專利名稱：河豚魚皮活性膠原蛋白及其肽的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種來源于魚的活性膠原蛋白及其肽的制備技術，特別是用微 生物處理的技術領域。
背景技術：
研究表明，活性膠原蛋白有著多種生理功能，其在醫藥、化工、食品等領 域有著廣泛的應用，其酶解產物膠原蛋白肽也具有多種生理功效，主耍表現在 抗氧化、降血壓、降血脂、抗腫瘤等。因此人們對膠原蛋白及其肽類的研究開 發相當關注。膠原蛋白的利用首先是從陸生動物開始的，但僅是陸生動物的膠 原蛋白制品難以滿足人們的需求，岡此，近幾年，人們把目光轉向了膠原蛋白 資源更豐富的水產動物，尤其是淡水以及海水魚類。秦玉青等研究了魷魚皮膠
原蛋白提取的最佳工藝條件(中醫研究，2002， 1: 20-21)，王靜鳳等(中國專 利申請號200710013140.2)提供了一種魷魚皮膠原蛋白活性肽的制備方法，他 們都是單獨的制備膠原蛋白或膠原蛋白活性肽，沒有把二者制備的工藝結合起 來，以達到對原料更充分的利用。
河豚魚是瓊目、河豚科的水產動物，它含有劇毒物質河豚魚毒素，因此對 它的開發利用存在一定的困難，目前對于河豚魚的研究大都停留在河豚魚毒素 上，而對河豚魚其它方面的研究涉獵的不多。陳丁丁等(中國專利申請號 03152847.3)采用常規的制取明膠的方法制備河豚膠，并對其醫藥保健用途進 行了研究，但沒有進行河豚魚皮膠原蛋白活性肽的提取研究。
發明內容
本發明利用無毒的河豚魚皮，提供一種將河豚魚皮活性膠原蛋白與其活性 肽的結合起來制備的方法，達到對河豚魚皮高的利用率，保持制備的膠原蛋白 的結構及生理功能，制取高活性的河豚魚膠原蛋白肽，不僅解決了河豚魚下腳 料的環境污染問題，而且提高了產品的附加值，拓寬河豚魚的利用領域。
本發明的技術方案按如下所述實現
(一) 活性膠原蛋白的制取
1. 原料處理
將河豚魚皮剪成小塊冷凍干燥，然后用粉碎機將其粉碎。
2. 非膠原蛋白的去除
將冷凍干燥粉碎后的魚皮放入5 100倍體積0. 5 15%的氯化鈉溶液中，在 0 4。C下攪拌12h，然后在10000r/min、 0 4。C條件下離心10 30min，棄去上 清液，以除去非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。其中以粉碎魚皮放入 50 100倍體積5 15%的氯化鈉溶液中，在0 ^C下攪拌12h為好。
3. 活性膠原蛋白的提取
將除去非膠原蛋白的魚皮放入5 100倍體積0. 05 1%醋酸溶液中，在0 l(TC的低溫條件下，按1000 10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解時間8 96h，然后在5000r/mimO 5。C下離心10 30min。將上清液通過5000 100000Da 的超濾膜，收集超濾的上面部分，在-20 -8(TC下冷凍干燥。其中以除去非膠 原蛋白的魚皮放入20 100倍體積0. 5 1. 0%醋酸溶液中，在0 1(TC的低溫條 件下，按3000 10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解時間50 100h為好。 得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無酸味，略有輕微的腥味，純度可達80% 以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、食品等領域。離心所得到的沉淀 用于制備膠原蛋白活性肽。
(二) 膠原蛋白肽的制備 1.原料處理
將(一)中制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH2.0 7.0，在4000r/min條件下離心10min，棄上清，沉淀用于膠原蛋白肽的制備。 2.膠原蛋白肽的制備
在20 85°C、 pH值2. 0 10. 0的條件下，按1000 12000U/g底物的比例 向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解0. 5 10. 0h后在80 12(TC下滅酶2 5min。 在4000r/min下離心10 20min，上清液分別通過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。經噴霧干燥或冷凍干燥后 得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋白活性肽。其 中以在40 85。C、 pH值6.0 10.0的條件下，按3000-10000U/g底物的比例向 沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解1.5-10. Oh為好。
本發明以無毒河豚魚皮為原料，以酶解物隊羥自由基清除率為指標，從木 瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、風味蛋白酶中優選出最高清除 率的一種酶為木瓜蛋白酶。
本發明制得的河豚魚皮膠原蛋白活性肽有較好的抗氧化性，可用于食品、 藥品及化妝品的有效成分，發揮其清除自由基，降低衰老程度的作用。
下面對河豚魚皮膠原蛋白活性肽的體外抗氧化性作進一步的說明。
① 清除H0 自由基的能力本實驗以Fenton體系檢測了河豚魚皮膠原蛋白 太清除H0*自由基的能力，結果表明，采用木瓜蛋白酶制得的河豚魚皮膠原蛋 白肽有顯著的清除HO"自由基的能力，其中分子量為3000-5000、 1000-3000、 1000以下分子量范圍的清除率最高，IC5。值分別為0.4425mg/ml、 0. 3761mg/ml、 0. 373mg/ml，均小于對照維生素C的I"值0. 9289mg/ml。說明該肽的清除HO '自 由基的能力比維生素C要強。
② 清除DPPH'自由基的能力二苯代苦味酰自由基(DPPH*)是一種很穩定 的以氮為中心的自由基，若受試物能將其清除，則提示受試物具有降低羥自由 基，烷自由基或過氧化自由基的有效濃度和打斷脂質過氧化鏈反應的作用。實 驗結果表明，河豚魚皮膠原蛋白活性肽有較強的清除DPPH*自由基的能力。其 中分子量為3000-5000、 1000-3000、 1000以下分子量范圍的清除率最高，IC5。 值分別為3. 0650mg/ml、 2. 9609mg/ml、 2.4651mg/ml，小于維生素E的1〔50值 4.7329mg/ml，說明該肽的清除DPPH.自由基的能力比維生素E要強。
