專利名稱：酸棗仁皂苷a和b的分離制備方法
技術領域：
本發明涉及一種采用高速逆流色譜法從酸棗仁粗提物中分離制備出高純度單體酸棗仁皂苷A和B的制備分離方法。
背景技術：
酸棗仁為鼠李科植物酸棗ZiziphusjujubaMill.Var.spinosa(Bunge)Hu exH.F.chou的干燥成熟種子。酸棗仁為中國藥典收載的首選養心安神中藥，有補肝、寧心、斂汗、生津之功效，主要用于治療虛煩不眠、驚悸多夢、體虛多汗和津傷口渴。《神農本草經》列為上品，《本草綱目》列為本部類，《中藥學》教科書中列為養心安神藥類。臨床用藥及藥理實驗均證明酸棗仁具有顯著的鎮靜催眠作用。隨著社會的發展，人們工作生活的壓力越來越大，隨之產生的焦慮、失眠等癥狀也不斷地困擾著人們的正常生活，對于養心安神藥的研究和開發就日益迫切。其中酸棗仁皂苷A及B為其鎮靜催眠的有效成分之一。
現有文獻報道采用柱層析及高效液相色譜的方法分離，經反相硅膠柱，碳十八柱，及Sephadex LH-20柱從正丁醇萃取后粗品分離獲得酸棗仁皂苷A，或者經反復多次硅膠柱分離獲得酸棗仁皂苷A、B，工藝繁瑣，成本高，回收率低。逆流色譜分離制備方法可以達到高純度，成本低，回收率高，優于傳統的柱層析及高效液相色譜分離方法在兩方面，一方面沒有固態支持體無不可逆吸附損失，另一方面粗品可以直接上柱。由于高速逆流色譜(High-speed Countercurrent Chromatography，HSCCC)是近些年發展起來的一種連續的無需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，它避免了固態支持體或載體帶來的各種問題---樣品易被吸附、損耗和變性，使用其它液相色譜法進行制備量分離時，其分配效率會明顯降低，溶劑消耗量大，HSCCC保證較高峰型分辨度，分離量大、樣品無損失、回收率高、分離環境緩和，節約溶劑。逆流色譜儀能直接進大量粗提樣品或合成混合物，分離結果能達到相當高的純度，甚至能直接接質譜儀等儀器，已廣泛應用于生物、醫藥、環保等領域化學物質的制備分離和純化。
發明內容
本發明的目的是以正丁醇萃取的酸棗仁粗品為原料或采用大孔樹脂從含量僅為0.3％的酸棗仁皂苷A和B提高到50％左右為原料，然后高速逆流色譜的方法得到純度95％以上的酸棗仁皂苷A和B。本發明的方案是正丁醇萃取的酸棗仁粗品原料或該粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分通過逆流色譜法分離制備高純度酸棗仁皂苷A和B選擇溶劑的兩相組合，可選用的兩相體系為含水溶劑體系。含水溶劑體系由三個組分構成，A組分可選自石油醚，正己烷、正戊烷等正構烷烴或乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯類。B組分可選乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮。C組分為水。
采用含水溶劑體系，以上相為固定相，下相為流動相，在保證上下相體積比小于1前提下，根據溶解度常數，在不破壞體系平衡的情況下，調節A∶B∶C三組分的體積比10-5∶1∶10-5，經過一次逆流分離得到酸棗仁皂苷A和B。
實驗條件適合室溫15-30℃，室溫對分離效率影響不大。在上述溫度范圍內，室溫較高時，出峰時間略有提前，分離效率變化不大，對酸棗仁皂苷A和B峰形無影響。
首先按體積比將上述溶劑體系配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開。采用分析型或半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，2mL或20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40或240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。將酸棗仁皂苷粗提物或通過大孔樹脂乙醇梯度洗脫獲得(70％乙醇∶水)洗脫組分溶解于流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為500-1000rpm(半制備型儀器轉速)1500-2000rpm(分析型儀器轉速)，以0.5-3.0mL/min的流速將流動相泵入柱內，待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，得到固體。
用本方法提取的酸棗仁皂苷A和B其純度可達到95％以上。適用于用各種型號的逆流色譜儀分離制備酸棗仁皂苷A和B單體，能直接進大量粗提樣品或合成混合物，分離結果能達到相當高的純度。
具體實施例方式
實施例1
選取正己烷-乙醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離純化酸棗仁皂苷提取物(正丁醇萃取的酸棗仁粗品原料或該粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分)，首先按8∶1∶8體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取300mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品原料溶解于20mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，其HPLC純度達到96％左右。
實施例2選取乙酸丁酯-甲醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物。先按5∶1∶5體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取100mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分溶解于20mL流動相中待用，進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，其HPLC純度達到97％左右。
