專利名稱：：一種口腔藥物及口腔護理用品的制作方法
技術領域：
：本發明屬于藥物
技術領域：
，涉及一種以化合物桑根素(morusin)為有效成分制成的治療或預防口腔疾病的藥物或口腔護理用品，其制備方法和其在制備治療或預防口腔疾病的藥物或口腔護理用品中的應用。2.技術背景人類常見口腔疾病有齲病和牙周病。齲病是發生在牙齒硬組織的一種慢性細菌性疾病，表現為牙齒硬組織出現色，形，質的變化。牙周病的臨床癥狀是牙齦出血，溢膿，牙齒松動，牙槽骨吸收以及牙周袋形成。齲齒和牙周病是造成成年人失牙的主要原因之一。目前認為，齲病和牙周病的病因都是口腔正常菌群在口腔生態失調情況下所致的內源性感染的疾病，即始動因子為菌斑微生物，而且是由特異性病原菌所致。細菌是齲病發生的必要條件，變形鏈球菌(5^e/tococa^ww/ara)、內氏放線菌(v4c""o附;^es"a"/wm//)、粘放線菌04"/wowycesv/sccmw)等可使碳水化合物分解產酸，導致牙齒無機質脫礦形成齲洞。變形鏈球菌和血鏈球菌(S&印tococcM幼"gw7^)還是牙菌斑形成的先鋒菌，同內氏放線菌、粘放線菌、牙齦卟啉單胞菌(尸or;/^ramo"asgZ"gzVa/的、伴放線放線桿菌(^c""o6acv'〃Mfl"fwo附^c"e/ewaw/to"51)、具禾亥梭桿菌(尸wso6a"en'wwwwc/ea加w)共同形成牙菌珍王。牙菌珍王內的細菌所產生的毒素及其他有害物質可引起宿主的炎癥反應，使血管滲透性增高、炎癥擴散，破壞牙齦、牙骨質和牙槽骨，引起牙齦炎和牙周病。因此抑制口腔致病菌是預防齲齒、牙齦炎和牙周病的重要手段，但目前治療齲病和牙周病的藥物非常有限。一方面，用化學藥物消滅或抑制菌斑細菌，但長期使用廣譜抑菌藥物會產生耐藥菌株及其它副作用。比如，近年來國內外使用的化學控菌斑劑洗必泰(Chlorhexidine)，是一種具有明顯抑菌作用的二胍己垸(diguanido-hexane)，但長期使用含有0.12-0.20%洗必泰的含漱劑，雖不會形成耐藥菌株或對人體造成損害，但它會使牙齒著色，舌背也可能有棕色舌苔。另一方面，利用中醫辨證療法，如含漱金銀花等清熱解毒中藥，也有外敷法，如敷冰硼散，或細辛于患處。這些方法使用起來有很多不方便之處，而且欠缺確鑿的證據證明其療效。然而牙齦炎若不及時治療或治療不當，其炎癥可能會擴散至根尖周引起尖周組織炎癥，進而波及牙槽骨或臨近組織。基于以上原因，可以看出，從天然植物里研究開發治療常見口腔疾病如齲病和牙周病的新藥，以及開發能夠抑制口腔主要致病菌和牙菌斑，牙齦炎，抑制口臭的口腔藥物或口腔護理用品是非常有意義的。天然植物抑制口腔致病菌的研究具有鮮明的地域特性，根據全球各地不同的地理環境和國情,不同的國家和地區發現了一些具有防齲作用的一些植物，如非洲和中東的榆綠木、斑雞菊、藤黃;拉美國家的血根草、可可果;東南亞的檳榔;澳洲的桉葉。中國和R本則多集中在中草藥的研究。迄今為止，現有技術中還未有化合物桑根素作為有效成分制成的口腔用藥或口腔護理用品的報道。3.
