajder，2000)中Hsp70升高導致的缺氧-缺血性損傷。Hsp90抑制劑(誘導的Hsp70水平升高)也能用于蛋白質錯誤折疊或聚集是其主要原因因素的疾病，例如神經源性疾病如綿羊瘙癢病/CJD，亨廷頓病和阿耳茨海默病(Sittler，2001;Trazelt，1995和Winklhofer，2001)。因此，本發明還包括(i)包含上述式(I)化合物以及藥學上或獸藥學上可接受的載體的藥學或獸藥學組合物。(ii)上述式(I)化合物在制備用于在體外或體內抑制Hsp90活性的組合物中的應用。(iii)治療哺乳動物響應抑制Hsp90活性的疾病或病癥的方法，該方法包括給予哺乳動物一定量的上述式(I)化合物以有效抑制所述Hsp90活性。應理解，任何特定患者的具體劑量水平取決于許多因素，包括采用的具體化合物的活性、患者的年齡、體重、健康狀況、性別、飲食、給藥時間、給藥途徑、排泄率、藥物組合、原因機制以及正在進行治療的特定疾病的嚴重性。一般，口服給藥制劑適當的劑量為0.1-3000mg，每天一次、兩次或三次，或通過輸注或其他途徑給予相當的日劑量。然而，最佳劑量水平和給藥頻率則通過本領域常規的臨床試驗來確定。本發明考慮的化合物可通過與藥動學性質相一致的任何途徑進行給藥。口服給藥組合物可以是片劑、膠囊、粉末劑、顆粒劑、錠劑、液體或凝膠制劑的形式，例如口服、外用、或無菌胃腸外溶液劑或混懸劑。口服給藥的片劑和膠囊可以是單位劑量形式，可包含常用輔料，例如粘合劑，如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨糖醇、黃甚膠或聚乙烯基-吡咯烷酮；填充劑，如乳糖、糖、玉米淀粉、磷酸l丐、山梨糖醇或甘氨酸；壓片潤滑劑，如硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇或二氧化硅；崩解劑，如馬鈴薯淀粉；或可接受的濕潤劑，如十二烷基硫酸鈉。片劑可根據正常藥學實踐中眾所周知的方法進行包衣。口服液體制劑可以是例如水性或油性混懸劑、溶液劑、乳劑、糖漿劑或酏劑的形式，或者可以是臨用前用水或其他合適的運載體進行重建的干燥產物形式。這些液體制劑可包括常規添加劑，例如助懸劑，如山梨糖醇、糖漿、甲基纖維素、葡萄糖糖漿、明膠氫化食用脂肪；乳化劑，如卵磷脂、去水山梨糖醇單油酸酯、或阿拉伯膠；非水運載體(可包括食用油)，如扁桃仁油、分餾椰子油、油酯如甘油、丙二醇、或乙醇；防腐劑，如對羥基苯甲酸甲酯或丙酯、或山梨酸，需要時還可包含常規的芳香劑或著色劑。外用于皮膚時，可將藥物制備成乳膏、洗劑或軟膏的形式。乳膏或軟膏制劑可是本領域公知的常規藥物制劑，例如標準藥學參考書中所述，例如英國藥典。活性成分還可以在無菌介質中通過胃腸外途徑給予。根據所用運載體和濃度，藥物可懸浮或溶解在運載體中。優選地，運載體中溶解有輔助試劑如局部麻醉劑、防腐劑和緩沖劑。本發明化合物可與其他類型的藥學活性藥物一起給予。例如，為治療癌癥，已認可和廣泛實踐了用兩種或多種不同類型抗癌藥的聯合治療。本發明化合物可用于這種聯合治療中，尤其當其他藥物具有不同于Hsp90抑制的作用模式時。下面的實施例顯示了本發明特定化合物的制備和活性，而不是為了限制本發明的范圍。通用過程所有商業來源的試劑無需進一步純化即可使用。無水溶劑商業購得，無需進一步干燥即可使用。快速色譜法用預填充的硅膠色譜柱進行(StrataSI-1;6lA，Phenomenex，CheshireUK或1STFlashII，54A，Argonaut,Hengoed，UK)。薄層色譜法用涂覆有MerckType60F254硅膠的5x10cm色譜板進行。本發明化合物的鑒定采用連接四極檢測器的HewlettPackard1100序列LC/MSD通過LC/MS進行(電離模式電噴霧正或負；柱PhenomenexLuna3uC18(2)30x4.6mm;緩沖液A的制備1.93g醋酸銨溶解在2.5LHPLC級H20中并加入2mL甲酸。緩沖液B的制備132mL緩沖液A加入2.5LHPLC級乙腈中并加入2mL甲酸；洗脫梯度95:5到5:95的緩沖液A:緩沖液B，持續時間3.75分鐘或7.5分鐘。流速=2.0mL/分鐘)。保留時間(RT)以分鐘表示。除非另有說明，電離為正。核磁共振(NMR)分析用BruckerDPX-400MHzNMR波譜儀進行。波譜參比是已知的溶劑化學位移。質子NMR數據表示如下化學位移(5)以ppm表示，多裂數(s二單峰，(1=雙峰，1=三重峰，q二四重峰，p二五重峰，111=多重峰，dd二雙二重峰，bF寬峰)，積分，偶合常數。一些本發明的化合物通過制備型HPLC純化。制備型HPLC純化在WatersFractionLynxMS自動純化系統上進行，具有來自Phenomenex的Gemini5CI8(2)，內徑100mmx20mm的柱，在流速20mL/分鐘下運行，帶有UV二極管陣列檢測器(210-400nm)和質量導向收集裝置(mass-directedcollection)。每種化合物采用的梯度如表1所示。pH4下溶劑A:HPLC級水+10mM醋酸銨+0.08%v/v甲酸。溶劑B:95%v/vHPLC級乙腈+5%v/v溶劑A+0.08%v/v甲酸。pH9下溶劑A:HPLC級水+10mM醋酸銨+0.08%v/v氨水溶液。溶劑B:95%v/vHPLC級乙腈+5%v/v溶劑A+0.08%v/v氨水溶液.。質譜儀是在正離子或負離子電噴射離子化模式下運行的WatersMicromassZQ2000質譜儀，分子量掃描范圍150-1000。表1制備型HPLC梯度<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>IUPAC化學命名采用AutoNom標準命名法產生。一些本發明化合物可通過方案1所示途徑進行制備(以例子的方式)(PG:保護基團)。方案1<formula>formulaseeoriginaldocumentpage22</formula>一些本發明化合物可通過方案2所示途徑進行制備(PGH呆護基團)。方案2一些本發明化合物可通過方案3所示途徑進行制備(PGH呆護基團)。方案3合成諸如17的化合物的可選的合成路徑如方案4所示。該過程包括采用本領域技術人員已知的方法和試劑，用合適的親核物質來置換砜(18)。實施例l4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5畫腈步驟14-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>可進一步操控芳基(方案1-4中的"Ar")以產生更多本發明的例子，如方案所示(PGH呆護基團)。方案5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>(TC下，在氫化鈉(276mg;6.89mmol)的DMF(10ml)混合物中，逐滴加入4-氯-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶[如Davoll.J.丄Ozem.Soc.1960，第131-138頁所述制備](1.145g;5.74mmol)的無水DMF(20ml)溶液。滴加完成時，逐滴加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(1.32ml;7.46mmol)并將該反應混合物在O'C下攪拌1.5小時，然后升高至環境溫度。反應混合物在水(IOOml)和乙酸乙酯(100ml)之間分配。將有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液真空中蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在硅膠(70g)上純化，用梯度0-5%乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到無色油狀產物(2.04g)。LC/MS:保留時間=2.88分鐘；m/z=332，330[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶用氮氣吹掃反應混合物5分鐘，對4-氯-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(2.04g;6.19mmol)、1N碳酸氫鈉(水溶液)18.6ml;18.6mmol)、DMF(41ml)和2，4-二甲基苯基硼酸的混合物進行脫氣。加入二氯雙(三苯基膦)鈀(11)(217mg;0.309mmol)，并在氮氣環境下將反應混合物加熱至8(TC持續2.25小時。使反應混合物冷卻至環境溫度，然后通過硅藻土濾墊過濾。濾餅用甲醇和乙酸乙酯洗滌，合并濾液在真空中除去溶劑，殘留物在乙酸乙酯(lOOml)和飽和氯化鈉水溶液(lOOml)之間分配。將有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在硅膠(50g)上純化，用梯度0-10%乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到步驟2黃色油狀產物(2.01g)。LC/MS:保留時間=3.06分鐘；m/z=400[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟35-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并2，3-d嘧啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>0°C下，在4-(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(步驟2)(100mg，0.25mmol)的CH2C12(3ml)溶液中，逐滴加入N-溴琥珀酰亞胺的CH2Cl2溶液(45mg，0.25mmol)。5分鐘后，使該反應液升高至環境溫度。真空蒸發溶液，殘留物在EtOAc(2x20ml)和飽和硫代硫酸鈉水溶液(20ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。將粗產物加載到Si02柱(20g)上，用己烷-5。/。EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生無色油狀的標題化合物100mg，84%。LC/MS:保留時間=5.92分鐘；m/z=480，478[M+H]+。總的運行時間7.5分鐘。步驟44-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>將5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(90mg，0.188mmol)、CuCN(67mg，0.753mmol)、dppf(17mg，0.03mmol)、Pd2(dba)3(7mg，0.04mmol)和1，4-二噁烷(1.5ml)進行合并，然后加熱至100°C過夜。該反應尚未完全，因此再加入等量的CuCN、dppf和Pd2(dba)3，反應液再加熱2小時。使該反應混合物冷卻至環境溫度，在EtOAc(2x20ml)和飽和NaHC03水溶液(20ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到粗產物固體(IOOmg)。該粗產物通過快速色譜法在SiO2(20g)上純化，用己垸到10。/。EtOAc/己垸(梯度)洗脫，得到標題化合物10mg，13%。LC/MS:保留時間=2.94分鐘；=m/z=425[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟54-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈在4-(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(10mg,0.024mmol)的THF(0.4ml)溶液中連續加入乙二胺(0.005ml，0.071mmol)和TBAF(1M在THF中，0.15ml,0.142mmol)。將該反應混合物在50°C下加熱過夜。使反應液冷卻至環境溫度，然后在EtOAc(2x10ml)和水(10ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02(5g)上純化，用己垸-40。/。EtOAc/己垸(梯度)洗脫，得到所需固體產物5mg，72y。。LC/MS:保留時間=2.44分鐘；w/z=295[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。^NMR(CD30D):52.26(s，3H);2.43(s，3H);2.65(s，3H);7.19(d,1H，J=7.7Hz);7.23(s，1H);7.30(d,1H,J=7.7Hz);8.11(s,1H)麗未觀察到。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例2(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>步驟15-溴-4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2，3-dj嘧啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>0°C下，在4-氯-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.5g，1.516mmol)(實施例1步驟2)的DMF(14ml)溶液中，逐滴加入N-溴琥珀酰亞胺(270mg，1.516mmol)的DMF(6ml)溶液。5分鐘后，使反應液升高至環境溫度。該溶液在EtOAc(2x40ml)和水(40ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。粗產物通過快速色譜法在SiO2(50g)上純化，用己烷-5%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，得到白色固態的所需產物433mg，70%。LC/MS:保留時間=3.112分鐘；m/z=410，408[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘步驟24-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-羧酸0°C下，在正-丁基鋰(2.5M在己垸中，0.24ml,0.59mmol)的THF(0.5ml)溶液中，逐滴緩慢加入5-溴-4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(200mg，0.489mmol)的THF(2ml)溶液。2分鐘后，加入碾碎的固體C02，使混合物升高至環境溫度。加入乙酸，然后是水(20ml)，用EtOAc(2x20ml)萃取混合物。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到白色固態的所需粗產物167mg，91%。LC/MS:保留時間=2.664分鐘；m/z=374[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘步驟34-氯-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺在4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸(100mg,0.268mmol)的CH2C12(1.5ml)溶液中，加入草酰氯(2M在CH2Cl2中，0.17ml,0.349mmol)，然后加入幾滴DMF。IO分鐘后，將反應混合物真空蒸發，然后重新溶解在CH2C12(3ml)中。加入氨水溶液(2ml)并將混合物劇烈攪拌15分鐘。加入水(IOml)和CH2C12(10ml)，分離各相。水相再用CH2C12(15ml)進行萃取。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。將粗產物加載到SiO2柱上(20g)，用CH2Cb-5。/。MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生黃色固態的標題化合物77mg，77%。LC/MS:保留時間=2.47分鐘；m々=373,375[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟44-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5國腈0°C下，在4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(73mg，0.196mmol)的012<:12溶液中，加入Et3N，然后緩慢滴加TFAA(0.03ml,0.21mmol)。使攪拌的反應混合物升高至環境溫度。再加入CH2C12(5ml)，將有機相用飽和NaHC03溶液(15ml)洗滌。使有機層通過疏水玻璃料并真空蒸發。粗產物通過快速色譜法在SiO2(20g)上純化，用己垸-20%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物60mg,86%。LC/MS:保留時間=2.84分鐘；w/z=357,355[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟52-甲基硫烷基-4-苯基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈用氮氣吹掃混合物5分鐘，對4-氯-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(54mg，0.152mmol)、苯基硼酸(24mg,0.198mmol)、Pd2Cl2(PPh3)2(5mg,0.0076mmol)、NaHC03水、溶液(1M,0.46ml，0.456mmol)和DMF的混合物進行脫氣。然后將反應液在氮氣環境中80°C下加熱3小時。使混合液冷卻，然后在EtOAc(2x15ml)和鹽水(15ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。