實施例3取乙酸乙酯-甲醇-水組分在分析型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物。首先按10∶1∶10體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用分析型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，1mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為40mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取15mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品溶解于1mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為1600rpm，以1.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，其HPLC純度達到96％以上。
實施例4選取乙酸乙酯-7腈-水在半制備型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物，首先按6∶1∶8體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取370mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分溶解于20mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，其HPLC純度達到97％左右。
實施例5選取乙酸乙酯-乙醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物。首先按5∶1∶8體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取360mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品溶解于20mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，接收目標成分，其HPLC純度達到96％左右。
實施例6選取乙酸異丙酯-乙腈-水在半制備型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物，首先按6∶1∶6體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取365mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分溶解于20mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，得到黃色固體，其HPLC純度達到97％左右。
實施例7選取石油醚-7醇-水在半制備型逆流色譜儀上來分離酸棗仁皂苷提取物，首先按7∶1∶7體積比將上述溶劑組分配置于分液漏斗中，搖勻后靜置分層。待平衡一段時間后，將上相和下相分開，取下相作為固定相，上相作為流動相。采用半制備型高速逆流色譜儀，配有NS-1007泵，20mL進樣閥，聚四氟乙烯柱，柱容積為240mL，8823A-UV紫外檢測器，Yokogawa 3057便攜式記錄儀，FC-95自動餾份收集器。稱取300mg正丁醇萃取的酸棗仁粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分溶解于20mL流動相中待用。進樣前，先用固定相存滿整個柱子，調整主機轉速為800rpm，以2.0mL/min的流速將流動相泵入柱內；待整個體系建立動態平衡后，由進樣閥進樣；然后根據檢測器紫外譜圖，得到黃色固體，其HPLC純度達到97％左右。
權利要求
1.一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于它是采用逆流色譜法從酸棗仁皂苷提取物(正丁醇萃取的酸棗仁粗品原料或該粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇水洗脫組分)中分離制備出高純度酸棗仁皂苷A和B，其溶劑可為正構烷烴、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、腈類、醚類、水等溶劑，溶劑的組分可由其中的三個組分構成。
2.根據權利要求1所述的一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于其三個組分構成的含水溶劑體系是由正構烷烴或脂肪酯、乙腈或脂肪醇或脂肪酮、水構成，體積比依次為10-5∶1∶10-5。
3.根據權利要求1所述的一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于正構烷烴是正己烷、正庚烷、正戊烷。
4.根據權利要求1所述的一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于脂肪醇、脂肪酮是甲醇、乙醇、丙酮。
5.根據權利要求1所述的一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于脂肪酯是乙酸乙酯、乙酸丙酯、乙酸異丙酯、乙酸正丁酯。
6.根據權利要求1所述的一種酸棗仁皂苷A和B的分離制備方法，其特征在于醚類是乙醚、石油醚、甲基叔丁基醚等。
全文摘要
本發明涉及一種用高速逆流色譜法從酸棗仁皂苷提取物(正丁醇萃取的酸棗仁粗品原料或該粗品采用大孔樹脂通過乙醇梯度洗脫獲得70％乙醇∶水洗脫組分)中分離制備出高純度單體酸棗仁皂苷A和B的方法。其特點是兩相體系為含水溶劑體系；所用的溶劑可為正構烷烴、醚類、脂肪酯、脂肪醇、脂肪酮、水等溶劑。含水溶劑體系由三個組分構成，A組分可選自石油醚，正己烷、正戊烷等正構烷烴或乙酸乙酯、乙酸丁酯等酯類。B組分可選乙腈、甲醇、乙醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮。C組分為水。其適用于用各種型號的逆流色譜儀分離制備單體酸棗仁皂苷A和B，能直接進大量粗品或合成混合物，分離效果能達到很高的純度。
文檔編號C07J71/00GK101054404SQ20071009968
公開日2007年10月17日 申請日期2007年5月28日 優先權日2007年5月28日
發明者魏蕓, 曹曉瑩, 俞巍, 楊麗娟, 王晨 申請人:北京化工大學