發明內容本發明的目的在于提供一種桑根素化合物為有效成分制成的治療或預防口腔疾病的藥物或口腔護理用品，其制備方法和其在制備治療或預防口腔疾病的藥物或口腔護理用品中的應用。為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案一種口腔用品，含有桑根素化合物及藥用輔料或護理輔料。所述的口腔用品包括但不限于口腔藥物、口腔護理用品。所述的輔料，包括但不限于可藥物載體和/或賦形劑、口腔護理用品常規輔助劑。本發明同時提供了制備上述口腔用品的方法，取桑白皮，用90%乙醇回流提取三次，每次3小時，回收至干，得浸膏，將該浸膏溶解混懸，用乙酸乙酯萃取3次，回收至干得乙酸乙酯浸膏，所得浸膏用丙酮溶解，吸附硅膠上，室溫揮發致干，經硅膠柱層析，用V/V，8:2石油醚丙酮洗脫，每50升為一流分，共計得27個流分Fr.l-Fr.27,流分Fr.4經硅膠柱層析，8:2石油醚丙酮洗脫，再經60:40的乙醇水聚酰胺柱層析，95:5的氯仿丙酮硅膠柱層析得到化合物桑根素，然后加入口腔用藥常規輔劑或口腔護理用品常規輔助料制成。本發明的化合物桑根素可用于制備治療或預防口腔疾病的藥物中，也可用于制備口腔護理用品。本發明首次發現化合物桑根素對口腔致病菌具有一定的抑制作用，可作為有效成分應用在抗齲齒，抑制口臭的口腔藥物或口腔護理用品中，也可用于抗牙齦炎、抗牙菌斑、口腔去敏感、抗牙垢、牙齒增白的口腔藥物或口腔護理用品中。以下結合實施例具體說明本發明。實施例1.桑根素(morusin)的制備結構確定桑白皮50kg用90%乙醇500kg回流提取三次，每次3小時，回收至干，得10.5kg浸膏。將該浸膏用8kg熱水及90%的乙醇4kg溶解混懸，用50kg乙酸乙酯萃取3次，回收至干得4kg乙酸乙酯浸膏。所得浸膏用丙酮溶解，吸附與6kg硅膠上，室溫揮發致干，經硅膠柱層析(30目，30kg)，用石油醚丙酮(V/V，8:2)洗脫，每50升為一流分，共計得27個流分Fr.l-Fr.27。流分Fr.4經硅膠柱層析，石油醚丙酮(8:2)洗脫得主要含化合物l(桑根素)的流分10g，經聚酰胺柱層析(乙醇水，60:40)、硅膠柱層析(氯仿丙酮，95:5)得到化合物桑根素(5g)。經此方法制得的桑根素可以具有很高的濃度。在某些實施例中，經此方法制得的桑根素的濃度高于98%。在某些其它實施例中，經此方法制得的桑根素的濃度為50%-99.9%。在另一些實施例中，經此方法制得的桑根素的濃度為75%-99.9%。在上述實施例中，使用了桑白皮來提取桑根素化合物。本領域的普通技術人員可以認識到，其他植物也可能是適用的，例如與桑白皮同屬或同科的植物。質譜(MS)用AutoSPEC3000型質譜儀測定。核磁共振譜。HNMR禾B13CNMR)用BrukerDRX-500超導核磁共振儀測定，TMS作內標。柱層析材料和薄層層析用硅膠為青島美高集團有限公司的產品。桑根素結構式性狀淡黃色粉末mp.168-169。C分子式C25H2406分子量420iH陽NMR(MeOD，400MHz)5:7.20(1H，s，H-6')，7.09(1H，s，H-3')，6.96(1H，d，J=8.0Hz，H-5')，6.73(1H，d，J=9.6Hz，H-14),6.49(1H，s，H誦6)，5.56(1H，t，J=6.4Hz，H-IO)，5.50(1H，d，J=10.0Hz，H-15),3.56(2H，dd，J=6.8，1.0Hz，H-9)，1.64(3H，s，H-12),1.62(3H，s，H-13),L40(6H，s，H-17，18)。13C-NMR(MeOD,畫MHz)5:162.3(s，C-2)，121.2(s，C-3)，182.7(s，C-4)，105.3(s，C-4a)，162.3(s，C-5)，99.4(d，C-6)，158.2(s，C-7)，100.9(s，C-8)，152.6(s，C-8a)，24.6(t，C-9)，122.4(d，C-IO)，132.0(s，C陽ll)，25.6(q，C-12),17.6(q，C-13),115.1(d，C-14),126.8(d，C-15)，77.9(s，C-16),27.8(s，C-17)，27.8(s，C-18),112.4(s，C-l')，158.2(s，C-2')，104.1(d，C-3')，159.1(s，C-4')，107.8(d，C-5')，131.7(s，C陽6')。