粗產物通過快速色譜法在SiO2(20g)上純化，用己烷-20%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，得到白色固態的所需產物50mg,83%。LC/MS:保留時間=2.912分鐘；m/z=397[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟62-甲基硫烷基-4-苯基-7H-吡咯射2,3-d嘧啶-5-腈在2-甲基硫垸基-4-苯基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(50mg,0.126mmol)的THF(1ml)溶液中，加入乙二胺(0.025ml，0.378mmol)，再加入氟化四丁銨(lM的THF溶液，0.76ml，0.756mmol)。將該反應混合物在50°C下加熱過夜。反應液冷卻至環境溫度，然后在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之間分配。合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在SiO2(20g)上純化，用10%EtOAc/己烷-40%EtOAc/己垸(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物17mg，51%。LC/MS:保留時間=2.313分鐘；m/z=267[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘&NMR(d6DMSO):S2.60(s，3H);7.5-7.6(m,3H);7.8-7.9(m,2H);8.50(s,1H);13.21,(s，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例34-(4-氰基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈在合適的步驟中采用4-氰基苯基硼酸，通過方案2所示路徑并經由實施例2的方法，制備標題化合物。LC/MS:保留時間=3.56分鐘；m/z=290[M-Hr(負電離)。總的運行時間7.5分鐘。&NMR(d6DMSO):S2.61(s，3H);8.05(d,1H，J=8.2Hz)，8.07(d,lH,J=8.2Hz);8.56(s,1H);13.32(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例44-(2-甲基-4-氟-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈在合適的步驟(交叉偶聯(crosscoupling))中采用2-甲基-4-氟苯基硼酸和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2，3-，密啶-5-腈，通過方案2所示路徑并經由實施例2的方法，制備標題化合物。步驟1LC/MS:保留時間=2.89分鐘；m/z=429[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘步驟24-(2-甲基-4-氟-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈經由實施例1步驟5的方法來制備標題化合物(TBAF介導的SEM脫保護)。粗產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用乙酸乙酯和己垸混合物洗脫，產生灰白色固體。LC/MS:保留時間=2.40分鐘；m々=299[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S，2.22(s，3H);2.57(s,3H);7.1-7.2(m，1H);7.26(dd，1H,J=10.1,2.2Hz)，7.46(dd，lH,J=8.6，6.1Hz);8.44(s,1H);13.19(brs，lH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例55-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨處理5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(實施例1，步驟3)來制備標題化合物。通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用乙酸乙酯/己垸混合液洗脫。LC/MS:保留時間=4.44分鐘；m/z=350，348[M+H]+。總的運行時間7.5分鐘。&NMR(d6DMSO):S2.06(s,3H);2.35(s，3H);2.57(s，3H);7.08-7.20(m,3H),7.62(s,1H);12.48(s，lH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例64-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶4-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶向在氮氣環境下C02-丙酮浴中冷卻的正-丁基鋰(2.5M;0.10ml;0.253mmol)的無水THF(2ml)溶液中逐滴加入5-溴-4-(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(110mg;0.23mmol)的無水THF(1.4ml)溶液中。加入完成后，加入甲基碘(72pL;1.15mmol)并將該反應混合物攪拌5分鐘，除去冷卻浴，使反應混合物升高至環境溫度。反應混合物在飽和NH4C1水溶液和乙酸乙酯之間分配。有機相通過疏水玻璃料并真空除去溶劑，得到油，通過快速色譜法純化，用0-10%梯度的乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到無色油狀的產物(80mg;84°/。)。步驟1LC/MS:保留時間=3.08分鐘；m/z=414[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟24-(2,4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨處理4-(2，4-二甲基-苯基)-5-甲基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶來制備標題化合物。通過快速色譜法在硅膠上純化，用乙酸乙酯/己垸混合物洗脫；然后用二乙醚研磨，得到無色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=2.63分鐘；m/z=284[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。NMR(d6DMSO):51.68(s,3H);2.05(s,3H);2.35(s,3H);2.52(s,3H);7.08-7.12(m,4H);11.75(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例74-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基1-2-甲基硫垸基-711-吡咯并[2，3-(11嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>步驟14-[(3-羥基-苯基-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d〗嘧啶-5-腈在合適的步驟(交叉偶聯)中采用3-羥基苯基硼酸和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2，3-d]嘧啶-5-腈，通過方案2所示路徑并經由實施例2的方法，制備標題化合物。LC/MS保留時間=2.746分鐘；w/z=413[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟24-(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈將碳酸銫(73mg;0.225mmol)加入到4-[(3-羥基-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(37mg;0.09mmol)的DMF(1.5ml)溶液中，加入2-溴-N,N-二乙基乙胺氫溴化物(26mg;O.lmmol)，再加入催化量的KI，將該懸浮液在11()GC下加熱18小時。使所得懸浮液冷卻并在乙酸乙酯和氨水之間分配。分離各相，傾倒通過疏水玻璃料，粗產物通過色譜法在硅膠上純化，用二氯甲烷和甲醇的混合物(0-15%梯度甲醇的二氯甲垸溶液)洗脫，得到黃色固態的產物28mg;61%。LC艇S:保留時間=2.243分鐘；m/z=512[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟34-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基卜2-甲基硫垸基-711-吡咯并[2，3-(1嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法，4-[(3-(2-二乙基氨基-乙氧基卜苯基]-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與氟化四丁銨和乙二胺在THF中反應，得到標題化合物。通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用梯度1%三乙胺的二氯甲烷溶液到1%三乙胺；15%甲醇；84%二氯甲垸的溶液洗脫，得到淡黃色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=1.69分鐘；m/z=382[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。N證(d6DMSO):50.99(t，6H,J=7.1Hz);2.56-2.65(m，4H),2.60(s，3H);2.86(t,2H,J=5.8Hz);4.18(t,2H，J=5.9Hz);7.14(d,1H,J=7.9Hz);7.38-7.50(m,3H);8.490，1H);12.91(brs;1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例82-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈步驟16-氨基-5-(2，2-二乙氧基乙基)-嘧啶-2，4-二醇氮氣環境下，在脲(5.24g;87.2mmol)的無水乙醇(200ml)溶液中，加入2-氰基-4,4-二乙氧基丁酸乙酯[根據Davoll.J.丄C/z亂Soc.,1960,第Ul-138頁所述制備](20g;87.2mmol)，再加入乙醇鈉(11.88g;172.6mmol)。將該反應混合物回流加熱過夜。反應液冷卻至環境溫度，加入水(500ml)和乙酸(5ml)。將該溶液冷卻至約5。C，過濾收集得到淡褐色固體(8.4g;40%)。LC/MS:保留時間=1.37分鐘；m/z=198[M-EtOH]+。總的運行時間3.75分鐘&NMR(d6DMSO):S1.07(t，3H);2.40(d,2H);3.39(m,2H);3.60(m,2H);4.45(t,1H);10.08(s,1H);10.8(brs，lH)。步驟27H-吡咯并[2,3-d嘧啶-2，4-二醇環境溫度下，將6-氨基-5-(2,2-二乙氧基乙基)-嘧啶-2,4-二醇(2.57g;10.6mmol)在HC1(0.2M;80ml)中攪拌1.5小時。過濾懸浮液得到淡褐色固態的所需產物(1.28g;80%)。LC/MS:保留時間=0.54分鐘；m/z=152[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘步驟32,4-二氯-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶(HCl將7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2,4-二醇(1.28g;8.5mmol)的苯基膦酰二氯化物(7ml)溶液在165。C下加熱2小時。然后將該熱的反應混合物緩慢傾倒到冰水上(150ml)，用乙酸乙酯(2x100ml)萃取。有機萃取物用水(IOOml)，然后用飽和氯化鈉水溶液(100ml)洗滌。有機相在Na2S04上干燥，過濾，濾液真空蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在硅膠(20g)上純化，用75%乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到黃色固態的所需產物(0.45g;28%)。LC/MS:保留時間=1.98分鐘；m/z=188[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘步驟42，4-二氯-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶ciCI"、NT，(TC下，在氫化鈉(115mg;2.88mmol)的DMF(4ml)混合液中，逐滴加入2，4-二氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.45g;2.4mmol)的無水DMF(2ml)溶液。加入完全后，逐滴加入2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(0.55ml;3.12mmol)并將該反應混合物在0。C下攪拌1.5小時，然后升高至環境溫度。該反應混合物在水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)之間分配。有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用15。/。乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到黃色油狀的產物(0.65g;85%)。LC/MS:保留時間=2.84分鐘；m/z=320,318[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟55-溴-2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶ci0°C下，在2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.81g;5.7mmol)的DMF(8ml)溶液中逐滴加入N-溴琥珀酰亞胺的DMF(1.02g;5.7mmol)溶液。1小時后，該溶液在EtOAc(100ml)和水(100ml)之間分配。有機萃取物用水(100ml)，然后是飽和氯化鈉水溶液(100ml)洗滌。有機相在Na2S04上干燥，過濾，濾液在真空中蒸發溶劑，得到橘色油。在己烷中研磨得到黃色固態的所需產物(1.39g;61%)。LC/MS:保留時間=2.94分鐘；m/z=400，398，396[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。NMR(d6DMSO):S0.00(s,9H);0.92(t,2H);3.61(t,2H);5.64(s,2H);8.26(s,1H)。步驟62，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并2，3-d嘧啶-5-羧酸-78。C下，在正-丁基鋰(2.5M在己垸中；1.18ml;2.95mmol)的THF(10ml)溶液中，緩慢滴加5-溴-2，4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(980mg;2.46mmol)的THF(2ml)溶液。5分鐘后，將(302吹掃到混合液中，混合液升高至環境溫度。加入乙酸，再加入水(50ml)，用EtOAc(2x50ml)萃取混合物。合并的有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑，得到綠色固體。在己烷中研磨得到淡綠色固態的所需產物(431mg,48%)。LC/MS:保留時間=2.60分鐘；m/z=364/362[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘在2,4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸(320mg;0.89mmol)的CH2C12(10ml)溶液中，加入草酰氯(2M在CH2C12中，0.58ml;1.16mmol)，然后加入幾滴DMF。20分鐘后，在真空中蒸發反應混合物，然后重新溶解在CH2Cl2(10ml)中。加入氨水溶液(6ml)，將混合液劇烈攪拌3小時。加入水(50ml)和CH2C12(50ml)，分離所得各相。水相再用CH2Cl2(50ml)萃取。合并的有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。將粗產物加載到SiO2柱(20g)上，用2。/。MeOH/CH2Cl2洗脫，產生白色固態的標題化合物(0.146g;46%)。LC/MS:保留時間=2.42分鐘；m/z=363,361[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S0.00(s，9H);0.92(t，2H);3.62(t,2H);5.67(s,2H);7.49(brs,1H);7.88(brs，1H);8.29(s,1H)。步驟82,4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶Q、~《0°C下，在2,4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(146mg;0.405mmol)的CH2C12(10ml)溶液中，加入Et3N(0.12ml;0.87mmol)，再緩慢逐滴加入TFAA(0.06ml;0.43mmol)。