③ 實驗還表明河豚魚皮膠原蛋白肽具有一定的清除02— *自由基和還原能力。 本發明的創新性如下所述
(一)本發明的一大特點是注重提取的目的性與過程性的結合
1. 在原料處理的過程中，先把河豚魚皮剪成小塊然后冷凍干燥，這樣節省 了原料處理的時間，并且使干燥后的魚皮粉碎效果好。
2. 在制取活性膠原蛋白的過程中，整個過程都是在低溫條件下進行，避免 了高溫對膠原蛋白的破壞作用，確保所提取膠原的結構完整性和性能優良性。
3. 制備膠原蛋白活性肽所用的原料是制備活性膠原蛋白的河豚魚皮殘渣，
即將河豚魚膠原蛋白的提取與河豚魚膠原蛋白活性肽的制備結合在一起，不僅 節省了處理原料的時間和費用，而且使原料得到了充分的利用。
4.經優選，采用木瓜蛋白酶制備膠原蛋白肽，使制取的活性肽具有更高的 抗氧化活性。
(二)首次用河豚魚魚皮制取膠原蛋白活性肽 下面是本發明實施例。 實施例一
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取10g放入50ml、 0. 5%的氯化鈉溶液中，在0 。C下攪拌12h，然后在10000r/min、 (TC條件下離心10min，棄上清液，以除去 非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入50ml、 0.05%醋酸溶液中，在0。C的低溫條件下，加入100000U的胃蛋白酶，酶解時間 96h，然后在5000r/min (TC下離心30min。將上清液通過5000的超濾膜，收集 超濾的上面部分，在-2(TC下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無 酸味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化 工、食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。
2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH2.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 20°C、 pH2.0的條件下，按1000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 10h后，在80。C條件下滅酶30min，在4000r/min下離心10min，上清液分別通 過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
實施例二
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取10g放入1000ml 15%的氯化鈉溶液中，在4 。C下攪拌12h，然后在10000r/min、 4"C條件下離心30min，棄上清液，以除去
非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入
1000mlW。的醋酸溶液中，在10。C的低溫條件下，加入ioooou的胃蛋白酶，酶解 時間96h,然后在5000r/min、 5。C下離心10min。將上清液通過5000的超濾膜， 收集超濾的上面部分，在-8(TC下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白， 無酸味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、 化工、食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。
2.膠原蛋白活性肽的制備 將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至PH7.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 85°C、 pH10.0的條件下，按1000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶 解O. 5h后，在90。C條件下滅酶20min，在4000r/min下離心20min，上清液分別 通過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原 蛋白肽。經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚 皮膠原蛋白活性肽。 實施例三
活性膠原蛋白的制備
l.活性膠原蛋白的制備 將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取10g放入500ml、 5%的氯化鈉溶液中，在2'C 下攪拌12h，然后在10000r/min、 2。C條件下離心20min，棄上清液，以除去非 膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入500ml、 0. 5%醋酸溶液中，在4。C的低溫條件下，加入60000U的胃蛋白酶，酶解時間48h， 然后在5000r/min 3。C下離心20min。將上清液通過10000的超濾膜，收集超濾 的上面部分，在-45'C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無酸味， 略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、食 品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。 2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至PH3.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在
65°C、 pH7.0的條件下，按6000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 2h后，在100。C條件下滅酶5min，在4000r/min下離心10min，上清液分別通過 10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
實施例四