根據本發明所披露的化合物結構式，本領域的技術人員可以無須經過創造性勞動即可輕易地通過化學方法合成所述化合物，以替代本發明中所使用的提取物或純化物。故而，本領域的技術人員應當了解，除了本發明實施例所列出的從天然甘草中進行提取或純化外，本發明還可以通過化學合成方法來實現。其它對本發明所披露的化合物的顯而易見的修改也被包括在本發明的保護范圍之內。實施例2.桑根素(morusin)對口腔主要致病菌的抑制實驗A.菌種的培養表1:相關的口腔致病菌<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從日常儲存菌種的胰酶解大豆蛋白胨瓊脂血平板(簡稱TSA5B)中挑取單菌落到相應肉湯培養基中，于37.0。C士1.0。C，95%空氣，5。/。C02微需氧環境中培養(P.g和F.n需厭氧培養)，其中s.m，S.sa培養18-24h，其余三種培養40-48h。然后用相應肉湯培養基調節菌懸液的混濁度到0.5#McFarlandstandard,相當于1.0X108CFU/mL。B.實驗方法肉湯稀釋法(Brothdilution)在肉湯中將抗菌藥物進行一系列二倍稀釋后再定量接種檢測菌，37。C孵育18-24h后觀察，抑制檢測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度為測定藥物對檢測菌的最低抑菌濃度(MIC)。操作步驟為a.抗菌藥物原液的配制配制1%各種抗菌藥物原液，溶劑為100%純乙醇。原液配制好后過濾除菌，小量分裝備用。b.測定濃度的范圍本實驗選擇250ppm作為抗菌藥物測定濃度的上限。C.測定方法微量稀釋法。先于96孔板上的每個孔加10(^1肉湯培養基，再在第一列的每個孔加10(^1經10倍稀釋過的無菌抗菌藥液U000mg/1)，然后用多道微量移液器在第一列的每個孔上反復吹打7-8次，使藥品與TSB充分混合后移取100nl樣品到第二列，同樣反復吹打7-8次后再移取100pl樣品到第三列，以此類推到最后一列，這樣藥品的濃度就被二倍梯度稀釋了，從第一列的500mg/l到最后一列(第12列)的0.24mg/1。待測菌和標準菌準備如上。用肉湯培養基將菌液稀釋，達到含菌量約l()SCFU/ml。然后每孔接種100nl。這樣每排抗菌藥物的最終稀釋濃度為250，125，62.5...0.12mg/L，最終接種菌量約5xl07CFU/ml或每孔5"06個菌；將96孔板置微型振蕩器上振蕩lmin，使各孔內溶液混勻，微孔板加蓋并用膠紙密封以減少孵育過程中的蒸發并置濕盒內，于37.0。C士1.0。C，95%空氣，5%。02微需氧(或90°/(^2，5%H2，5%C02厭氧)環境中培養18-24小時。將96孔板置于酶標儀下，對照檢測菌和標準菌的生長特性，以無菌生長孔所含最低抗菌藥物濃度即為MIC。C.實驗結果(見表2)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>實施例3.桑根素(morusin)的抗炎試驗A.實驗采用KB細胞(人口腔上皮癌細胞)實驗時對接種于培養板中的KB細胞予以化合物桑根素處理或不予化合物桑根素處理(對照)，處理結束后，收集培養液上清并保存于-80。C冰箱。上清中的PGE2用酶聯免疫吸附法檢測，上清中的GM-CSF、TNF-a、IL-lp和IL-6的檢測則使用Luminex多功能液相芯片分析系統[結果見表3]。B.PGE2的酶聯免疫吸附法檢測按照標準的酶聯免疫吸附法進行。結果(數值越小抗炎活性越好)化合物桑根素對口腔KB細胞生長的半數抑制濃度為0.02ppm，和陽性對照品玉潔純相當。結果表明化合物桑根素均具有顯著的抗炎活性。C.GM-CSF、TNF-a、IL-l和IL-6的Luminex多功能液相芯片分析封閉液封閉96孔板30min。熒光微球稀釋后加入96孔板。加入標準品和待測樣品，4°C過夜。第二天,棄去上清，每孔加入50nlGM-CSF、TNF-a、IL-lp和IL-6抗體。清洗4次后，96孔板放入搖床室溫避光1小時，清洗4次，加入鏈親和素標記的PE室溫避光15分鐘。清洗4次，微球懸于清洗緩沖液中，96孔板立刻置于Luminex(LuminexCorporation,Austin,Tx.)上分析。D.結果化合物桑根素具有很強的抗炎能力。具體結果見表3。