使攪拌的反應混合物升高至環境溫度。再加入CH2C12(10ml)，有機相用飽和NaHC03溶液(20ml)洗滌。有機層在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在SiO2(10g)上純化，用10%EtOAc/己垸洗脫，產生白色固態的標題化合物(92mg;66%)。LC緒:保留時間=2.78分鐘；m/z=345,343[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):50.00(s,9H);0.99(t,2H);3.62(t,2H);5.69(s，2H);8.96Cs,1H)。步驟92-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈氮氣吹掃混合物5分鐘，對2,4-二氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-卩比咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(75mg;0.22mmol)、2,4-二甲基苯基硼酸(49mg;0.33mmol)、Pd(dppf)Cl2(10mg;0.012mmol)、K2C03(90mg;0.65mmol)和THF/H20(10:1;2ml)的混合物進行脫氣。然后將反應液在120。C下微波加熱20分鐘。使混合物冷卻，然后在EtOAc(2x20ml)和鹽水(20ml)之間分配。合并的有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。粗產物通過快速色譜法在SiO2(10g)上純化，用10%EtOAc/己垸洗脫，得到白色固態的所需產物(40mg;44%)。LC/MS:保留時間=2.91分鐘；m/z=415，413[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。'HNMR(d6DMSO):S0.00(s，9H);0.94(t,2H);2.27(s,3H);2.45(s，3H);3.68(t，2H);5.73(s,2H);7.25(d,1H);7.30(s，1H)，7.40(d,1H);8,89(s,1H)。步驟102-氯-4-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并2，3-d嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage42</formula>在2-氯-4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(40mg;0.097mmol)的THF(2ml)溶液中，加入乙二胺(0.019ml;0.29mmol)，再加入氟化四丁銨(lM的THF溶液；0.58ml;0.58mmol)。將該反應混合物在50°C下加熱過夜。使反應液冷卻至環境溫度，然后在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之間分配。合并的有機相在Na2S04上干燥，然后過濾，濾液在真空中蒸發溶劑。所得粗產物通過制備型HPLC(pl^4)純化，得到白色固態的所需產物(2.3mg;8.4%)。LC/MS:保留時間=2.36分鐘；m/z=283[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。^NMR(d6丙酮)S2.32(s，3H);2.42(s，3H);7.21(d，1H);7.24(s，1H),7.39(d,1H);8.46(s，1H),NH未見。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例94-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈將6-氨基-5-(2,2-二乙氧基-乙基)-2-巰基-嘧啶-4-醇嘧啶3.0g(11.6mmol)[根據Davoll.J.,丄C7zem.Soc.1960,第131-138頁所述制備]溶解到水(150ml和氨水溶液(9ml)的混合液中，加熱至90°C。將阮內鎳(RaneyNickel)懸浮液的等分試樣(2-3ml)加入到反應混合物中，直至UTLC禾口LC/MS步驟16-氨基-5-(2，2-二乙氧基-乙基)-嘧啶-4-醇分析顯示反應完全。反應混合物冷卻至環境溫度，過濾通過硅藻土濾墊。濾餅用水(2x25mL)洗滌，將合并的水性濾液凍干，產生灰白色粉末狀的標題化合物2.23g(85%)LC/MS:保留時間=1.37分鐘；m/z=182[M-EtOH+H]+。總的運行時間3.75分鐘。NMR(d6DMSO):S1.07(brt,6H);3.40(m，2H);3.59(m,2H);4.56(brt,1H);6.07(brs,2H);7.70(s，1H);11.43(brs,1H)。步驟27H-吡咯并[2,3-d嘧啶-4-醇(H^OH將12.8M鹽酸(1.2ml)加入到6-氨基-5-(2，2-二乙氧基-乙基)-嘧啶-4-醇(2.23g9.8mmol)的水(60ml)懸浮液中，環境溫度下攪拌2.5小時。然后將混合液用冰水浴冷卻，然后過濾。濾過的固體在真空中干燥，得到黃色固態的標題化合物1.2g(90%)。LC/MS:保留時間=0.572分鐘;m/z=158[M+Na]+。總的運行時間3.75分鐘。丄HNMR(d6畫SO):S6.40(dd,1H);7.03(dd，1H);7.82(s,1H);11.74(brs,1H);11.83(brs，1H)。步驟34-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶<formula>formulaseeoriginaldocumentpage44</formula>將磷酰氯加入到7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-醇(1.15g,8.5mmol)中，將該反應液在氮氣下加熱至100"C持續2.5小時。最初的懸浮液形成均質深色懸浮液，然后冷卻至室溫。真空去除過量磷酰氯，殘留物在冰浴中冷卻，攪拌下加入碎冰。將混合液用水(20ml)稀釋，用乙酸乙酯(2x30ml)萃取。合并的有機萃取物用飽和NaCl水溶液洗滌，然后在無水Na2S04上干燥。將混合液過濾，濾液在真空中除去溶劑，得到白色固體(0.811g;(62%)。LC/MS:保留時間=1.619分鐘；m/z=154[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&N匿(d6DMSO):56.60(dd,1H,J=3.5，1.8Hz);7.69(dd,1H,J=3.6，2.3Hz);8.59(s,lH),12.57(brsIH)。步驟44-氯-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶采用實施例1步驟1的方法，從4-氯-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶(0.805g;5.24mmol)制備標題化合物。產物通過快速色譜法在硅膠(25g)上純化，用2-25%梯度的乙酸乙酯的己垸溶液洗脫。得到無色油狀的標題化合物1.31g(87%)。LC/MS:保留時間=0.572分鐘；m/z=384[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):5-0.66(s，9H);0.90(t,2H);3.51(t,2H);5.64(s,2H);6.66(d,1H);7.38(d,1H);8.66(s,1H)。步驟54-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶該化合物通過實施例l步驟2的方法制備。因此，4-氯-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(1.29g，4.54mmol)與2,4-二甲基苯基硼酸(0.818g;1.2當量)、二氯雙(三苯基膦)鈀(II)和碳酸氫鈉的DMF/H20混合液反應，粗產物通過快速色譜法在硅膠(25g)上純化，用梯度3-30%的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色油狀的標題化合物(1.29g;80%)。LC/MS:保留時間=2.87分鐘；w/z=354[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟65-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2，3-dl嘧啶將N-溴琥珀酰亞胺(0.639g,3.59mmol)的DMF(10ml)溶液加入到冰浴冷卻的攪拌的4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧咬(1.27g,3.59mmol)的DMF溶液(20ml)中。然后將該反應混合物在環境溫度下攪拌18小時。真空去除DMF，殘留物在乙酸乙酯(150ml)和水(150ml)之間分配。分離各相，水相用乙酸乙酯(50ml)再次萃取。合并的有機相用飽和NaCl水溶液洗漆，在Na2S04上干燥。將混合液過濾，濾液去除溶劑，得到褐色油，通過快速色譜法在硅膠(50g)上純化，用梯度0-30%的乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到無色油狀的標題化合物(0.772g;49%)。LC/MS:保留時間=2.940分鐘；m/z=434,432[M+H]+(觀察到的溴同位素分裂模式)。總的運行時間3.75分鐘。步驟74-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-羧酸。該化合物通過實施例2步驟2的方法制備。因此，0.77g,1.78mmol的5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶與正-丁基鋰和二氧化碳反應，得到粗產物，通過快速色譜法在硅膠上(50g)純化，用梯度25-100%的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色固態的標題化合物(0.307g;43%)。LC/MS:保留時間=2.584分鐘；m/z=398[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟84-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺該化合物通過實施例2步驟3的方法制備。因此，0.304g，0.76mmol的4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2,3-(1]嘧啶-5-羧酸與草酰氯和氨水反應，得到粗產物(褐色油)，通過快速色譜法在硅膠上純化(25g)，用梯度50-100%的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色固態的標題化合物(0.135g;45%)。LC/MS:保留時間=2.446分鐘；m/z=397[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-(2，4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-5-腈該化合物通過實施例2步驟4的方法制備。因此，0.133g,0.34mmol的4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7^吡咯并[2，3-01]嘧啶-5-羧酸酰胺與三氟乙酸酐反應，得到粗產物(褐色油)，通過快速色譜法在硅膠(25g)上純化，用梯度20-70%的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到無色固態的標題化合物(0.075g;59%)。LC/MS:保留時間=2.789分鐘；m/z=379[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟104-(2,4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈該化合物通過實施例2步驟6的方法制備。因此，0.075g，0.20mmol的4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2，3-(1]嘧啶-5-腈與TBAF反應，得到粗產物(褐色油)，通過快速色譜法在硅膠(10g)上純步驟9化，用3:2的乙酸乙酯:己垸洗脫，得到無色固態的標題化合物(0.075g.;59%)oLC/MS:保留時間=2.034分鐘；m/z=249[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。!HNMR(d6DMSO):S2.18(s，3H);2.37(s,3H);7.14(d，1H，J=7.5Hz);7.20(s,1H);7.30(d,1H，J=7.5Hz);8.52(s，1H);8.97(s，1H);13.34(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例104-(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫垸基-5-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶步驟14-(2,4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-5-三氟甲基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基K7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶將5_溴_4_(2,4_二甲基_苯基)_2_甲基硫烷基_7_(2_三甲基硅烷基—乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(實施例1步驟3)(100mg,0.209mmol)、Cul(80mg,0.418mmol)、三氟乙酸鈉(57mg，0.418mmol)、甲苯(0.5ml)禾dDMF(1ml)在氮氣下混合，加熱至170°C過夜。使該反應混合物冷卻至室溫，然后在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之間分配。有機相通過疏水玻璃料并在真空中蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在SiO2(20g)上純化，用己烷-6%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，與脫鹵產物一起得到所需保護的產物。步驟24-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-5-三氟甲基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶采用實施例1步驟5的方法，使步驟1的產物脫保護。最終產物經HPLC(在pH4下進行)純化，產生灰白色固態的標題化合物7mg,10%。LC/MS:保留時間=2.68分鐘；m/z=349[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):$1.92(s，3H);2.34(s，3H);2.55(s，3H);7.04-7.15(m，3H);8.08(s，1H);NH未觀察到。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例115-環丙基-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶將5-溴-4-(2，4-二甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(實施例1,步驟3)(100mg,0.209mmol)、Pd(OAc)2(3mg，0.01mmol)、P(Cy)3(57mg,0.418mmol)、K3P04(170mg,0.80mmol)、環丙基硼酸(25mg,0.30mmol)、甲苯(1.0ml)和水(0.05ml)在氮氣下混合，氮氣吹掃該5分鐘使該混合液脫氣。然后反應液在100°C下加熱2小時。使反應混合物冷卻至室溫，然后在EtOAc(2xl5ml)和水(15ml)之間分配。將有機相干燥(Na2S04)并通過疏水玻璃料，真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在SiO2(10g)上純化，用己垸-5%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，得到所需保護的一些脫鹵產物(17mg)。采用實施例1步驟5的方法使該化合物混合物脫保護。粗產物通過HPLC(在pH4下進行)純化，產生灰白色固態的標題化合物4mg，6%。LC/MS:保留時間=2.70分鐘；m々=310[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S.0.36-0.40(m,4H);1.06m,1H);2.10(s,3H);2.34(s,3H);2.52(s，3H);7.00(m,1H);7.09(d,1H，J=7.5Hz);7.14(s,1H);7.20(d,1H，J=7.5Hz);11.7(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例124-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲氧基-7H-吡咯并2，3-dl嘧啶-5-腈4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并2，3-d〗嘧啶-5-腈根據方案2和方案4所示方法來制備標題化合物。