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取20g放入1400ml、 10%的氯化鈉溶液中，在2 。C下攪拌12h，然后在10000r/min、 4。C條件下離心20min，棄上清液，以除去 非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入 1000ml、 0.5%醋酸溶液中，在4。C的低溫條件下，加入80000U的胃蛋白酶，酶 解時間72h，然后在5000r/min 2。C下離心30min。將上清液通過30000的超濾膜， 收集超濾的上面部分，在-65。C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白， 無酸味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、 化工、食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。
2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH4.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 70°C、 pH6.0的條件下，按7000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 5h后，在IO(TC條件下滅酶2min，在4000r/min下離心25min，上清液分別通過 10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
實施例五
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取20g放入800ml 8%的氯化鈉溶液中，在TC 下攪拌12h，然后在10000r/min、 4。C條件下離心20min，棄上清液，以除去非
膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入1200mll% 醋酸溶液中，在4"C的低溫條件下，加入160000U的胃蛋白酶，酶解時間64h， 然后在5000r/min、 3'C下離心20min。將上清液通過50000的超濾膜，收集超 濾的上面部分，在-45'C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無酸 味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、 食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。 2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH5.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 55°C、 pH7.5的條件下，按6000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 1. 5h后，在80。C條件下滅酶25min，在4000r/min下離心15min，上清液分別通 過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
實施例六
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取50g放入1000ml、 12%的氯化鈉溶液中，在2 。C下攪拌12h，然后在10000r/min、 2。C條件下離心30min，棄上清液，以除去 非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入 1500ml、 0.2%醋酸溶液中，在4i:的低溫條件下，加入150000U的胃蛋白酶，酶 解時間90h，然后在5000r/min 3"C下離心10min。將上清液通過10000的超濾膜， 收集超濾的上面部分，在-75"C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白， 無酸味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、 化工、食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。
2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH6.0，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 75°C、 p朋.O的條件下，按10000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶
解0. 5h后，在80。C條件下滅酶30min，在4000r/min下離心10min，上清液分別 通過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原 蛋白肽。經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚 皮膠原蛋白活性肽。
實施例七
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取10g放入600ml、 5%的氯化鈉溶液中，在4'C 下攪拌12h，然后在10000r/min、 (TC條件下離心20min，棄上清液，以除去非 膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入700ml、 0. 3%醋酸溶液中，在8X:的低溫條件下，加入90000U的胃蛋白酶，酶解時間24h， 然后在5000r/min 3。C下離心20min。將上清液通過100000的超濾膜，收集超 濾的上面部分，在-45。C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無酸 味，略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、 食品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。