表3:化合物桑根素的抗炎作用(此數值越大表明抗炎能力越強)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(陽性對照)從上述實驗結果可以證實本發明的化合物桑根素對口腔致病菌(粘性放線菌，伴生放線線桿菌，變鏈球菌，牙齦卟啉單胞菌)具有很好的抑制作用，對口腔KB細胞具有顯著的抗炎活性，以及對炎癥因子也有明顯的抑制作用。實施例4.桑根素(morusin)的應用本發明化合物桑根素用作藥物時，可以直接使用，也可以作為有效成分應用于口腔藥物或口腔護理產品中，如牙膏、漱口水，糊劑，速溶片或薄膜，香口膠等。可以以有效量與其它成分如保濕劑，摩擦劑，表面活性劑，藥學上可接受的載體和/或添加劑等混合制得口腔藥物或口腔衛生產品，所制得的口腔藥物或口腔衛生產品包括但不限于牙膏，漱口水，口香糖，口腔糊劑等。本發明所指的有效量是指足以產生一正面效果的劑量。該有效量可因具體應用方式的改變而改變。并且，對于某一具體應用方式，可以有多個有效劑量或者有效劑量范圍。在某些實施例中，桑根素可以以0.0005-20%(質量百分比)的添加量與其它成分相混合。在某些其它實施例中，桑根素的含量為0.001-10%(質量百分比)。在某些優選實施例中，桑根素的含量為0.025-5%(質量百分比)。在另一些實施例中，桑根素的含量為0.05-0.5%(質量百分比)。優選地，在片劑中，桑根素的含量為4%(質量百分比)；在鼻噴霧劑中，桑根素的含量為4%(質量百分比)；在滴丸中，桑根素的含量為10%(質量百分比)；在牙膏中，桑根素的含量為0.5%(質量百分比)；在漱口水中，桑根素的含量為0.5%(質量百分比)；在口腔糊劑中，桑根素的含量為0.01%(質量百分比)。其它有效劑量也可應用于本發明中。本發明所涉及的配方組成成分也可能含有陽離子表面活性劑和/或非離子表面活性劑。陽離子表面活性劑包括，但不限于此，鯨蠟基三甲基氯化銨，二異丁苯氧乙氧乙基二甲苯芐基溴化銨。非離子表面活性劑包括泊洛沙姆，多乙氧基醚，和乙氧基脂肪酸等，泊洛沙姆是聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物，具有工業效用。如BASF生產的商品名為Pluronic,多乙氧基醚包括聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯(典型的聚多乙氧基醇單酯)，是由ICL公司生產的商品名是Tween,其他的非離子表面活性劑包括聚氧乙烯垸基酚，聚氧乙烯醇類，脂肪酸，聚氧乙烯酯類，聚氧乙烯垸基胺甘油酯，聚甘油酯，丁糖醇脂，戊糖醇酯，己糖醇酯，無水三糖醇酯和聚氧垸基胺多烴酯。一般表面活性劑在配方中的質量含量為0.001%到3.0%。配方中可能含有二價金屬離子，如鋅，銅，硒，鈣或鎂。它們會以可溶性無機鹽的形式如氯化鋅或有機/無機化合物的形式。二價金屬離子在混合物中的加入量將是0.001%到3.0%。配方中可能含有低聚糖，低聚糖將會以水溶的狀態，有可能轉化成可溶性鹽，如果加入的話最少加入0.01%。本發明產品可包含各種常用的口腔藥物或口腔衛生產品，如漱口水，口腔噴霧，牙膏，褚哩，口腔粘膜貼片，口腔膜劑，速溶片和膜，香口膠，等用于哺乳類尤其人和動物的抑制菌斑，預防齲齒，牙周病的產品。由于方法不同可能使用其他添加物漱口水可能含有酸性物質，漱口水還可能含有脫敏物質如硝酸鉀，牙膏可能含有磨擦劑如碳酸鈉，磷酸鈣，氧化鋁，二氧化硅；增溶劑如PEG，甘油，乙醇；其他矯味劑如木糖醇，增稠劑如卡拉膠，表面活性劑如SLS等都可能使用。在牙膏或口腔粘膜貼片中都可能用到蠟，如蜂蠟；增稠劑，成膜劑也可能加入如卡拉膠，CMC，HPMC，黃原膠等。香精可能會使用如薄荷，留蘭香，桉葉油，薄荷腦，香芹酮，冬青，丁香，肉桂，檸檬，西柚，橙子及一些由酵母和蛋白分解消化出的香精。在片劑和膜劑中，惰性賦形劑可能用于產品的成形。主要包括一些著色劑，矯味劑等輔料以改善口味和外觀。本發明用于片劑所涉及的配方組成成分可能包含填充劑，粘合劑，潤滑劑，崩解劑。填充劑包括，但不限于此，淀粉，乳糖，微晶纖維素等。粘合劑包括，但不限于此，淀粉漿，纖維素衍生物，聚維酮，明膠等。潤滑劑包括，但不限于此，硬脂酸鎂，微粉硅膠，滑石粉，聚乙二醇類等。崩解劑包括，但不限于此，羧甲基淀粉鈉，低取代羥丙基纖維素，交聯聚維酮，交聯羧甲基纖維素鈉等。這些成分都是中國藥典及英、美等許多國家藥典收載的藥用輔料。