步驟10°C下，在4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(189mg，0.44mmol)(實施例4步驟l)的CH2C12(8.5ml)溶液中，逐滴加入mCPBA(396mg，1.76mmol)的CH2C12(8.5ml)溶液。加入完全后，使反應液升高至室溫。l小時后，用5y。Na2S203溶液(20ml)洗滌反應混合液。水層再用CH2C12(20ml)萃取。然后將合并的有機相用飽和NaHC03水溶液(40mi)洗滌。然后讓有機相通過疏水玻璃料，真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02(25g)上純化，用20%EtOAc/己烷-45%EtOAc/己垸(梯度)洗脫，產生無色油狀的標題化合物187mg,92%。LC/MS:保留時間=2.65分鐘；m/z=461[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟24-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈氮氣、(TC下，在K(VBu(20mg,0.17mmol)的THF(1ml)混合液中加入MeOH(0.007ml,0.17mmol)，然后再逐滴加入4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(40mg,0.087mmol)的THF(0.5ml)溶液。30分鐘后，使該反應混合液在EtOAc(2x10ml)和飽和NaHC03溶液(15ml)之間分配。有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到保護的粗產物。采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨使該產物脫保護。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用10%EtOAc/己烷-50。/。EtOAc/己垸(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物12mg,48%。LC/MS:保留時間=2.16分鐘；m/z=283[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。^NMR(d6DMSO):S2.23(s,3H);3.96(s,3H);7.17(m,1H);7.26(dd,1H，M0.4禾口2.3Hz);7.44(dd,1H,J=8.4,6.0Hz);8.37(s,1H);13.06(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例134-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-吡咯烷-l-基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用實施例12所示的方法，根據方案2和方案4的路徑來制備標題化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與2-吡咯垸-l-基-乙醇反應，然后用TBAF使所得產物脫保護。LC/MS:保留時間=1.63分鐘；m/z=366[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):5.1.68-1.74(brm,4H);2.23(s,3H);2.60-2.67(brm,4H);2.93(brt，2H);4.46(t,2H,J=5.8Hz);7.17(m，1H);7.23(dd,1H,J=10.2和2.5Hz);7.44(dd，1H，J=8.6，6.0Hz);8.37(s，1H);12.7(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例144-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用實施例12所示的方法，根據方案2和方案4的路徑來制備標題化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與2-嗎啉-4-基-乙醇反應，然后用TBAF使所得產物脫保護。LC/MS:保留時間=1.62分鐘；m/z=382[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。iHNMR(d6DMSO):S.2.23(s，3H);2.41-2.49(m,4H);2.72(t,2H,J=5.8Hz);3.55(t,4H,J=4.5Hz);3.60(t,2H，J=5.5Hz);4.52(t,2H,J=5.8Hz);7.17(m,1H);7.23(dd,1H，J=10.1和2.6Hz);7.44(dd,1H，J=8.3，6.1Hz);8.36(s,1H);13.0(brs,IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-2-(2-氧代-妣咯烷-l-基)-乙氧基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈采用實施例12所示的方法，根據方案2和方案4的路徑來制備標題化合實施例15物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈與l-(2-羥基-乙基-吡咯垸-2-酮反應，然后用TBAF使所得產物脫保護。LC愿:保留時間=2.023分鐘；w/z=380[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。NMR(d6DMSO):5.1.89(m,2H);2.19(t,2H,J=8.4Hz);2.23(s，3H);3.45(t，2H,J=6.8Hz);3.60(t，2H,J=5.5Hz);4.45(t,2H,J=5.5Hz);7.17(m,1H);7.26(dd,1H,=10.2禾卩2.6Hz);7.44(dd，1H,J=8.6,6.1Hz);8.38(s,1H);13.0(brs,IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例164畫(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-5畫腈步驟14-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并2,3-d]嘧啶-5-腈氮氣下將4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(實施例12步驟1)(50mg,0.11mmol)、1-甲基哌嗪(0.024ml，0.22mmol)和無水DMF(0.5ml)混合并在100°C下加熱3小時。使反應液冷卻至室溫，在EtOAc(2x10ml)和飽和NaHC03溶液(10ml)之間分配。然后，讓有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到保護的粗產物。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用10%EtOAc/己垸-50。/。EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生無色油狀的標題化合物29mg,55。/。。LC/MS:保留時間=2.14分鐘；m/z=481[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨使4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(4-甲基-哌嗪-l-基)-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈脫保護。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用CH2Clr6%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生黃色固態的標題化合物4mg,18%。LC/MS:保留時間=1.67分鐘；m/z=351[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。'HNMR(d6DMS。):5.0.93(t,6H，J=7.1Hz);2.53(q，4H，J=7.1Hz);2.75(brt,2H,J=8.0Hz);3.28(m,2H);7.17(m,1H);7.25(dd,1H，M0.2和2.6Hz);7.44(dd，1H,J=8).13.0brs1H。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例174—(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲基氨基-7H-吡咯并[2,3-dj嘧啶-5-腈步驟2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>根據方案2和方案4的路徑，采用實施例16所示方法來制備標題化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與甲基胺反應，然后用TBAF使所得產物脫保護。LC/MS:保留時間=2.08分鐘；m/z=282[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。!HNMR(d6DMSO):S.2.21(s,3H);2.83(d,3H,J=4.8Hz);7.11(m，1H);7.20(dd,1H,J=10.1和2.5Hz);7.12-7.21(brs,1H);7.36(dd，1H，J=8.3和6.0Hz);8.02(s,1H);12.44(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例182-乙基-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage57</formula>0°C下，將EtMgBr(0.04ml,0.11mmol,3M的Et20溶液)加入4國[(2-甲基隱4-氟-苯基]-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例12步驟1)(50mg，0.11mmol)的溶液中。20分鐘后，反應液在EtOAc(2x15ml)和水(15ml)之間分配。然后，有機相通過疏水玻璃料，真空蒸發，得到保護的粗產物。采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨使該產物脫保護。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用CH2Cl2-6%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生米色固態的標題化合物24mg,79%。LC/MS:保留時間=2.20分鐘；m/z=281[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S.1.33(t，3H，J=7.6Hz);2.21(s,3H);2.99(q,2H,J=7.6Hz);7.17(m，1H);7.25(dd,1H,J=10.1和2.5Hz);7.44(dd,1H,J=8.5和6.0Hz);8.50(s，IH);13.18(brs，IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例192-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈步驟12-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d贈啶-5-腈氮氣下將4-[(2-甲基-4-氟-苯基]-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例12步驟1)(50mg,0.11mmol)、2-二乙基氨基乙硫醇鹽酸鹽(37mg,0.22mmol)、Et3N(0.03ml，0.22mmol)和無水DMF(2.0ml)混合并在100°C下加熱40分鐘。使反應液冷卻至室溫，在EtOAc(2x15ml)和氨水溶液(15ml)之間分配。然后讓有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到保護的粗產物。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用CH2Cl2-6%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生黃色油狀的標題化合物40mg，71%。LC/MS:保留時間=2.17分鐘；m/z=514[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟22-(2-二乙基氨基-乙基硫垸基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并2，3-d嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨使2-(2-二乙基氨基-乙基硫垸基)-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈脫保護。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用CH2C12-13%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物20mg,67%。LC/MS:保留時間=1.73分鐘；m/z=384[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。JHNMR(d6DMSO):S.0.93(t,6H,J=7.1Hz);2.53(q，4H,J=7.1Hz);2.75(brt,2H，J=8.0Hz);3.28(m,2H);7.17(m,IH);7.25(dd,IH,J,.2禾口2.6Hz);7.44(dd，1H，J=8.3和6.1Hz);8.43(s,IH);12.91(brs，IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例204-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-羥基-乙基硫垸基)-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage59</formula>根據方案2和方案4的路徑，采用實施例18的方法來制備標題化合物。因此，4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-711-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與2-巰基乙醇反應，然后用TBAF使所得產物脫保護。LC/MS:保留時間=2.073分鐘；w/z=329[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):32,22(s，3H);3.27(t,2H，J=6.6Hz);3.68(m,2H);4.99(t，1H,J=5.3Hz);7.18(m,1H);7.26(dd,1H,J=10.1和2.1Hz);7.44(dd,1H，J=8.3和6.1Hz);8.43(s,1H);13.17(brs,IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例214-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-嗎啉-4-基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈步驟l4_(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-嗎啉-4-基-乙基硫烷基)-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧腚-5-腈在4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-羥基-乙基硫垸基)-711-吡咯并[2,3-(1]嘧啶-5-腈(實施例20的前體)(100mg,0.22mmol)的CH2C12(10ml)溶液中，加入DMP試齊U(Dess-Martinperiodinane)(lllmg,0.26mmol)。將反應液在室溫下攪拌5小時。然后真空蒸發混合液，得到保護的粗產物醛。通過快速色譜法在硅膠(20g)上部分純化，用己垸-40%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，得到無色油狀的醛73mg。將其與嗎啉(0.03ml,0.308mmol)、AcOH(0.04ml,0.77mmol)、粉末化3A分子篩、MeOH(3ml)和Na(OAc)3BH3(65mg,0.31mmol)混合并在氮氣中室溫下攪拌2小時。然后過濾混合液，濾液在真空中蒸發。然后在CH2C12(2x10ml)和飽和NaHC03溶液(10ml)之間分配。然后讓有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到保護的粗產物。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用20%EtOAc/己烷-70。/。EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生無色油狀的標題化合物47mg，41%。