2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH6.5，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 45°C、 pH8.0的條件下，按3000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 10h后，在90。C條件下滅酶20min，在4000r/min下離心10min，上清液分別通 過10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
實施例八
l.活性膠原蛋白的制備
將冷凍干燥的魚皮粉碎后稱取10g放入900ml 5%的氯化鈉溶液中，在2°C 下攪拌12h，然后在10000r/min2'C條件下離心20min，棄上清液，以除去非膠 原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白。將除去非膠原蛋白的魚皮放入500ml、 0. 5%
醋酸溶液中，在4°。的低溫條件下，加入80000U的胃蛋白酶，酶解時間88h，然 后在5000r/min 4。C下離心20min。將上清液通過10000的超濾膜，收集超濾的 上面部分，在-45"C下冷凍干燥。得到的河豚魚皮膠原蛋白色澤潔白，無酸味， 略有輕微的腥味，純度可達80%以上。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、食 品等領域。離心所得到的沉淀用于制備膠原蛋白活性肽。 2.膠原蛋白活性肽的制備
將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀用去離子水洗至pH5.5，在 4000r/min條件下離心10min，棄上清液，沉淀用于膠原蛋白活性肽的制備。在 60°C、 pH7.0的條件下，按5000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解 3h后，在8(TC條件下滅酶30min，在4000r/min下離心10min，上清液分別通過 10000Da、 5000Da、 3000Da、 1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000 10000、 3000 5000、 1000 3000、 1000以下等不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽。 經噴霧干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋 白活性肽。
權利要求
1.一種膠原蛋白、及其肽的制備方法，其特征在于河豚魚皮的活性膠原蛋白及其肽的制備方法，工藝操作步驟為一.活性膠原蛋白的制取(1)原料處理將河豚魚皮剪成小塊冷凍干燥，然后用粉碎機粉碎；(2)非膠原蛋白的去除將冷凍干燥粉碎后的魚皮放入5-100倍體積0.5～15％的氯化鈉溶液中，在0～4℃下攪拌12h，然后在10000r/min、0～4℃下離心10～30min，棄上清液，以除去非膠原蛋白，沉淀用于提取活性膠原蛋白；(3)活性膠原蛋白的提取將除去非膠原蛋白的魚皮放入5～100倍體積的0.05～1％醋酸溶液中，在0～10℃下，按1000～10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解8～96h，在5000r/min、0～5℃下離心10～30min，將上清液通過5000～100000Da的超濾膜，收集超濾的上面部分，在-20～-80℃下冷凍干燥，得到的河豚魚皮膠原蛋白；色澤潔白，無酸味，略有輕微的腥味，純度可達80％以上；二.膠原蛋白肽的制備(1).原料處理將(一)中制備活性膠原蛋白離心后所得到的沉淀用去離子水洗至pH2.0～7.0，4000r/min離心10min，沉淀用于膠原蛋白肽的制備；(2).膠原蛋白肽的制取在20～85℃、pH2.0～10.0下，按1000～12000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解0.5～10h，后80～120℃下滅酶2～5min，在4000r/min下離心10～20min，上清液分別通過10000Da、5000Da、3000Da、1000Da的超濾膜，得到10000以上、5000～10000、3000～5000、1000～3000、1000以下不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽，經噴霧干燥或冷凍干燥后得到淡黃色或白色粉狀、復溶性好、略帶腥味的河豚魚皮膠原蛋白活性肽。
2. 根據權利要求1所述膠原蛋白、及其肽的制備方法，其特征在于活性膠 原蛋白的制取的(2)非膠原蛋白的去除的步驟中，粉碎魚皮放入50 100倍體積 5 15%的氯化鈉溶液中，在0 4"C下攪拌12h。
3. 根據權利要求l所述膠原蛋白、及其肽的制備方法，其特征在于活性膠 原蛋白的制取的(3)活性膠原蛋白的提取步驟中，除去非膠原蛋白的魚皮放入 20 100倍體積0.5 1.0%醋酸溶液中，在0 10。C的低溫條件下，按3000 10000U/g底物的比例加入胃蛋白酶，酶解時間50 100h。
4.根據權利要求l所述膠原蛋白、及其肽的制備方法，其特征在于膠原蛋 白肽的制備的(2).膠原蛋白肽的制取步驟中，在40 85。C、 pH值6.0 10.0的 條件下，按3000 10000U/g底物的比例向沉淀中加入木瓜蛋白酶，酶解1.5 10. Oh。
全文摘要
河豚魚皮的活性膠原蛋白及其肽的制備方法，是將河豚魚皮剪成小塊冷凍干燥粉碎，放入氯化鈉溶液中攪拌12h，然后離心，棄上清液除去非膠原蛋白，將沉淀放入醋酸溶液中，在0～10℃下，加入胃蛋白酶，酶解，離心，上清液通過的超濾膜，上面部分冷凍干燥得膠原蛋白。將制備活性膠原蛋白后離心所剩下的沉淀洗至pH2.0～7.0，向沉淀中加入木瓜蛋白酶酶解，滅酶后離心上清液分別通過超濾膜，得到不同分子量范圍的河豚魚皮膠原蛋白肽，經冷凍干燥后得到淡黃色或白色粉狀的河豚魚皮膠原蛋白活性肽。所制得的膠原蛋白可用于醫藥、化工、食品等領域，河豚魚皮膠原蛋白活性肽有較好的抗氧化性，發揮其清除自由基，降低衰老程度的作用。
文檔編號C07K14/78GK101182357SQ20071015852
公開日2008年5月21日 申請日期2007年11月23日 優先權日2007年11月23日
發明者任俊鳳, 呂永軍, 周大勇, 瑜 張, 朱蓓薇, 李冬梅, 董秀萍, 高全義 申請人:大連工業大學;大連富谷水產有限公司