專利名稱：利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法
技術領域：
本發明涉及一種白藜蘆醇的純化方法，特別是涉及一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法。
背景技術：
白藜蘆醇是一種對人類健康有著顯著保健作用的天然活性物質，已引起國際社會的普遍關注。經科學研究及臨床應用證明，白藜蘆醇具有抗癌、抗氧化以及防止血栓形成、保護肝臟和清除自由基等功效，對老年人的退化疾病如帕金森癥、癡呆癥、早老性癡呆、風濕性疾病等都有較好的預防和治療作用；在化妝品方面，它具有祛除黃褐斑和增白的功效；它對脂類代謝和血小板的凝固亦有影響，可以防治冠心病和動脈粥樣硬化等疾病。近年來，人們發現天然植物虎杖中含有大量的虎杖甙(又名白藜蘆醇甙)和白藜蘆醇，從中提取白藜蘆醇并且取得了可喜的進展，如公開號為CN1341587A、名稱為“一種從虎杖中制備白藜蘆醇的方法”的專利申請中便公開了一種將虎杖作為原料來提取白藜蘆醇的方法，但由于其原料虎杖為中藥，原料來源較少，從中提取白藜蘆醇存在與藥爭源。據報道花生根中也含有白藜蘆醇，雖然含量比虎杖中要低，但原料來源豐富，價格低廉。在公開號為CN1709846A，名稱為“花生根提取白藜蘆醇的生產方法”的專利申請中便公開了將花生根經有機溶劑提取濃縮后經高壓層析洗脫、精制得白藜蘆醇產品的工藝流程。上述專利文獻中的白藜蘆醇提取工藝主要是經過有機溶劑直接浸泡萃取后經高壓硅膠柱層析等步驟提取而成，其分離效果遠遠不如大孔吸附樹脂處理后再進行硅膠柱層析分離的效果。
發明內容
本發明的目的在于克服常規技術提取率相對較低、提取純度低等的缺點，提供一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法。
為實現上述目的，本發明采用的技術方案是一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后用有機溶劑提取；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑的初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入乙酸乙酯萃取，用堿調其PH值為7.0～11.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附；(5)用不同濃度乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得白藜蘆醇半成品，其含量為35％以上；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并以乙酸乙酯、氯仿以不同體積比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶方法精制得白藜蘆醇，其含量在98％以上。
所述的步驟(1)中，花生根粉碎后過10～80目篩再進行有機溶劑提取。
在所述的步驟(1)中，有機溶劑為丙酮、乙酸乙酯、10～100％乙醇中的一種或一種以上，提取時間為4～48小時。
所述的步驟(1)中，有機溶劑提取的方法為浸漬法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續提取法中的一種或一種以上。
所述的步驟(1)中，加入有機溶劑的體積為花生根粉體積的5～20倍。
在所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計算為提取物水溶液的5～20倍，調節PH值所用的堿為氫氧化鈉或氨水。
步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8和NKA-II型樹脂中的一種，吸附為靜態吸附或動態吸附。
步驟(5)中所述的洗脫為用10～90％的乙醇進行洗脫。
在步驟(5)和(7)中，所采用的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。
步驟(7)中所采用乙酸乙酯與氯仿的體積比為1～7∶1。
本發明應用大孔吸附技術分離純化白藜蘆醇，對白藜蘆醇的吸附選擇性良好，吸附快，解析也快，吸附容量較大；提取方便快捷，原料來源豐富，生產成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品和含量98％以上的白藜蘆醇終產品，克服了常規提取率相對較低、提取純度低等的缺點。
本發明選用理化性質穩定、表面積較大、交換速度較快、機械強度高、抗污染能力強、熱穩定性能好的大孔吸附樹脂，不溶于酸、堿及有機溶媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附白藜蘆醇，吸附快，解析也快，吸附容量較大。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步的說明實施例1一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后過60目篩，用花生根粉體積10倍的乙酸乙酯浸漬提取48小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積20倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氫氧化鈉水溶液調其PH值為9.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物在大孔吸附樹脂層析柱上進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的NKA-II型樹脂；(5)用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
實施例2一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后過10目篩，用花生根粉體積20倍的丙酮浸漬12小時，然后回流提取4小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所得初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氨水調其PH值為7.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的D4006型樹脂；(5)用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
實施例3一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下
(1)將干花生根粉碎后過80目篩，用花生根粉體積15倍的75％乙醇回流提取6小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氫氧化鈉水溶液調其PH值為11.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物在大孔吸附樹脂層析柱上進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的NKA-9型樹脂；(5)用20％、40％、60％、80％的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