LC/MS:保留時間=2.25分鐘；m/z=528[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟24-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-嗎啉-4-基-乙基硫垸基)-711-吡咯并2,3-(1]嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法，用氟化四丁銨使4-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-(2-嗎啉_4-基-乙基硫烷基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈脫保護。通過快速色譜法在硅膠(10g)上純化，用CH2Cl2-5%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物19mg,54%。LC/MS:保留時間=1.68分鐘；m/z=398[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。!HNMR(d6DMSO):5.2.22(s，3H);2.43(brm，4H);2.65(t，2H,J=7.5Hz);3.30(t，2H,J=7.5Hz);3.55(m,4H);7'18(m,1H);7.26(dd,1H，J=10.1禾口2.5Hz);7.44(dd,1H,J=8.7和6.0Hz);8.44(s,1H);13.17(brs,IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例224-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈將碳酸鉀(12g,87mmol)加入2,4-二氯-5-硝基苯酚(英國蘭開夏莫堪貝的蘭開絲牛寺合成公司(LancasterSynthesis,Morecambe，Lancashire,UK))(15.6g,75mmol)的丙酮溶液中。加入芐基溴(9ml，76mmol)并將該懸浮液在75"C(油浴溫度)下加熱約3小時。使所得懸浮液冷卻，加水(500ml)，用二氯甲烷(2x200ml)萃取混合液。將合并的萃取物用氫氧化鈉水溶液(150ml，2M)、水(2x200ml)和飽和氯化鈉水溶液(150ml)洗滌。將該溶液在無水硫酸鈉上干燥，濃縮得到淡黃色固體(21.5g,96%)Rf0.73CH2C12(Si02)LC保留時間2.915分鐘[M+H]+無電離(運行時間3.75分鐘)步驟25-芐氧基-2,4-二氯-苯基胺步驟1l-芐氧基-2,4-二氯-5-硝基-苯/將鐵粉(21g，376mmol)加入l-芐氧基-2，4-二氯-5-硝基-苯(21.5g,72mmo1)的乙酸(300ml)/水(150ml)懸浮液中，將該混合液在85GC(油浴溫度)下加熱約90分鐘。過濾所得懸浮液。使濾液冷卻，加水(750ml)，并用二氯甲烷(3xl50ml)萃取混合液。將合并的萃取物用氫氧化鈉水溶液(300ml，2M)、水(2x500ml)和飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗滌。該溶液用無水硫酸鈉干燥，過濾，濾液在真空中除去溶劑，得到淡褐色固體產物(18.6g，96y。)Rf0.57CH2Cl2(Si02)。LC保留時間2.792分鐘[M+H]+270/268(運行時間3.75分鐘)步驟3l-芐氧基-2，4-二氯-5-碘-苯將鹽酸(60ml,6M)加入5-芐氧基-2，4-二氯-苯基胺(16.2g,60mmol)的乙酸(240ml)溶液中，并使所得懸浮液冷卻(冰/水/鹽)。緩慢加入亞硝酸鈉水溶液(4.8g,69.5mmol，40ml)(保持溫度〈5^C)。加入完全后，將所得溶液攪拌約30分鐘。將所得溶液傾倒到碘化鉀(20g,120mmo1)和碘(4g,16mmo1)的水溶液(200ml)中，將該混合液攪拌約90分鐘。加水(800ml)并用二氯甲垸(3x250ml)萃取該混合液。將合并的萃取物用硫代硫酸鈉水溶液(2xl50ml，10%)、氫氧化鈉水溶液(250ml，2M)、水(2x250ml)和飽和氯化鈉水溶液(200ml)萃取。溶液用無水硫酸鈉干燥，濃縮得到淡褐色油，靜置固化(20.6g，90。/。)。Rf0.82CH2C12(Si02)LC保留時間3.084分鐘[M+H]+無電離(運行時間3.75分鐘)步驟42,4-二氯-5-碘-苯酚0。C下，在l-芐氧基-2,4-二氯-5-碘-苯(3.0g,7.92mmol)的CH2C12(50ml)溶液中，逐滴加入BC13(23.8ml，23.8mmol,1M的012(:12溶液)。加入完全后，使反應液升高至室溫。然后讓混合液在飽和NH4C1溶液(50ml)和CH2C12(2x50ml)之間分配。讓合并的有機相通過疏水玻璃料并真空蒸發，得到粗產物油。通過快速色譜法在硅膠(70g)上純化，用己烷-10%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生黃色固態的標題化合物1.83g，80%。LC/MS:保留時間=2.48分鐘；m/z=289，287[M-H]-。總的運行時間3.75分鐘。步驟52，5-二氯-2-碘-甲氧基-苯在2,4-二氯-5-碘-苯酚(0.5g，1.73mmol)的DMF(10ml)溶液中，相繼加入K2C03(480mg,3.46mmol)和Mel(0.12ml,1.90mmol)，將所得混合液在氮氣、室溫下攪拌過夜。再加入等量的K2C03(480mg，3.46mmol)、Mel(0.12ml,1.90mmol)和DMF(4ml),室溫下攪拌過夜。反應混合物在氨水溶液(30ml)和EtOAc(2x30ml)之間分配。干燥(Na2S04)合并的有機相，真空蒸發，得到粗產物。通過快速色譜法在硅膠(50g)上純化，用己垸洗脫，產生黃色固態的標題化合物1.83g,80%。LC/MS:保留時間=2.76分鐘；附々=無質量。總的運行時間3.75分鐘。4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈步驟6CI-78°C、氮氣下，在2,5-二氯-2-碘-甲氧基-苯的THF溶液中，加入三異丙基硼酸酯(0.64ml,2.75mmol)，再逐滴加入"BuLi(0.72ml,1.79mmol,2.5M在己烷中)。使反應液升高至室溫，然后真空蒸發，并在EtOAc(2x50ml)和稀鹽酸溶液(50ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發，得到白色固態的粗產物硼酸(320mg)。將其與4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(390mg,1.1mmol)、1MNaHC03溶液(4.1ml，4.1mmol)、PdCl2(PPh3)2(48mg,0.07mmol)和DMF(12ml)混合。氮氣吹掃5分鐘使該混合液脫氣，然后在氮氣中在8(TC下加熱3小時。使反應液冷卻，然后在EtOAc(3x50ml)和飽和NaHC03溶液(50ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發得到粗產物油。通過快速色譜法在硅膠上(70g)純化，用己烷-20%EtOAc/己垸(梯度)洗脫，產生黃色油狀的標題化合物260mg,48%。LC認:保留時間=2.96分鐘；m/z=495,497[M國H]懇。總的運行時間3.75分鐘。步驟74-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.52分鐘；w/z=365,367[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。'H雨R(d6DMSO):5.2.59(s,3H);3.90(s,3H);7.39(s,1H);7.81(s,1H);8.48(s，1H);13.23。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例234-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-711-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈根據方案2和方案4的路徑，采用實施例12、19和22的方法來制備標題化合物。因此，用mcpba氧化4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例22步驟6)，所得砜用2-二乙基氨基乙硫醇置換。用TBAF除去SEM保護基團，得到固體標題化合物。LC/MS:保留時間=1.84分鐘；m/z=450,452[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):5.0.98(t，6H,J=7.0Hz);2.61-2.76(m,4H);2.86-2.95(m,2H);3.26-3.35(m,2H),3.90(s，3H);7.41(s，1H);7.85(s，1H);8.49(s,1H);12.2-12.9(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙氧基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈實施例24根據方案2和方案4的路徑，采用實施例12和22的方法來制備標題化合物。因此，用mcpba氧化4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2，3-d]嘧啶-5-腈(實施例22步驟6)，所得砜用2-二乙基氨基乙醇置換。用TBAF除去SEM保護基團，得到固體標題化合物。LC/MS:保留時間=1.75分鐘；m/z=434,436[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。JHNMR(d6DMSO):S.0.97(t，6H,J=7.0Hz);2.57(q,4H,J=7.0Hz);2.82(t,2H，J=6.4Hz);3.90(s，3H);4.41(t，2H,J=6.4Hz),7.37(s,1H);7.80(s,1H);8.38(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-(2，4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-[2-(2-氧代-吡咯垸-l-基)-乙氧基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈根據方案2和方案4的路徑，采用實施例22、實施例12的方法來制備標題化合物。因此，用mcpba氧化4-(2,4-二氯-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基匿7-i(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例22步驟6)，所得砜用l-(2-羥基-乙基-P比咯垸-2-酮置換。用TBAF除去SEM保護基團，得到固體的標題化合物。實施例25LC/MS:保留時間=2.14分鐘；m/z=446，448[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。N匿(d6DMSO):$1.89(m,2H);2.20(t，2H，J=8.0Hz);3.46(t,2H,J=7.0Hz》；3.61(t,2H,J=5.5Hz);3.90(s,3H);4.47(t,2H,J=5.5Hz);7.39(s,1H);7.81(s,1H);8.42(d，1H，J=2.5Hz);13.13(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-[2,4-二氯-5-(2-吡咯烷-l-基-乙氧基)-苯基l-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈氮氣下將2，4-二氯-5-碘-苯酚(實施例22,步驟4)(1g，3.46mmol)、l-(2-溴乙基)吡咯烷氫溴酸(3.81mmol)、CsC03(2.8g,8.65mmol)和DMF(15ml)混合，并在110°C下加熱3小時。然后使反應混合物在EtOAc(2x40ml)和氨水溶液(40ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發，得到粗產物油。通過快速色譜法在硅膠(25g)上純化，用己烷-45%EtOAc/己垸(梯度)洗脫，產生黃色固態的標題化合物1.08g,80%。LC認:保留時間=1.81分鐘；m/z=386,388[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-[2，4-二氯-5-(2-吡咯烷-l-基-乙氧基)-苯基]-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并實施例26步驟1l-[2-(2，4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-吡咯烷步驟2[2，3-d嘧啶-5-腈CI-78°C、氮氣下，在l-[2-(2,4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-吡咯烷(200mg,0.518mmol)的THF溶液中加入三異丙基硼酸酯(0.24ml，1.04mmol)，再逐滴加入"BuLi(0.27ml，0.67mmol,2.5M在己烷中)。使反應液升高至室溫，然后真空蒸發，得到粗產物硼酸。將其與4-氯-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(92mg,0.26mmol)、1MNaHC03溶液(0.8ml，0.78mmol)、PdCl2(PPh3)2(9mg，0.01mmol)和DMF(6ml)混合。氮氣吹掃5分鐘使混合液脫氣，然后在氮氣中80°C下加熱2小時。使反應液冷卻，然后在EtOAc(2x60ml)和氨水溶液(60ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發，得到粗產物油。通過快速色譜法在硅膠(50g)上純化，用CH2Cl2-5%MeOH/CH2Cl2(梯度)洗脫，得到黃色油狀的保護的產物160mg。采用實施例1步驟5的方法使該產物脫保護，產生黃色固態的標題化合物49mg，42。/c)。LC/MS:保留時間=1.83分鐘；m/z=448,450[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6畫SO):5.1.68(m，4H);2.58(s，3H);2.61(m，4H);2.89(t,2H，J=5.8Hz);4.22(t,2H，J=5.7Hz);7.42(s,1H);7.80(s,1H);8.46(s,1H);13.00(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例274-[2，4-二氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基1-2-甲基硫垸基-711-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈根據方案2和方案4的路徑，采用實施例26的方法來制備標題化合物。因此，將[2-(2,4-二氯-5-碘-苯氧基)-乙基]-二乙胺(根據實施例26步驟1制備)轉化為5-取代的硼酸，并與4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2，3-d]嘧啶-5-腈反應。除去SEM保護基團，得到固體的標題化合物。LC/MS:保留時間=1.86分鐘；m々=450，452[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S.0.99(t，6H,J=7.1Hz);2.59(s，3H);2.62(q，4H,J=7.0Hz);2.90(t,2H，J=5.1Hz);4.18(t，2H,J=5.1Hz);7.42(s,1H);7.80(s，1H);8.47(s，1H);12.8(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。2-(5-氰基-4-2，4-二氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苯基-7H-吡咯并[2，3-d嘧噴-2-基硫烷基}-^甲基-乙酰胺根據方案2和方案4的路徑，采用實施例12、26和19的方法來制備標LC/MS:保留時間=1.70分鐘；m/z=507，509[M+H]+。總的運行時間3.75HNMR(d6DMSO):S.0.50(t，6H,J=7.2Hz);1.92(s,3H);2.38(q，4H:實施例28題化合物。分鐘。J=7.2Hz);2.68(t，2H,J=5.1Hz);3.14(s,2H);3.62(t,2H,J=5.1Hz);6.51(s,lH);6.88(s,IH)，7.37(s，1H);7.72(s，IH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例294-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈在3,4-二甲氧基硼酸(364mg)的乙腈(4mL)懸浮液中加入TFA(50uL)和NCS(294mg)。將該反應混合液在室溫下攪拌6小時，用AcOEt稀釋并用鹽水洗滌。將有機相用硫酸鈉干燥，減壓除去溶劑。將結晶粗產物用AcOEt/己垸研磨，得到2-氯-4,5-二甲氧基-硼酸(183mg,42%)。步驟24-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈步驟12-氛-4,5-二甲氧基苯基硼酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage71</formula>根據方案2的路徑，采用實施例2的方法來制備標題化合物。因此，在鈴木(Suzuki)交叉偶聯反應條件下，使4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與2-氯-4，5-二甲氧基苯基硼酸反應。用TBAF除去所得產物的SEM保護基團，得到固體。