本發明在糊劑中可能用到聚乙二醇等基質。可能以固態及液態的聚乙二醇混合使用以調節稠度。也可能加入硬脂酸鎂等成分，以調節稠度。實施例5.具體應用實施例下面的試驗例和實施例可以使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。桑根素牙膏配方l:<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>桑根素牙膏配方4:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>桑根素牙膏配方5:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>桑根素牙膏配方6:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>桑根素牙膏配方7:配<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>桑根素牙膏配方8:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>桑根素片劑-片劑活性成分桑根素10mg、乳糖180mg、淀粉55mg、硬脂酸鎂5mg。制備方法將活性成分、乳糖和淀粉混合，用水均勻濕潤，把濕潤后的混合物過篩并干燥，再過篩，加入硬脂酸鎂，然后將混合物壓片，每片重250mg，活性成分含量為10mg。桑根素鼻噴霧劑桑根素80mg氯化鈉8mgEDTA1mg磷酸鈉緩沖液(pH6.5)10mg多乙氧基醚10mg重蒸餾水2ml制備方法攪拌下于適當體積的重蒸餾水中每次加入一種成分，直至完全深解，然后再加入另一種成分。加水至2ml后，將該溶液在無菌過濾器上過濾，裝入瓶中并按照適當的劑量分隔。桑根素滴丸桑根素lg聚乙二醇60009g制法桑根素與聚乙二醇6000熔融液的制備按上述處方量稱取桑根素加入適量無水乙醇，微熱溶解后，加入處方量的聚乙二醇熔融液中(60'C水浴保溫)，攪拌混合均勻，直至乙醇揮盡為止，靜置于6(TC水浴中保溫30分鐘，待氣泡除盡，然后將除盡氣泡的上述混勻熔融液轉入貯液筒內，在保溫80-85r的條件下，控制滴速，一滴滴地滴入冷凝液中，等冷凝完全，傾去冷凝液，收集滴丸，瀝凈和用濾紙除去丸上的冷凝液，放置硅膠干燥器中或自然干燥即可。以上對本發明的詳細描述中闡述了大量具體的細節，其目的是為了對本發明作出清楚完整的解釋，以便公眾閱讀理解。但是，本領域的技術人員將清楚的是，在某些情況下，沒有這些具體的細節，或對這些具體的細節進行非本質的變更或替換，也可以實現本發明。這些變體方案都應被認為落入本發明的精神和范圍內。本發明的范圍應由所附權利要求書的平實語言來決定，而不應限于說明書中所提供的具體實施例。權利要求1、一種制備桑根素化合物的方法，包含將植物用有機溶劑提取以及將提取物用柱層析分離。2、如權利要求l所述的方法，所述植物是桑白皮。3、一種用于治療或預防口腔疾病的藥物組合物，其中含有治療或預防有效量的桑根素化合物和藥學上可接受的載體。4、一種口腔護理的用品，其中含有口腔護理有效量的桑根素化合物和口腔護理可接受的輔劑。5、一種如權利要求3或4所示的用于治療或預防口腔疾病的藥物組合物或用于口腔護理的用品，其中桑根素化合物的含量為0.0005-20%(質量百分比)。6、一種如權利要求5所示的用于治療或預防口腔疾病的藥物組合物或用于口腔護理的用品，其中桑根素化合物的含量為0.001-10%(質量百分比)。7、一種如權利要求5所示的用于治療或預防口腔疾病的藥物組合物或用于口腔護理的用品，其中桑根素化合物的含量為0.025-5%(質量百分比)。8、一種如權利要求6所示的用于治療或預防口腔疾病的藥物組合物或用于口腔護理的用品，其中桑根素化合物的含量為0.05-0.5%(質量百分比)。9、桑根素化合物在制備治療或預防口腔疾病的藥物中的應用。10、桑根素化合物在制備口腔護理用品中的應用。全文摘要本發明披露了一種桑根素(morusin)化合物，其制備方法，以及其在制備治療或預防口腔疾病的藥物中、和在制備口腔護理用品中的應用。文檔編號C07D493/00GK101148451SQ20071010699公開日2008年3月26日申請日期2007年5月16日優先權日2007年5月16日發明者瑤施申請人:好維股份有限公司