專利名稱：：亮菌乙素及其提取分離方法
技術領域：
：本發明涉及一種具有防治膽囊炎的化合物，具體地說是亮菌乙素及其提取分離方法和在制藥中的應用。
背景技術：
：亮菌(^環/〃腦W/ato6&scms)屬口蘑禾斗(Tricholomataceae)真菌，子實體常數十至百余個呈叢生長，叢徑可達20-30厘米。菌蓋呈扁半球形，菌蓋干，不粘，蜜黃色。蓋緣有不明顯條紋。菌肉白色或帶乳黃色。菌柄細圓柱形，扭曲，長7-12厘米，粗0.3-0.5厘米。因菌絲在暗處能發出淺藍色熒光，故稱為亮菌。民間用亮菌治療膽囊炎和傳染性肝炎有效。我國70年代成立了"亮菌"科研協作組對假蜜環菌進行了較深入的研究。該研究涉及到菌種的分離、鑒定和菌絲體的培養，化學成分的分離與測定等內容。從假蜜環菌培養物的乙醇提取物中分離得到兩個成分，分別命名為亮菌甲素(armillarisinA)和亮菌乙素(armillarisinB)。亮菌甲素為一香豆素化合物，化學結構為3-乙酰基-5-羥甲基-7-羥基-香豆素。該化合物已作為新藥上市，有利膽、解痙、止痛、消炎等作用。該藥可單獨用于治療非嚴重梗阻型急性膽囊感染，其特點是起效快、活性高、劑量小。而關于另一個活性化合物亮菌乙素的化學結構確定至今尚未見后續明確的報道。
發明內容本發明的目的是克服現有技術的不足，尋找到有明確防治膽囊炎作用的藥物，最終確定亮菌乙素的化學名稱及其化學結構式。本發明的另一目的在于提供一種從亮菌子實體中提取分離亮菌乙素的方法。本發明的技術方案如下亮菌乙素，其化學結構式為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>化學名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺。一種亮菌乙素的提取分離方法，該方法按以下步驟進行:(1)以亮菌子實體為原料，將干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏。(2)將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，然后用氯仿-甲醇系統洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品。本發明方法在步驟l中，干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫浸泡提取時間為2448小時。在步驟2中，將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，先用體積比為9:1石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，然后用8:2的石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，最后用體積比為95:585:15的氯仿-甲醇系統洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經洗脫液溶解后重結晶得到化合物亮菌乙素純品。本發明的優點在于首次確定了亮菌乙素的結構，亮菌乙素具有良好的開發、利用和發展前景，同時也為研究開發治療膽囊炎的藥物開辟了一個新途徑。本發明提供的亮菌乙素的提取分離方法，方法簡便可行，在分離過程中并未使用價格昂貴的分離設備，而是采甩混合有機溶劑進行柱分離，降低了提取分離方法的成本及操作難度。具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一歩說明，但本發明的內容并不局限于此。實施例1將200g干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫24小時浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏15g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質，然后用V(氯仿)V(甲醇)=95:5的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品48mg。將400g干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫32小時浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏30g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1,V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質，然后用V(氯仿)V(甲醇)=92:8的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品90mg。實施例3將800g干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫36小時浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏65g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質，然后用V(氯仿)V(甲醇)=90:10的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品185mg。實施例4將1000g干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫24小時浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏70g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質，然后用V(氯仿)V(甲醇)=88:12的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品210mg。實施例5將2000g干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫24小時浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏150g。將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用V(石油醚)V(丙酮)=9:1，V(石油醚)V(丙酮)=8:2的洗脫液洗脫除去雜質，然后用V(氯仿)V(甲醇)=85:15的洗脫液洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品430mg。實施例1-5所得化合物亮菌乙素純品利用現代波譜技術進行結構解析如下亮菌乙素，UVmax(loge)250.5(2.35),256.5(2.43),263(2.38)。從紫外光譜分析本化合物骨架為單取代苯環。紅外光譜表明有胺基(3436)、羥基(3352)、酰胺(1680)、叔醇(1127)、苯環(1580，1452)、苯環單取代(763，692)。FAB:MS測定其分子量為194，高分辨質譜HR-FAB:MSm/z(%):217.0605(M++Na)(計算值為217.0589)給出分子式為C9H1()N203。氫譜(CsD5N,400MHz)給出一組單取代苯信號8.22(2H,dd,J=1.4，7.2Hz,H-2，，6，)，7.35(2H，m,H-3，，5，)，7.25(1H,m,H-4，)。氫譜還給出兩個酰胺信號9.03(br.s)。碳譜(C5DsN,100MHz)給出9個信號(其中6個為一組苯環信號)174.2(s)，142.1(s),128.6(d，X2)，128.3(s),126.8(d,X2),80.2(s)。根據碳譜上174.2季碳信號較強及分子式的組成，推測有兩個酰胺基團。由^」HCOSY，HMQC相關關系確定苯環上6個碳氫信號的歸屬。在HMBC上可見H-2，，6，與80.2的季碳相關，同時氨基上的氫與80.2的季碳也有較弱的相關，最終確定亮菌乙素的結構為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺，碳氫信號歸屬見表l。表1.and13CNMR(G5D5N)dataofarmillarsinB<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權利要求1.亮菌乙素，其化學結構式為化學名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺。2.權利要求1所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于該方法按以下步驟進行(1)以亮菌子實體為原料，將千燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫浸泡提取，過濾并除去溶劑，得到浸膏；(2)將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，依次用石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，然后用氯仿-甲醇系統洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品。3.根據權利要求2所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于在步驟1中，干燥的亮菌子實體經粉碎后用甲醇室溫浸泡提取時間為2448小時。4.根據權利要求2或3所述的亮菌乙素的提取分離方法，其特征在于在步驟2中，將浸膏用硅膠拌樣后上硅膠柱分離，先用體積比為9:l石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，然后用8:2的石油醚-丙酮系統洗脫除去雜質，最后用體積比為95:585:15的氯仿-甲醇系統洗脫，收集洗脫液，洗脫液經溶劑揮發析出結晶，該晶體經重結晶得到化合物亮菌乙素純品。全文摘要本發明公開了亮菌乙素及其提取分離方法，亮菌乙素的化學名稱為2-羥基-2-苯基-丙二酰胺，化學結構式為右式，其提取分離方法包括原料粉碎、浸取、萃取和柱層析分離。本發明首次確定了亮菌乙素的結構，亮菌乙素具有良好的開發、利用和發展前景，同時也為研究開發治療膽囊炎的藥物開辟了一個新途徑。本發明提供的亮菌乙素的提取分離方法，方法簡便可行。文檔編號C07C235/34GK101307008SQ20071018985公開日2008年11月19日申請日期2007年10月26日優先權日2007年10月26日發明者麻兵繼申請人:河南農業大學