LC/MS:保留時間=2.24分鐘；m/z=361[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6畫SO):S.2.58(s,3H);3.80(s,3H);3.86(s,3H)，7.14(s，1H),7.19(s,1H);8.44(s，1H);13.20(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-711-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈步驟l4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈采用實施例12的方法來制備標題化合物。因此，用mcpba氧化4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧P定-5-腈(實施例29)，產生淡褐色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=2.588分鐘；m/z=523,525[M+H]+。總的運行時間實施例303.75分鐘。步驟24-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈根據實施例19步驟1的方法來制備標題化合物。因此，4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈與2-二乙基氨基乙硫醇反應。反應所得粗產物通過實施例1步驟5的方法脫保護，得到無色固體產物，然后用快速色譜法純化(硅膠；乙酸乙酯/己烷混合液洗脫)。LC/MS:保留日寸間=1.68分鐘；m/z=446[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。NMR(d6DMSO):S.0.97(t,6H,J=7.1Hz);2.57-2.68(m,4H);2.82-2.90(brm，2H，)；3.25-3.35(brm,4H),3.80(s,3H);3.86(s,3H)7.16(s,1H),7.19(s，1H);8.44(s，1H);該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧基]-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈實施例31鹽(600mg，3.8mmol)在含有Et3N(U.4mmo1，U51g，1.59ml)的DCM(10ml)中攪拌，并使混合液冷卻至0°C。逐滴加入用DCM(5ml)配制的乙酰氧基乙酰氯(5.7mmo1，778mg,0.612ml)，將該反應混合液在室溫下攪拌過夜。相繼用飽和NaHC03溶液(x2)和鹽水(x2)洗滌該反應混合液。將有機層干燥(MgS04)，過濾，濾液在真空中除去溶劑。將殘留物冷卻，用己烷研磨，得到無色油狀的標題化合物(773mg(92%)。步驟22-(4，4-二氟-哌啶基-l-基)乙醇室溫下將LiAlH4(15mmol,15ml1M的THF溶液)在THF(20ml)中攪拌。逐滴加入用THF(15ml)配制的乙酸-2-(4,4-二氟-哌啶-l-基)-2-氧代-乙酯(5mmo1,l.lg)。加入完全后，將反應液加熱至4(TC并保持4小時。室溫下將反應液攪拌過夜，然后冷卻至0°C。小心加入H20(2ml)、1MNaOH水溶液(lml)和H20(lml)來淬滅反應混合液。將混合液攪拌30分鐘，然后通過硅藻土過濾，濾餅用EtOAc洗滌幾次。真空濃縮濾液，得到標題化合物800mg(95。/0)。步驟34-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-l-基)-乙氧基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用4-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例30，步驟l)和2-(4,4-二氟-哌啶基-1-基)乙醇，根據實施例12步驟2的方法來合成標題化合物。得到粗產物，通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用1:1的乙酸乙酯:己垸洗脫，得到灰白色固體產物(產率90%)。LC/MS:保留時間=2.33分鐘；m/z=608,610[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4，4-二氟-哌啶-l-基)-乙氧基-7H-吡咯并[2,3-dl嘧啶-5-腈根據實施例1步驟5的方法來制備標題化合物。因此，4-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4,4-二氟-哌啶-1-基)-乙氧萄-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與TBAF和乙二胺在THF中反應，得到粗產物，通過快速色譜法在硅膠上純化，用梯度1-5%的甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到灰白色固體產物(產率39%)。LC/MS:保留時間=1.646分鐘；m/z=478，480[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。^NMR(d6DMSO):S.1.87-2.00(m,4H);2.59-2.68(m，4H);2.83(brt，2H，J=5.3Hz);3.74(s，3H);3.86(s,3H),4.46(brt,2H,J=5.3Hz);7.13(s,1H),步驟47.19(s,1H);8.37(s,1H);13.02(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例324誦(4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(4,4-二氟-哌啶-l-基)-乙氧基-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈采用合適的硼酸進行偶聯，合適的醇進行砜置換，利用實施例2、12和31的方法，根據方案2和方案4的路徑來制備該化合物。最終產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用梯度0-5%甲醇的二氯甲垸溶液洗脫，得到灰白色固體產物。LC/MS:保留時間=1.583分鐘；m/z=444[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。JHNMR(d6DMSO):31.88-2.00(m，4H);2.59-2.65(m,4H);2.82(t,2H，J=5.6Hz);3.85(s，3H);3.89(s,3H),4.48(t，2H,J=5.6Hz);7.14(d,1H,J=8.7Hz),7.46-7.51(m，2H);8.42(s，1H);12.99(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。2-[2-(3，3-二氟-吡咯烷-l-基)-乙氧基-4-(3,4-二甲氧基-苯基)-7H-吡咯并[2,3-d〗嘧啶-5-腈采用合適的硼酸進行偶聯，合適的醇進行砜置換，利用實施例2、12和實施例3331的方法，根據方案2和方案4來制備該化合物。最終產物通過制備型HPLC(pH4)純化，得到無色固體。LC/MS:保留時間=1.736分鐘；m/z=430[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。^NMR(d6DMSO):S2.17-2.28(m,2H);2.80(t,2H,J=6.8Hz);2.88(t，3H,J=5.6Hz);3.00(t，2H，J=13.5Hz);3.85(s,3H);3.90(s,3H);4.47(t,2H,J=5.6Hz);7.14(s，1H);7.46-7.51(m，2H)，8.42(s,1H)，13.00(brs1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例344-(3,4-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3(8)-氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基-711-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用合適的硼酸進行偶聯，合適的醇進行砜置換，利用實施例2、12和31的方法，根據方案2和方案4來制備該化合物。最終產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用梯度0-5%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到白色固體產物。LC/MS:保留時間=1.474分鐘；m/z=412[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S.1.78-1.94(m,1H)，2.02-2.21(m,1H),2.35-2.47(m,1H);2.63-2.75(m，1H),2.80-2.95(m,4H),3.85(s,3H),3.90(s，3H)，4.47(t,2H,J=5.8Hz);5.49(dm，1H);7,14(d，1H，J=8.3Hz);7.49(m,2H),8.42(s，1H);13.01(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例354-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-[2-(3(S)-氟-哌啶-l-基)-乙氧基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用合適的硼酸進行偶聯，合適的醇進行砜置換，利用實施例2、12和31的方法，根據方案2和方案4來制備該化合物。最終產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用梯度3-5%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到白色固體產物。LC/MS:保留時間=1.502分鐘；m/2=446[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S.1.76-1.93(m,1H)，2.04-2.19(m,1H)，2.40(m，1H),2.62-2.77(m，1H)，2.80-2.88(m，4H),3.79(s,3H),3.86(s,3H),4.46(t,2H，J=5.8Hz);5.20(dm，1H);7.13(s,1H),7.18(s,1H),8.35(s，1H);13.00(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。2-2-(3，3-二氟-吡咯烷-l-基)-乙氧萄-4-(2-氯-3，4-二甲氧基-苯基)-7H-吡咯射2，3-d嘧啶-5-腈采用合適的硼酸進行偶聯，合適的醇進行砜置換，利用實施例2、12和31的方法，根據方案2和方案4來制備該化合物。最終產物通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用梯度0-3%甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到白色固體產物。LC認:保留時間=1.816分鐘；m/z=464[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。實施例36'HNMR(d6DMSO):S2.17-2.28(m,2H);2.80(t，2H,J=6.7Hz);2.88(t3H，J=5.6Hz);2.99(t,2H,J=13.4Hz);3.74(s,3H);3.86(s,3H);4.40(t,2HJ=5.6Hz);7.14(s,1H);7.18(s,1H),8.36(s，1H),13.00(brsIH)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫垸基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈將4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸(,熟(600mg，2.98mmol)加入磺酰胺(715mg;7.44mmol,2.5當量)中，然后將該混合物溶解在吡啶(2.9ml)中，氮氣環境下加熱2.5小時。使反應混合物冷卻至環境溫度，真空除去吡啶。所得固體用10%MeOH的二氯甲烷溶液洗滌。過濾并干燥，得到乳膏固體550mg;92%。步驟24-氨基-5-氯-2-甲氧基芐腈實施例37步驟l4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺<formula>formulaseeoriginaldocumentpage79</formula>將4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酰胺加入乙腈中，在所得懸浮液中加入POCl3(過量)，并將該混合液加熱至80。C持續3小時(1.5小時后反應混合液是均質的)。使反應混合液冷卻至室溫，然后倒入冰水中。攪拌2小時后，過濾出黃色固體，5(TC下干燥過夜。步驟34-碘-5-氯-2-甲氧基芐腈根據實施例22步驟3的方法來制備標題化合物(重氮化和用碘/碘化鈉水溶液淬滅)。4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈根據實施例26步驟1的方法來制備標題化合物(形成硼酸，然后交叉偶聯)。LC/MS:保留時間=2.884分鐘；m/z=486,488[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈步驟4步驟5<formula>formulaseeoriginaldocumentpage81</formula>根據實施例22步驟1的方法來制備標題化合物(用mcpba氧化)。步驟64-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫烷基)-7H-吡咯并[2,3-d嘧啶-5-腈根據方案4的路徑，采用實施例19(砜置換)和實施例1步驟5(脫保護)的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=1.75分鐘；m/z=457[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(ADMSO):S1.02(t，6H，J=7.1Hz);2.72-2.81(brm,4H);2.94-3.03(brm，4H)，3.26-3.37(brm,4H);3.96(s，3H);7.56(s，1H);8.19(s,1H),8.51(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例382-[5-氰基-4-(4-氟-2-甲基-苯基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基硫垸基j-N-甲基-乙酰胺根據方案2和方案4的路徑，采用實施例12和實施例19的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.01分鐘；m/z=356[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例394-(2，4-二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-羧酸酰胺采用實施例1步驟5的方法，使4-(2,4-二甲基-苯基)-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(實施例9步驟8)脫保護。因此，與TBAF和乙二胺在THF中反應，得到粗產物，通過制備型HPLC(pH4)純化，得到無色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=1.987分鐘；m/z=267[M+H]+。總的運行時間7.5分鐘。步驟14-(2，4二甲基-苯基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-羧酸酰胺丄HNMR(d6DMSO):51.91(s,3H);2.33(s,3H);6.81(brs，1H);7.05(d1H,J=7.7Hz);7.07(s,1H);7.12(d，1H,J=7.7Hz);7.97(s，1H);8.83(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例404-(4-氟-2-甲基-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺根據方案2的路徑，采用實施例2和實施例39的方法來合成標題化合物。4-[(2-甲基-4-氟-苯基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-羧酸酰胺根據實施例2步驟5的方法，使4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-羧酸酰胺(實施例2，步驟3)與4-氟-2-甲基苯基硼酸交叉偶聯。得到粗產物，通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用20-65%乙酸乙酯的己烷溶液(梯度)洗脫；得到無色油狀的標題化合物(產率90%)。LC/MS:保留時間=2.676分鐘；w/z=447[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟1步驟24-(4-氟-2-甲基苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-羧酸酰胺采用實施例1步驟5的方法來制備標題化合物。