實施例4一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后過40目篩，用花生根粉體積10倍的50％的乙醇滲漉提取24小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氨水調其PH值為9.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物在大孔吸附樹脂層析柱上進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的H103型樹脂；(5)用10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
實施例5一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后過60目篩，用花生根粉體積10倍的丙酮連續提取4小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積15倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氫氧化鈉水溶液調其PH值為10.0，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的AB-8型樹脂；(5)用15％、25％、35％、45％、55％、65％、75％、85％的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
實施例6一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后過40目篩，用花生根粉體積5倍的50％乙醇煎煮提取6小時；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積15倍的乙酸乙酯進行萃取，然后用氨水調其PH值為7.5，靜置、抽濾、減壓回收溶劑得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物在大孔吸附樹脂層析柱上進行吸附，所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所生產的NKA-9型樹脂；(5)用10％、30％、50％、70％、90％的乙醇在大孔吸附樹脂層析柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并用乙酸乙酯、氯仿依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液，采用活性炭脫色、重結晶等方法精制，得到含量98％以上的白藜蘆醇。
權利要求
1.一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征在于，其步驟如下(1)將干花生根粉碎后用有機溶劑提取；(2)將經步驟(1)處理的花生根提取液抽濾，得提取液并減壓回收溶劑得初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入乙酸乙酯萃取，用堿調其PH值為7.0～11.0，靜置、抽濾、減壓濃縮得白藜蘆醇粗提物；(4)將所得白藜蘆醇粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附；(5)用不同濃度乙醇水溶液對大孔吸附樹脂進行洗脫，收集白藜蘆醇段洗脫液；(6)將白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收洗脫劑，得白藜蘆醇半成品；(7)將所得白藜蘆醇半成品上硅膠層析柱，并以乙酸乙酯、氯仿以不同體積比進行洗脫，收集白藜蘆醇段洗脫液；(8)將所收集到的白藜蘆醇洗脫液進行精制得白藜蘆醇。
2.根據權利要求1所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是所述的步驟(1)中，花生根粉碎后過10～80目篩再進行有機溶劑提取。
3.根據權利要求1或2所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是在所述的步驟(1)中，有機溶劑為丙酮、乙酸乙酯、10～100％乙醇中的一種或一種以上，提取時間為4～48小時。
4.根據權利要求3所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是所述的步驟(1)中，有機溶劑提取的方法為浸漬法、回流提取法、滲漉法、煎煮法、連續提取法中的一種或一種以上。
5.根據權利要求4所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是所述的步驟(1)中，加入有機溶劑的體積為花生根粉體積的5～20倍。
6.根據權利要求5所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是在所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計為提取物水溶液的5～20倍，調節PH值所用的堿為氫氧化鈉或氨水。
7.根據權利要求6所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是步驟(4)中所述吸附為靜態吸附或動態吸附；步驟(5)中所述的洗脫為用10～90％的乙醇水溶液進行洗脫。
8.根據權利要求7所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是在步驟(5)和(7)中，洗脫過程中采用薄層色譜法跟蹤檢測。
9.根據權利要求8所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是步驟(7)中所采用乙酸乙酯與氯仿的體積比為1～7∶1。
10.根據權利要求9所述的利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，其特征是在步驟(8)中，采用活性炭脫色、重結晶方法進行精制。
全文摘要
本發明涉及一種利用大孔吸附樹脂富集純化花生根中白藜蘆醇的方法，包括以下步驟干花生根粉碎后用有機溶劑提取，提取液抽濾、回收溶劑得初提物，用水加熱溶解，加入乙酸乙酯萃取，調pH值為7.0～11.0，靜置、抽濾、減壓濃縮，得到的白藜蘆醇粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附，不同濃度乙醇洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，將收集的白藜蘆醇段洗脫液濃縮回收乙醇，得到含量35％以上的白藜蘆醇半成品，上硅膠層析柱，用不同體積比例的乙酸乙酯、氯仿進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集的白藜蘆醇段洗脫液采用活性炭脫色、重結晶等方法精制得到含量98％以上的白藜蘆醇。本發明提取的白藜蘆醇純度高，提取方便快捷，原料來源豐富，生產成本低廉。
文檔編號C07C37/00GK101074188SQ20071005423
公開日2007年11月21日 申請日期2007年4月17日 優先權日2007年4月17日
發明者黃紀念, 方杰, 侯傳偉 申請人:河南省農科院農副產品加工研究所