因此，與TBAF和乙二胺在THF中反應，得到粗產物，通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用0-4%甲醇的二氯甲烷溶液(梯度)洗脫，得到無色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=1.920分鐘；m/z=317[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。iHNMR(d6DMSO):S2.56(s,3H);6.68(brs,1H);6.98-7.11(m,3H);7.19-7.24(m,1H);7.84(d，1H,J=2.3Hz)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例414-(二氯-苯基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并2,3-d嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage84</formula>根據方案2的路徑，采用實施例2的方法來制備標題化合物。因此，4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈與2，4二氯苯基硼酸反應，所得產物用TBAF和乙二胺在THF中脫保護。最終產物通過制備型HPLC(pH4)純化，得到灰白色固態的標題化合物。LC/MS:保留時間=2.511分鐘；m/z==335，337[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&顧R(d6DMSO):S2.58(s，3H);7.62(m,2H);8.86(m,1H);8.49(s1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例424-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用實施例1步驟5的方法，使4-(2-氯-4-氰基-5-甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例37步驟4)脫保護。通過快速色譜法在硅膠上進行純化，用20-50%乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，得到固體產物。LC/MS:保留時間=2.33分鐘；m/z=356[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S2.59(s，3H);3.96(s,3H);7.54(s,1H);8.19(s,1H);8.51(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。4畫(2,3-二氫-苯并[l，4]二噁烯(dioxin)-6-基)-2-甲基硫烷基-711-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈根據方案2的路徑，采用實施例2的方法來制備標題化合物。因此，4-實施例43氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈與1，4-苯并二噁烷-6-硼酸反應，所得產物用TBAF和乙二胺在THF中脫保護。最終產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用l:l的乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到固體標題化合物。LC/MS:保留時間=2.26分鐘；m/z=325[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):52.58(s,3H);4.30-4.37(m,4H);7.03(dd,1H,J=7.1,1.3Hz);7.39(s,1H);7.40(dd,1H，J=7.1,2.4Hz)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"C"。實施例444-(二甲氧基苯萄-2-甲基硫垸基-711-吡咯射2，3-(1嘧啶-5-腈根據方案2的路徑，采用實施例2的方法來制備標題化合物。因此，4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈與3，4-二甲氧基苯基硼酸反應，所得產物用TBAF和乙二胺在THF中脫保護。最終產物通過快速色譜法在硅膠上純化，用l:l的乙酸乙酯的己垸溶液洗脫，得到固體標題化合物。LC/MS:保留時間=2.17分鐘；m/z=327[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&顧R(d6DMSO):52.60(s，3H);3.86(s，3H);3.89(s,3H);7.15(d,1H，J=8.4Hz);7.46-7.51(m，2H);8.50(s,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例454-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯萄-2-異丙基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage87</formula>在5-溴-2-甲氧基-苯甲醛(15g,69.8mmol)的CH2C12(200ml)溶液中，力口入mCPBA(19.0g,82.4mmol)，將所得混合液在室溫下攪拌48小時。然后在CH2C12(150ml)和飽和NaHC03溶液(400ml)之間分配。將有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。然后，將殘留物溶解在最少量的EtOAc中，通過Si02柱塞，再用EtOAc洗滌。將濾液真空蒸發并重新溶解在MeOH(50ml)中。加入1MLiOH水溶液(50ml)，將混合液攪拌10分鐘。然后小心加入2MHC1水溶液以酸化反應混合物至pH6-7。用EtOAc(3xl00ml)萃取，將合并的有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用己垸，然后是10。/。EtOAc/己烷洗脫，產生白色固態的標題化合物10.21g,72%。LC/MS:保留時間=2.11分鐘；m/z=201,203[M-H]。總的運行時間3.75分鐘。步驟25-溴-4-氯-2-甲氧基-苯酚在5-溴-2-甲氧基-苯酚(10.08g,49.66mmol)的MeCN(110ml)溶液中，相繼加入TFA(1.15ml,14.9mmol)和NCS(7.29g,54.63mmol)，將所得混合液在室溫下攪拌16小時。然后在EtOAc(200ml)和鹽水(400ml)之間分配。將有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上進行純化，用己垸、然后是10%EtOAc/己烷洗脫，產生白色固態的標題化合物10.5g,89%。LC/MS:保留時間=2.28分鐘；m/z=235,237[M-H]。總的運行時間3.75分鐘。步驟31-溴-2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯CTC、氮氣下，向5-溴-4-氯-2-甲氧基-苯酚(1.0g,4.21mmol)的二甲氧基甲烷(28ml)和CHC13(28ml)的溶液中一次性加入P205(5.68g,40mmol)。5分鐘后，使反應液升高至室溫。然后將反應混合液倒在冰上，用CH2Cl2(2x50ml)萃取。將合并的有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用己烷-10。/。EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物1.03g,87%。LC/MS:保留時間=2.57分鐘；未檢測到質量。總的運行時間3.75分鐘。4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷步驟4基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2，3-d]嘧啶-5-腈在合適的步驟(交叉偶聯)中采用l-溴-2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯和4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7^吡咯并[2,3-，密啶-5-腈，根據方案2的路徑，采用實施例2和22的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.84分鐘；m/z=521,523[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟54-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2，3-d]嘧啶-5-腈采用4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈，根據方案4的路徑，采用實施例12(步驟l)的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.62分鐘；m/z=553,555[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟64-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-異丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2,3-d嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>在合適的步驟(親核置換)中采用4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯射2,3-d]嘧啶-5-腈，根據方案4的路徑，采用實施例12步驟2的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.96分鐘；m々=549,551[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟74-(2-氯-5-羥基-4-甲氧基-苯基)-2-異丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage90</formula>氮氣下將4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-異丙基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(94mg,0.17mmol)、對甲苯磺酸吡啶鑰(9mg,0.034mmol)和'PrOH混合并在85QC下加熱5小時。使反應液冷卻，在EtOAc(20ml)和鹽水(20ml)之間分配。將有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用己烷-30。/。EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物85mg,99%。LC/MS:保留時間=2.86分鐘；m/z=505，507[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟84-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基-2-異丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3d嘧啶-5-腈在合適的步驟(烷基化)中采用4-(2-氯-5-羥基-4-甲氧基-苯基)-2-異丙基硫垸基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈和(2-溴-乙基)-二乙基-胺，根據方案5的路徑，采用實施例26步驟1的方法來制備標題化合物。LC艇S:保留時間=2.37分鐘；w/z=604，606[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟94-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基-2-異丙基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d嘧啶-5-腈采用4-[2-氯-5-(2-二乙基氨基-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-2-異丙基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3d]嘧啶-5-腈，和用THF配制的TBAF/乙二胺，根據實施例1步驟5的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=1.90分鐘;m/z=474,476[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。!HNMR(d6DMSO):S0.96(t,6H,J=7.1Hz);1.41(d,6H,J=6,8Hz);2.58(q，4H,J=7.1Hz),2.84(t,2H,J=6.0Hz);3.86(s,3H)，3.94(sept,1H,J=6.8Hz);4.06(t,2H,J=6.0Hz);7.18(s，IH)，7.19(s,1H);8.43(s,1H);NH未觀察到。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。實施例464-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙垸亞磺酰基)-7H-吡咯并[2，3-dl嘧啶-5-腈(TC下，在4-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯基)-2-(2-二乙基氨基-乙基硫垸基)-711-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例30)(30mg，0.067mmol)的MeCN溶液中，逐滴加入MeCN:BF3復合物(0.85ml,16%BFg在MeCN中)。然后緩慢加入mCPBA(15mg,-0.067mmol)的MeCN(0.5ml)溶液，使反應液升高至室溫。1小時后，反應混合液在EtOAc(15ml)和硫代硫酸鈉溶液(15ml)之間分配。有機相用飽和NaHC03溶液(15ml)洗滌，干燥(Na2S04)，真空蒸發。所得粗產物通過制備型HPLC純化，得到白色固態的標題化合物2mg,6%。LC/MS:保留時間=1.54分鐘；m/z=462,464[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例474-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯基)-2-甲垸亞磺酰基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈O(TC下，在4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(實施例29)(50mg，0.139mmol)的012(:12溶液中，加入mCPBA(31mg，~0.139mmol)的CH2Cl2(2.5ml)溶液，使反應液升高至室溫。然后，反應混合液在CH2C12(2x15ml)和硫代硫酸鈉溶液(15ml)之間分配。有機相用飽和NaHC03溶液(15ml)洗漆，干燥(Na2S04)，真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用CH2C12-5%MeOH/CH2C12(梯度)洗脫，產生白色固態的標題化合物27mg，52%。LC/MS:保留時間=1.81分鐘；w/z=377,379[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):52.94(s,3H);3.81(s,3H);3.88(s,3H);7.24(s,1H);7.25Cs,2H);8.77Cs，lH);13.8(brs，1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例484-(2-氯-4,5-二甲氧基-苯萄-2-甲磺酰基-7H-P比咯射2，3-d嘧啶-5-腈o在合適的步驟(氧化)中采用4-(2-氯-4，5-二甲氧基-苯基)-2-甲基硫垸基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈(實施例29)，根據方案4的路徑，采用實施例12(步驟l)的方法來制備標題化合物。LC/MS:保留時間=1.97分鐘；w/z=393,395[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。&NMR(d6DMSO):S3.49(s,3H);3.87(s,3H);3.89(s，3H);7.26(s,1H);7.27(s,2H);8.90(s,1H);14.0(brs,1H)。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。實施例49(4-{2-氯-5-[2-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-711-口比咯并[2，3-dj嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸乙酯。步驟1嘧啶-2-基硫烷基l-乙酸乙酯。采用巰基乙醇酸乙酯、氫化鈉和4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-2-甲磺酰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈(實施例45,步驟6)，根據方案2和方案4的路徑，采用實施例12(步驟2)的方法來o制備標題化合物。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用己烷、然后是30%EtOAc/己烷洗脫，產生油狀標題化合物240mg,81%。LC/MS:保留時間=2.82分鐘(270nm);m/z=593，595[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘(短位置(shortpos))。步驟2-乙酸乙酯。在合適的步驟(MOM脫保護)中采用[4-(2-氯-4-甲氧基-5-甲氧基甲氧基-苯基)-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯和吡啶對甲苯磺酸鹽，根據實施例45步驟7的方法來制備標題化合物。全水后處理(fullaqueousworkup)之后，分離乳膏狀有色泡沫形式的標題化合物，無需進一步純化即可使用，172mg，81%。LC/MS:保留時間=2.73分鐘(270nm);m/z=549，551[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘(短位置)。步驟3嘧啶-2-基硫垸基-乙酸乙酯。在化合物2(164mg，0.298mmol)的THF(5ml)溶液中加入三苯基膦(118mg，0.448mmol)和2-(3,3-二氟-吡咯垸-l-基)-乙醇卩裙薪2-~，(二嚴-厥淀萄-Z:摩游實^"舞^,驟/浙2劍備)(68mg,0.448mmo1)。反應液在室溫下攪拌15分鐘，然后冷卻至0°C。逐滴加入用THF(3ml)配制的二異丙基偶氮二羧基酯(91mg,0.448mmol)，加入后使反應液在15分鐘內升高至室溫。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，然后在EtOAc和水之間分配。分離有機層，再用另一部分EtOAc萃取水相，將合并的有機層相繼用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和鹽水溶液洗滌。將有機相干燥(Na2S04)并真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，用30%EtOAc/己垸-50%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，產生油狀標題化合物120mg，60%。LC/MS:保留時間=2.79分鐘(270nm);m/z=682，684[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘(短位置)。步驟4(4-{2-氯-5-[2-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基1-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-711-吡咯并[2,3-d嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸乙酯。采用[4-{2-氯-5-[2-(3,3-二氟-妣咯垸-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基硫烷基]-乙酸乙酯、氟化四丁銨溶液1M和用THF配制的1,2-二氨基乙烷，根據實施例1步驟5的方法來制備標題化合物。所得粗產物通過快速色譜法在Si02上純化，先用50%EtOAc/己烷，再用50%EtOAc/DCM洗脫，產生淡黃色固態的標題化合物30mg,31。/。。LC/MS:保留時間=2.12分鐘(270nm);m/z=552,554[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘(短位置)。NMR(d4MeOH):51.15(t，3H);2.15-2.27(七重峰，2H);2.82-2.91(m,4H);3.04(t，2H);3.88(s,3H);4.01(s,2H);4.08-4.16(m，4H);7.09(s，1H);7.11(s,1H);8.07(s,1H)NH未見。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。(4曙{2-氯-5-[2-(3,3-二氟-吡咯垸-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-711-吡咯并[2，3-d嘧啶-2-基硫烷基)-乙酸。在(4-{2-氯-5-[2-(3,3-二氟-吡咯烷-1-基)-乙氧基]-4-甲氧基-苯基}-5-氰基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-2-基硫垸基)-乙酸乙酯(20mg,0.0362mmol)的MeOH(1mL)溶液中加入KOH(8mg，0.145mmol)的水(lmL)溶液，將反應液回流1.5小時。反應液冷卻至室溫，真空濃縮。將殘留物溶解在最少量的水中，用2MHC1小心酸化至pH4。所得水性溶液用EtOAc(3xl0mL)萃取，將合并的萃取物用飽和鹽水溶液洗滌，干燥(Na2S04)，真空濃縮，產生白色固態的標題化合物15.5mg,82%。LC/MS:保留時間=1.77分鐘(270nm);m/z=524，526[M+H]+。總的運行實施例50時間3.75分鐘(短位置)。'HNMR(d4MeOH):S2.29-2.41(七重峰，2H);3.01-3.09(m，4H);3.23(t，2H);3.98(s，3H);4.09(s,2H);4.25(t，2H);7.19(s,1H);7.21(s，1H);8.15(s,1H);NH和OH未見。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"A"。本發明的其他化合物如表l所示。這些化合物根據方案1-5的途徑，采用實施例l-50的方法制備。<table>tableseeoriginaldocumentpage99</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage100</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage101</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage102</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage103</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage104</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage105</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage106</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage107</column></row><table>'下述FP結合分析中的活性實施例934-(l，3-二氫-異吲哚-2-羰基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage107</formula>步驟l5-氰基-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-dl嘧啶-4-羧酸<formula>formulaseeoriginaldocumentpage107</formula>將4-氯-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶隱5隱腈(100mg，0.282mmol)、三乙胺(0.083ml,0.592mmol)、MeOH(0.16ml，3.93mmol)、1，3-雙(二苯基膦基)丙烷(96mg,0.23mmol)、Pd(OAc)2(48mg,0.214mmol)和無水DMF(2ml)混合。然后將CO通入混合液持續2分鐘。將反應液在CO氣氛中7CfC下加熱4小時。反應混合液在EtOAc(2x15ml)和飽和NH4C1溶液(20ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發，得到粗產物油。通過快速色譜法在硅膠(20g)上純化，用己垸-30%EtOAc/己烷(梯度)洗脫，得到黃色油狀的不純甲酯。將其溶解在DMA(lml)中，加入2NNaOH(0.1ml,0.212mmol)。室溫下攪拌2小時之后，加水(15ml)，小心加入1NHCl水溶液使溶液酸化至pH4-5。用EtOAc(3x20ml)萃取，將有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發，產生黃色油狀標題化合物50mg。LC/MS:保留時間=2.50分鐘；m/z=365[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟24-(l，3-二氫-異吲哚-2-羰基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-腈<formula>formulaseeoriginaldocumentpage108</formula>氮氣下，將5-氰基-2-甲基硫烷基-7-(2-三甲基硅垸基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-4-羧酸(25mg,-0.05mmol)、異二氫吲哚(0.106mmol)、HBTU(40mg，0.106mmol)、DIPEA(0.018ml,0.106mmol)禾口DMA(1mL)混合并在室溫下攪拌1小時。然后使該反應液在EtOAc(2x15ml)和飽和NH4C1溶液(20ml)之間分配。將合并的有機相干燥(Na2S04)，真空蒸發。所得粗產物通過快速色譜法在SiCb上純化，用己烷-乙酸乙酯混合物(梯度)洗脫，產生黃色油狀標題化合物。LC/MS:保留時間=2.84分鐘；m/z=466[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。步驟34-(l，3二氨-異吲哚-2-羰基)-2-甲基硫烷基-7H-吡咯并2，3-d]嘧啶-5-腈采用4-(l，3-二氫-異吲哚-2-羰基)-2-甲基硫垸基-7-(2-三甲基硅烷基-乙氧基甲基)-7H-吡咯并[2，3-d]嘧啶-5-腈、氟化四丁銨溶液1M和用THF配制的1,2-二氨基乙烷，根據實施例1步驟5的方法制備標題化合物。LC/MS:保留時間=2.19分鐘；m/z=336[M+H]+。總的運行時間3.75分鐘。該化合物在下述熒光偏振分析中的活性為"B"。熒光偏振分析熒光偏振{也稱為熒光各向異性}測定溶液中發熒光基團的旋轉，較大的分子熒光發射的偏振較高。當熒光團受到偏振光激發時，其發射的光也偏振。分子大小與熒光發射的偏振程度成比例。熒光素-標記的探針-結合HSP90{全長人，全長酵母或N-末端區域HSP90}，測定各向異性{探針的旋轉:蛋白質復合物}。在試驗板中加入試驗化合物，靜置平衡，再次測定各向異性。各向異性的任何變化是因為化合物與HSP90的競爭性結合，從而釋放探針。將市售純度最高的化學物質和所有水性溶液配制在AR水中。1)Costar96-孔黑色試驗板#39152)試驗緩沖液(a)100mMTrispH7.4;(b)20mMKC1;(c)6mMMgCl2。室溫下儲存。3)BSA(牛血清白蛋白)IOmg/ml(新英格蘭生物實驗室(NewEnglandBiolabs)#B9001S)4)20mM探針的100%DMSO儲備液。室溫下黑暗中儲存。使用濃度為AR水中稀釋的200nM，4"C下儲存。試驗中的最終濃度為80nM。5)表達人全長HSP90蛋白質的大腸桿菌，純度〉95X(參見例如，Panaretou等，1998)，以50pL等分試樣在-8(TC下儲存。方法1)將100^1lx緩沖液加入孔11A和12A(=FPBLNK)2)制備試驗混合液-所有反應液在冰上保持，因為探針光敏感，所有冰桶加蓋。lxHsp90FP緩沖液BSA10mg/ml(NEB)探針200jxM人全長Hsp9010ml5.0|il4.0|il6.25終濃度lx5嗎/ml80nM200nM3)將等分試樣lOOpl試驗混合物加入所有其他孔中4)密封板，室溫下黑暗中靜置20分鐘使其平衡。化合物稀釋板-1x3稀釋系列1)在干凈的96-孔v形底試驗板中-{#VWR007/008/257}，向孔Bl-Hll加入10|il100%DMSO。2)向孔Al-All加入17.5|il100%DMSO。3)向孑LAl加入2.5plcpd。得到2.5mM(50xM諸備cpd-假定cpd20mM。4)對孔A2-A10重復上述操作。列11和12作為對照。5)將5pl從行A轉移至行B-列12除外。混合各孔。6)將5^tl從行B轉移至行C。混合各孔。7)重復至G。8)對行H不添加任何化合物-這是0行。9)這就產生了從50到0.07的1x3稀釋系列。10)在孔B12中制備20pllOOjnM的標準化合物。11)首次孵育后，在Fusiona-FP讀板儀(PB生物科學公司(PackardBioscience,Pangbourne),Berkshire，UK)上讀取試驗板。12)第一次讀取后，將2pl稀釋的化合物加入列1-10的各孔中。在列11中(提供標準曲線M又加入化合物B11-Hll。將2pl100mM標準cpd加入B12-H12各孔中(作為陽性對照》13)從零對照和陽性孔計算Z'因子。通常值為0.7-0.9。上述試驗中測試的化合物歸屬于以下三種活性范圍之一，即A=<0.5pM;B=0.5^iM-10^iM;C=〉10}iM，這些歸屬如上所述。也采用生長抑制實驗來評價試驗化合物硫代羅丹明(SRBH式驗評價細胞毒性計算50%抑制濃度(ICW>第l天1)血球計測定細胞數。2)使用8通道移液器向96-孔微量滴定板的各孔中加入160jil細胞懸浮液(3600個細胞/孔或2x1C^個細胞/ml)。3)在C02培養箱中37'C下孵育過夜。第2天4)制備藥物儲備液，用培養液配制每種藥物的系列稀釋液，得到各孔中的終濃度。5)采用多通道移液器，將4(^1藥物(5x終濃度)加入四復孔中。6)對照孔在96孔板的任一側，加入40|al培養液。7)將板在C02培養箱中孵育4天(48小時)。第6天8)將培養液倒入池中，將板緩慢浸漬到10。/。冰冷的三氯乙酸(TCA)中。在冰上靜置約30分鐘。9)通過將板浸漬到自來水浴中和傾倒，用自來水洗滌各板三次。10)在培養箱中干燥。11)將100W用1%乙酸配制的0.4%SRB加入各孔中(96孔板的最后一行(右手)除外，這是0%對照，即無藥物無染色。第一行是無藥物但進行染色的100%對照)。靜置15分鐘。12)1%乙酸洗滌四次，除去未結合的SRB染料。13)在培養箱中干燥板。14)用100pl10mM的Tris堿溶解SRB，將板置于振蕩儀上震搖5分鐘。15)用讀板儀測定540nm處的吸光度。計算四復孔的平均吸光度，以對照未處理孔的百分比表示。16)將百分吸光度值與藥物對數濃度作圖，測定GI5a，即抑制細胞生長50%時所需的試驗化合物的濃度。上述試驗中測試的化合物歸屬于以下三種活性范圍之一即A=<0.5nM;B=0.5|iM-10|iM;C=>10(iM，本發明六種化合物的結果如表2所示。表2實施例結構Gl50*<table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table>參考文獻上文引用了許多出版物以更全面地闡述和描述本發明和本發明所屬領域的狀態。下面提供了這些參考文獻的全面信息。這些參考文獻各自的全部內容結合在本文中作為參考。詳細背景和藥物開發的綜述IsaacsJS.2005，熱激蛋白90抑制劑在抗腫瘤治療中是否都被包裹？(Heat-shockprotein90inhibitorsinantineoplastictherapy:isitallwrappedup),ExpertOpin.Investig.Drugs14，569-589。MaloneyA和WorkmanP.2002，Hsp90作為一種新的癌癥治療耙點展開的古女事(Hsp90asanewtherapeutictargetforcancertherapy:thestoryunfolds),ExpertOpin.Biol.Ther.2,3-24。WhitesellL和LindquistSL.2005，癌癥的Hsp卯和侶伴分子(Hsp90禾口thechaperoningofcancer),NatureRev.Cancer5,761-772。JaninY,熱激蛋白90抑制劑，藥物化學教科書實例(HeatShockProtein90Inhibitors.ATextBookExampleofMedicinalChemistry)J.Med.Chem.2005,48,7503。AoyagiS和ArcherTK.2005，通過可逆乙酰化作用來調節侶伴蛋白Hsp90的功能(ModulatingmolecularchaperoneHsp90functionsthroughreversibleacetylation)，TrendsCellBiol.15，565-7。ArgonY禾PSimenBB.1999，Grp94，一種具有蛋白質和肽結合性質的ER侶伴蛋白(Grp94，anERchaperonewithproteinandpeptidebindingproperties),Semin.CellDev.Biol.10,495-505。BijlmakersM-JJE,MarshM.2000，Hsp90是Src-激酶p561ck的合成和后續膜結合維持所必需的，而不是維護所必需(Hsp90isessentialforthesynthesisandsubsequentmenbraneassociation,butnotthemaintenance,oftheSrc-kinasep561ck).MolecularBiologyoftheCell11'1585-1595。BucciM;RoviezzoF;CicalaC;SessaWC,CirinoG.2000，格爾德霉素，一種介導信號轉導的熱激蛋白90(Hsp90)的抑制劑，具有抗炎癥作用和與糖皮質激素受體體內反應(Geldanamycin，aninhibitorofheatshockprotein90(Hsp90)medi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